Name: covalent binding of bmp-2 on surfaces using a self-assembled monolayer approach
Uploaded: 2013-08-26T13:00:00
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हम उसकी तरह की सहायता के लिए प्रो जेपी Spatz (biophysical रसायन विज्ञान विभाग, विश्वविद्यालय के हीडलबर्ग और नई सामग्री और Biosystems विभाग, इंटेलिजेंट सिस्टम के लिए मैक्स प्लैंक इंस्टीट्यूट, स्टटगार्ट) धन्यवाद. मैक्स प्लैंक-Gesellschaft और ड्यूश Forschungsgemeinschaft (ईएसी-A के लिए DFG SFB/TR79.) से वित्तीय सहायता भी बहुत स्वीकार कर रहे हैं.

1. 11-Mercaptoundecanoyl एन hydroxysuccinimide एस्टर (एम यू एन एच एस) के संश्लेषण <ol><li> कमरे के तापमान (आर टी) पर 40 एमएल dichloromethane (देहात) में 10 मिलीलीटर एसीटोन (देहात) में (dimethylamino) pyridine जी 1 के लिए 11-mercaptoundecanoic एसिड - एक 500 मिलीग्राम एन hydroxysuccinimide का स...

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	<li>Helm, G., Andersson, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Summary+statement:+Bone+morphogenetic+proteins:+Basic+science.">Summary statement: Bone morphogenetic proteins: Basic science.</a> Spine. 27 (16S), S9 (2002).</li><li>Hogan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+proteins:+multifunctional+regulators+of+vertebrate+development.">Bone morphogenetic proteins: multifunctional regulators of vertebrate development.</a> Genes Dev. 10 (13), 1580-1594 (1996).</li><li>Reddi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMPs:+from+bone+morphogenetic+proteins+to+body+morphogenetic+proteins.">BMPs: from bone morphogenetic proteins to body morphogenetic proteins.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 16, 249-250 (2005).</li><li>Rengachary, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+proteins:+basic+concepts.">Bone morphogenetic proteins: basic concepts.</a> Neurosurg Focus. 13 (6), 1-6 (2002).</li><li>Schlunegger, M., Gru&#776;tter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+unusual+feature+revealed+by+the+crystal+structure+at+2.2+&#197;;+resolution+of+human+transforming+growth+factor-&#946;2.">An unusual feature revealed by the crystal structure at 2.2 &#197;; resolution of human transforming growth factor-&#946;2.</a> Nature. 358, 430-434 (1992).</li><li>Scheufler, C., Sebald, W., Hu&#776;lsmeyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+human+bone+morphogenetic+protein-2+at+2.7+&#197;+resolution.">Crystal structure of human bone morphogenetic protein-2 at 2.7 &#197; resolution.</a> J. 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Chem. 277 (7), 5330-5338 (2002).</li><li>Sieber, C., Kopf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+BMP+receptor+signaling.">Recent advances in BMP receptor signaling.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 20 (5-6), 343-355 (2009).</li><li>Carragee, E. J., Hurwitz, E. L., Weiner, B. 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Biopharm. 58 (2), 197-208 (2004).</li><li>Nakaji-Hirabayashi, T., Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oriented+immobilization+of+epidermal+growth+factor+onto+culture+substrates+for+the+selective+expansion+of+neural+stem+cells.">Oriented immobilization of epidermal growth factor onto culture substrates for the selective expansion of neural stem cells.</a> Biomaterials. 28 (24), 3517-3529 (2007).</li><li>Gon&#231;alves, R., Martins, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactivity+of+immobilized+EGF+on+self-assembled+monolayers:+Optimization+of+the+immobilization+process.">Bioactivity of immobilized EGF on self-assembled monolayers: Optimization of the immobilization process.</a> J. Biomed. Mater. Res. Part A. 94A. 2 (2), 576-585 (2010).</li><li>Pohl, T. L. M., Boergermann, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+immobilization+of+bone+morphogenetic+protein+2+via+a+self-assembled+monolayer+formation+induces+cell+differentiation.">Surface immobilization of bone morphogenetic protein 2 via a self-assembled monolayer formation induces cell differentiation.</a> Acta Biomater. 8 (2), 772-780 (2012).</li><li>Love, J., Estroff, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+monolayers+of+thiolates+on+metals+as+a+form+of+nanotechnology.">Self-assembled monolayers of thiolates on metals as a form of nanotechnology.</a> Chem. Rev. 105 (4), 1103-1169 (2005).</li><li>Katagiri, T., Yamaguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-2+converts+the+differentiation+pathway+of+C2C12+myoblasts+into+the+osteoblast+lineage.">Bone morphogenetic protein-2 converts the differentiation pathway of C2C12 myoblasts into the osteoblast lineage.</a> J. Cell Biol. 127 (6), 1755-1766 (1994).</li><li>Whitaker, M. J., Quirk, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+release+from+tissue+engineering+scaffolds.">Growth factor release from tissue engineering scaffolds.</a> J. Pharm. Pharmacol. 53 (11), 1427-1437 (2001).</li><li>Uludag, H., D'Augusta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+recombinant+human+bone+morphogenetic+proteins+with+biomaterial+carriers:+a+correlation+between+protein+pharmacokinetics+and+osteoinduction+in+the+rat+ectopic+model.">Implantation of recombinant human bone morphogenetic proteins with biomaterial carriers: a correlation between protein pharmacokinetics and osteoinduction in the rat ectopic model.