Name: enrichment and purging of human embryonic stem cells by detection of cell surface antigens using the monoclonal antibodies tg30 and gctm-2
Uploaded: 2013-12-06T17:30:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Enrichment and Purging of Human Embryonic Stem Cells by Detection of Cell Surface Antigens Using the Monoclonal Antibodies TG30 and GCTM-2 at JoVE.com

हम ईएसएश विश्वविद्यालय में एफएनकोर सुविधा को एचएससी लाइनों के प्रावधान और FACS सेवाओं के लिए मोनाश विश्वविद्यालय में फ्लोकोर सुविधा के लिए धन्यवाद देते हैं । इस काम को ऑस्ट्रेलियन स्टेम सेल सेंटर, न्यू साउथ वेल्स और विक्टोरियन गवर्नमेंट स्टेम सेल रिसर्च ग्रांट प्रोग्राम से सभी को रिसर्च ग्रांट का समर्थन मिला । सभी स्टेम सेल विज्ञान, स्टेम सेल ऑस्ट्रेलिया में ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद (एआरसी) विशेष अनुसंधान पहल के एक साथी अन्वेषक है ।

<ol>
	<li>Pera, M. F., Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+regulation+of+pluripotent+stem+cells.">Extrinsic regulation of pluripotent stem cells.</a> Nature. 10 (7299), 713-720 (2010).</li><li>Pistollato, F., Bremer-Hoffmann, S., Healy, L., Young, L., Stacey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+pluripotent+stem+cell+cultures+for+toxicity+testing.">Standardization of pluripotent stem cell cultures for toxicity testing.</a> Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 8 (2), 239-257 (2012).</li><li>Miura, K., Okada, Y., Aoi, T., Okada, A., Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., Koyanagi, M., Tanabe, K., Ohnuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+the+safety+of+induced+pluripotent+stem+cell+lines.">Variation in the safety of induced pluripotent stem cell lines.</a> Nat. Biotechnol. 27 (8), 743-745 (2009).</li><li>Polanco, J. C., Laslett, A. L., Lenka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+Assessment+of+Reprogrammed+Cells+Prior+to+Clinical+Applications:+Potential+Approaches+to+Eliminate+Teratoma+Formation.">Safety Assessment of Reprogrammed Cells Prior to Clinical Applications: Potential Approaches to Eliminate Teratoma Formation.</a> Pluripotent Stem Cells. , (2013).</li><li>Laslett, A. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+continuum+of+cell+states+spans+pluripotency+and+lineage+commitment+in+human+embryonic+stem+cells.">A continuum of cell states spans pluripotency and lineage commitment in human embryonic stem cells.</a> PLoS One. 4, e7708 (2009).</li><li>Filipczyk, A. A., Laslett, A. L., Mummery, C., Pera, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+is+coupled+to+changes+in+the+cell+cycle+regulatory+apparatus+of+human+embryonic+stem+cells.">Differentiation is coupled to changes in the cell cycle regulatory apparatus of human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Res. 1, 45-60 (2007).</li><li>Polanco, J. C., Ho, M. S. H., Wang, B., Zhou, Q., Wolvetang, E., Mason, E., Wells, C., Kolle, G., Grimmond, S. M., Bertoncello, I., O'Brien, C., Laslett, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+unsafe+human+IPSC+lines+using+a+robust+surrogate+assay+for+pluripotency.">Identification of unsafe human IPSC lines using a robust surrogate assay for pluripotency.</a> Stem Cells. 31 (8), 1498-1510 (2013).</li><li>Sharpe, M. E., Morton, D., Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonclinical+safety+strategies+for+stem+cell+therapies.">Nonclinical safety strategies for stem cell therapies.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 262 (3), 223-231 (2012).</li></ol>

