Name: anticancer metal complexes: synthesis and cytotoxicity evaluation by the mtt assay
Uploaded: 2013-11-10T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay at JoVE.com

Finansieringen ble mottatt fra European Research Council under EU sjuende rammeprogram (FP7/2007-2013) / ERC Grant avtalen ingen [239603]

<ol><li> Utarbeidelse av V (V) kompleks (figur 2), 18 oppførsel trinn 01.01 til 01.04 i en hanske-box, hvis en hanske-boksen ikke er tilgjengelig, kan du hoppe til den alternative trinn 2 (02.01-02.06). <ol><li> Oppløs 0,42 mmol av ligandene H 2 L i tørr THF og tilsett den til en omrørt oppløsning av ekvivalente mengder av VO (O-i Pr) 3 i THF. </li><li> Omrør reaksjonsblandingen ved romtemperatur i 15 min, og fjerner de flyktige bestanddeler under vakuum. </li><li> Legg kald heksa...

<ol>
	<li>Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+in+vitro+cytotoxicity+assays+for+drug+development.">Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).</li><li>Hatok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+for+the+evaluation+of+drug+resistance+in+tumor+cells.">In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor cells.</a> Clinical and Experimental Medicine. 9, 1-7 (2009).</li><li>Wang, D., Lippard, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processing+of+platinum+anticancer+drugs.">Cellular processing of platinum anticancer drugs.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4, 307-320 (2005).</li><li>Muggia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platinum+compounds+30+years+after+the+introduction+of+cisplatin:+Implications+for+the+treatment+of+ovarian+cancer.">Platinum compounds 30 years after the introduction of cisplatin: Implications for the treatment of ovarian cancer.</a> Gynecologic Oncology. 112, 275-281 (2009).</li><li>Bruijnincx, P. C., Sadler, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+trends+for+metal+complexes+with+anticancer+activity.">New trends for metal complexes with anticancer activity.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 12, 197-206 (2008).</li><li>Ott, I., Gust, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+platinum+metal+complexes+as+anti-cancer+drugs.">Non platinum metal complexes as anti-cancer drugs.</a> Archiv der Pharmazie (Weinheim. 340, 117-126 (2007).</li><li>Desoize, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metals+and+metal+compounds+in+cancer+treatment.">Metals and metal compounds in cancer treatment.</a> Anticancer Research. 24, 1529-1544 (2004).</li><li>Jakupec, M. A., Galanski, M., Arion, V. B., Hartinger, C. G., Keppler, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumour+metal+compounds:+more+than+theme+and+variations.">Antitumour metal compounds: more than theme and variations.</a> Dalton Transactions. , 183-194 (2008).</li><li>Mel&#233;ndez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+complexes+in+cancer+treatment.">Titanium complexes in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 309-315 (2002).</li><li>Evangelou, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanadium+in+cancer+treatment.">Vanadium in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 249-265 (2002).</li><li>Djordjevic, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+vanadium+compounds.">Antitumor activity of vanadium compounds.</a> Metal ions in biological systems. 31, 595-616 (1995).</li><li>Caruso, F., Rossi, M., Pettinari, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+titanium+agents.">Anticancer titanium agents.</a> Expert Opinion on Therapeutic Patents. 11, 969-979 (2001).</li><li>Caruso, F., Rossi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+titanium+compounds.">Antitumor titanium compounds.</a> Mini-Review in Medicinal Chemistry. 4, 49-60 (2004).</li><li>Kostova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+and+vanadium+complexes+as+anticancer+agents.">Titanium and vanadium complexes as anticancer agents.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 9, 827-842 (2009).</li><li>Tshuva, E. Y., Ashenhurst, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+Titanium(IV)+Complexes:+Renaissance.">Cytotoxic Titanium(IV) Complexes: Renaissance.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. , 2203-2218 (2009).</li><li>Buettner, K. M., Valentine, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinorganic+Chemistry+of+Titanium.">Bioinorganic Chemistry of Titanium.</a> Chemical Reviews. 112, 1863-1881 (2012).