Name: in vitro coculture assay to assess pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration
Uploaded: 2014-01-06T15:45:00
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इस काम को एनआईएच (1 R01 AI095338-01A1) द्वारा आर्थिक रूप से समर्थन दिया गया था।

कदम (1-3) एक लैमिनार प्रवाह हुड के तहत एक बाँझ वातावरण में किया जाना चाहिए। 
1. कोलेजन कोटिंग ट्रांसवेल्स
<ol><li>30 माइक्रोन/एमएल कोलेजन का घोल बनाएं। तनु 3 मिलीग्राम/मिलीलीटर कोलेजन स्टॉक 1:100 में 60%...

बैक्टीरियल रोगजनकों के साथ संक्रमण के बाद रोग विकृति में म्यूकोसल एपिथेलियलसतहोंमें न्यूट्रोफिल माइग्रेशन एक आम विशेषता है। यहां वर्णित पद्धति एक तेजी से, सीधा दृष्टिकोण प्रदान करती है जो वाय...

म्यूकोसल सतहें पर्यावरण में व्यापक बाहरी खतरों से सुरक्षा प्रदान करने वाली भौतिक और प्रतिरक्षा बाधाओं के रूप में काम करती हैं1,2. रोगजनक जीवों केआक्रमणकरने पर इस सुरक्षात्मक एपिथेलियल बैरियर से समझौता किया जा सकता है . एक जीवाणु रोगजनक के मामले में, यह मुठभेड़ अक्सर जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली को सक्रिय करके और न्यूट्रोफिल2-4के रूप में जाने वाले पहले उत्तरदाता ग्रैनुलोसाइट्स के तेजी से जुड़ाव को ट्रिगर करके एक भड़काऊ प्रक्रिया को भड़काती है। न्यूट्रोफिल भर्ती की सुविधा देने वाले केमोटैक्टिक एजेंटों का उत्पादन म्यूकोसल एपिथेलियल कोशिकाओं द्वारा किया जाता है जो अपमानजनक रोगजनक2-4की मेजबानी से छुटकारा पाने की मांग करते हैं। म्यूकोसल एपिथेलियल सतह की अत्यधिक या अनसुलझी न्यूट्रोफिल घुसपैठ महत्वपूर्ण विकृति का कारण बन सकती है1,5. यह एंटी बैक्टीरियल न्यूट्रोफिल आर्सेनल5-7के कारण गैर-विशिष्ट ऊतक क्षति का परिणाम है। ऐसे मामलों में, न्यूट्रोफिल की बैक्टीरियल क्लीयरेंस क्षमता संक्रामक अपमान के दौरान मेजबान ऊतक के विनाश से दब जाती है।  सुरक्षात्मक एपिथेलियल बैरियर फ़ंक्शन के व्यवधान से सूक्ष्मजीवों और/या विषाक्त पदार्थों के अंतर्निहित ऊतकों का संपर्क बढ़ सकता है, और रोग विकृति8,9को बढ़ा सकता है। ये परिणाम फेफड़ों और पाचन तंत्र सहित कई अंग प्रणालियों में देखे जा सकते हैं1,5. इसके अलावा, अस्थमा के गंभीर मुकाबलों, क्रोनिक ऑब्सट्रक्टिव पल्मोनरी डिजीज (सीओपीडी), तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस), और भड़काऊ आंत्र रोग (आईबीडी) जैसी गैर-संक्रामक भड़काऊ स्थितियों को अत्यधिक न्यूट्रोफिलिक प्रतिक्रिया4,5,10-12द्वारा म्यूकोसल एपिथेलियल बैरियर के रोग उल्लंघन द्वारा चिह्नित किया जाता है।
म्यूकोसल संक्रमण के बाद न्यूट्रोफिल भर्ती की जटिल प्रक्रिया में कई विभाजित कदम शामिल हैं1,5,13,14. सबसे पहले, न्यूट्रोफिल को सेल-टू-सेल इंटरैक्शन की एक श्रृंखला के माध्यम से परिसंचरण से रवाना होना चाहिए जो ट्रांस-एंडोथेलियल माइग्रेशन1,13की सुविधा प्रदान करता है। न्यूट्रोफिल अगले एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स1,14युक्त मौजूदा इंटरस्टिशियल स्पेस को नेविगेट करते हैं। संक्रमित म्यूकोसा के ल्यूमेन तक पहुंचने के लिए, न्यूट्रोफिल को फिर एपिथेलियल बैरियर1,4,5में स्थानांतरित करना होगा। इस जटिल मल्टीस्टेप घटना की जांच अक्सर संक्रमणके वीवो पशु मॉडल में कुल मिलाकर की जाती है । इस तरह के मॉडल विशिष्ट कारकों की आवश्यकता स्थापित करने के लिए उपयोगी होते हैं, जैसे कि केमोकिंस, आसंजन अणु, या सिग्नलिंग रास्ते जो समग्र प्रक्रिया में भाग लेते हैं, लेकिन प्रत्येक अलग-अलग विभाजित चरण16के लिए महत्वपूर्ण आणविक योगदान को हल करने के लिए काफी हद तक अपर्याप्त हैं। कोकल्चर्ड इन विट्रो सिस्टम मॉडलिंग ट्रांस-एंडोथेलियल, ट्रांस-मैट्रिक्स, या न्यूट्रोफिल के ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन इस संबंध में विशेष रूप से उपयोगी रहे हैं1,14,16,17।
रोगजनक संक्रमण18-22के जवाब में न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन के लिए जिम्मेदार तंत्र को समझने के उद्देश्य से एक मजबूत सहसंस्कृति परख प्रणाली विकसित की गई है। इस मॉडल में ध्रुवीकृत मानव एपिथेलियल सेल परतों की एपिकल सतह को जीवाणु रोगजनक के साथ संक्रमित करना शामिल है जिसके बाद18-22के बेसोलाटरल सतह पर ताजा अलग मानव न्यूट्रोफिल का उपयोग किया जाता है। न्यूट्रोफिल रोगजनक संक्रमण18,21-23के बाद गुप्त एपिथेलियल-व्युत्पन्न रसायनीय उत्पादों के जवाब में एपिथेलियल बैरियर के पार प्रवास करते हैं। इस मॉडल प्रणाली को उचित ऊतक विशिष्ट जीवाणु रोगजनकों के संपर्क में आंतों और फेफड़ों की एपिथेलियल संस्कृतियों का उपयोग करके नियोजित किया गया है और म्यूकोसल संक्रमण3,8,19,24-28के दौरान न्यूट्रोफिल भर्ती प्रक्रिया के लिए महत्वपूर्ण उपन्यास आणविक तंत्र का अनावरण किया गया है। इस इन विट्रो कॉकल्चर मॉडल की ताकत यह है कि एक न्यूनीकरणवादी दृष्टिकोण अन्वेषक को प्रायोगिक रूप से रोगजनक, एपिथेलियल बैरियर, और/या न्यूट्रोफिल को एक अच्छी तरह से नियंत्रित, अत्यधिक प्रजनन योग्य, काफी सस्ती प्रणाली में हेरफेर करने में सक्षम बनाता है । इस दृष्टिकोण से एकत्र की गई अंतर्दृष्टि को वीवो संक्रमण मॉडल22,29,30में उपयोग करके न्यूट्रोफिल भर्ती के दौरान विभाजित घटनाओं का केंद्रित विश्लेषण करने के लिए प्रभावी ढंग से लाभ उठाया जा सकता है।
यह लेख रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन का पता लगाने के लिए इस प्रजनन मॉडल की सफल स्थापना के लिए आवश्यक कई कदमों को दर्शाता है। इस लेख में रोगजनक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा से संक्रमित फेफड़ों के एपिथेलियल बाधाओं को चित्रित किया गया है; हालांकि, अन्य ऊतक एपिथेलिया और रोगजनकों को मामूली संशोधनों के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता है। उल्टे कोलेजन लेपित पारगम्य ट्रांसवेल फिल्टर पर ध्रुवीकृत फेफड़ों एपिथेलियल सेल परतों की सीडिंग और संस्कृति यहां विस्तृत है, जैसा कि रोगजनक पी एरुगिनोसा का विकास और पूरे रक्त से न्यूट्रोफिल का अलगाव है। कैसे इन घटकों को रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन का निरीक्षण करने के लिए संयुक्त किया जाता है, एक प्रजनन योग्य परख स्थापित करने के लिए उचित सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण के साथ प्रस्तुत किया जाता है। रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन के विभिन्न पहलुओं की जांच करने के लिए इस दृष्टिकोण की बहुमुखी प्रतिभा पर साहित्य में विशिष्ट अध्ययनों के संदर्भ में चर्चा की गई है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1470">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">NCl-H292 cells</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">CRL-1848</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">RPMI-1640 medium</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">30-2001</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Pseudomonas aeruginosa PAO1</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">#47085</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Escherichia coli MC1000</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">#39531</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">D-PBS (1x) liquid</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">14190-144</td>
