Name: confocal imaging of single mitochondrial superoxide flashes in intact heart or in vivo
Uploaded: 2013-11-05T19:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke legene. Heping Cheng, Huiliang Zhang og Stephen Kolwicz for nyttige kommentarer og teknisk støtte i å utvikle denne metoden. Denne studien ble støttet av NIH tilskudd og Scientist Development Grant fra American Heart Association til WW.

En. Eksperiment Forberedelse <ol><li> Klargjør isotonisk balanserte saltløsning (50 ml) inneholdende: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2,5 mM CaCl 2, 2 mM MgCl2 og 10 mM HEPES (pH 7,2) for in vivo avbildning skjelettmuskel. </li><li> Tilbered en L av Krebs-Henseleit buffer (KHB) inneholdende: 118 mM NaCl, 5,3 mM KCl, 1,2 mM MgSo4, 0,5 mM EDTA og 25 mM NaHCO3. </li><li> Boble den KHB med gass inneholdende 95% O2 / 5% CO2 i 10-15 minutter før tilsetning...

<ol>
	<li>Brookes, P. S., Yoon, Y., Robotham, J. L., Anders, M. W., Calcium Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium,+ATP,+and+ROS:+a+mitochondrial+love-hate+triangle.">Calcium, ATP, and ROS: a mitochondrial love-hate triangle.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 287, 817-833 (2004).</li><li>Scheffler, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mitochondria. , (2008).</li><li>Rosca, M. G., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+heart+failure.">Mitochondria in heart failure.</a> Cardiovasc. Res. 88, 40-50 (2010).</li><li>Griffiths, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+heart+disease.">Mitochondria and heart disease.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 942, 249-267 (2012).</li><li>Winklhofer, K. F., Haass, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+in+Parkinson's+disease.">Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1802, 29-44 (2010).</li><li>Pieczenik, S. R., Neustadt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+molecular+pathways+of+disease.">Mitochondrial dysfunction and molecular pathways of disease.</a> Exp. Mol. Pathol. 83, 84-92 (2007).</li><li>Szentesi, P., Zaremba, R., van Mechelen, W., Stienen, G. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+utilization+for+calcium+uptake+and+force+production+in+different+types+of+human+skeletal+muscle+fibres.">ATP utilization for calcium uptake and force production in different types of human skeletal muscle fibres.</a> J. Physiol. 531, 393-403 (2001).</li><li>Lemieux, H., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+in+the+human+heart.">Mitochondria in the human heart.</a> J. Bioenerg. Biomembr. 41, 99-106 (2009).</li><li>Chance, B., Williams, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+enzymes+in+oxidative+phosphorylation.+III.+The+steady+state.">Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. III. The steady state.</a> J. Biol. Chem. 217, 409-427 (1955).</li><li>Lambert, A. J., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+production+by+mitochondria.">Reactive oxygen species production by mitochondria.</a> Methods Mol Biol. 554, 165-181 (2009).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochem. J. 435, 297-312 (2011).</li><li>Robinson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+fluorescent+imaging+of+superoxide+in+vivo+using+ethidium-based+probes.">Selective fluorescent imaging of superoxide in vivo using ethidium-based probes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15038-15043 (2006).</li><li>Dickinson, B. C., Srikun, D., Chang, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial-targeted+fluorescent+probes+for+reactive+oxygen+species.">Mitochondrial-targeted fluorescent probes for reactive oxygen species.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 14, 50-56 (2010).</li><li>Dooley, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+dynamic+redox+changes+in+mammalian+cells+with+green+fluorescent+protein+indicators.">Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators.</a> J. Biol. Chem. 279, 22284-22293 (2004).</li><li>Hanson, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+mitochondrial+redox+potential+with+redox-sensitive+green+fluorescent+protein+indicators.">Investigating mitochondrial redox potential with redox-sensitive green fluorescent protein indicators.</a> J. Biol. Chem. 279, 13044-13053 (2004).</li><li>Belousov, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+intracellular+hydrogen+peroxide.">Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide.</a> Nat. Methods. 3, 281-286 (2006).