</li><li>Meker, S., Margulis-Goshen, K., Weiss, E., Magdassi, S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+antitumor+activity+of+highly+resistant+salan-titanium(IV)+complexes+in+nanoparticles:+an+identified+active+species.">High antitumor activity of highly resistant salan-titanium(IV) complexes in nanoparticles: an identified active species.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 51, 10515-10517 (2012).</li><li>Reytman, L., Braitbard, O., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+cytotoxic+vanadium(V)+complexes+of+salan+ligands;+insights+on+the+role+of+hydrolysis.">Highly cytotoxic vanadium(V) complexes of salan ligands; insights on the role of hydrolysis.</a> Dalton Transactions. 41, 5241-5247 (2012).</li><li>Tzubery, A., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+and+Hydrolysis+of+trans-Ti(IV)+Complexes+of+Salen+Ligands:+Structure-Activity+Relationship+Studies.">Cytotoxicity and Hydrolysis of trans-Ti(IV) Complexes of Salen Ligands: Structure-Activity Relationship Studies.</a> Inorganic Chemistry. 51, 1796-1804 (2012).</li><li>Tshuva, E. Y., Peri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+cytotoxic+titanium(IV)+complexes;+Insights+on+the+enigmatic+involvement+of+hydrolysis.">Modern cytotoxic titanium(IV) complexes; Insights on the enigmatic involvement of hydrolysis.</a> Coordination Chemistry Reviews. 253, 2098-2115 (2009).</li><li>Shavit, M., Peri, D., Manna, C. M., Alexander, J. S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+cytotoxic+reagents+based+on+non-metallocene+non-diketonato+well-defined+C-2-symmetrical+titanium+complexes+of+tetradentate+bis(phenolato)+ligands.">Active cytotoxic reagents based on non-metallocene non-diketonato well-defined C-2-symmetrical titanium complexes of tetradentate bis(phenolato) ligands.</a> Journal of the American Chemical Society. 129, 12098-12099 (2007).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival+-+Application+to+Proliferation+and+Cyto-Toxicity+Assays.">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival - Application to Proliferation and Cyto-Toxicity Assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (83), 55-63 (1983).</li><li>Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Toxicity+of+Nanogenomedicine+in+MCF-7+Cell+Line:+MTT+assay.">Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (26), e1191 (2009).</li><li>Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+hepatic+subcellular+fractions+for+Alamar+blue+and+MTT+reductase+activity.">Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity.</a> Toxicology in Vitro. 15, 257-259 (2001).</li><li>Denizot, F., Lang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cell-Growth+and+Survival+-+Modifications+to+the+Tetrazolium+Dye+Procedure+Giving+Improved+Sensitivity+and+Reliability.">Rapid Colorimetric Assay for Cell-Growth and Survival - Modifications to the Tetrazolium Dye Procedure Giving Improved Sensitivity and Reliability.</a> Journal of Immunological Methods. 89, 271-277 (1986).</li><li>Alley, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+drug+screening+with+panels+of+human+tumor+cell+lines+using+a+microculture+tetrazolium+assay.">Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay.</a> Cancer Research. 48, 589-601 (1988).</li><li>Weyermann, J., Lochmann, D., Zimmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+note+on+the+use+of+cytotoxicity+assays.">A practical note on the use of cytotoxicity assays.</a> International Journal of Pharmaceutics. 288, 369-376 (2005).</li><li>Chmura, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+4+complexes+with+aminebisphenolate+ligands+and+their+application+for+the+ring+opening+polymerization+of+cyclic+esters.">Group 4 complexes with aminebisphenolate ligands and their application for the ring opening polymerization of cyclic esters.</a> Macromolecules. 39, 7250-7257 (2006).</li><li>Sebaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+accurate+EC50/IC50+estimation.">Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation.</a> Pharmaceutical Statistics. 10, 128-134 (2011).</li><li>Yung, W. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Chemosensitivity+Testing+and+its+Clinical-Application+in+Human+Gliomas.">In vitro Chemosensitivity Testing and its Clinical-Application in Human Gliomas.</a> Neurosurgical Review. 12, 197-203 (1989).</li><li>McCarthy, N. J., Evan, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current Topics in Developmental Biology. 36, 259-278 (1997).</li></ol>

