Name: organelle transport in cultured drosophila cells: s2 cell line and primary neurons.
Uploaded: 2013-11-20T18:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons. at JoVE.com

हम इन प्रोटोकॉल के विकास के लिए जो योगदान दिया Gelfand प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद. इस प्रकाशन में सूचना दी अनुसंधान पुरस्कार संख्या बीएफआई-2011-295 UDC के तहत VIG को पुरस्कार संख्या R01GM052111 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के जनरल मेडिकल साइंस के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा और बास्क सरकार शिक्षा विभाग, विश्वविद्यालयों और अनुसंधान द्वारा समर्थित किया गया.

1. ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं <ol><li> Cona लेपित coverslips की तैयारी <ol><li> एक चीनी मिट्टी के रैक में coverslips प्लेस और 1 घंटे के लिए क्रोमिक एसिड विसर्जन द्वारा उन्हें धो लो. [चेतावनी: क्रोमिक एसिड संक्षारक है और आंख?...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence.</a> 3, 606-611 (2008).</li><li>Buster, D. W., Nye, J., Klebba, J. E., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Drosophila+S2+cells+for+light+microscopy.">Preparation of Drosophila S2 cells for light microscopy.</a> J. Vis. Exp. (40), e1982 (2010).</li><li>Ling, S. C., Fahrner, P. S., Greenough, W. T., Gelfand, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport+of+Drosophila+fragile+X+mental+retardation+protein-containing+ribonucleoprotein+granules+by+kinesin-1+and+cytoplasmic+dynein.">Transport of Drosophila fragile X mental retardation protein-containing ribonucleoprotein granules by kinesin-1 and cytoplasmic dynein.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17428-17433 (2004).</li><li>Kural, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+and+dynein+move+a+peroxisome+in+vivo:+a+tug-of-war+or+coordinated+movement.">Kinesin and dynein move a peroxisome in vivo: a tug-of-war or coordinated movement.</a> Science. 308, 1469-1472 (2005).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule+binding+by+dynactin+is+required+for+microtubule+organization+but+not+cargo+transport.">Microtubule binding by dynactin is required for microtubule organization but not cargo transport.</a> J. Cell. Biol. 176, 641-651 (2007).</li><li>Ally, S., Larson, A. G., Barlan, K., Rice, S. E., Gelfand, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite-polarity+motors+activate+one+another+to+trigger+cargo+transport+in+live+cells.">Opposite-polarity motors activate one another to trigger cargo transport in live cells.</a> J. Cell. Biol. 187, 1071-1082 (2009).</li><li>Bensenor, L. B., Barlan, K., Rice, S. E., Fehon, R. G., Gelfand, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule-mediated+transport+of+the+tumor-suppressor+protein+Merlin+and+its+mutants.">Microtubule-mediated transport of the tumor-suppressor protein Merlin and its mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 7311-7316 (2010).</li><li>Jolly, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-1+heavy+chain+mediates+microtubule+sliding+to+drive+changes+in+cell+shape.">Kinesin-1 heavy chain mediates microtubule sliding to drive changes in cell shape.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 12151-12156 (2010).</li><li>Barlan, K., Lu, W., Gelfand, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microtubule-binding+protein+ensconsin+is+an+essential+cofactor+of+Kinesin-1.">The microtubule-binding protein ensconsin is an essential cofactor of Kinesin-1.</a> Curr. Biol. 23, 317-322 (2013).</li><li>Lu, W., Fox, P., Lakonishok, M., Davidson, M. W., Gelfand, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+Neurite+Outgrowth+in+Drosophila+Neurons+Is+Driven+by+Kinesin-Powered+Microtubule+Sliding.">Initial Neurite Outgrowth in Drosophila Neurons Is Driven by Kinesin-Powered Microtubule Sliding.</a> Curr. Biol. 23, 1018-1023 (2013).</li><li>Pathak, D., Sepp, K. J., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+myosin+activity+opposes+microtubule-based+axonal+transport+of+mitochondria.">Evidence that myosin activity opposes microtubule-based axonal transport of mitochondria.</a> J. Neurosci. 30, 8984-8992 (2010).</li><li>Clark, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+pink1+is+required+for+mitochondrial+function+and+interacts+genetically+with+parkin.">Drosophila pink1 is required for mitochondrial function and interacts genetically with parkin.</a> Nature. 441, 1162-1166 (2006).</li><li>Gunawardena, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40, 25-40 (2003).