Name: in vitro coculture assay to assess pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration
Uploaded: 2014-01-06T15:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet økonomisk av NIH (1 R01 AI095338-01A1).

Trinn (1-3) skal utføres i et sterilt miljø under en laminær strømningshette. 
1. Kollagenbelegg Transwells
<ol><li>Lag en 30 μg/ml kollagenoppløsning. Fortynn kollagenbestanden på 3 mg/ml 1:100 i 60 % etanol som har gått gjennom en filterenhet på 0,2 μm.</li>
	<li>Virvel fortynnet 30 μg/ml oppløsning. Merk: Det er ikke nødvendig å virvelere 3 mg/ml kollagenbestandsoppløsningen, da denne løsningen er ganske viskøs og luftbobler kan innføres, noe som potensielt kan ...

Nøytrofil migrasjon over slimhinne epiteloverflater er et vanlig trekk ved sykdomspatologi etter infeksjon med bakterielle patogener3. Metodikken som er beskrevet her, tilbyr en rask, grei tilnærming for å eksperimentelt isolere denne diskrete hendelsen ved hjelp av en menneskelig celle avledet i vitro kokulturanalysesystem som modellerer en funksjon av den inflammatoriske prosessen utløst av bakterielle infeksjoner. Dette systemet ble opprinnelig utviklet ved hjelp av polariserte intestinale epit...