Fremgangsmåten som beskrives i dette manuskriptet kombinerer kjemisk syntese med biologisk cellelevedyktighet assay. Som med eventuelle biologiske metoder som gjelder levedyktige celler, er det viktig å arbeide i en laminær hette, og opprettholde sterile forhold, herunder bruk av sterile organiske løsemidler. I tillegg bør fremstilling og lagring av hydrolytisk ustabil metallbaserte stoffer utføres under inerte betingelser, hvor hanskeboks eller Schlenk linjeteknikker bør utnyttes. Ut...

Kjemoterapi er fortsatt en av de hovedretter av behandlinger ansatt i klinikken for ulike kreftsykdommer, og dermed enorme mengden av forskning er gjennomført på verdensbasis med sikte på å utvikle nye og forbedrede kreft narkotika. Slike studier stort sett begynner ved den kjemiske nivå, med utforming og fremstilling av forbindelser, etterfulgt av biologisk evaluering av de cytotoksiske egenskaper in vitro. Cell levedyktighet kan bli vurdert av ulike analyser som gir informasjon om cellulær aktivitet 1-2. Cisplatin er et eksempel på en platina kompleks som er mye brukt som et kjemoterapeutisk stoff, som regnes som en effektiv behandling hovedsakelig for testikkelkreft og eggstokkreft 3-4. Imidlertid dens smale aktivitet rekkevidde og alvorlige bivirkninger utløse studier av andre potente overgangsmetallkomplekser 5-8. Blant annet, titan (IV) og vanadium (V)-komplekser viste lovende resultater med høy aktivitet og redusertetoksisitet 9-16. Ti (IV) komplekser var de første til å gå inn kliniske studier etter cisplatin på grunn av disse egenskapene, men har de mislyktes forsøkene på grunn av formuleringsvansker og hydrolyttisk ustabilitet. Det er derfor et aktuelt behov for å utvikle forbedrede derivater av disse metallkomplekser som kan kombinere høy anticancer aktivitet med vann motstand 15,17-21. En utfordring ved fremstilling av Ti (IV) og V (V)-komplekser viser til hydrolytisk ustabilitet av forløper-reagensene, og derfor bør den inerte atmosfære opprettholdes. Fremstillingen av Ti (IV) og V (V)-forbindelser er utført under N2 eller Ar forhold i en hanskeboks eller ved hjelp av Schlenk linjeteknikker. En vanlig metode for evaluering av anti-cancer-aktivitet er basert på MTT (3 - (4,5-dimethylthiazolyl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid) assay. Denne analysen er en kolo levedyktighet analysen som ble presentert i 1983 av Mosmann22. Det er meget godt studert og karakterisert, og det anses svært effektiv ved vurdering av effektiviteten av nye cytotoksiske forbindelser på grunn av sin presisjon, hurtighet, og dens evne til å bli anvendt på forskjellige cellelinjer. Denne levedyktighet assay er basert på fargeforandring av MTT-molekylet når det er utsatt for levedyktige celler. Måling av absorbansen, som er proporsjonal med antall levedyktige celler, og sammenlignet med ubehandlede kontroller, muliggjør vurdering av celleveksthemmende egenskapene til den testede forbindelse. Det MTT kolorimetrisk analyse blir gjennomført i en 96-brønn plate-format 23. Cellene kan kreve preinkubering i brønner før tilsetningen av den testede medikament. Forinkuberingen Tiden kan variere 0-24 timer i henhold til cellelinje egenskaper. Celler blir vanligvis utsatt for medikament for 24 til 96 timer, avhengig av legemiddel-aktivitet. MTT-løsning blir deretter tilsatt til de behandlede celler, der kjefteow MTT er redusert til fiolett formazan av en rekke mitokondrielle og cytosoliske enzymer som er i drift i levedyktige celler (figur 1) 24. Det MTT-molekylet blir ikke redusert av døde celler eller røde blodceller (metabilsk inaktive celler), miltceller (hvile celler) og Con A-stimulerte lymfocytter (aktiverte celler) 22. Etter 3-4 timer med inkubasjon med MTT formazangruppen utfellinger. Dannelsen av formazan begynner etter 0,5 timer med inkubasjon men for optimale resultater er det best å eksponere cellene til MTT i minst 3 timer 22. Følgelig er den voksende medium fjernet og formazan ble oppløst i et organisk oppløsningsmiddel, fortrinnsvis isopropanol, 25, selv om DMSO kan også anvendes 26. Elimineringen av mediet er avgjørende for å oppnå nøyaktige resultater, siden fenolrødt, som er vidt utbredt i vekstmedium, og utfelling av proteiner kan interferere med målingen absorbans 25.. Når formazan-løsning når homogen, absorbansen av oppløsningen måles ved hjelp av en mikroplateleser spektrofotometer. Absorbansen ved 550 nm er direkte proporsjonal med antallet celler i rekke 200-50,000 celler per brønn, og dermed meget små mengder av celler kan bli detektert 22.. Absorbansen indikerer mengden av levedyktige celler som var tilbake etter behandling med medikamentet, og er i forhold til absorbansen for kontrollceller som ikke var utsatt for medikamentet. Analyse av resultater ved riktig programvare gir IC50 (inhibering konsentrasjon, 50%) verdier og deres statistiske feil basert på flere gjentakelser av målingen. MTT analysen er allment vanlig i cytotoksisitetstester studier for screening nye kreft forbindelser, på grunn av sin nøyaktighet og relativ enkelhet. Imidlertid, ved bruk av MTT-analysen, som er avhengig av enzymatisk reaksjon, må man tenke på at forskjellige enzyminhibitorer kan påvirke reduksjonen av MTT end føre til falske resultater 27. I tillegg vil MTT analysen ikke gi noen opplysninger om den molekylære mekanismen for den cytotoksiske aktiviteten til stoffet to.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-007-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830122313</td>
			<td>Dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-29 cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830111370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5655-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin antibiotics</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 with phenol red with L-glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI without phenol red</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-103-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrahydrofuran (THF) AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830156391</td>
			<td>dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti(OiPr)4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>205273-500ML</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VO(OiPr)3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>404926-10G</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 30-300 &#956;l</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 flask</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>156472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate with lid (flat bottom)</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>APT.line C150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counter chamber</td>
			<td>Marienfeld-Superior</td>
			<td>650030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vial</td>
			<td>KARTELL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glove box</td>
			<td>M. Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>ADS LAMINAIRE</td>
			<td>OPTIMALE 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader spectrophotometer</td>
			<td>Bio-Tek</td>
			<td>El-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TS100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 20-200 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anticancer metal complexes: synthesis and cytotoxicity evaluation by the mtt assay