</a> J. Biomed. Mater. Res. 50 (2), 227-238 (2000).</li><li>Kashiwagi, K., Tsuji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+BMP-2+for+functionalization+of+titanium+surfaces.">Directional BMP-2 for functionalization of titanium surfaces.</a> Biomaterials. 30 (6), 1166-1175 (2008).</li><li>Karageorgiou, V., Meinel, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-2+decorated+silk+fibroin+films+induce+osteogenic+differentiation+of+human+bone+marrow+stromal+cells.">Bone morphogenetic protein-2 decorated silk fibroin films induce osteogenic differentiation of human bone marrow stromal cells.</a> J. Biomed. Mater. Res. 71 (3), 528-573 (2004).</li><li>Rose, F. R. A. J., Hou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+systems+for+bone+growth+factors+-+the+new+players+in+skeletal+regeneration.">Delivery systems for bone growth factors - the new players in skeletal regeneration.</a> J. Pharm. Pharmacol. 56 (4), 415-427 (2004).</li><li>Masters, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+growth+factor+immobilization+strategies+for+tissue+repair+and+regeneration.">Covalent growth factor immobilization strategies for tissue repair and regeneration.</a> Macromol. Biosci. 11 (9), 1149-1163 (2011).</li><li>Crouzier, T., Fourel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presentation+of+BMP-2+from+a+soft+biopolymeric+film+unveils+its+activity+on+cell+adhesion+and+migration.">Presentation of BMP-2 from a soft biopolymeric film unveils its activity on cell adhesion and migration.</a> Adv. Mater. 23 (12), H111-H118 (2011).</li><li>Ruppert, R., Hoffmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+morphogenetic+protein+2+contains+a+heparin-binding+site+which+modifies+its+biological+activity.">Human bone morphogenetic protein 2 contains a heparin-binding site which modifies its biological activity.</a> European Journal of Biochemistry. 237 (1), 295-302 (1996).</li><li>Love, J., Estroff, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+monolayers+of+thiolates+on+metals+as+a+form+of+nanotechnology.">Self-assembled monolayers of thiolates on metals as a form of nanotechnology.</a> Chem. Rev. 105 (4), 1103-1169 (2005).</li><li>Kato, K., Sato, H., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilization+of+histidine-tagged+recombinant+proteins+onto+micropatterned+surfaces+for+cell-based+functional+assays.">Immobilization of histidine-tagged recombinant proteins onto micropatterned surfaces for cell-based functional assays.</a> Langmuir. 21 (16), 7071-7075 (2005).</li><li>Martins, M., Curtin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecularly+designed+surfaces+for+blood+deheparinization+using+an+immobilized+heparin-binding+peptide.">Molecularly designed surfaces for blood deheparinization using an immobilized heparin-binding peptide.</a> J. Biomed. Mater. Res. 88 (1), 162-173 (2009).</li><li>Limbut, W., Kanatharana, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+capacitive+immunosensors+based+on+self-assembled+monolayers+formed+from+thiourea,+thioctic+acid,+and+3-+mercaptopropionic+acid.">A comparative study of capacitive immunosensors based on self-assembled monolayers formed from thiourea, thioctic acid, and 3- mercaptopropionic acid.</a> Biosens. Bioelectron. 22 (2), 233-240 (2006).</li><li>Patel, N., Davies, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilization+of+protein+molecules+onto+homogeneous+and+mixed+carboxylate-terminated+self-assembled+monolayers.">Immobilization of protein molecules onto homogeneous and mixed carboxylate-terminated self-assembled monolayers.</a> Langmuir. 13 (24), 6485-6490 (1997).</li><li>Hu, J., Duppatla, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+PEGylation+of+bone+morphogenetic+protein-2+cysteine+analogues.">Site-specific PEGylation of bone morphogenetic protein-2 cysteine analogues.</a> Bioconjug. Chem. 21 (10), 1762-1772 (2010).</li><li>Hersel, U., Dahmen, C., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RGD+modified+polymers:+biomaterials+for+stimulated+cell+adhesion+and+beyond.">RGD modified polymers: biomaterials for stimulated cell adhesion and beyond.</a> Biomaterials. 24 (24), 4385-4415 (2003).</li><li>Cao, T., Wang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+spacer+length+effect+on+immobilized+Escherichia+coli+pili-antibody+molecular+recognition+by+AFM.">Investigation of spacer length effect on immobilized Escherichia coli pili-antibody molecular recognition by AFM.</a> Biotechnol. Bioeng. 98 (6), 1109-1122 (2007).</li><li>Puleo, D., Kissling, R., Sheu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+to+immobilize+bioactive+proteins,+including+bone+morphogenetic+protein-4+(BMP-4),+on+titanium+alloy.">A technique to immobilize bioactive proteins, including bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), on titanium alloy.</a> Biomaterials. 23 (9), 2079-2087 (2002).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में हम bioactive rhBMP-2 के साथ क्रियाशील सतहों की तैयारी का वर्णन है. ; RhBMP -2 प्रोटीन की 2) सहसंयोजक स्थिरीकरण सोने की सतह पर एक bifunctional लिंकर की एक स्वयं कोडांतरण monolayer (एसएएम) का 1) प्रारंभिक गठन: यह दृष्टिकोण ?...

