Name: using click chemistry to measure the effect of viral infection on host-cell rna synthesis
Uploaded: 2013-08-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis Video at JoVE.com

Vi tackar RB Tesh för att ge musen polyklonala anti-RVFV antiserum och M. Griffin av UTMB flödescytometri Core Facility för hjälp med flödescytometri. Detta arbete stöddes av 5 U54 AI057156 genom Västra Regional Center of Excellence, NIH R01 AI08764301, och finansiering från Sealy Centrum för utvecklingen av vaccin vid UTMB.BK stöddes av James W. McLaughlin Fellowship Fund at UTMB.OL stöddes av en Maurice R. Hilleman början av karriären karriär Investigator Award.

Analys av transkription genom fluorescensmikroskopi Ett. Infektera celler med MP-12 och Etikett Begynnande RNA med EU <ol><li> Placera 12-mm runda täckglas i 12-brunnars vävnadsodlingsplatta, ett täckglas per brunn. </li></ol> Obs: Om cellerna har problem som ansluter sig till täckglas, belägga med poly-L-lysin (MW ≥ 70.000) innan den placeras i brunnar. I detta syfte submerge täckglas i en steril 0,1 mg / ml lösning i H2O av poly-L...

<ol>
	<li>Fakan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+support+for+RNA+synthesis+in+the+cell+nucleus.">Structural support for RNA synthesis in the cell nucleus.</a> Methods Achiev. Exp. Pathol. 12, 105-140 (1986).</li><li>Jensen, P. O., Larsen, J., Christiansen, J., Larsen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+measurement+of+RNA+synthesis+using+bromouridine+labelling+and+bromodeoxyuridine+antibodies.">Flow cytometric measurement of RNA synthesis using bromouridine labelling and bromodeoxyuridine antibodies.</a> Cytometry. 14, 455-458 (1993).</li><li>Jao, C. Y., Salic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+RNA+transcription+and+turnover+in+vivo+by+using+click+chemistry.">Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 15779-15784 (2008).</li><li>Rostovtsev, V. V., Green, L. G., Fokin, V. V., Sharpless, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stepwise+huisgen+cycloaddition+process:+copper(I)-catalyzed+regioselective+"ligation"+of+azides+and+terminal+alkynes.">A stepwise huisgen cycloaddition process: copper(I)-catalyzed regioselective "ligation" of azides and terminal alkynes.</a> Angew Chem. Int. Ed. Engl. 41, 2596-2599 (2002).</li><li>Tornoe, C. W., Christensen, C., Meldal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptidotriazoles+on+solid+phase:+[1,2,3]-triazoles+by+regiospecific+copper(i)-catalyzed+1,3-dipolar+cycloadditions+of+terminal+alkynes+to+azides.">Peptidotriazoles on solid phase: [1,2,3]-triazoles by regiospecific copper(i)-catalyzed 1,3-dipolar cycloadditions of terminal alkynes to azides.</a> J. Org. Chem. 67, 3057-3064 (2002).</li><li>Kalveram, B., Lihoradova, O., Ikegami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NSs+protein+of+rift+valley+fever+virus+promotes+posttranslational+downregulation+of+the+TFIIH+subunit+p62.">NSs protein of rift valley fever virus promotes posttranslational downregulation of the TFIIH subunit p62.</a> J. Virol. 85, 6234-6243 (2011).