Titanium (IV) og vanadium (V)-komplekser er meget potente anticancermidler. En utfordring i deres syntese refererer til deres hydrolytiske ustabilitet, og derfor deres fremstilling bør bli utført under en inert atmosfære. Evaluering av anticancer aktivitet av disse komplekser kan oppnås ved MTT-assay. Det MTT-analysen er en kolorimetrisk assay levedyktighet basert på enzymatisk reduksjon av MTT til formazan-molekylet når det er utsatt for levedyktige celler. Utfallet av reduksjonen er en fargeendring i MTT molekylet. Absorbans målinger i forhold til en kontroll bestemme prosentandelen av gjenværende levedyktige kreftceller etter deres behandling med varierende konsentrasjoner av en testet forbindelse, som er oversatt til forbindelsen anticancer aktivitet og dets IC50-verdier. MTT-analysen er allment vanlig i cytotoksisitetstester studiene på grunn av sin nøyaktighet, hurtighet, og relativ enkelhet. Heri vi presendes en detaljert protokoll for syntese av luftfølsomme metallbaserte medikamenter og celleviabilitet målinger, inkludert fremstilling av celleplatene, inkubering av forbindelsene med cellene, levedyktighet målingene ved anvendelse av MTT-analysen, og bestemmelse av IC-50 verdier.

