Name: anticancer metal complexes: synthesis and cytotoxicity evaluation by the mtt assay
Uploaded: 2013-11-10T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay at JoVE.com

Finansiering blev modtaget fra Det Europæiske Forskningsråd under Det Europæiske Fællesskabs syvende rammeprogram (FP7/2007-2013) / ERC tilskudsaftale nr. [239.603]

<ol><li> Forberedelse af V (V) kompleks (figur 2), 18 adfærd trin 1,1-1,4 i en handske-box, hvis en handske-box ikke er tilgængelig, skal du springe til den alternative trin 2 (2,1-2,6). <ol><li> Opløs 0,42 mmol af ligander H 2 L i tør THF og føje den til en opløsning under omrøring af tilsvarende mængder af VO (O i Pr) 3 i THF. </li><li> Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 15 minutter og fjerne de flygtige stoffer under vakuum. </li><li> Tilføj kold hexan og fjer...

<ol>
	<li>Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+in+vitro+cytotoxicity+assays+for+drug+development.">Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).</li><li>Hatok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+for+the+evaluation+of+drug+resistance+in+tumor+cells.">In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor cells.</a> Clinical and Experimental Medicine. 9, 1-7 (2009).</li><li>Wang, D., Lippard, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processing+of+platinum+anticancer+drugs.">Cellular processing of platinum anticancer drugs.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4, 307-320 (2005).</li><li>Muggia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platinum+compounds+30+years+after+the+introduction+of+cisplatin:+Implications+for+the+treatment+of+ovarian+cancer.">Platinum compounds 30 years after the introduction of cisplatin: Implications for the treatment of ovarian cancer.</a> Gynecologic Oncology. 112, 275-281 (2009).</li><li>Bruijnincx, P. C., Sadler, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+trends+for+metal+complexes+with+anticancer+activity.">New trends for metal complexes with anticancer activity.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 12, 197-206 (2008).</li><li>Ott, I., Gust, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+platinum+metal+complexes+as+anti-cancer+drugs.">Non platinum metal complexes as anti-cancer drugs.</a> Archiv der Pharmazie (Weinheim. 340, 117-126 (2007).</li><li>Desoize, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metals+and+metal+compounds+in+cancer+treatment.">Metals and metal compounds in cancer treatment.</a> Anticancer Research. 24, 1529-1544 (2004).</li><li>Jakupec, M. A., Galanski, M., Arion, V. B., Hartinger, C. G., Keppler, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumour+metal+compounds:+more+than+theme+and+variations.">Antitumour metal compounds: more than theme and variations.</a> Dalton Transactions. , 183-194 (2008).</li><li>Mel&#233;ndez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+complexes+in+cancer+treatment.">Titanium complexes in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 309-315 (2002).</li><li>Evangelou, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanadium+in+cancer+treatment.">Vanadium in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 249-265 (2002).</li><li>Djordjevic, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+vanadium+compounds.">Antitumor activity of vanadium compounds.</a> Metal ions in biological systems. 31, 595-616 (1995).</li><li>Caruso, F., Rossi, M., Pettinari, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+titanium+agents.">Anticancer titanium agents.</a> Expert Opinion on Therapeutic Patents. 11, 969-979 (2001).</li><li>Caruso, F., Rossi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+titanium+compounds.">Antitumor titanium compounds.</a> Mini-Review in Medicinal Chemistry. 4, 49-60 (2004).</li><li>Kostova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+and+vanadium+complexes+as+anticancer+agents.">Titanium and vanadium complexes as anticancer agents.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 9, 827-842 (2009).</li><li>Tshuva, E. Y., Ashenhurst, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+Titanium(IV)+Complexes:+Renaissance.">Cytotoxic Titanium(IV) Complexes: Renaissance.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. , 2203-2218 (2009).</li><li>Buettner, K. M., Valentine, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinorganic+Chemistry+of+Titanium.">Bioinorganic Chemistry of Titanium.</a> Chemical Reviews. 112, 1863-1881 (2012).</li><li>Meker, S., Margulis-Goshen, K., Weiss, E., Magdassi, S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+antitumor+activity+of+highly+resistant+salan-titanium(IV)+complexes+in+nanoparticles:+an+identified+active+species.">High antitumor activity of highly resistant salan-titanium(IV) complexes in nanoparticles: an identified active species.