खुलासा करने के लिए कुछ नहीं ।

नैदानिक संदर्भ में, विभेदित दैहिक कोशिका प्रकार प्रत्यारोपण और चिकित्सीय अनुप्रयोगों के लिए अंतिम वांछित उत्पाद हैं, और एचपीएससी प्रयोगशाला में उन दैहिक कोशिकाओं या उनके जनकों को उत्पन्न करने के लिए एक आत्म-नवीनीकरण और स्केलेबल स्रोत हैं। टेराटोमा गठन के लिए एक अंतर्निहित क्षमता के साथ अवशिष्ट अविभेदित एचएससी की उपस्थिति रोगियों में प्रत्यारोपण के लिए एचएसएससी-व्युत्पन्न दैहिक कोशिकाओं पर विचार करते समय एक सुरक्षा जोखिम है। इस और सेल थेरेपी के साथ जुड़े अन्य जोखिमों की समीक्षा के लिए कृपया शार्प एट अल देखें। 16 इसलिए, ऐसे अनुप्रयोगों को महसूस करने के लिए, यह जरूरी है कि शोधकर्ताओं का लक्ष्य लक्ष्य सेल आबादी उत्पन्न करना है जो भी पूर्णपोटेंट स्टेम सेल-मुक्त हैं। इस उद्देश्य के लिए, हम यहां प्रदर्शित करते हैं कि हमारे TG30/GCTM-2 FACS पद्धति काउपयोग करके एक अंतर कोशिका आबादी में pluripotent कोशिकाओं (TG30 Hi-GCTM-2हाय)की उपस्थिति के लिए निगरानी करना संभव है और व्यवहार्य एचईएससी-विभेदित डेरिवेटिव प्राप्त करते हैं जिन्हें समृद्ध और बाद-FACS के बाद पुनर्संस्कृति की जा सकती है । यद्यपि हमारे प्रोटोकॉल के एक पास के साथ 100% बहुल स्टेम सेल-मुक्त नमूने प्राप्त करना संभव नहीं है, समृद्ध एचएससी-डेरिवेटिव को पुनर्संस्कृत किया जा सकता है और लगातार पासिंग के बाद 100% दैहिक-सेल शुद्धता हासिल की जाती है। विस्तार के बाद FACS के लिए दैहिक कोशिकाओं की प्रदर्शित व्यवहार्यता भी संभावित प्रत्यारोपण चिकित्सा के लिए उपयुक्त कोशिकाओं की पर्याप्त संख्या के उत्पादन के लिए अनुमति देता है ।
इस प्रायोगिक अध्ययन के उत्साहजनक परिणामों ने हमें कई मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (hiPSC) लाइनों15के साथ एक तुलनात्मक अध्ययन में हमारे TG30/GCTM-2 प्रोटोकॉल का उपयोग कर एक अधिक व्यापक जांच करने के लिए प्रेरित किया । उस अध्ययन में, हमने पाया कि हमारे TG30/GCTM-2 FACS प्रोटोकॉल का उपयोग कर प्राप्त pluripotent स्टेम सेल मुक्त नमूनों टेराटोमा उत्पन्न नहीं किया जब प्रतिरक्षा से वंचित चूहों में प्रत्यारोपित किया । इसलिए, हम आत्मविश्वास से कह सकते हैं कि इस इन विट्रो प्रोटोकॉल के उपयोग के साथ, प्रारंभिक चरण विभेदक कोशिका संस्कृतियों को pluripotent TG30 हाय-जीसीटीएम-2हाय कोशिकाओं से मुक्त होने के लिए निर्धारित वीवो मेंटेरेटामास विकसित नहीं करते हैं। यह दृढ़ता से हमारी परख की मजबूती का समर्थन करता है, नैदानिक अनुप्रयोगों में एचपीएससी-व्युत्पन्न कोशिकाओं के उपयोग से पहले टेराटोमा गठन के जोखिम को खत्म करने के लिए एक संभावित दृष्टिकोण प्रदान करता है।
इसके विपरीत, हम यह भी बताते है कि TG30/GCTM-2 FACS परख इन दो सतह एंटीजन (TG30 हाय-GCTM-2हाय)की अभिव्यक्ति के उच्च स्तर के साथ एक pluripotent सेल आबादी को पुनः प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पिछले अध्ययनों से पता चला है कि TG30 हाय-GCTM-2हाय कोशिकाओं OCT4हाय अभिव्यक्ति के साथ सबसे अधिक संबंध प्रदर्शित करते है और hESC की तरह कालोनियों की सबसे अधिक संख्या के रूप में५,६,१३,१५। इसलिए हम कारण है कि pluripotency नेटवर्क TG30 हाय-GCTM-2हायव्यक्त कोशिकाओं में अपने अधिकतम स्तर पर सक्रिय है । हम मानते है कि हमारे TG30/GCTM-2 FACS प्रोटोकॉल काउपयोग कर और P7 (TG30 हाय-GCTM-2हाय)कोशिकाओं को पुनः प्राप्त करने के लिए समृद्ध लाइव hESC संस्कृतियों के बड़े पैमाने पर शुद्धि के लिए अनुमति दे सकता है, भेदभाव परख के लिए इनपुट के रूप में ।