Mucosal overflater tjener som fysiske og immunologiske barrierer som gir beskyttelse mot eksterne trusler gjennomgripende i miljøet1,2. Denne beskyttende epitelbarrieren kan kompromitteres når patogene organismer invaderer2. Når det gjelder et bakteriell patogen, initierer dette møtet ofte en inflammatorisk prosess ved å aktivere det medfødte immunforsvaret og utløse en rask mobilisering av første respondergranulocytter kjent som nøytrofiler2-4. Chemotaktiske midler som letter nøytrofilrekruttering, produseres delvis av mucosal epitelceller som søker å kvitte seg med verten for det fornærmende patogenet2-4. Overdreven eller uløst nøytrofil infiltrasjon av mucosal epiteloverflaten kan forårsake betydelig patologi1,5. Dette er en konsekvens av ikke-spesifikk vevsskade forårsaket av det antibakterielle nøytrofilarsenalet5-7. I slike tilfeller er bakteriell clearance kapasitet av nøytrofiler overskygget av ødeleggelse av vertsvev under en smittsom fornærmelse.  Forstyrrelse av den beskyttende epitelbarrierefunksjonen kan føre til økt eksponering av underliggende vev for mikroorganismer og / eller giftstoffer, ytterligere forverrende sykdomspatologi8,9. Disse konsekvensene kan observeres i flere organsystemer, inkludert lunge- og fordøyelseskanalen1,5. Videre er ikke-smittsomme inflammatoriske tilstander som alvorlige utbrudd av astma, kronisk obstruktiv lungesykdom (KOLS), akutt respiratorisk nødsyndrom (ARDS) og inflammatorisk tarmsykdom (IBD) preget av det patologiske bruddet på mucosal epitelbarrieren ved en overdreven nøytrofil respons4,5,10-12.
Den komplekse prosessen med nøytrofilrekruttering etter slimhinneinfeksjon innebærer flere inndelte trinn1,5,13,14. For det første må nøytrofiler avvike fra sirkulasjon via en rekke celle-til-celle interaksjoner som letter trans-endotelial migrasjon1,13. Nøytrofiler navigerer deretter i eksisterende mellomliggende mellomrom som inneholder ekstracellulær matrise1,14. For å nå lumen til den infiserte slimhinnen, må nøytrofiler migrere over epitelbarrieren1,4,5. Dette intrikate multistepfenomenet undersøkes ofte samlet ved hjelp av in vivo dyremodeller av infeksjon15. Slike modeller er nyttige for å fastslå nødvendigheten av spesifikke faktorer, for eksempel kjemokiner, vedheftsmolekyler eller signalveier som deltar i den samlede prosessen, men som i stor grad er utilstrekkelige for å løse molekylære bidrag som er kritiske for hvert distinkte inndelt trinn16. Kokulturerte in vitro-systemer som modellerer trans-endotelial, transmatrise eller transeptelial migrasjon av nøytrofiler har vært spesielt nyttig i denne forbindelse1,14,16,17.
Et robust kokulturanalysesystem er utviklet med det formål å dechiffrere mekanismer som er ansvarlige for nøytrofil transepiteriemigrasjon som svar på patogen infeksjon18-22. Denne modellen innebærer å infisere den apikale overflaten av polariserte menneskelige epitelcellelag med et bakteriell patogen etterfulgt av påføring av nyisolerte menneskelige nøytrofiler til den basolaterale overflaten18-22. Nøytrofiler migrerer over epitelbarrieren som svar på epitel-avledede chemotaktiske produkter utskilt etter patogen infeksjon18,21-23. Dette modellsystemet har blitt brukt ved hjelp av tarm- og lungeepitelkulturer utsatt for passende vevsspesifikke bakterielle patogener og har avduket nye molekylære mekanismer som sannsynligvis er viktige for nøytrofilrekrutteringsprosessen under slimhinneinfeksjon3,8,19,24-28. Styrken til denne in vitro-kokulturmodellen er at en reduksjonistisk tilnærming gjør det mulig for undersøkeren å eksperimentelt manipulere patogenet, epitelbarrieren og / eller nøytrofil i et godt kontrollert, svært reproduserbart, ganske billig system. Innsikt samlet fra denne tilnærmingen kan effektivt utnyttes til å gjennomføre fokusert analyse av inndelte hendelser under nøytrofilrekruttering ved hjelp av in vivo-infeksjonsmodeller 22,29,30.
Denne artikkelen demonstrerer de mange trinnene som er nødvendige for vellykket etablering av denne reproduserbare modellen for å utforske patogenindusert nøytrofil trans-epitelial migrasjon. Lunge epitelial barrierer smittet med patogenet Pseudomonas aeruginosa er omtalt i denne artikkelen; Imidlertid kan andre vevsepilesi og patogener erstattes med mindre modifikasjoner. Såing og dyrking av polariserte lungeepitelecellelag på inverterte kollagenbelagte gjennomtrengelige transwellfiltre er detaljert heri, og det samme er veksten av patogen P. aeruginosa og isolering av nøytrofiler fra hele blodet. Hvordan disse komponentene kombineres for å observere patogenindusert nøytrofil transeptelial migrasjon presenteres sammen med passende positive og negative kontroller for å etablere en reproduserbar analyse. Allsidigheten av denne tilnærmingen for å undersøke ulike aspekter av patogenindusert nøytrofil trans-epitelial migrasjon diskuteres med referanse til spesifikke studier i litteraturen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1470">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">NCl-H292 cells</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">CRL-1848</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">RPMI-1640 medium</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">30-2001</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Pseudomonas aeruginosa PAO1</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">#47085</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Escherichia coli MC1000</td>
			<td style="width:147px;">ATCC</td>
			<td style="width:137px;">#39531</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">D-PBS (1x) liquid</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">14190-144</td>
			<td style="width:667px;">without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Heat Inactivated Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">10082-147</td>
			<td style="width:667px;">10% added to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">15140-122</td>
			<td style="width:667px;">100x: 10,000 units of penicillin and 10,000 &#181;g of streptomycin per ml.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Trypsin-EDTA (0.05%)</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">25300-062</td>
			<td style="width:667px;">50 ml aliquots are stored frozen at -20 &#186;C.&#160; Aliquot in use can be stored at 4 &#186;C short-term.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Hank&#39;s Balanced Salt Solution - HBSS(-)</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">14175-079</td>
			<td style="width:667px;">Sterile, without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Trypan Blue Solution</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">15250-061.</td>
			<td style="width:667px;">Stock = 0.4%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Collagen, Rat Tail</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">A10483-01</td>
			<td style="width:667px;">Can also be isolated in the laboratory directly from the tails of rats using standard protocols</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Citric acid</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">C1909-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of 1 M citrate buffer and acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sodium Citrate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">S4641-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of 1 M citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Dextrose anhydrous</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">D8066-250G</td>
			<td style="width:667px;">Component of acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">213330-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">S6014-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">EDTA</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">ED-100G</td>
			<td style="width:667px;">Component of red blood cell (RBC) lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">HBSS(+) powder</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H1387-10L</td>
			<td style="width:667px;">Key component of HBSS+</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">HEPES</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H3375-500G</td>
			<td style="width:667px;">Component of HBSS+</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Sigmacote</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">SL2-25ML</td>
			<td style="width:667px;">Follow vendor instructions to coat glass pipette tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">T-9284</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">2,2&#39;-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">A9941-50TAB</td>
			<td style="width:667px;">Key component of ABTS substrate solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">H1009-100ML</td>
			<td style="width:667px;">Component of ABTS substrate solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">N-Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP or fMLF)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:137px;">F-3506</td>
			<td style="width:667px;">A Stock solution of 10 mM in DMSO should be prepared and aliquots stored at -20 &#186;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Gelatin Type B</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">M-12026</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Pseudomonas isolation agar&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">DF0927-17-1</td>
			<td style="width:667px;">Follow manufacturer&#8217;s instructions to make PIA plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Ficoll-Paque PLUS&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">45-001-749</td>
			<td style="width:667px;">Optional, can improve neutrophil purity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Name of Material / Equipment</td>
			<td style="width:147px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:667px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">24-well migration plate</td>
			<td style="width:147px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:137px;">#3524</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">24-well wash plate</td>
			<td style="width:147px;">Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-1147</td>
			<td style="width:667px;">Can be reused if soaked in 70% ethanol and washed thoroughly prior to reuse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">96-well plate</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">#12565501</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:520px;">Transwell Permeable Supports&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:137px;">#3415</td>
			<td style="width:667px;">Polycarbonate; Diameter: 6.5 mm; Growth area: 0.33 cm2; Dish style: 24-well plate; Pore size: 3.0 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Petri dish</td>
			<td style="width:147px;">Falcon</td>
			<td style="width:137px;">35-1013</td>
			<td style="width:667px;">Each Petri dish holds 24 inverted 0.33 cm2 Transwells.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">500 ml 0.2 &#956;m filter / flask</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">09-740-25A</td>
			<td style="width:667px;">To sterilize acid citrate dextrose (ACD) solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">5-3/4 in glass Pasteur pipette</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">13-678-20A</td>
			<td style="width:667px;">Coat tips with Sigmacote prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Hemostat</td>
			<td style="width:147px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:137px;">13-812-14</td>
			<td style="width:667px;">Curved, Serrated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Invertoskop Inverted Microscope</td>
			<td style="width:147px;">Zeiss</td>
			<td style="width:137px;">#342222</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:520px;">Versa-Max Microplate Reader</td>
			<td style="width:147px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:137px;">#432789</td>
			<td style="width:667px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro coculture assay to assess pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration

Mucosal overflater tjener som beskyttende barrierer mot patogene organismer. Medfødte immunresponser aktiveres ved sensing patogen som fører til infiltrasjon av vev med migrerende inflammatoriske celler, primært nøytrofiler. Denne prosessen har potensial til å være ødeleggende for vev hvis overdreven eller holdt i uløst tilstand.  Kokulturerte in vitro-modeller kan brukes til å studere de unike molekylære mekanismene som er involvert i patogenindusert nøytrofil transepitelmigrasjon. Denne typen modell gir allsidighet i eksperimentell design med mulighet for kontrollert manipulering av patogenet, epitelbarrieren eller nøytrofil. Patogen infeksjon av den apikale overflaten av polariserte epitelmonolayers dyrket på gjennomtrengelige transwellfiltre instigates fysiologisk relevant basolateral til apikal trans-epitelial migrasjon av nøytrofiler påført den basolaterale overflaten.  In vitro-modellen som er beskrevet her, demonstrerer de mange trinnene som er nødvendige for å demonstrere nøytrofil migrasjon over en polarisert lungeepitelmonolayer som har blitt smittet med patogen P. aeruginosa (PAO1). Såing og dyrking av gjennomtrengelige transwells med humane avledede lungeepitelceller er beskrevet, sammen med isolering av nøytrofiler fra hele menneskelig blod og dyrking av PAO1 og ikke-patogen K12 E. coli (MC1000).  Utvandringsprosessen og kvantitativ analyse av vellykkede migrerte nøytrofiler som har blitt mobilisert som respons på patogen infeksjon, vises med representative data, inkludert positive og negative kontroller. Dette in vitro-modellsystemet kan manipuleres og påføres andre slimhinneoverflater. Inflammatoriske responser som involverer overdreven nøytrofil infiltrasjon kan være ødeleggende for å være vert for vev og kan oppstå i fravær av patogene infeksjoner. En bedre forståelse av molekylære mekanismer som fremmer nøytrofil trans-epitelial migrasjon gjennom eksperimentell manipulering av in vitro coculture analysesystemet beskrevet heri har betydelig potensial til å identifisere nye terapeutiske mål for en rekke mucosal smittsomme så vel som inflammatoriske sykdommer.