हड्डी morphogenetic प्रोटीन 2 (बीएमपी -2) बदलने वृद्धि कारक (TGF-β) परिवार और डी नोवो हड्डी गठन की inducer के रूप में अच्छी तरह से भ्रूण के विकास और वयस्क दौरान कई ऊतकों के नियामक के रूप में कार्य करता है 1-3 homeostasis के एक सदस्य है. जैविक रूप से सक्रिय homodimeric बीएमपी -2 प्रोटीन की प्रत्येक monomer अत्यधिक सभी BMPs 4 में संरक्षित है जो एक &quot;सिस्टीन गाँठ&quot; मूल भाव शामिल हैं. सातवें सिस्टीन दो monomers 5,6 के बीच एक intermolecular बांड बनाने, dimerization में शामिल है जबकि सात सिस्टीन अवशेषों के छह, प्रत्येक मोनोमर को स्थिर कि intramolecular डाइसल्फ़ाइड बांड फार्म. यह अत्यधिक संरक्षित सिस्टीन गाँठ बीएमपी -2 प्रोटीन के तीन आयामी संरचना को परिभाषित करता है और इस तरह की गर्मी, denaturants और अम्लीय पीएच 7-9 के खिलाफ प्रतिरोध के रूप में अपनी अद्वितीय गुण, निर्धारित करता है. बीएमपी -2, जिससे संकेत पारगमन उत्प्रेरण, सेरीन / threonine kinase transmembrane रिसेप्टर्स करने के लिए बांध <sup&gt; 10-12. रिसेप्टर oligomerization के मोड पर निर्भर करता है, अलग संकेत दे रास्ते सक्रिय कर रहे हैं: एक Smad निर्भर मार्ग Smad जटिल परमाणु स्थानान्तरण और के प्रतिलेखन के सक्रियण में रिसेप्टर phosphorylation परिणामों से सक्रिय है, जबकि एक Smad स्वतंत्र संकेत झरना, p38 संकेतन के माध्यम alkaline फॉस्फेट प्रेरण की ओर जाता है इस तरह के भेदभाव का अवरोध करनेवाला (आईडी) 12-14 के रूप में विशिष्ट लक्ष्य जीन,. हड्डी में, बीएमपी -2 के इस प्रकार उपचार और हड्डी का नए सिरे से गठन के उत्तेजक, अस्थिकोरक में mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव को प्रेरित करता है. वर्तमान में, recombinantly बीएमपी 2 खंडित साइटों के उपचार बढ़ाने के लिए चिकित्सकीय लागू किया जाता है व्यक्त की है. अस्थि ऊतक इंजीनियरिंग में एक आम रणनीति स्थानीय वितरण प्रणाली की तुलना में कम आक्रामक है जो इंजेक्शन वृद्धि कारकों का इस्तेमाल होता है. हालांकि, vivo अध्ययन और नैदानिक ​​अनुप्रयोगों से पता चला है कि कम जैविक आधा जीवन, unspecific नियंत्रण रेखाalization और बीएमपी -2 के तेजी से स्थानीय निकासी कई स्थानीय अस्थानिक और प्रणालीगत समस्याओं 15 को जन्म दे सकती. इसलिए, एक प्रभावी प्रस्तुति, सामग्री के भीतर या पर बीएमपी -2 के फंसाने या स्थिरीकरण प्राप्त करने के लिए लक्ष्य साइट पर अपने स्थानीय और निरंतर वितरण के लिए आवश्यक है. निरंतर वितरण जैसे भौतिक फंसाने, सोखना या आयन complexation के रूप में 16 गैर सहसंयोजक प्रतिधारण दृष्टिकोण के साथ प्राप्त किया जा सकता है. हालांकि, यह ज्ञात है कि अणुओं की 17 विकृतीकरण में सतहों के लिए प्रोटीन की unspecific सोखना मई का परिणाम है. वृद्धि कारकों के बंधन सहसंयोजक के लिए, समर्थन के विभिन्न प्रकार पिछले दशक में विकसित किया गया है. उदाहरण के लिए प्रोटीन के अमीनो या carboxyl समूहों को लक्षित कि bifunctional जोड़ने अणुओं का उपयोग करते हैं, जरूरी नहीं कि इसके स्थिरीकरण प्राप्त करने के लिए प्रोटीन संशोधन की आवश्यकता नहीं है कि दृष्टिकोण का एक प्रकार है. वास्तव में, जबकि प्रोटीन संशोधन, प्रोटीन उन्मुखीकरण को नियंत्रित करने का लाभ प्रदान करता हैकृत्रिम डोमेन, पेप्टाइड टैग और साइट विशेष चेन की शुरूआत के विकास की जैविक गतिविधि 17 कारकों को बदल सकता है. इस प्रकार, कारण समर्थन सामग्री के साथ बातचीत करने के लिए विकृतीकरण नाकाम करने के लिए, सतहों वांछित कारक 18 के युग्मन के बाद एक लिंक के अणु का एक आत्म इकट्ठे monolayer (एसएएम), के साथ, उदाहरण के लिए, पहले से क्रियाशील किया जा सकता है. हम अपनी स्वतंत्र amine अवशेषों को लक्षित करके covalently एक सतह पर बीएमपी -2 स्थिर करने के लिए एक सैम आधारित दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया है और immobilized प्रोटीन अपनी छोटी और लंबी अवधि के जैविक गतिविधि 19 दोनों को बरकरार रखे हुए दिखाया है. इस प्रोटोकॉल कोशिका झिल्ली में पाए जाते हैं और osteogenic संकेतन के लिए जिम्मेदार intracellular संकेत विनियमित जो तंत्र पर इन विट्रो अध्ययन के लिए कोशिकाओं को बीएमपी -2 वितरित करने के लिए एक सरल और कारगर तरीका प्रदान करता है.