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+Flashes+in+Single+Mitochondria.">Superoxide Flashes in Single Mitochondria.</a> Cell. 134, 279-290 (2008).</li><li>Wei-Lapierre, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respective+Contribution+of+Mitochondrial+Superoxide+and+pH+to+Mitochondria-targeted+Circularly+Permuted+Yellow+Fluorescent+Protein+(mt-cpYFP)+Flash+Activity.">Respective Contribution of Mitochondrial Superoxide and pH to Mitochondria-targeted Circularly Permuted Yellow Fluorescent Protein (mt-cpYFP) Flash Activity.</a> J. Biol. Chem. 288, 10567-10577 (2013).</li><li>Fang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+superoxide+flash+and+metabolism-coupled+mitochondrial+permeability+transition+in+living+animals.">Imaging superoxide flash and metabolism-coupled mitochondrial permeability transition in living animals.</a> Cell Res. 21, 1295-1304 (2011).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+superoxide+flashes:+metabolic+biomarkers+of+skeletal+muscle+activity+and+disease.">Mitochondrial superoxide flashes: metabolic biomarkers of skeletal muscle activity and disease.</a> FASEB J. 25, 3068-3078 (2011).</li><li>Sheu, S. S., Wang, W., Cheng, H., Dirksen, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes:+illuminating+new+insights+into+cardiac+ischemia/reperfusion+injury.">Superoxide flashes: illuminating new insights into cardiac ischemia/reperfusion injury.</a> Future Cardiol. 4, 551-554 (2008).</li><li>Wei, L., Dirksen, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+on:+SGP+symposium+on+mitochondrial+physiology+and+medicine:+mitochondrial+superoxide+flashes:+from+discovery+to+new+controversies.">Perspectives on: SGP symposium on mitochondrial physiology and medicine: mitochondrial superoxide flashes: from discovery to new controversies.</a> J. Gen. Physiol. 139, 425-434 (2012).</li><li>Johnson, I., Spence, M. T. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+12.2.">Ch. 12.2.</a> The Molecular Probes Handbook, A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies. , 510-511 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes:+elemental+events+of+mitochondrial+ROS+signaling+in+the+heart.">Superoxide flashes: elemental events of mitochondrial ROS signaling in the heart.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 52, 940-948 (2012).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+flashes+reveal+novel+properties+of+mitochondrial+reactive+oxygen+species+excitability+in+cardiomyocytes.">Superoxide flashes reveal novel properties of mitochondrial reactive oxygen species excitability in cardiomyocytes.</a> Biophys. J. 102, 1011-1021 (2012).</li><li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+The+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 50, 940-950 (2011).</li><li>Pasdois, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+diazoxide+on+flavoprotein+oxidation+and+reactive+oxygen+species+generation+during+ischemia-reperfusion:+a+study+on+Langendorff-perfused+rat+hearts+using+optic+fibers.">Effect of diazoxide on flavoprotein oxidation and reactive oxygen species generation during ischemia-reperfusion: a study on Langendorff-perfused rat hearts using optic fibers.</a> Am. J. Physiol. 294, H2088-H2097 (2008).</li><li>Granville, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia+and+reperfusion-induced+myocardial+damage+by+cytochrome+P450+inhibitors.">Reduction of ischemia and reperfusion-induced myocardial damage by cytochrome P450 inhibitors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 1321-1326 (2004).</li><li>Davidson, S. M., Yellon, D. M., Murphy, M. P., Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+calcium+waves+and+redox+changes+precede+mitochondrial+permeability+transition+pore+opening+in+the+intact+heart+during+hypoxia+and+reoxygenation.">Slow calcium waves and redox changes precede mitochondrial permeability transition pore opening in the intact heart during hypoxia and reoxygenation.</a> Cardiovasc. Res. 93, 445-453 (2012).</li></ol>

Imaging enkelt mitokondrielle hendelser i levende dyr eller perfusert organer har betydelig fordel i forhold til tradisjonelle metoder for mitokondrienes funksjon evaluering 17,19,21,22,24,25. Teknikken som beskrives her kan oppnå sanntids-bestemmelse på stedet av mitokondriell funksjon i en fast fysiologisk tilstand ved subcellulære oppløsning. Dette er spesielt nyttig i kombinasjon med andre målinger for å systemisk studere rollen til mitokondrier i den normale funksjonen til et bestemt organ...