Flere studier har vist at patogeninfiserte epitellag letter nøytrofil trans-epitelial migrasjon3,8,19,24-28,31,32. Dette skjer via en patogenspesifikk induksjon av en epitelcelle-avledet nøytrofil kjemoaktisk gradient3,23. For eksempel fører patogen P. aeruginosa som samhandler med den apikale overflaten av lungeepiteleceller til at et betydelig antall nøytrofiler migrerer over epitellaget18,22,25,26,33,34. Dette klinisk relevante analysesystemet kan manipuleres på mange må...

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration at JoVE.com

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Introduksjon Kokulturanalyse for å vurdere patogenindusert nøytrofil transepiteriemigrasjon

Neutrophil trans-epitelial migrasjon som svar på mucosal bakteriell infeksjon bidrar til epitelskade og klinisk sykdom. En in vitro-modell er utviklet som kombinerer patogene, menneskelige nøytrofiler og polariserte menneskelige epitelcellelag dyrket på transwellfiltre for å lette undersøkelser mot å avdekke molekylære mekanismer som orkestrerer dette fenomenet.

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Assay for Pathogen-Associated Molecular Pattern (PAMP)-Triggered Immunity (PTI) in Plants

Assay for Pathogen-Associated Molecular Pattern PAMP-Triggered Immunity PTI in Plants

To perceive potential pathogens in their environment, plants use pattern recognition receptors (PRRs) present on their plasma membranes. PRRs recognize ...

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Kvantitativ<em&gt; In vitro</em&gt; Analysen for å måle Neutrophil vedheft til Aktiverte primære humane mikrovaskulær endotelceller under statiske betingelser

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

Kvantitativ vurdering av Menneskelig Neutrophil Migration Across en kultivert Blære Epitel

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

Menneskelig Neutrophil Flow Chamber Adhesion analysen

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Nøytrofile Isolering og analyse for å fastslå deres rolle i lymfom Cell Følsomhet for Terapeutiske midler

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

En roman In Vitro sår helbredelse analysen for å vurdere celle migrasjon

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Analyse av skjær flyt-indusert migrering av murint Marginal sone B celler In Vitro

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

A High-throughput Assay to Assess and Quantify Neutrophil Extracellular Trap Formation

En høy gjennomstrømming analysen vurdere og kvantifisere nøytrofile ekstracellulære felle formasjon

Neutrophil extracellular traps (NETs) are immunogenic extracellular DNA structures that can be released by neutrophils upon a wide variety of triggers. ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic drepe analysen å vurdere immunologiske svar mot bakteriell patogener

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...