</li><li>Kalveram, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rift+Valley+fever+virus+NSs+inhibits+host+transcription+independently+of+the+degradation+of+dsRNA-dependent+protein+kinase+PKR.">Rift Valley fever virus NSs inhibits host transcription independently of the degradation of dsRNA-dependent protein kinase PKR.</a> Virology. , (2012).</li><li>Head, J. A., Kalveram, B., Ikegami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+Rift+Valley+fever+virus+NSs+encoding+a+partial+truncation.">Functional analysis of Rift Valley fever virus NSs encoding a partial truncation.</a> PLoS One. 7, e45730 (2012).</li><li>Lihoradova, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Rift+Valley+Fever+Virus+MP-12+Strain+Encoding+NSs+of+Punta+Toro+Virus+or+Sandfly+Fever+Sicilian+Virus.">Characterization of Rift Valley Fever Virus MP-12 Strain Encoding NSs of Punta Toro Virus or Sandfly Fever Sicilian Virus.</a> PLoS Negl Trop Dis. 7, e2181 (2013).</li><li>Kalveram, B., Ikegami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toscana+Virus+NSs+Protein+Promotes+Degradation+of+Double-Stranded+RNA-Dependent+Protein+Kinase.">Toscana Virus NSs Protein Promotes Degradation of Double-Stranded RNA-Dependent Protein Kinase.</a> J. Virol. , (2013).</li><li>Schmaljohn, C., Nichol, S., Knipe, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In Fields Virology. , 1741-1789 (2007).</li><li>Le May, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TFIIH+transcription+factor,+a+target+for+the+Rift+Valley+hemorrhagic+fever+virus.">TFIIH transcription factor, a target for the Rift Valley hemorrhagic fever virus.</a> Cell. 116, 541-550 (2004).</li><li>Caplen, H., Peters, C. J., Bishop, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutagen-directed+attenuation+of+Rift+Valley+fever+virus+as+a+method+for+vaccine+development.">Mutagen-directed attenuation of Rift Valley fever virus as a method for vaccine development.</a> J. Gen. Virol. 66, 2271-2277 (1985).</li><li>Ikegami, T., Won, S., Peters, C. J., Makino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+infectious+Rift+Valley+fever+virus+entirely+from+cDNA,+analysis+of+virus+lacking+the+NSs+gene,+and+expression+of+a+foreign+gene.">Rescue of infectious Rift Valley fever virus entirely from cDNA, analysis of virus lacking the NSs gene, and expression of a foreign gene.</a> J. Virol. 80, 2933-2940 (2006).</li><li>Vyboh, K., Ajamian, L., Mouland, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+viral+RNA+by+fluorescence+in+situ+hybridization+(FISH).">Detection of viral RNA by fluorescence in situ hybridization (FISH).</a> J. Vis. Exp. , e4002 (2012).</li><li>Reich, E., Goldberg, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actinomycin+and+nucleic+acid+function.">Actinomycin and nucleic acid function.</a> Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 3, 183-234 (1964).</li><li>Holmes, K. L., Lantz, L. M., Russ, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugation+of+fluorochromes+to+monoclonal+antibodies.">Conjugation of fluorochromes to monoclonal antibodies.</a> Curr. Protoc. Cytom. Chapter 4 (Unit 4 2), (2001).</li></ol>

