Name: confocal imaging of single mitochondrial superoxide flashes in intact heart or in vivo
Uploaded: 2013-11-05T19:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة. خه بينغ تشنغ، Huiliang تشانغ وستيفن Kolwicz على تعليقاتهم المفيدة والدعم التقني في تطوير هذا الأسلوب. وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح والمنح الإنمائية العلماء من جمعية القلب الأمريكية لWW.

1. تجربة إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول ملحي متساوي التوتر متوازنة (50 مل) تحتوي على: 140 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5 ملي بوكل، 2.5 مم CaCl 2، 2 مم MgCl 2 و 10 ملي HEPES (درجة الحموضة 7.2) لفي الجسم الحي التصوير العضلات والهيكل العظمي. ...

<ol>
	<li>Brookes, P. S., Yoon, Y., Robotham, J. L., Anders, M. W., Calcium Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium,+ATP,+and+ROS:+a+mitochondrial+love-hate+triangle.">Calcium, ATP, and ROS: a mitochondrial love-hate triangle.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 287, 817-833 (2004).</li><li>Scheffler, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mitochondria. , (2008).</li><li>Rosca, M. G., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+heart+failure.">Mitochondria in heart failure.</a> Cardiovasc. Res. 88, 40-50 (2010).</li><li>Griffiths, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+heart+disease.">Mitochondria and heart disease.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 942, 249-267 (2012).</li><li>Winklhofer, K. F., Haass, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+Parkinson's+disease.">Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1802, 29-44 (2010).</li><li>Pieczenik, S. R., Neustadt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+molecular+pathways+of+disease.">Mitochondrial dysfunction and molecular pathways of disease.</a> Exp. Mol. Pathol. 83, 84-92 (2007).</li><li>Szentesi, P., Zaremba, R., van Mechelen, W., Stienen, G. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+utilization+for+calcium+uptake+and+force+production+in+different+types+of+human+skeletal+muscle+fibres.">ATP utilization for calcium uptake and force production in different types of human skeletal muscle fibres.</a> J. Physiol. 531, 393-403 (2001).</li><li>Lemieux, H., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+the+human+heart.">Mitochondria in the human heart.</a> J. Bioenerg. Biomembr. 41, 99-106 (2009).</li><li>Chance, B., Williams, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+enzymes+in+oxidative+phosphorylation.+III.+The+steady+state.">Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. III. The steady state.</a> J. Biol. Chem. 217, 409-427 (1955).</li><li>Lambert, A. J., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+production+by+mitochondria.">Reactive oxygen species production by mitochondria.</a> Methods Mol Biol. 554, 165-181 (2009).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochem. J. 435, 297-312 (2011).</li><li>Robinson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+fluorescent+imaging+of+superoxide+in+vivo+using+ethidium-based+probes.">Selective fluorescent imaging of superoxide in vivo using ethidium-based probes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15038-15043 (2006).</li><li>Dickinson, B. C., Srikun, D., Chang, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial-targeted+fluorescent+probes+for+reactive+oxygen+species.">Mitochondrial-targeted fluorescent probes for reactive oxygen species.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 14, 50-56 (2010).</li><li>Dooley, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+dynamic+redox+changes+in+mammalian+cells+with+green+fluorescent+protein+indicators.">Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators.</a> J. Biol. Chem. 279, 22284-22293 (2004).</li><li>Hanson, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+mitochondrial+redox+potential+with+redox-sensitive+green+fluorescent+protein+indicators.">Investigating mitochondrial redox potential with redox-sensitive green fluorescent protein indicators.</a> J. Biol. Chem. 279, 13044-13053 (2004).