</li><li>Koo, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precursor+of+amyloid+protein+in+Alzheimer+disease+undergoes+fast+anterograde+axonal+transport.">Precursor of amyloid protein in Alzheimer disease undergoes fast anterograde axonal transport.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 1561-1565 (1990).</li><li>Stokin, G. B., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+and+Alzheimer's+disease.">Axonal transport and Alzheimer's disease.</a> Annu. Rev. Biochem. 75, 607-627 (2006).</li><li>Bilsland, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+axonal+transport+precede+ALS+symptoms+in+vivo.">Deficits in axonal transport precede ALS symptoms in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 20523-20528 (2010).</li><li>Lloyd, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p150(Glued)+CAP-Gly+domain+regulates+initiation+of+retrograde+transport+at+synaptic+termini.">The p150(Glued) CAP-Gly domain regulates initiation of retrograde transport at synaptic termini.</a> Neuron. 74, 344-360 (2012).</li><li>Moughamian, A. J., Holzbaur, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynactin+is+required+for+transport+initiation+from+the+distal+axon.">Dynactin is required for transport initiation from the distal axon.</a> Neuron. 74, 331-343 (2012).</li><li>Lorenzo, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila.">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell. Biol. 189, 143-158 (2010).</li><li>Robinow, S., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+locus+elav+of+Drosophila+melanogaster+is+expressed+in+neurons+at+all+developmental+stages.">The locus elav of Drosophila melanogaster is expressed in neurons at all developmental stages.</a> Dev. Biol. 126, 294-303 (1988).</li><li>Pilling, A. D., Horiuchi, D., Lively, C. M., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-1+and+Dynein+are+the+primary+motors+for+fast+transport+of+mitochondria+in+Drosophila+motor+axons.">Kinesin-1 and Dynein are the primary motors for fast transport of mitochondria in Drosophila motor axons.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2057-2068 (2006).</li><li>Furst, A., Mahowald, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+primary+embryonic+neuroblasts+in+purified+neural+cell+cultures+from+Drosophila.">Differentiation of primary embryonic neuroblasts in purified neural cell cultures from Drosophila.</a> Dev. Biol. 109, 184-192 (1985).</li><li>Salvaterra, P. M., Bournias-Vardiabasis, N., Nair, T., Hou, G., Lieu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+neuronal+differentiation+of+Drosophila+embryo+cells.">In vitro neuronal differentiation of Drosophila embryo cells.</a> J. Neurosci. 7, 10-22 (1987).</li><li>Wiemer, E. A., Wenzel, T., Deerinck, T. J., Ellisman, M. H., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+the+peroxisomal+compartment+in+living+mammalian+cells:+dynamic+behavior+and+association+with+microtubules.">Visualization of the peroxisomal compartment in living mammalian cells: dynamic behavior and association with microtubules.</a> J. Cell. Biol. 136, 71-80 (1997).</li><li>Rizzuto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+specifying+subunit+VIII+of+human+cytochrome+c+oxidase+is+localized+to+chromosome+11+and+is+expressed+in+both+muscle+and+non-muscle+tissues.">A gene specifying subunit VIII of human cytochrome c oxidase is localized to chromosome 11 and is expressed in both muscle and non-muscle tissues.</a> J. Biol. Chem. 264, 10595-10600 (1989).</li><li>Poot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+morphology+and+function+with+novel+fixable+fluorescent+stains.">Analysis of mitochondrial morphology and function with novel fixable fluorescent stains.</a> J. Histochem. Cytochem. 44, 1363-1372 (1996).</li><li>Haller, T., Dietl, P., Deetjen, P., Volkl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lysosomal+compartment+as+intracellular+calcium+store+in+MDCK+cells:+a+possible+involvement+in+InsP3-mediated+Ca2++release.">The lysosomal compartment as intracellular calcium store in MDCK cells: a possible involvement in InsP3-mediated Ca2+ release.</a> Cell Calcium. 19, 157-165 (1996).</li></ol>

यहाँ हम ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं और प्राथमिक न्यूरॉन संस्कृति में microtubule निर्भर कार्गो परिवहन के अध्ययन के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. दोनों S2 प्रक्रियाओं और neurites organelle परिवहन के लिए पटरियों ...

ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं कई सेलुलर प्रक्रियाओं के अध्ययन के लिए बढ़ती लोकप्रियता हासिल की है. इन कोशिकाओं को मूल रूप से OregonR ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर की trypsinized देर चरण भ्रूण से प्राप्त की है और 1. ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं अन्य सेल लाइनों पर कई लाभ प्रदान बृहतभक्षककोशिका जैसी सुविधाओं को बनाए रखने के थे. वे सीओ 2 के बिना 25 डिग्री सेल्सियस पर संवर्धित कर रहे हैं, और हीटिंग या गैस विनिमय की आवश्यकता के बिना कमरे के तापमान पर कई घंटे के लिए imaged किया जा सकता है. इससे भी महत्वपूर्ण बात, ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं ब्याज की प्रोटीन का उच्च दक्षता पछाड़ना की अनुमति आरएनएआई उपचार के लिए बहुत संवेदनशील होते हैं. S2 कोशिकाओं अत्यधिक transfectable हैं और स्थिर सेल लाइनों ब्याज की प्रोटीन की स्थिर अस्थानिक अभिव्यक्ति अनुमति देने के लिए कम से कम चार सप्ताह में चुना जा सकता है. S2 कोशिकाओं सामान्य रूप से या तो बढ़ने शिथिल संलग्न लेकिन एक कुप्पी पर या निलंबन में फैल नहीं. वे एक संयंत्र लेक्टिन Conca साथ precoated coverslips पर प्रसार करने के लिए प्रेरित किया जा सकता हैnavalin ए (Cona). प्रसार कोशिकाओं की परिधि विशेष रूप से पतली है और इसलिए जीवित सेल माइक्रोस्कोपी के लिए आदर्श है. S2 कोशिकाओं संस्कृति, आरएनएआई उपचार, लाइव प्रकाश इमेजिंग और immunostaining के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल साहित्य 2,3 में पाया जा सकता है. हमारी प्रयोगशाला. ऐसे cytochalasin डी के रूप में एफ actin depolymerizes या severs कि किसी भी दवा, (CytoD) के साथ इलाज ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं, समान रूप से ध्रुवीकृत सूक्ष्मनलिकाएं 4 से भर लंबी प्रक्रियाओं बढ़ने microtubule आधारित कार्गो परिवहन अध्ययन करने के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप S2 कोशिकाओं को अपनाया है -10, यह microtubule सरणियों साथ कार्गो आंदोलन का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श प्रणाली है जो बनाता है. इन प्रक्रियाओं में परिवहन के विभिन्न मापदंडों (. यानी प्रक्षेप पथ लंबाई, वेग, दिशात्मकता आदि) आसानी से स्वचालित कण ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर, DiaTrack (Semasopht का उपयोग करके मापा जा सकता है: http://www.microscopy.info/Organization/Details/4423, डॉ. . पास्कल Vallotton: http://www.csiro.au/en/Organisation-Structure/Divisions/Mathematics-Informatics-and-Statistics/PascalVallotton.aspx # A4). इन गुणों S2 कोशिकाओं ऊतक संस्कृति कोशिकाओं में सूक्ष्मनलिकाएं साथ कार्गो परिवहन के अध्ययन के लिए एक अपील प्रणाली बनाते हैं. S2 कोशिकाओं में पायलट प्रयोगों ड्रोसोफिला प्राथमिक न्यूरॉन्स में माल परिवहन के अध्ययन की एक physiologically महत्वपूर्ण मॉडल के लिए बढ़ाया जा सकता है. S2 कोशिकाओं के समान, अलग भ्रूण से सभ्य न्यूरॉन्स ऐसे रंगों और inhibitors के रूप में छोटे अणुओं को प्रवेश के योग्य हैं, और organelle परिवहन की उच्च संकल्प रहते इमेजिंग कमरे के तापमान पर न्यूरॉन्स में प्रदर्शन किया जा सकता है. विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ ड्रोसोफिला का उपयोग करना, हम नॉकआउट (आनुवंशिक नुकसान के समारोह म्यूटेशन) द्वारा प्राथमिक न्यूरॉन्स में जीन समारोह की जांच कर सकते हैं, पछाड़ना (dsRNA इंजेक्शन या अभिव्यक्ति) या अस्थानिक अभिव्यक्ति (ट्रांसजेनिक मक्खियों). विशेष रूप से, CytoD उपचार का उपयोग actin filaments के विखंडन neurite परिणाम नहीं रोकता है, बजाय वे तेजी से बढ़ती है, और इस तरह हम microtubule-depende अध्ययन कर सकते हैंactin के प्रभाव के बिना CytoD इलाज न्यूरॉन्स में NT organelle परिवहन 11 फिलामेंट्स. इसलिए, प्राथमिक neuronal संस्कृतियों यह एक शारीरिक प्रासंगिक प्रणाली 10,12 में माल परिवहन अध्ययन करने के लिए एक महान प्रणाली है, जो टिशू कल्चर कोशिकाओं के फायदे गठबंधन और आनुवंशिकी उड़. कई पारिवारिक neurodegenerative रोगों की वजह से या माल परिवहन दोष (जैसे पार्किंसंस रोग 13 के साथ संबद्ध किया जा सकता है, हंटिंगटन बीमारी 14, अल्जाइमर रोग 15,16, Amyotrophic पार्श्व स्केलेरोसिस / ए एल एस 17, HMN7B और पेरी सिंड्रोम 18,19, और spinocerebellar गतिभंग प्रकार 5/SCA5 20), प्राथमिक neuronal संस्कृतियों microtubule निर्भर परिवहन पर इन रोगों के कारण विशिष्ट परिवर्तन के प्रभावों का विश्लेषण करने में उपयोगी हो सकता है. अंत में, microtubule निर्भर परिवहन का महत्वपूर्ण गुण अच्छी तरह से स्तनधारियों और मक्खियों के बीच संरक्षित, लेकिन कर रहे हैं <em&gt; ड्रोसोफिला आनुवंशिक और सेल संस्कृति सामान्य और रोग की स्थिति में organelle परिवहन के आवश्यक पहलुओं के अध्ययन के लिए सुसंस्कृत ड्रोसोफिला कोशिकाओं के उपयोग को न्यायोचित ठहरा, कम खर्चीला और समय लेने वाली है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="435">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Powder Insect cell medium (Schneider&#8217;s)</td>
			<td style="width:133px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:179px;">S9895</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Insect &#8211;Xpress medium</td>
			<td style="width:133px;">Fisher</td>
			<td style="width:179px;">BW12730Q</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Insulin</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">I6634</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Penicillin</td>
			<td style="width:133px;">Research Products International</td>
			<td style="width:179px;">P93000</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:133px;">Research Products International</td>
			<td style="width:179px;">S62000</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Tetracycline hydrochloride</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">T7660-5G</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:133px;">Atlanta Biologicals</td>
			<td style="width:179px;">S11150</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Concanavalin A</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">C2010</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Cytochalasin D</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">IC15077105</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">LysoTracker Red DND-99</td>
			<td style="width:133px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:179px;">L7528</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">100 &#181;m Cell strainer</td>
			<td style="width:133px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">22363549</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">25 mm Circle cover glass</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">48380 080</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Drosophila Vials</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">89092-730</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:124px;">Disposable pellet pestles with matching microtubes</td>
			<td style="width:133px;">Kimble Chase</td>
			<td style="width:179px;">749520-0000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organelle transport in cultured drosophila cells: s2 cell line and primary neurons.

ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं समान रूप से ध्रुवीकृत सूक्ष्मनलिकाएं से भर किसी भी actin-depolymerizing दवा फॉर्म लंबे unbranched प्रक्रियाओं की उपस्थिति में एक coverslip पर चढ़ाया. Organelles microtubule मोटर्स द्वारा इन प्रक्रियाओं के साथ कदम. आसान रखरखाव, आरएनएआई की मध्यस्थता प्रोटीन तोड़े नीचे और स्थिर सेल लाइनों बनाने के लिए कुशल प्रक्रिया के लिए उच्च संवेदनशीलता ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं रहते इमेजिंग द्वारा माल परिवहन अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल प्रणाली बनाते हैं. अलग ड्रोसोफिला भ्रूण से सुसंस्कृत प्राथमिक न्यूरॉन्स में axonal परिवहन: S2 कोशिकाओं के साथ प्राप्त परिणामों के आगे एक अधिक physiologically प्रासंगिक प्रणाली को लागू किया जा सकता है. सभ्य न्यूरॉन्स S2 प्रक्रियाओं के बहुत समान बंडल सूक्ष्मनलिकाएं से भरा लंबे neurites हो जाना. जैसा S2 कोशिकाओं में, सभ्य न्यूरॉन्स में organelles या तो organelle विशेष फ्लोरोसेंट रंगों से या डीएनए द्वारा इनकोडिंग फ्लोरोसेंट organelle मार्कर का उपयोग करके देखे जा सकते हैं जल्दी भ्रूण में इंजेक्ट या transgen में व्यक्तआईसी मक्खियों. इसलिए, organelle परिवहन आसानी से रह इमेजिंग का उपयोग कांच coverslips पर सभ्य न्यूरॉन्स में दर्ज किया जा सकता है. यहाँ हम ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं और प्राथमिक न्यूरॉन्स में माल परिवहन संवर्धन और दृश्यमान करने के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन. हम इन प्रोटोकॉल माल परिवहन का अध्ययन प्रयोगशालाओं के लिए दोनों प्रणालियों सुलभ बनाने का मानना ​​है कि.