Mitokondrier spille en sentral rolle i celle bioenergi, frie radikaler signalering, redoks homeostase, ion regulering, og celle skjebne besluttsomhet 1,2. Mitokondrier dysfunksjon ofte følger og ligger til grunn for patogenesen av sykdommer 3-6. Spesielt i de muskelsystemene som hjerte og skjelettmuskler, gir mitokondriell respirasjon flertallet av ATP til å støtte rettidig regulering av intracellulært kalsium og robust kraft utvikling 7,8. Disse muskler har et stort antall mitokondria som ofte opptar opp til 20-40% av det totale cellevolum, og er &quot;fast&quot; i mellom myofilaments 2. Til tross for en rekke studier, vår forståelse av mitokondrienes funksjon regulering, spesielt in vivo og under fysiologisk relevante forhold, er begrenset. En av grunnene er at flertallet av de metodene som er utviklet for å vurdere mitokondrienes funksjon stole på i vitro eller ex vivo metoder, slik som å overvåke oksygenforbruk av isolerte mitokondrier supplert med kunstige substrater, og den indirekte bestemmelse av mitokondriell funksjon gjennom morfologi (f.eks elektronmikroskopi), enzymaktivitet (f.eks aconitase aktivitet), eller intracellulære ATP-nivåer 9-11 . Nylig har lite molekyl fluorescerende indikatorer med relativ mitokondrie berikelse blitt brukt til å gi et glimt av de mitokondrielle signaler, inkludert membranpotensialet, kalsium og reaktive oksygen arter (ROS), i intakte celler 11-13. Dessuten er flere grønt fluorescerende protein (GFP) basert Redox og ROS indikatorer har blitt utviklet for å oppnå en mer konkret vurdering av den compartmentalized intracellulære redoks eller ROS signaliserer 14-16. Blant dette, har vi utviklet en genetisk kodet superoksid indikator, den sirkulære permuted gul fluoriserende protein, og targeted det inn i mitokondriene (mt-cpYFP) 17. mt-cpYFP kan bli opphisset på 405 eller 488 nm med både utslipps topper på 515 nm. Den emisjon ved 488 nm eksitasjon er spesielt tilpasset superoksid som vist ved foregående in vitro og in vivo kalibreringer 17,18. Utslippet på 405 nm eksitasjon brukes som intern kontroll (se Figur 1 av Ref 17 for detaljert informasjon om utslipp og eksitasjon spektra av mt-cpYFP under ulike forhold). Med time-lapse confocal bildebehandling, oppdager denne indikatoren sprengning superoksydproduksjon hendelser, kalt superoxide blinker, i enkelt mitokondriene av intakte celler. Superoksid flash fungerer som en sammensatt funksjon av mitokondriell respirasjon, medfølgende forbigående mitokondriemembranen depolarisering og ROS produksjon 17-20. Nylig, har vi generert de pan-vev mt-cpYFP transgene mus ved hjelp av pUC-CAGGS-mt-cpYFP vektor 17,19 på C57/BL6 bakgrunn og bekreftet den sterke uttrykksjon av denne indikator i hjerte, skjelettmusklene og andre vev (fig. 2). Den transgene mus vil være tilgjengelig for interesserte akademiske etterforskere på forespørsel og MTA godkjenning ved University of Washington. I denne studien, vi beskrive in situ avbildning av superoxide blinker i Langendorff perfundert hjertet så vel som in vivo avbildning av flash hendelser i skjelettmuskulatur av bedøvede mt-cpYFP transgene mus 17,19. Denne teknologien gjør det mulig for sanntids overvåkning av enkelt mitokondrielle ROS produksjons hendelser i en fysiologisk relevant tilstand eller in vivo 21,22. Det er også mulig å bruke systemet for å overvåke andre enkelt mitokondrielle parametere som membranpotensialet og kalsium med egnede fluorescerende indikatorer. Videre, samtidig eller parallell evaluering av mitokondrienes funksjon med intracellulære hendelser (f.eks kalsium transienter) eller hjertefunksjon (f.eks. Ejeksjonsfraksjon) kan oppnås. Patologiske forstyrrelser, slik som iskemi og reperfusjon, kan påføres på den perfusert hjerte å vurdere virkningen av belastningen på enkel mitokondriefunksjon i det intakte myokardium.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Toronto Research Chemicals</td>
			<td>B592500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC34961-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H7006-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#8226;6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1880-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6014-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2256-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMRM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T-668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Confocal Line Scanning Microscope (LSM 510 Meta, Zeiss), software version 4.2 SP1 including &#34;Physiological Analysis&#34; module.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal imaging of single mitochondrial superoxide flashes in intact heart or in vivo