अंत में, हम यहां एचएससी के शुद्ध और संवर्धन दोनों के लिए सतह एंटीजन TG30 और GCTM-2 की संयुक्त अभिव्यक्ति के आधार पर हमारे FACS परख की क्षमता प्रदर्शित करते हैं । एचपीएससी के निर्देशित भेदभाव के लिए प्रोटोकॉल के साथ भविष्य के अध्ययन भी इस क्षमता के बारे में जानकारीपूर्ण होने की संभावना है । हम जानते हैं कि कुछ परख में जहां विभेदित एचएससी-डेरिवेटिव टेम्पोरल एक्सप्रेस TG30 (CD9) या GCTM-2, इन दो एंटीबॉडी उचित या परख 6 में एक विशेष समय बिंदु पर एक विभेदितआबादीसे pluripotent कोशिकाओं शुद्ध करने के लिए पर्याप्त नहीं हो सकता है । इसलिए, उपन्यास एंटीबॉडी खोजने की एक आवश्यकता चल रही है जो कुछ विभेदित सेल प्रकारों के साथ क्रॉस-रिएक्शन की संभावित सीमा को दूर करने के लिए विशेष रूप से लाइव एचएससी को पहचानती है।

एचपीएससी (एचपीएससी) में मानव भ्रूणीय स्टेम सेल (एचईएससी) और मानव प्रेरित प्लूइपोपेंट स्टेम सेल (एचपीएससी) शामिल हैं। एचपीएससी "pluripotency" के रूप में जाना जाता अपनी क्षमता को खोने के बिना उपयुक्त संस्कृति की स्थिति में अनिश्चित काल के लिए आत्म नवीनीकृत कर सकते हैं । Pluripotency एक कोशिका के लिए क्षमता के रूप में परिभाषित किया गया है अनिवार्य रूप से तीन भ्रूण रोगाणु कोशिका परतों में से प्रत्येक के कोशिकाओं प्रतिनिधि सहित किसी भी दैहिक सेल वंश में अंतर करने के लिए । एचपीएससी की उल्लेखनीय क्षमता चिकित्सीय विकल्पों सहित सेल-आधारित अनुप्रयोगों की एक बड़ी विविधता के लिए एक साधन प्रदान करती है। उदाहरण के लिए, कोशिका मृत्यु और पतन से जुड़े विकार हैं, जहां मानव शरीर में कोशिकाओं की सामान्य कार्यक्षमता से समझौता किया जाता है, जैसा कि दिल की विफलता, रीढ़ की हड्डी की चोटों, मधुमेह, पार्किंसंस रोग, कुछ कैंसर और अन्य नैदानिक विकृतियों में होता है। इन स्थितियों से पीड़ित रोगियों को प्रयोगशाला में एचपीएससी से प्राप्त स्वस्थ और कार्यात्मक दैहिक कोशिकाओं का प्रत्यारोपण करके संभावित रूप से इलाज किया जा सकता है । हालांकि, वर्तमान एचपीएससी भेदभाव प्रोटोकॉल 100% कुशल नहीं हैं और विभेदित लक्ष्य और ऑफ-टारगेट सेल प्रकारों का मिश्रण उत्पीड करते हैं, साथ ही अवशिष्ट एचपीएससी जो भेदभाव नहीं करते हैं, इसके बजाय स्वयं को नवीनीकृत करने के लिए जारी रखतेहैं 1-3। रोगियों में प्रत्यारोपण के लिए इरादा एचपीएससी-व्युत्पन्न दैहिक कोशिकाओं के एक नमूने में एचपीएससी की एक छोटी संख्या की उपस्थिति एक गंभीर नैदानिक जोखिम का गठन करती है क्योंकि इन कोशिकाओं को उनकी अंतर्निहित प्रकृति द्वारा सभी तीन भ्रूणीय रोगाणु परतों के ऊतकों के रूप में, संभवतः वीवो में एक प्रकार के ट्यूमर का रूप ले सकता है जिसे टेराटोमा के रूप में जाना जाता है। इसलिए, केवल लक्ष्य सेल आबादी pluripotent स्टेम सेल से मुक्त होने के लिए निर्धारित रोगियों में प्रत्यारोपण के लिए सुरक्षित माना जा सकता है । भेदभाव के बाद अवशिष्ट एचपीएससी के मिटाने को संभावित रूप से पूरा करने के लिए कई दृष्टिकोण ों की सूचना दी गई है, (समीक्षा के लिए पोलांको और लैलेट4देखें)। हमने पहले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी टीजी 30 (सीडी 9) और जीसीटीएम-2 के उपयोग की सूचना दी है, जो प्लूसिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं की पहचान करने और एचएससीलाइन5-7की संस्कृतियों में भेदभाव के प्रारंभिक चरण से गुजर रही कोशिकाओं से भेदभाव करने के लिए सक्रिय सेल छंटाई (FACS) के साथ मिलकर किया गया है।