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(dimethylamino)pyridin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>522805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A2282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-mercaptoundecanoic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>674427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichlormethane</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N&#39;-dicyclohexylcarbodiimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D80002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum benzene</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>M 875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylacetate</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A3550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>4627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-dimethylformamide</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>T921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhBMP-2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>355-BM</td>
			<td>Carrier-free; expressed in E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>PAA</td>
			<td>H15-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>HN00.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(dimethyl siloxane) (PDMS)</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 silicone elastomer kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rhBMP-2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B9553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2005</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampliflu Red assay</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>90101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) (1x), liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>41966</td>
			<td>High glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7524</td>
			<td>Sterile filtered, cell culture tested</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% (1x) with EDTA 4Na</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine (0.1 M)</td>
			<td>Riedel-de Ha&#235;n</td>
			<td>33226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGEPAL CA-630 (1%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I8896</td>
			<td>Lysis buffer (ALP assay)19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride (MgCl2)(1 mM)</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>HNO3.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc chloride (ZnCl2) (1 mM)</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>3533.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-nitrophenylphosphate (pNPP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0942</td>
			<td>Phosphatase substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mysin heavy chain (MHC)</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank, University of Iowa</td>
			<td>MF20</td>
			<td>Monoclonal antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Goat anti-mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrsonic bath (Sonorex Super RK 102H), Frequency 35 kHz</td>
			<td>BANDELIN electronic GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED 020 Sputtercoating system</td>
			<td>BAL-TEC AG</td>
			<td></td>
			<td>Coating conditions 
			Cr: 120 mA, 1.3 x 10-2 mbar, 30 sec 
			Au: 60 mA, 5.0 x 10-2 mbar, 45 sec</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite M200 Plate reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