एक फ्लैट दौर &quot;पैनकेक&quot; आकार (आंकड़े 1 ए और 1 सी) में Cona लेपित coverslip प्रसार पर संलग्न ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं. S2 कोशिकाओं CytoD की उपस्थिति में coverslips पर चढ़ाया और 2-3 घंटे के लिए प्रसार करने के लिए अनुम?...

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Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं और सभ्य न्यूरॉन्स विवो में मोटर चालित organelle परिवहन की इमेजिंग के लिए महान व्यवस्था कर रहे हैं. यहाँ हम, दोनों प्रकार की कोशिकाओं के संवर्धन के लिए उनके इमेजिंग और परिवहन का विश्लेषण विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन.

संवर्धित में organelle परिवहन<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; सेल: S2 सेल लाइन और प्राथमिक न्यूरॉन्स.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Research

JoVE Journal

Biology

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

एफएम लेबल का प्रयोग न्यूरॉन्स में exocytosis माप

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

स्वर्गीय स्टेज ड्रोसोफिला pupae के दिमाग से प्राथमिक Neuronal संस्कृति

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

प्राथमिक संवर्धित hippocampal न्यूरॉन्स में घने कोर vesicles के लाइव इमेजिंग

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

की तैयारी ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं लाइट माइक्रोस्कोपी के लिए

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

प्राथमिक सेल संस्कृति से ड्रोसोफिला गेसट्रुला भ्रूण

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

अलगाव और चूहा यकृत कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृति

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotic सेल क्लीयरेंस की इमेजिंग के दौरान जीते<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

एक &quot;Humanized&quot; सृजन<em&gt; ड्रोसोफिला</emKinesin -5 के औषधीय निषेध करने के लिए&gt; S2 सेल लाइन संवेदनशील

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

डायनामिक सेलुलर प्रोट्र्रेशन में प्रोटीन एकाग्रता के सॉफ़्टवेयर-सहायता प्राप्त ट्रैकिंग के लिए एक ग्राफ़िकल यूजर इंटरफेस

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

ग्लूकोज अपटेक मापन और इनसुलिन उत्तेजना के प्रति प्रतिक्रिया<em&gt; विट्रो में</em&gt; संवर्धित मानव प्राथमिक म्यूट्यूब्स

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...