Mitokondrie er en kritisk intracellulære organeller ansvarlig for energiproduksjon og intracellulær signalisering i eukaryote systemer. Mitokondriell dysfunksjon ofte følger med og bidrar til sykdom hos mennesker. Flertallet av de tilnærmingene som er blitt utviklet for å evaluere mitokondrienes funksjon og dysfunksjon er basert på in vitro eller ex vivo målinger. Resultatene fra disse forsøkene har begrenset evne til å bestemme mitokondriell funksjon in vivo. Her beskriver vi en ny tilnærming som utnytter confocal scanning mikroskopi for avbildning av intakt vev i levende aminals, som tillater evaluering av enkeltmitokondriefunksjonen i en sanntid måte in vivo. Først genererer vi transgene mus som uttrykker mitokondrie målrettet superoksid indikator, sirkulært permuted gul fluoriserende protein (mt-cpYFP). Bedøvet mt-cpYFP musen er fiksert på et skreddersydd scene adapter og tid-lapse bildene er tatt fROM de utsatte musklene i bakbena. Musen ble deretter avlivet og hjerte er satt opp etter Langendorff perfusjon med fysiologiske løsninger ved 37 ° C. Den perfusert hjerte er anbragt i et særskilt kammer på konfokalmikroskop fase og lett trykk påføres for å immobilisere hjertet og undertrykke hjerterytme indusert bevegelsesartefakter. Superoksid blinker oppdages av sanntids 2D confocal avbildning med en frekvens på ett bilde per sekund. Perfusjon løsning kan bli endret for å inneholde ulike åndedrett underlag eller andre fluorescerende indikatorer. Den perfusjon kan også bli justert for å produsere sykdomsmodeller slik som iskemi og reperfusjon. Denne teknikken er en unik metode for å bestemme funksjonen av enkelt mitokondrie i intakt vev, og in vivo.

I henhold til denne protokollen, kan in vivo-avbildning av enkelt mitokondrielle arrangementer gjøres i skjelettmuskulaturen i bedøvede mus, etterfulgt av in situ avbildning i perfusert hjerte (figur 1). Den optimale innstilling av de bildedannende betingelser vil sikre klare bilder av de intakte muskelvev og med enkelt mitokondrie-oppløsning (figur 2). TMRM blir ofte brukt til å bekrefte plasseringen av mt-cpYFP og bør vise en komplett overlappende mønster med m...

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo at JoVE.com

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Konfokal scanning mikroskopi brukes for å avbilde enkelt mitokondrielle hendelser i perfundert hjerte eller skjelettmuskulatur i levende dyr. Real-time overvåkning av enkelt mitokondrielle prosesser som superoxide blinker og membran potensielle svingninger gjør at evalueringen av mitokondrienes funksjon i en fysiologisk relevant kontekst og i løpet av patologiske forstyrrelser.

Confocal Imaging av enkelt Mitokondrielle superoksid Blinker Intakt hjerte eller<em&gt; I Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Research

JoVE Journal

Biology

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Vurdering av kalsium Sparks i Intakt skjelettmuskelfibre

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection av nitrogenoksid og Superoxide i endothelial lag av intakte Arterier

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

Høy oppløsning respirometri å vurdere mitokondrienes funksjon i permeabilized og intakte celler

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

Drosophila Utarbeidelse og Longitudinal Imaging av hjertefunksjonen in vivo ved hjelp Optical Coherence Mikroskopi (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

AC confocal Imaging av Neuropeptide Y-pHluorin: en teknikk for å visualisere Insulin Granule Exocytosis i intakt Murine og menneskelig holmer

Insulin secretion plays a central role in glucose homeostasis under normal physiological conditions as well as in disease. Current approaches to study ...

Single-Cell Resolution Three-Dimensional Imaging of Intact Organoids

Encellede oppløsning tredimensjonal avbildning av intakte organoider

Organoid technology, in vitro 3D culturing of miniature tissue, has opened a new experimental window for cellular processes that govern organ development ...

Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells (Video) | JoVE 

Fluorescensbasert kvantifisering av mitokondriemembranpotensial og superoksidnivåer ved bruk av levende avbildning i HeLa-celler

Mitochondria are dynamic organelles critical for metabolic homeostasis by controlling energy production via ATP synthesis. To support cellular metabolism, ...