</li><li>Belousov, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+intracellular+hydrogen+peroxide.">Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide.</a> Nat. Methods. 3, 281-286 (2006).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+Flashes+in+Single+Mitochondria.">Superoxide Flashes in Single Mitochondria.</a> Cell. 134, 279-290 (2008).</li><li>Wei-Lapierre, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respective+Contribution+of+Mitochondrial+Superoxide+and+pH+to+Mitochondria-targeted+Circularly+Permuted+Yellow+Fluorescent+Protein+(mt-cpYFP)+Flash+Activity.">Respective Contribution of Mitochondrial Superoxide and pH to Mitochondria-targeted Circularly Permuted Yellow Fluorescent Protein (mt-cpYFP) Flash Activity.</a> J. Biol. Chem. 288, 10567-10577 (2013).</li><li>Fang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+superoxide+flash+and+metabolism-coupled+mitochondrial+permeability+transition+in+living+animals.">Imaging superoxide flash and metabolism-coupled mitochondrial permeability transition in living animals.</a> Cell Res. 21, 1295-1304 (2011).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+superoxide+flashes:+metabolic+biomarkers+of+skeletal+muscle+activity+and+disease.">Mitochondrial superoxide flashes: metabolic biomarkers of skeletal muscle activity and disease.</a> FASEB J. 25, 3068-3078 (2011).</li><li>Sheu, S. S., Wang, W., Cheng, H., Dirksen, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes:+illuminating+new+insights+into+cardiac+ischemia/reperfusion+injury.">Superoxide flashes: illuminating new insights into cardiac ischemia/reperfusion injury.</a> Future Cardiol. 4, 551-554 (2008).</li><li>Wei, L., Dirksen, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+on:+SGP+symposium+on+mitochondrial+physiology+and+medicine:+mitochondrial+superoxide+flashes:+from+discovery+to+new+controversies.">Perspectives on: SGP symposium on mitochondrial physiology and medicine: mitochondrial superoxide flashes: from discovery to new controversies.</a> J. Gen. Physiol. 139, 425-434 (2012).</li><li>Johnson, I., Spence, M. T. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+12.2.">Ch. 12.2.</a> The Molecular Probes Handbook, A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies. , 510-511 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes:+elemental+events+of+mitochondrial+ROS+signaling+in+the+heart.">Superoxide flashes: elemental events of mitochondrial ROS signaling in the heart.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 52, 940-948 (2012).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes+reveal+novel+properties+of+mitochondrial+reactive+oxygen+species+excitability+in+cardiomyocytes.">Superoxide flashes reveal novel properties of mitochondrial reactive oxygen species excitability in cardiomyocytes.</a> Biophys. J. 102, 1011-1021 (2012).</li><li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+The+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 50, 940-950 (2011).</li><li>Pasdois, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+diazoxide+on+flavoprotein+oxidation+and+reactive+oxygen+species+generation+during+ischemia-reperfusion:+a+study+on+Langendorff-perfused+rat+hearts+using+optic+fibers.">Effect of diazoxide on flavoprotein oxidation and reactive oxygen species generation during ischemia-reperfusion: a study on Langendorff-perfused rat hearts using optic fibers.</a> Am. J. Physiol. 294, H2088-H2097 (2008).</li><li>Granville, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia+and+reperfusion-induced+myocardial+damage+by+cytochrome+P450+inhibitors.">Reduction of ischemia and reperfusion-induced myocardial damage by cytochrome P450 inhibitors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 1321-1326 (2004).</li><li>Davidson, S. M., Yellon, D. M., Murphy, M. P., Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+calcium+waves+and+redox+changes+precede+mitochondrial+permeability+transition+pore+opening+in+the+intact+heart+during+hypoxia+and+reoxygenation.">Slow calcium waves and redox changes precede mitochondrial permeability transition pore opening in the intact heart during hypoxia and reoxygenation.</a> Cardiovasc. Res. 93, 445-453 (2012).</li></ol>