covalent binding of bmp-2 on surfaces using a self-assembled monolayer approach

हड्डी morphogenetic प्रोटीन 2 (बीएमपी 2) अस्थि ऊतक के बाह्य मैट्रिक्स में एम्बेडेड एक वृद्धि कारक है. इस प्रकार चिकित्सा और डी नोवो हड्डी गठन उत्तेजक अस्थिकोरक में mesenchymal सेल भेदभाव के ट्रिगर के रूप में बीएमपी 2 कार्य करता है,. scaffolds के साथ संयोजन के रूप में पुनः संयोजक मानव बीएमपी -2 (rhBMP -2) का उपयोग नैदानिक ​​प्रस्तुति के मोड पर आधारित है, हाल ही में विवादों को उठाया गया है और राशि वितरित किया जाना है. यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल कोशिकाओं पर इन विट्रो अध्ययन के लिए बीएमपी -2 वितरित करने के लिए एक सरल और कारगर तरीका प्रदान करता है. हम एक heterobifunctional लिंकर से मिलकर एक आत्म इकट्ठे monolayer फार्म करने के लिए कैसे का वर्णन है, और rhBMP-2 के सहसंयोजक स्थिरीकरण प्राप्त करने के बाद के बंधन कदम दिखा. इस दृष्टिकोण के साथ यह प्रोटीन की जैविक गतिविधि को बनाए रखते हुए बीएमपी -2 के एक निरंतर प्रस्तुति को प्राप्त करने के लिए संभव है. वास्तव में, बीएमपी -2 के सतह स्थिरीकरण unspecific विज्ञापनों को रोकने के द्वारा लक्षित जांच की अनुमति देता हैorption, वृद्धि कारक की मात्रा को कम करने और जबकि, सबसे विशेष रूप से, सतह से अनियंत्रित रिहाई निरोधक. कोशिकाओं covalently immobilized rhBMP -2 पेश सतहों को उजागर कर रहे हैं जब बीएमपी 2 से चालू होने वाले दोनों छोटी और लंबी अवधि के संकेत घटनाओं बीएमपी -2 उत्तेजना को सेल प्रतिक्रियाओं पर इन विट्रो अध्ययन के लिए इस दृष्टिकोण से उपयुक्त है, जिससे जगह ले रहे हैं.

यह एक जैविक रूप से unspecific लेकिन रासायनिक tunable प्रणाली प्रदान करता है के बाद से हमारे सेटअप में, सोने excipient के रूप में चुना गया था. इसके अलावा, स्वयं कोडांतरण monolayers के आवेदन कई लाभ जरूरत पर जोर देता: उनके कार्यात्म...

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Covalent Binding of BMP-2 on Surfaces Using a Self-assembled Monolayer Approach

हम सतहों पर बीएमपी -2 के कुशल स्थिरीकरण को पूरा करने के लिए एक विधि का वर्णन. हमारा दृष्टिकोण अपनी स्वतंत्र amine अवशेषों के माध्यम से बीएमपी -2 के बंधन सहसंयोजक प्राप्त करने के लिए एक आत्म इकट्ठे monolayer के गठन पर आधारित है. इस विधि कोशिका झिल्ली पर संकेतन अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है.

सहसंयोजक एक स्व इकट्ठे monolayer दृष्टिकोण का उपयोग कर सतहों पर बीएमपी -2 के बंधन

Bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) is a growth factor embedded in the extracellular matrix of bone tissue. BMP-2 acts as trigger of mesenchymal cell ...

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