कोशिका सतह एंटीजन का पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करने का एक लाभ यह है कि लक्षित कोशिकाएं आमतौर पर एंटीबॉडी बाइंडिंग और/या लेबलिंग के बाद व्यवहार्य होती हैं । इसलिए, प्रत्यारोपण से पहले विस्तार और आगे के अनुप्रयोगों के लिए एंटीबॉडी लेबलिंग और पुनर्संस्कृति के बाद लक्षित कोशिकाओं को एकत्र किया जा सकता है। एचपीएससी पर व्यक्त सेल सतह एंटीजन के लिए एक चेतावनी यह है कि वे प्लुरिपोटेंट चरण के लिए अनन्य नहीं हैं और विकास के दौरान कई मामलों में अस्थायी रूप से फिर से व्यक्त किए जाते हैं और इसलिए कुछ विभेदित सेल प्रकारों में पता लगाया जाएगा। इसलिए, यदि उद्देश्य मानव pluripotent कोशिकाओं का पता लगाने और उन्हें एचपीएससी-व्युत्पन्न कोशिकाओं के एक नमूने से शुद्ध करने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करना है, तो चयनित एंटीबॉडी को प्रत्यारोपण के लिए इरादा विशिष्ट विभेदित कोशिका प्रकारों पर एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया भी नहीं करनी चाहिए। दुर्भाग्य से, सीमित संख्या में एंटीबॉडी हैं जो लाइव एचपीएससी 4पर सेल सतह मार्कर का पता लगाते हैं, जिससे चयन के लिए विकल्प सीमित हो जाते हैं। इसके अलावा, कुछ अध्ययनों ने बताया है कि सभी एचपीएससी को खत्म करने के लिए एक एकल सेल-सरफेस मार्कर का पता लगाना पर्याप्त नहीं है, यह सुझाव देते हुए कि सभी एचपीएससी प्लूइटोटेंट उपआबादी को खत्म करने के किसी भी प्रयास को उन तरीकों पर निर्भर करना चाहिए जो एचपीएससी 9-10द्वारा व्यक्त विभिन्न एपिटोप का पता लगाने वाले दो या अधिक एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं । जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, केवल एचपीएससी-व्युत्पन्न कोशिकाएं जिन्हें pluripotent स्टेम सेल-मुक्त सेल आबादी के रूप में निर्धारित किया जा सकता है, मानव प्रत्यारोपण के लिए उपयुक्त हैं। एक एंटीबॉडी-मध्यस्थता सेल छंटाई प्रौद्योगिकी के माध्यम से एक भी पास के साथ स्ट्रिंग के इस स्तर तक पहुंचने प्राप्त नहीं किया जा सकता है। विभेदित लक्ष्य कोशिकाओं की समृद्ध आबादी की पुनर्संस्कृति और सेल छंटाई के बाद के दौर निश्चित रूप से pluripotent स्टेम सेल मुक्त नमूने प्राप्त करने के लिए आवश्यक हो सकता है ।
हमारी प्रयोगशाला में, हमने लाइव प्लुरिपोटेंट कोशिकाओं का पता लगाने के लिए दो एचईएस सेल-सरफेस एंटीबॉडी, टीजी 30 (सीडी 9) और जीसीटीएम-2 की बड़े पैमाने पर विशेषता है। हमारे अध्ययनों से पता चला है कि टीजी 30 और जीसीटीएम-2 दोनों का संयुक्त पता लगाना एचईएससी लाइनों 5-7में विहित बहुलता से जुड़े जीन की अभिव्यक्ति से संबंधित है। TG30/GCTM-2 FACS इम्यूनोप्रोफिलिंग ने लगातार दिखाया है कि एचएसईसी संस्कृतियों TG30/GCTM-2 अभिव्यक्ति 5-7के एक मात्रात्मक सतत ढाल का गठन । हम मनमाने ढंग से इस TG30/GCTM-2 ढाल के भीतर कोशिकाओं की चार आबादी (पी) की स्थापना की है: P4 (TG30 Neg-GCTM-2Neg),P5(TG30 कम-GCTM-2कम),P6 (TG30मध्य-GCTM-2मिड)और P7 (TG30Hi-GCTM-2) Hi5-77 इन P4, P5, P6 और P7 सेल आबादी के हमारे लक्षण वर्णन से पता चला है कि P6 और P7 उपवर्वर्त बड़ी संख्या में pluripotency से जुड़े जीन व्यक्त करते है और कुशलता से स्टेम की तरह कालोनियों के रूप में जब faced के बाद FACS 2-3। दूसरी ओर, पी 4 (TG30 Neg-GCTM-2Neg)कोशिकाएं बड़ी संख्या में भेदभाव मार्कर व्यक्त करती हैं और अनायास विभेदित कोशिका प्रकारों का गठन करती हैं जो आमतौर पर एचएससी लाइनों 5-6की संस्कृतियों के विस्तार में होती हैं। हमने प्रारंभिक चरण के भेदभाव के बाद अवशिष्ट एचपीएससी के चयनात्मक उन्मूलन के लिए अपने टीजी 30/जीसीटीएम-2 FACS की क्षमता का परीक्षण करने का निर्णय लिया, और पूर्णीकृत स्टेम सेल आबादी के संवर्धन के लिए भी । नीचे वर्णित प्रोटोकॉल से पता चलता है कि कैसे इकट्ठा करने के लिए और पुनर्संस्कृति विभेदित P4 (TG30 Neg-GCTM-2Neg)कोशिकाओं के बाद FACS pluripotent P7 (TG30हाय-GCTM-2हाय)के मिटाने को पूरा करने के लिए । इसके अलावा, हम pluripotent P7 (TG30 हाय-GCTM-2हाय)कोशिकाओं के संग्रह और पुनर्संस्कृति की व्याख्या भी pluripotent कोशिकाओं की एक समृद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए, जो बाद में संभावित दक्षता और भेदभाव परख की निरंतरता बढ़ाने के लिए एक परिभाषित इनपुट आबादी के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Short Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Long Name </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11320082</td>