			<td style="width:667px;">without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Heat Inactivated Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">10082-147</td>
			<td style="width:667px;">10% added to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">15140-122</td>
			<td style="width:667px;">100x: 10,000 units of penicillin and 10,000 &#181;g of streptomycin per ml.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Trypsin-EDTA (0.05%)</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">25300-062</td>
			<td style="width:667px;">50 ml aliquots are stored frozen at -20 &#186;C.&#160; Aliquot in use can be stored at 4 &#186;C short-term.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Hank&#39;s Balanced Salt Solution - HBSS(-)</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">14175-079</td>
			<td style="width:667px;">Sterile, without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Trypan Blue Solution</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">15250-061.</td>
			<td style="width:667px;">Stock = 0.4%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Collagen, Rat Tail</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">A10483-01</td>
			<td style="width:667px;">Can also be isolated in the laboratory directly from the tails of rats using standard protocols</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Citric acid</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">C1909-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of 1 M citrate buffer and acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sodium Citrate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">S4641-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of 1 M citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Dextrose anhydrous</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">D8066-250G</td>
			<td style="width:667px;">Component of acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">213330-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">S6014-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">EDTA</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">ED-100G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">HBSS(+) powder</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H1387-10L</td>
			<td style="width:667px;">Key component of HBSS+</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">HEPES</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H3375-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of HBSS+</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sigmacote</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">SL2-25ML</td>
			<td style="width:667px;">Follow vendor instructions to coat glass pipette tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">T-9284</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">2,2&#39;-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">A9941-50TAB</td>
			<td style="width:667px;">Key component of ABTS substrate solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H1009-100ML</td>
			<td style="width:667px;">Component of ABTS substrate solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">N-Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP or fMLF)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">F-3506</td>
			<td style="width:667px;">A Stock solution of 10 mM in DMSO should be prepared and aliquots stored at -20 &#186;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Gelatin Type B</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">M-12026</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Pseudomonas isolation agar&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">DF0927-17-1</td>
			<td style="width:667px;">Follow manufacturer&#8217;s instructions to make PIA plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Ficoll-Paque PLUS&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">45-001-749</td>
			<td style="width:667px;">Optional, can improve neutrophil purity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Name of Material / Equipment</td>
			<td style="width:147px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:667px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">24-well migration plate</td>
			<td style="width:147px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:137px;">#3524</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">24-well wash plate</td>
			<td style="width:147px;">Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-1147</td>
			<td style="width:667px;">Can be reused if soaked in 70% ethanol and washed thoroughly prior to reuse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">96-well plate</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">#12565501</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:520px;">Transwell Permeable Supports&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:137px;">#3415</td>
			<td style="width:667px;">Polycarbonate; Diameter: 6.5 mm; Growth area: 0.33 cm2; Dish style: 24-well plate; Pore size: 3.0 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Petri dish</td>
			<td style="width:147px;">Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-1013</td>
			<td style="width:667px;">Each Petri dish holds 24 inverted 0.33 cm2 Transwells.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">500 ml 0.2 &#956;m filter / flask</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">09-740-25A</td>
			<td style="width:667px;">To sterilize acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">5-3/4 in glass Pasteur pipette</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">13-678-20A</td>
			<td style="width:667px;">Coat tips with Sigmacote prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Hemostat</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">13-812-14</td>
			<td style="width:667px;">Curved, Serrated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Invertoskop Inverted Microscope</td>
			<td style="width:147px;">Zeiss</td>
			<td style="width:137px;">#342222</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Versa-Max Microplate Reader</td>
			<td style="width:147px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:137px;">#432789</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro coculture assay to assess pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration

म्यूकोसल सतहें रोगजनक जीवों के खिलाफ सुरक्षात्मक बाधाओं के रूप में काम करती हैं। जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं रोगजनक को संवेदन पर सक्रिय करती हैं जिससे भड़काऊ कोशिकाओं, मुख्य रूप से न्यूट्रोफिल को माइग्रेट करने के साथ ऊतकों की घुसपैठ होती है। इस प्रक्रिया में ऊतकों के लिए विनाशकारी होने की क्षमता है यदि अत्यधिक या एक अनसुलझे राज्य में आयोजित किया जाता है।  रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन में शामिल अद्वितीय आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए कॉकल्चर्ड इन विट्रो मॉडल का उपयोग किया जा सकता है। इस प्रकार का मॉडल रोगजनक, एपिथेलियल बैरियर या न्यूट्रोफिल के नियंत्रित हेरफेर के अवसर के साथ प्रयोगात्मक डिजाइन में बहुमुखी प्रतिभा प्रदान करता है। पारमीय ट्रांसवेल फिल्टर पर उगाए जाने वाले ध्रुवीकृत एपिथेलियल मोनोलेयर की एपिकल सतह का रोगजनक संक्रमण बेसोलेटरल सतह पर लागू न्यूट्रोफिल के एपिकल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन के लिए शारीरिक रूप से प्रासंगिक बेसोलिटरल को भड़काता है। इन विट्रो मॉडल यहां वर्णित एक ध्रुवीकृत फेफड़ों एपिथेलियल मोनोलेयर में न्यूट्रोफिल माइग्रेशन का प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक कई चरणों को दर्शाता है जो रोगजनक पी एरुगिनोसा (PAO1) से संक्रमित है। मानव व्युत्पन्न फेफड़ों के एपिथेलियल कोशिकाओं के साथ पारगम्य ट्रांसवेल की सीडिंग और खेती का वर्णन किया गया है, साथ ही पूरे मानव रक्त से न्यूट्रोफिल के अलगाव और PAO1 और गैरपैथोजेनिक K12 ई. कोलाई (MC1000) की खेती के साथ।  उत्प्रवास प्रक्रिया और रोगजनक संक्रमण के प्रत्युत्तर में जुटाए गए सफलतापूर्वक माइग्रेट न्यूट्रोफिल का मात्रात्मक विश्लेषण सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रणों सहित प्रतिनिधि डेटा के साथ दिखाया गया है। इस इन विट्रो मॉडल सिस्टम को हेरफेर किया जा सकता है और अन्य म्यूकोसल सतहों पर लागू किया जा सकता है। अत्यधिक न्यूट्रोफिल घुसपैठ शामिल भड़काऊ प्रतिक्रियाएं ऊतकों की मेजबानी के लिए विनाशकारी हो सकती हैं और रोगजनक संक्रमणों के अभाव में हो सकती हैं। आणविक तंत्र की एक बेहतर समझ है कि इन विट्रो coculture परख प्रणाली के प्रयोगात्मक हेरफेर के माध्यम से न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन को बढ़ावा देने के लिए यहां वर्णित म्यूकोसल संक्रामक के साथ-साथ भड़काऊ रोगों की एक श्रृंखला के लिए उपन्यास चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करने की महत्वपूर्ण क्षमता है ।