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 51, 10515-10517 (2012).</li><li>Reytman, L., Braitbard, O., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+cytotoxic+vanadium(V)+complexes+of+salan+ligands;+insights+on+the+role+of+hydrolysis.">Highly cytotoxic vanadium(V) complexes of salan ligands; insights on the role of hydrolysis.</a> Dalton Transactions. 41, 5241-5247 (2012).</li><li>Tzubery, A., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+and+Hydrolysis+of+trans-Ti(IV)+Complexes+of+Salen+Ligands:+Structure-Activity+Relationship+Studies.">Cytotoxicity and Hydrolysis of trans-Ti(IV) Complexes of Salen Ligands: Structure-Activity Relationship Studies.</a> Inorganic Chemistry. 51, 1796-1804 (2012).</li><li>Tshuva, E. Y., Peri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+cytotoxic+titanium(IV)+complexes;+Insights+on+the+enigmatic+involvement+of+hydrolysis.">Modern cytotoxic titanium(IV) complexes; Insights on the enigmatic involvement of hydrolysis.</a> Coordination Chemistry Reviews. 253, 2098-2115 (2009).</li><li>Shavit, M., Peri, D., Manna, C. M., Alexander, J. S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+cytotoxic+reagents+based+on+non-metallocene+non-diketonato+well-defined+C-2-symmetrical+titanium+complexes+of+tetradentate+bis(phenolato)+ligands.">Active cytotoxic reagents based on non-metallocene non-diketonato well-defined C-2-symmetrical titanium complexes of tetradentate bis(phenolato) ligands.</a> Journal of the American Chemical Society. 129, 12098-12099 (2007).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival+-+Application+to+Proliferation+and+Cyto-Toxicity+Assays.">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival - Application to Proliferation and Cyto-Toxicity Assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (83), 55-63 (1983).</li><li>Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Toxicity+of+Nanogenomedicine+in+MCF-7+Cell+Line:+MTT+assay.">Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (26), e1191 (2009).</li><li>Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+hepatic+subcellular+fractions+for+Alamar+blue+and+MTT+reductase+activity.">Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity.</a> Toxicology in Vitro. 15, 257-259 (2001).</li><li>Denizot, F., Lang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cell-Growth+and+Survival+-+Modifications+to+the+Tetrazolium+Dye+Procedure+Giving+Improved+Sensitivity+and+Reliability.">Rapid Colorimetric Assay for Cell-Growth and Survival - Modifications to the Tetrazolium Dye Procedure Giving Improved Sensitivity and Reliability.</a> Journal of Immunological Methods. 89, 271-277 (1986).</li><li>Alley, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+drug+screening+with+panels+of+human+tumor+cell+lines+using+a+microculture+tetrazolium+assay.">Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay.</a> Cancer Research. 48, 589-601 (1988).</li><li>Weyermann, J., Lochmann, D., Zimmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+note+on+the+use+of+cytotoxicity+assays.">A practical note on the use of cytotoxicity assays.</a> International Journal of Pharmaceutics. 288, 369-376 (2005).</li><li>Chmura, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+4+complexes+with+aminebisphenolate+ligands+and+their+application+for+the+ring+opening+polymerization+of+cyclic+esters.">Group 4 complexes with aminebisphenolate ligands and their application for the ring opening polymerization of cyclic esters.</a> Macromolecules. 39, 7250-7257 (2006).</li><li>Sebaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+accurate+EC50/IC50+estimation.">Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation.</a> Pharmaceutical Statistics. 10, 128-134 (2011).</li><li>Yung, W. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Chemosensitivity+Testing+and+its+Clinical-Application+in+Human+Gliomas.">In vitro Chemosensitivity Testing and its Clinical-Application in Human Gliomas.</a> Neurosurgical Review. 12, 197-203 (1989).</li><li>McCarthy, N. J., Evan, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current Topics in Developmental Biology. 36, 259-278 (1997).</li></ol>

Beskrevet i dette manuskript metode kombinerer kemisk syntese med biologisk cellelevedygtighed assay. Som med enhver biologiske metoder vedrørende levedygtige celler, er det vigtigt at arbejde i en laminar hætte og vedligeholde sterile forhold, herunder anvendelse af sterile organiske opløsningsmidler. Desuden bør tilberedning og opbevaring af hydrolytisk ustabile metal baserede lægemidler udføres under inerte betingelser, som handskerum eller Schlenk line teknikker bør udnyttes. Valg...