Kompleksene ble utarbeidet basert på etablerte prosedyrer 18,28 og deres renhet kan bli evaluert av NMR og elementanalyse. De mottatt fra MTT-analysen av data blir analysert for å evaluere cytotoksisiteten av forbindelsen 18,21. Først blir subtraksjon av blindkontroll absorbansverdi fra alle andre verdier utføres. For det andre er THF oppløsningsmidlet kontrollverdi satt til 100% levedyktighet, som ingen vekst inhiberende forbindelse ble tilsatt. Alle andre verdier...

Watch this Scientific Journal Video about Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay at JoVE.com

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

En fremgangsmåte for syntese av luftfølsomme titan og vanadium anticancermidler er beskrevet, sammen med evalueringen av deres cytotoksiske aktivitet overfor human kreft-cellelinje ved MTT-analysen.

Anticancer Metal Komplekser: Syntese og Cytotoksisitet Evaluering av MTT analysen

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Amide Coupling Reaction for the Synthesis of Bispyridine-based Ligands and Their Complexation to Platinum as Dinuclear Anticancer Agents

Amid koplingsreaksjon for syntese av Bispyridine-baserte Ligander og deres kompleks til Platinum som bisykliske legemidler mot kreft

Amide coupling reactions can be used to synthesize bispyridine-based ligands for use as bridging linkers in multinuclear platinum anticancer drugs. ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Syntese og karakterisering av funksjon Metal-organisk Rammeverk

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Metal-free Synthesis of Ynones from Acyl Chlorides and Potassium Alkynyltrifluoroborate Salts

Metall-fri Syntese av Ynones fra acylklorider og Kalium Alkynyltrifluoroborate Salts

Ynones are a valuable functional group and building block in organic synthesis. Ynones serve as a precursor to many important organic functional groups ...

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

The Synthesis, Characterization og reaktivitet av en serie av Ruthenium<em&gt; N</em&gt; -triphos<sup&gt; Ph</sup&gt; Komplekser

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the ...

Reverse Microemulsion-mediated Synthesis of Monometallic and Bimetallic Early Transition Metal Carbide and Nitride Nanoparticles

Omvendt Mikroemulsjon-mediert Syntese av mono og bimetall Tidlig Transition Metal Carbide og Nitride Nanopartikler

A reverse microemulsion is used to encapsulate monometallic or bimetallic early transition metal oxide nanoparticles in microporous silica shells. The ...

Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

Synthesis of a Water-soluble MetalÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã…â€œOrganic Complex Array

Syntese av en vann-løselig metall-organisk kompleks rekke

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as ...

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions

palladium<em&gt; N</em&gt; -Heterocykliske karbenkomplekser: Syntese fra benzimidazoliumsalter og katalytisk aktivitet i karbon-karbon-bindingsdannende reaksjoner

Detailed and generalized protocols are presented for the synthesis and subsequent purification of four palladium N-heterocyclic carbene complexes from ...

Synthesis and Evaluation of a Ruthenium-based Mitochondrial Calcium Uptake Inhibitor

Syntese og evaluering av en Ruthenium-baserte mitokondrie kalsium opptak hemmer

We detail the synthesis and purification of a mitochondrial calcium uptake inhibitor, [(OH2)(NH3)4Ru(&#181;-O)Ru(NH3)4(OH2)]5+. The optimized synthesis of ...

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction

Syntese og ytelse karakteristikkene av transisjonsmetall enkelt Atom katalysator elektrokjemiske CO2 reduksjon

This protocol presents both the synthesis method of the Ni single atom catalyst, and the electrochemical testing of its catalytic activity and selectivity ...