			<td>Long Name: Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium:Nutrient Mixture F-12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOSR</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10828028</td>
			<td>Long Name: Knockout Serum Replacement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Long Name: GlutaMAX supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonessential Amino Acids</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>Long Name: MEM Nonessential Amino Acids Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>21985023</td>
			<td>Long Name: 2-Mercaptoethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190250</td>
			<td>Long Name: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12604039</td>
			<td>Long Name: TrypLE Express (1x), no Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF-488</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21131</td>
			<td>Long Name: Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF-647</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21238</td>
			<td>Long Name: Alexa Fluor 647 goat anti-mouse IgM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-anti IgG2a</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>P21139</td>
			<td>Long Name: R-Phycoerythrin Goat Anti-Mouse IgG2a (&#947;2a) Conjugate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Long Name: Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium, high glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Long Name: Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled Water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15230-089.</td>
			<td>Long Name: Sterile Distilled Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P4864</td>
			<td>Long Name: Propidium iodide solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>12203C</td>
			<td>Long Name: Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G-1890</td>
			<td>Long Name: Gelatin from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-2</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>GF003AF-100UG</td>
			<td>Long Name: Fibroblast Growth Factor basic, human recombinant, animal-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td>Long Name: Stericup-GP, 0.22 &#956;m, polyethersulfone, 250 ml, radio-sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352350</td>
			<td>Long Name: Cell strainer with 70 &#956;m Nylon mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 &#956;m Lid cell strainer, 5 ml tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352235</td>
			<td>Long Name: 5 ml polystyrene round bottom test tube, with a cell strainer cap (35 &#956;m)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene round bottom test tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352054</td>
			<td>Long Name: 5 ml polystyrene round bottom test tube, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG2a Isotype Control</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>554126</td>