Kemoterapi er stadig en af ​​de vigtigste kurser af behandlinger ansat i klinikken for forskellige kræftsygdomme, og dermed store mængde af forskning er udført på verdensplan med henblik på at udvikle nye og forbedrede anticancer narkotika. Sådanne undersøgelser oftest begynder på det kemiske niveau, med design og fremstilling af forbindelserne, efterfulgt af biologisk evaluering af de cytotoksiske egenskaber in vitro. Cellelevedygtigheden kan vurderes ved forskellige analyser, der giver oplysninger om cellulær aktivitet 1-2. Cisplatin er et eksempel på en platin-kompleks, der er almindeligt anvendt som et kemoterapeutisk lægemiddel, der betragtes som en effektiv behandling primært til testis-og ovariecancer 3-4. Men dens smalle aktivitetsområde og alvorlige bivirkninger udløse studier af andre potente overgangsmetalkomplekser 5-8. Blandt andre, titan (IV) og vanadium (V)-komplekser viste lovende resultater af høj aktivitet og en reducerettoksicitet 9-16. Ti (IV) komplekser var de første til at indtaste kliniske forsøg efter cisplatin grund af disse egenskaber, men de har undladt forsøgene på grund af formulerings vanskeligheder og hydrolytisk ustabilitet. Der er derfor et aktuelt behov for at udvikle forbedrede derivater af disse metalkomplekser, der kan kombinere høj anticancer aktivitet med vandtæthed 15,17-21. En udfordring i fremstillingen af ​​Ti (IV) og V (V) komplekser refererer til den hydrolytiske ustabilitet precursor reagenser og derfor bør indifferent atmosfære fastholdes. Fremstillingen af Ti (IV) og V (V)-forbindelser udføres under N2 eller Ar forhold i en handskekasse eller ved hjælp af Schlenk line teknikker. En almindelig metode til vurdering af anti-cancer-aktivitet er baseret på MTT (3 - (4,5-dimethylthiazolyl) -2,5-diphenyltetrazoliumbromid) analysen. Denne analyse er en kolorimetrisk levedygtighedsassay som blev præsenteret i 1983 af Mosmann22.. Det er yderst godt undersøgt og karakteriseret, og det anses for meget effektiv, når vurdere effektiviteten af ​​nye cytotoksiske forbindelser på grund af deres nøjagtighed, hurtighed, og dens evne til at blive anvendt på forskellige cellelinier. Denne levedygtighed assay er baseret på farveændringen af ​​MTT-molekylet, når det udsættes for levedygtige celler. Måling af absorbans, som er proportional med antallet af levedygtige celler, og sammenligning med ubehandlede kontroller, muliggør vurdering af cellevækstinhibering kapaciteter af den testede forbindelse. MTT kolorimetrisk assay udføres i en 96-brønds pladeformat 23. Cellerne kan kræve præinkubation i brøndene, før tilsætning af det testede stof. Præinkubation tider kan variere fra 0 til 24 timer efter cellelinien egenskaber. Cellerne er normalt udsat for stoffet i 24-96 hr afhængig af narkotika aktivitet. MTT-opløsning tilsættes derefter til de behandlede celler, hvor råberow MTT reduceres til violet formazan af en række mitokondriske og cytosoliske enzymer, der er i drift i levedygtige celler (figur 1) 24. MTT molekylet ikke mindskes af døde celler eller røde blodlegemer (metabolisk inaktive celler), milt celler (hvilende celler) og concanavalin A-stimulerede lymfocytter (aktiverede celler) 22. Efter 3-4 timers inkubering med MTT formazan bundfald. Dannelsen af formazan begynder efter 0,5 timers inkubation, men for at opnå optimale resultater er det bedst at udsætte cellerne for MTT i mindst 3 timer 22. Følgelig vækstmediet fjernet, og formazan opløses i et organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis isopropanol 25, skønt DMSO også kan anvendes 26. Elimineringen af mediet er afgørende for at opnå nøjagtige resultater, da phenolrødt, som er meget almindelig i vækstmedium, og udfældende proteiner kan interferere med absorbansmåling 25. Når formazan opløsningen når homogent, opløsningens absorbans måles ved anvendelse af en mikropladelæser spektrofotometer. Absorbansen ved 550 nm er direkte proportional med antallet af celler i området 200-50,000 celler per brønd, og således meget små mængder af celler kan påvises 22. Absorbansen angiver mængden af ​​levedygtige celler, der var tilbage efter behandling med lægemidlet, og sammenlignes med absorbansen af ​​kontrolceller, der ikke var eksponeret for lægemidlet. Analyse af resultaterne efter en ordentlig software giver IC50 (hæmning koncentration 50%) værdier og deres statistiske fejl baseret på flere gentagelser af målingen. MTT assayet er meget almindelig i cytotoksicitetsundersøgelser til screening af nye anticancer-forbindelser, på grund af sin nøjagtighed og relative enkelhed. Men ved anvendelse af MTT-assayet, der er afhængig enzymatisk reaktion, må man overveje, at forskellige enzyminhibitorer kan påvirke reduktionen af ​​MTT end føre til falske resultater 27. Hertil kommer, at MTT assay ikke give nogen oplysninger om den molekylære mekanisme af den cytotoksiske aktivitet af lægemidlet 2..