Den medföljande protokoll beskriver en metod för att mäta effekten av virusinfektion på värdcellens transkription via inkorporering av uridin analog EU till begynnande RNA. Denna metod har flera fördelar jämfört med tidigare metoder: den är snabb, känslig, och det behöver inte förlita sig på användningen av radioaktiva isotoper. Vidare kan förfarandet anpassas för att ge kvalitativa data genom fluorescensmikroskopi eller kvantitativa data via flödescytometri med användning av i huvudsak samma reagens. ...

<html> Traditionellt har transkriptionsaktivitet mätts genom inkorporering av antingen radioaktiv (3 H-uridin) 1 eller halogenerade (BRU) 2 nukleosider i begynnande RNA. Dessa uridine analoger tas upp av celler, omvandlas till uridinproducerande trifosfat (UTP) genom nukleosid bärgning vägen, och därefter införlivas i nysyntetiserad RNA. 3 H-uridin kan detekteras genom autoradiografi, vilket kan vara tidskrävande, eller scintillation räkna, vilket kräver specialiserad utrustning. Dessutom kan användningen av radioaktiva isotoper inte vara praktiskt i ett antal laboratorie-inställningar, inklusive hög inneslutning biosäkerhet laboratorier. BRU kan upptäckas genom immunfärgning med anti-BRU-antikroppar, som kan kräva hårda permeabilization att säkerställa tillgången av antikroppen till kärnan eller partiell denaturering av RNA, som RNA sekundär struktur kan vara en steriskt hinder för antikroppsbindning. _content &quot;&gt; Protokollet som beskrivs här utnyttjar den nyligen utvecklade klicka kemi 3 för att mäta transkriptionell aktivitet i celler infekterade med den RVFV stammen MP-12. Klicka kemi förlitar sig på ett mycket selektivt och effektivt koppar (I)-katalyserad cykloadditionsreaktion mellan en alkyn och en azid del 4,5. I detta protokoll är begynnande RNA i infekterade celler först märkas genom inkorporering av uridin analog EU. I ett andra steg, är den inbyggda EU upptäcks genom reaktion med en fluorescerande azid. De främsta fördelarna med denna metod är (1) att det inte kräver användning av radioaktiva isotoper och (2) att det inte kräver hårda permeabilisering eller denaturering av RNA. Med en molekylvikt på mindre än 50 Da, åtkomst av fluorescerande azid inte hindras av otillräcklig permeabilisering eller RNA sekundär struktur. Dessutom är forskarna inte begränsade i sitt val av primära antikroppar vid kombination av upptäckten av RNA med en klassiCal immunfärgning för virala proteiner. Två olika metoder beskrivs i detta protokoll: en för att visualisera transkription via fluorescensmikroskopi (steg 1-4), och en för att kvantifiera transkriptionen genom flödescytometri (steg 5-8). Båda dessa metoder kombinerar märkning av begynnande RNA med en intracellulär immunfärgning för virala proteiner, vilket möjliggör en korrelation mellan transkriptionsaktiviteten och virusinfektion på en cell för cell basis. Författarna har framgångsrikt använt det protokoll som beskrivs här för att fastställa transkriptionell aktivitet i celler infekterade med den RVFV stammen MP-12 6, celler infekterade med olika MP-12-mutanter 7,8, 9, och celler infekterade med Toscana virus (TOSV) 10. Protokollet som beskrivs här kan enkelt anpassas för användning med olika virus och har potential att modifieras till att innefatta immunofluorescensfärgning av specifika virala eller cellulära proteiner.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-ethynyl-uridine</td>
			<td>Berry &amp; Associates</td>
			<td>PY 7563</td>
			<td>dissolve in DMSO for 100 mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-mm round coverslips</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-545-82</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml polystyrene tubes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352058</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actinomycin D (ActD)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9415</td>
			<td>dissolve in DMSO for 10 mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11029</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2323</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C-8027</td>
			<td>dissolve in H2O for 100 mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D-9542</td>
			<td>dissolve in H2O for 5 mg/ml stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11965092</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent azide (Alexa Fluor 594-coupled)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10270</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent azide (Alexa Fluor 657-coupled)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10277</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-5960</td>
			<td>dissolve in H2O for 500 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paper filter</td>
			<td>VWRbrand</td>
			<td>28333-087</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140122</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-L-lysine (MW &ge; 70000)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1274</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T-8787</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T-1503</td>
			<td>dissolve in H2O for 1.5 M stock, pH 8.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200056</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>e.g. Olympus IX71</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometer</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>e.g. BD Biosciences LSRII Fortessa</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using click chemistry to measure the effect of viral infection on host-cell rna synthesis