कई अध्ययनों से पता चला है कि रोगजनक-संक्रमित एपिथेलियल परतें न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन3,8,19, 24-28,31,32की सुविधा प्रदान करती हैं। यह एक एपिथेलियल सेल-व्युत्पन्न न्यूट्रोफिल केमोटेक्टिक ग?...

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In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

इन विट्रो रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन का आकलन करने के लिए कोकल्चर परख

म्यूकोसल बैक्टीरियल संक्रमण के जवाब में न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन एपिथेलियल चोट और नैदानिक रोग में योगदान देता है। एक इन विट्रो मॉडल विकसित किया गया है जो इस घटना को आर्केस्ट्रा करने वाले आणविक तंत्र को सुलझाने की दिशा में जांच को सुविधाजनक बनाने के लिए ट्रांसवेल फिल्टर पर उगाए गए रोगजनक, मानव न्यूट्रोफिल, और ध्रुवीकृत मानव एपिथेलियल सेल परतों को जोड़ती है।

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Assay for Pathogen-Associated Molecular Pattern (PAMP)-Triggered Immunity (PTI) in Plants

Assay for Pathogen-Associated Molecular Pattern PAMP-Triggered Immunity PTI in Plants

पैथोजन - एसोसिएटेड आण्विक (PAMP) पैटर्न ट्रिगर संयंत्रों में प्रतिरक्षण (पीटीआई) के लिए परख

To perceive potential pathogens in their environment, plants use pattern recognition receptors (PRRs) present on their plasma membranes. PRRs recognize ...

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

ट्रैकिंग न्युट्रोफिल Intraluminal क्रॉलिंग, Transendothelial प्रवासन और intravital वीडियो माइक्रोस्कोपी द्वारा chemotaxis ऊतक में

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

मात्रात्मक<em&gt; इन विट्रो में</emस्टेटिक शर्तों के तहत सक्रिय प्राथमिक मानव microvascular endothelial कोशिकाओं को न्युट्रोफिल आसंजन उपाय&gt; परख

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

एक सभ्य मूत्राशय उपकला भर में मानव न्युट्रोफिल प्रवास के गुणात्मक मूल्यांकन

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

मानव न्युट्रोफिल फ्लो चैंबर आसंजन परख

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

इन विट्रो में एक उपंयास घाव हीलिंग परख सेल प्रवासन का मूल्यांकन करने के लिए

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Murine सीमांत क्षेत्र बी कोशिकाओं के कतरनी प्रवाह प्रेरित प्रवासन का विश्लेषण इन विट्रो में

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

A High-throughput Assay to Assess and Quantify Neutrophil Extracellular Trap Formation

एक उच्च प्रवाह परख का आकलन करने के लिए और न्युट्रोफिल Extracellular जाल गठन यों तो

Neutrophil extracellular traps (NETs) are immunogenic extracellular DNA structures that can be released by neutrophils upon a wide variety of triggers. ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

बैक्टीरियल रोगजनकों के खिलाफ Immunological प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए Opsonophagocytic हत्या परख

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...