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-007-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830122313</td>
			<td>Dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-29 cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830111370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5655-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin antibiotics</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 with phenol red with L-glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI without phenol red</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-103-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrahydrofuran (THF) AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830156391</td>
			<td>dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti(OiPr)4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>205273-500ML</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VO(OiPr)3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>404926-10G</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 30-300 &#956;l</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 flask</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>156472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate with lid (flat bottom)</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>APT.line C150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counter chamber</td>
			<td>Marienfeld-Superior</td>
			<td>650030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vial</td>
			<td>KARTELL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glove box</td>
			<td>M. Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>ADS LAMINAIRE</td>
			<td>OPTIMALE 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader spectrophotometer</td>
			<td>Bio-Tek</td>
			<td>El-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TS100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 20-200 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anticancer metal complexes: synthesis and cytotoxicity evaluation by the mtt assay

Titan (IV) og vanadium (V)-komplekser er meget potente anticancer-midler. En udfordring i deres syntese henviser til deres hydrolytiske ustabilitet bør derfor gennemførte deres forberedelse under en inert atmosfære. Vurdering af anticancer-aktivitet af disse komplekser kan opnås ved MTT-assayet. MTT assayet er en kolorimetrisk levedygtighedsassay baseret på enzymatisk reduktion af MTT molekylet til formazan, når det udsættes for levedygtige celler. Resultatet af reduktion er en farveændring af MTT molekyle. Absorbansmålinger forhold til en kontrolgruppe bestemme procentdelen af tilbageværende levedygtige kræftceller efter deres behandling med varierende koncentrationer af en testet forbindelse, der er oversat til den sammensatte anticancer aktivitet og dens IC50-værdier. MTT-analysen er meget almindelig i Cytotoksicitetsstudier på grund af sin nøjagtighed, hurtighed og relative enkelhed. Heri vi presendte en detaljeret protokol til syntese af luftfølsomt metal baserede lægemidler og cellelevedygtighed målinger, herunder forberedelse af cellepladerne inkubation af forbindelserne med cellerne, levedygtighedsmålinger hjælp af MTT-assayet, og bestemmelse af IC50-værdier.

De komplekser blev udarbejdet på grundlag af etablerede procedurer 18,28 og renhed kan vurderes ved NMR og elementært analyse. De modtagne fra MTT assay data analyseres for at vurdere cytotoksicitet for forbindelsen 18,21. Først er fratrækning af blindprøvekontrollen absorbans værdi fra alle de andre værdier udføres. Sekund, THF værdi kontrol opløsningsmiddel sat til 100% levedygtighed som ingen vækstinhiberende forbindelse blev tilsat. Alle andre værdier om...