Många RNA-virus har utvecklat förmågan att inhibera transkription värdcell som ett sätt att kringgå cellulära försvar. För studiet av dessa virus, är det därför viktigt att ha ett snabbt och tillförlitligt sätt att mäta transkriptionsaktivitet i infekterade celler. Traditionellt har transkription mätts antingen genom inkorporering av radioaktiva nukleosider såsom 3 H-uridin följt av detektering via autoradiografi eller scintillationsräkning, eller inkorporering av halogenerade uridin-analoger, såsom 5-bromouridine (BRU) följt av detektering via immunofärgning. Användningen av radioaktiva isotoper, emellertid, kräver specialiserad utrustning och är inte möjligt i ett antal laboratorie-inställningar, medan detektion av BRU kan vara besvärliga och kan lida av låg känslighet. Den nyligen utvecklade klicka kemi, vilket innebär en kopparkatalyserad triazol formation från en azid och en alkyn, ger nu en snabb och highly känslig alternativ till dessa två metoder. Klicka kemi är en process i två steg i vilket begynnande RNA först märkas genom inkorporering av uridin analogen 5-etynyluridin (EU), följt av detektion av markören med en fluorescerande azid. Dessa azider finns som flera olika fluoroforer, vilket möjliggör ett brett spektrum av möjligheter för visualisering. Detta protokoll beskriver en metod för att mäta transkriptionell dämpning i celler infekterade med Rift Valley-feber-virus (RVFV) stam MP-12 med hjälp klicka kemi. Samtidigt är uttrycket av virala proteiner i dessa celler bestämdes genom klassisk intracellulär immunfärgning. Steg 1 till 4 detalj en metod för att visualisera transkriptionell dämpning via fluorescensmikroskopi, medan steg 5 till 8 detalj en metod för att kvantifiera transkriptionell dämpning via flödescytometri. Detta protokoll är lätt att anpassa för användning med andra virus.

Den NSs proteinet av RVFV (familj Bunyaviridae, släkte Phlebovirus) 11 inhiberar värdcell allmänna transkription genom två olika mekanismer: (i) genom att binda den p44-subenheten av den basala transkriptionsfaktorn TFIIH 11 och (ii) genom att främja proteasomal nedbrytning av p62 subenheten av TFIIH 6. Den RVFV MP-12 vaccinstam 13 har använts för de experiment som beskrivs i detta protokoll sedan MP-12 stam kan hanteras i en skyddsnivå 2 laboratoriet...

Watch this Scientific Journal Video about Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis Video at JoVE.com

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis Video (Video) | JoVE

Denna metod beskriver användningen av klickar kemi för att mäta förändringar i värdcellens transkription efter infektion med Rift Valley-feber-virus (RVFV) stam MP-12. Resultaten kan visualiseras kvalitativt via fluorescensmikroskopi eller erhållas kvantitativt genom flödescytometri. Denna metod kan avpassas för användning med andra virus.

Använda klicka kemi för att mäta effekten av virusinfektion på Host-cell RNA-syntes

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens (Video) | JoVE 

Med hjälp av en Pan-Viral microarray analys (Virochip) till skärm kliniska prover för virala patogener

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency (Video) | JoVE 

Isolering av Fidelity Varianter av RNA-virus och karakterisering av virus mutationsfrekvensen

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays (Video) | JoVE 

Förstärka och kvantifiera HIV-1 RNA i hiv-infekterade individer med virusnivåer under gränsen för upptäckt med vanliga kliniska analyser

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography (Video) | JoVE 

Separation av enda DNA, dubbel-strängat DNA och RNA ur miljösynpunkt Viral gemenskapen med hjälp av hydroxyapatit Kromatografi

Viruses, particularly bacteriophages (phages), are the most numerous biological entities on Earth1,2.  Viruses modulate host cell abundance and diversity, ...

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry Video (Video) | JoVE

Kemoselektiv Ändring av virala ytor via Bioorthogonal Klicka Kemi

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms Video (Video) | JoVE

Den synergistiska effekten av synligt ljus och Gentamycin på<em&gt; Pseudomona aeruginosa</em&gt; Mikroorganismer

Recently there were several publications on the  bactericidal effect of visible light, most of them claiming that blue part of  the spectrum (400 nm-500 ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro Video (Video) | JoVE

Att upprätta en flytande täckt kultur av polariserad Human luftvägsepitelceller Calu-3 celler för att studera svar värdcellen för luftvägspatogener<em&gt; In vitro</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins Video (Video) | JoVE

Använda Overlay-analys för att Kvalitativt Mät Bakteriell Produktion av och känslighet för pneumokockinfektioner bakteriociner

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms.  We have ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans Video (Video) | JoVE

Makrofag Kolesterol Utarmning och dess effekt på Fagocytos av<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii Video (Video) | JoVE

Utvecklingen av lyofiliserad Loop-medie Isothermal amplifieringsreagenserna för detektion av<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...