تصوير الأحداث الميتوكوندريا واحد في الحيوانات الحية أو الأجهزة perfused لديه ميزة كبيرة على الأساليب التقليدية لتقييم وظيفة الميتوكوندريا 17،19،21،22،24،25. تقنية الموضحة هنا يمكن أن يحقق في الوقت الحقيقي في تحديد الموضع وظيفة الميتوكوندريا في حالة فسيولوج?...

الميتوكوندريا تلعب دورا محوريا في الطاقة الحيوية الخلوية، مما يشير الى الجذور الحرة، الأكسدة التوازن، وتنظيم أيون، وتقرير مصير الخلية 1،2. ضعف الميتوكوندريا غالبا ما ترافق وراء التسبب في الأمراض 3-6. وخصوصا في النظم العضلات مثل القلب والعضلات والهيكل العظمي، ويوفر التنفس الميتوكوندريا غالبية ATP لدعم التنظيم في الوقت المناسب من الكالسيوم داخل الخلايا وقوية 7،8 تطوير القوة. هذه العضلات امتلاك عدد كبير من الميتوكوندريا التي غالبا ما تشغل ما يصل الى 20-40٪ من حجم الخلية الكلي و&quot;الثابتة&quot; بين لل myofilaments 2. على الرغم من العديد من الدراسات، فهمنا للتنظيم وظيفة الميتوكوندريا، وتحديدا في الجسم الحي، وتحت الظروف ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية، محدودة. أحد الأسباب هو أن غالبية الطرق وضعت لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في الاعتماد على vitro أو خارج الحي النهج، مثل مراقبة استهلاك الأوكسجين الميتوكوندريا المعزولة تستكمل مع ركائز مصطنعة، وغير المباشرة لتحديد وظيفة الميتوكوندريا من خلال التشكل (مثل الإلكترون المجهري)، نشاط انزيم (مثل النشاط أكونيتاز)، أو مستويات ATP داخل الخلايا 9-11 . مؤخرا، مؤشرات الفلورسنت جزيء صغير مع تخصيب الميتوكوندريا النسبية طبقت لتقديم لمحة عن إشارات الميتوكوندريا، بما في ذلك إمكانات غشاء، والكالسيوم وأنواع الاكسجين التفاعلية (ROS)، في الخلايا سليمة 11-13. علاوة على ذلك، العديد من الأخضر بروتين فلوري (GFP) الأكسدة ومقرها وضعت مؤشرات لتحقيق ROS تقييم أكثر تحديدا من الأكسدة داخل الخلايا مجزأة أو ROS يشير 14-16. بين هذا، قمنا بتطوير مؤشر المشفرة وراثيا الفائق، ومبدل بروتين فلوري الصفراء دائرية، وtargeteد عليه في الميتوكوندريا (MT-cpYFP) 17. MT-cpYFP يمكن متحمس في 405 أو 488 نانومتر مع كل قمم الانبعاثات في 515 نانومتر. انبعاث في 488 نانومتر الإثارة تستجيب خصيصا لالفائق كما يتضح من السابق في التجارب المختبرية والمعايرة فيفو 17،18. يتم استخدام الانبعاثات في 405 نانومتر الإثارة كما الرقابة الداخلية (يرجى الرجوع إلى الشكل 1 من المرجع 17 للحصول على معلومات مفصلة عن الانبعاثات والإثارة أطياف MT-cpYFP في ظل ظروف مختلفة). مع مرور الزمن التصوير متحد البؤر، وهذا مؤشر يكشف انفجار الأحداث الإنتاج الفائق، واسمه ومضات الفائق، في الميتوكوندريا واحدة من الخلايا سليمة. يقدم الفائق فلاش بوصفها وظيفة مركب من التنفس الميتوكوندريا، المرفقة عابرة الميتوكوندريا الاستقطاب الغشاء وROS إنتاج 17-20. في الآونة الأخيرة، ونحن قد ولدت الأنسجة عموم MT-cpYFP الفئران المعدلة وراثيا باستخدام ناقلات تقوم تقنية-CAGGS-MT-cpYFP 17،19 C57/BL6 على خلفية والتحقق من اكسبريس قويةسيون من هذا المؤشر في قلب والعضلات والهيكل العظمي والأنسجة الأخرى (الشكل 2). فإن الفئران المعدلة وراثيا تكون متاحة للمحققين الأكاديمية المهتمة بناء على طلب وموافقة MTA من جامعة واشنطن. في هذه الدراسة، ونحن تصف الوضع الطبيعي من ومضات التصوير الفائق في قلب Langendorff perfused وكذلك في الجسم الحي التصوير من الأحداث فلاش في عضلات الهيكل العظمي من تخدير MT-cpYFP الفئران المعدلة وراثيا في 17،19. هذه التكنولوجيا تتيح رصد في الوقت الحقيقي للأحداث إنتاج ريوس الميتوكوندريا واحد في حالة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية في الجسم الحي أو 21،22. بل هو أيضا من المجدي استخدام نظام لرصد الأخرى المعلمات الميتوكوندريا واحد مثل غشاء المحتملة والكالسيوم مع مؤشرات الفلورسنت المناسبة. التقييم كذلك، في وقت واحد أو بالتوازي وظيفة الميتوكوندريا مع الأحداث داخل الخلايا (مثل العابرين الكالسيوم) أو وظيفة القلب (على سبيل المثال. جزء طرد) لا يمكن أن يتحقق. الاضطرابات المرضية، مثل نقص التروية وضخه، يمكن تطبيقها على قلب perfused لتقييم تأثير الإجهاد على وظيفة الميتوكوندريا واحدة في عضلة القلب سليمة.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Toronto Research Chemicals</td>
			<td>B592500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC34961-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H7006-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#8226;6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1880-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6014-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2256-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMRM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T-668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Confocal Line Scanning Microscope (LSM 510 Meta, Zeiss), software version 4.2 SP1 including &#34;Physiological Analysis&#34; module.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal imaging of single mitochondrial superoxide flashes in intact heart or in vivo