Watch this Scientific Journal Video about Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay at JoVE.com

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay (Video) | JoVE

En fremgangsmåde til syntese af luftfølsomme titan og vanadium anticancermidler er beskrevet sammen med evalueringen af ​​deres cytotoksiske aktivitet over for human cancer cellelinie ved MTT-analysen.

Anticancer metalkomplekser: Syntese og cytotoksicitet Evaluering af MTT Assay

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR (Video) | JoVE

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Amide Coupling Reaction for the Synthesis of Bispyridine-based Ligands and Their Complexation to Platinum as Dinuclear Anticancer Agents

Amide Coupling Reaction for the Synthesis of Bispyridine-based Ligands and Their Complexation to Platinum as Dinuclear Anticancer Agents (Video) | JoVE

Amid Kobling Reaktion for syntesen af ​​bispyridin-baserede ligander og deres kompleksdannelse til Platinum som bicycliske anticancerlægemidler

Amide coupling reactions can be used to synthesize bispyridine-based ligands for use as bridging linkers in multinuclear platinum anticancer drugs. ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks (Video) | JoVE

Syntese og karakterisering af funktionaliserede Metal-organisk Frameworks

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Metal-free Synthesis of Ynones from Acyl Chlorides and Potassium Alkynyltrifluoroborate Salts

Metal-free Synthesis of Ynones from Acyl Chlorides and Potassium Alkynyltrifluoroborate Salts (Video) | JoVE

Metal-fri Syntese af Ynones fra acylchlorider og Kalium Alkynyltrifluoroborate Salte

Ynones are a valuable functional group and building block in organic synthesis. Ynones serve as a precursor to many important organic functional groups ...

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes (Video) | JoVE

Den sammenfattende, karakterisering og reaktivitet af en række Ruthenium<em&gt; N</em&gt; -triphos<sup&gt; Ph</sup&gt; Komplekser

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the ...

Reverse Microemulsion-mediated Synthesis of Monometallic and Bimetallic Early Transition Metal Carbide and Nitride Nanoparticles

Reverse Microemulsion-mediated Synthesis of Monometallic and Bimetallic Early Transition Metal Carbide and Nitride Nanoparticles (Video) | JoVE

Omvendt Microemulsion-medieret Syntese af Monometallic og Bimetal Tidlig Transition Metal Carbide og Nitride Nanopartikler

A reverse microemulsion is used to encapsulate monometallic or bimetallic early transition metal oxide nanoparticles in microporous silica shells. The ...

Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

Synthesis of a Water-soluble MetalÃ¢â‚¬â€œOrganic Complex Array (Video) | JoVE

Syntese af en Vandopløseligt Metal-Organic Complex Array

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as ...

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions (Video) | JoVE

palladium<em&gt; N</em&gt; -Heterocycliske carbenkomplekser: Syntese fra benzimidazoliumsalte og katalytisk aktivitet i carbon-carbon-bindingsdannende reaktioner

Detailed and generalized protocols are presented for the synthesis and subsequent purification of four palladium N-heterocyclic carbene complexes from ...

Synthesis and Evaluation of a Ruthenium-based Mitochondrial Calcium Uptake Inhibitor

Synthesis and Evaluation of a Ruthenium-based Mitochondrial Calcium Uptake Inhibitor (Video) | JoVE

Sammenfatning og evaluering af en Ruthenium-baserede mitokondrie Calcium Uptake hæmmer

We detail the synthesis and purification of a mitochondrial calcium uptake inhibitor, [(OH2)(NH3)4Ru(&#181;-O)Ru(NH3)4(OH2)]5+. The optimized synthesis of ...

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction (Video) | JoVE

Syntese og ydeevne beskrivelser af overgangen Metal enkelt Atom katalysator for elektrokemisk CO2 reduktion

This protocol presents both the synthesis method of the Ni single atom catalyst, and the electrochemical testing of its catalytic activity and selectivity ...