الحبيبات الخيطية هي عضية داخل الخلايا الحرجة المسؤولة عن إنتاج الطاقة والإشارات بين الخلايا في أنظمة حقيقية النواة. ضعف الميتوكوندريا غالبا ما ترافق وتساهم في الأمراض التي تصيب البشر. وتستند غالبية المناهج التي تم تطويرها لتقييم وظيفة الميتوكوندريا واختلال وظيفي في المختبر أو على فيفو السابقين القياسات. والنتائج من هذه التجارب القدرة في تحديد وظيفة الميتوكوندريا في الجسم الحي محدودة. هنا، نحن تصف الرواية التي تستخدم نهج متحد البؤر المسح المجهري للتصوير الأنسجة سليمة في aminals الحية، والذي يسمح للتقييم وظيفة الميتوكوندريا واحد بطريقة الوقت الحقيقي في الجسم الحي. أولا، نحن توليد الفئران المعدلة وراثيا معربا عن الميتوكوندريا المستهدفة مؤشر الفائق، مبدل دائري بروتين فلوري الصفراء (MT-cpYFP). يتم إصلاح MT-cpYFP تخدير الماوس على محول المرحلة حسب الطلب ويتم أخذ الصور الوقت الفاصل بين وROM عضلات الهيكل العظمي المكشوفة من hindlimb. وضحى الماوس في وقت لاحق ويتم تعيين ما يصل لقلب Langendorff نضح مع حلول فسيولوجية في 37 درجة مئوية. يتم وضع القلب perfused في غرفة خاصة على المسرح المجهر متحد البؤر ويتم تطبيق ضغط لطيف لشل حركة القلب وقمع ضربات القلب التي يسببها قطعة أثرية الحركة. تم الكشف عن ومضات الفائق من قبل في الوقت الحقيقي التصوير 2D متحد البؤر على تردد إطار واحد في الثانية الواحدة. الحل نضح يمكن تعديلها لاحتواء ركائز مختلفة التنفس أو مؤشرات الفلورسنت الأخرى. ويمكن أيضا نضح تعديلها لإنتاج نماذج مرض مثل نقص التروية وضخه. هذا الأسلوب هو نهج فريد لتحديد وظيفة واحدة في الحبيبات الخيطية أنسجة سليمة والحية.

وفقا لهذا البروتوكول، في الجسم الحي التصوير من الأحداث الميتوكوندريا واحد يمكن القيام به في عضلات الهيكل العظمي من الفئران تخدير تليها التصوير في الموقع perfused القلب (الشكل 1) في. سوف الإعداد الأمثل للظروف التصوير ضمان صور واضحة للأنسجة العضلات...

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo at JoVE.com

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

يتم تطبيق متحد البؤر المسح المجهري لتصوير الأحداث الميتوكوندريا واحد في القلب perfused أو عضلات الهيكل العظمي في الحيوانات الحية. رصد في الوقت الحقيقي للعمليات الميتوكوندريا واحد مثل ومضات الفائق وغشاء التقلبات المحتملة يمكن تقييم وظيفة الميتوكوندريا في سياق ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية وخلال الاضطرابات المرضية.

التصوير متحد البؤر واحدة من الميتوكوندريا الأكسيد ومضات في القلب سليمة أو<em&gt; في فيفو</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Research

JoVE Journal

Biology

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

وحيد الخلية في الجسم الحي Electroporation داخل الدماغ سليمة النامية

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

تسجيلات شفط وحيدة الخلية المستقبلة من المخروط ماوس

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

في التصوير من يرقات ذبابة الفاكهة فيفو سليمة الفرعية الخلوية في القرار

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

تقييم الكالسيوم سباركس السليمة في ألياف العضلات الهيكلية

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

أون كشف الوجه من اكسيد النيتريك وفوق الأكسيد في طبقة بطانة الأوعية الدموية من شرايين سليمة

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

عالية الدقة قياس التنفس لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في Permeabilized وخلايا سليمة

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

إعداد ذبابة الفاكهة والتصوير الطولي من وظيفة القلب في فيفو باستخدام البصرية بالاتساق المجهري (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

[كنفوكل] التصوير من Neuropeptide Y-فلورين: تقنية لتصور الأنسولين الحبيبية للرقابة في الجزيرات سليمة مورين والبشرية

Insulin secretion plays a central role in glucose homeostasis under normal physiological conditions as well as in disease. Current approaches to study ...

Single-Cell Resolution Three-Dimensional Imaging of Intact Organoids

وحيد الخلية القرار التصوير ثلاثي الأبعاد من organoids سليمة

Organoid technology, in vitro 3D culturing of miniature tissue, has opened a new experimental window for cellular processes that govern organ development ...

Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells (Video) | JoVE 

القياس الكمي القائم على التألق لإمكانات غشاء الميتوكوندريا ومستويات الأكسيد الفائق باستخدام التصوير المباشر في خلايا هيلا

Mitochondria are dynamic organelles critical for metabolic homeostasis by controlling energy production via ATP synthesis. To support cellular metabolism, ...