			<td>Long Name: Purified Mouse IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgM Isotype Control</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>553472</td>
			<td>Long Name: Purified Mouse IgM, &#954; Isotype Control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CD90.2</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>553014</td>
			<td>Long Name: PE Rat Anti-Mouse CD90.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-peaks calibration</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>559123</td>
			<td>Long Name: Rainbow Calibration Particles (8 peaks)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml sterile Polypropylene tube</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td>Long Name: 50 ml Polypropylene tube with conical bottom, Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 flask</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>658175</td>
			<td>Long Name: CELLSTAR Filter Cap Cell Culture 75 cm2 Flasks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TG30</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB4427</td>
			<td>Long Name: TG30 Antibody, clone TG30</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCTM-2</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB4346</td>
			<td>Long Name: GCTM-2 is not commercially available but TG343 and equivalent monoclonal antibody is</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 4. List of materials and reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>FACSVantage SE with FACSDiva option</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>IX71</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
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enrichment and purging of human embryonic stem cells by detection of cell surface antigens using the monoclonal antibodies tg30 and gctm-2

मानव भ्रूणस्टेम कोशिकाओं (hESC) स्वयं को विट्रो मेंअनिश्चित काल के लिए नवीनीकृत कर सकते हैं, और उचित संकेतों के साथ संभावित सभी दैहिक सेल वंश में अंतर करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है । विभेदित एचएससी डेरिवेटिव संभावित रूप से प्रत्यारोपण चिकित्सा में इस्तेमाल किया जा सकता है सेल अपक्षयी रोगों की एक किस्म के इलाज के लिए । हालांकि, एचएससी विभेदन प्रोटोकॉल आमतौर पर विभेदित लक्ष्य और ऑफ-टारगेट सेल प्रकारों के साथ-साथ अवशिष्ट अविभेदित कोशिकाओं का मिश्रण उत्पीड करते हैं। प्रयोगशाला से क्लिनिक में विभेदित एचईएससी-डेरिवेटिव के अनुवाद के लिए, अविभेदित (pluripotent) और विभेदित कोशिकाओं के बीच भेदभाव करने में सक्षम होना महत्वपूर्ण है, और इन आबादी को अलग करने के तरीके उत्पन्न करते हैं। एचएसएससी-व्युत्पन्न दैहिक कोशिका प्रकारों के सुरक्षित अनुप्रयोग को केवल pluripotent स्टेम सेल मुक्त आबादी के साथ पूरा किया जा सकता है, क्योंकि अवशिष्ट एचईएससी प्रत्यारोपण के बाद टेराटोमा के रूप में जाना जाने वाले ट्यूमर को प्रेरित कर सकता है। इस उद्देश्य की ओर, यहां हम सकारात्मक चयन का उपयोग करके pluripotent TG30 हाय-जीसीटीएम-2 एचईएससी की पहचान के लिए फ्लोरीपॉसेंट टीजी30 हाई-जीसीटीएम-2एचईएससी की पहचान के लिए फ्लोरीपॉजिटेंस से जुड़े सेल सरफेस एंटीजन का पता लगाने के लिए एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी टीजी30 (सीडी9) और जीसीटीएम-2 के माध्यम से एक पद्धति का वर्णन करते हैं। हमारे TG30/GCTM-2 FACS पद्धति के साथ नकारात्मक चयन का उपयोग करना, हम बहुत प्रारंभिक चरण के भेदभाव (TG30 Neg-GCTM-2Neg)के दौर से गुजर आबादी में अविभेदित hESCs का पता लगाने और शुद्ध करने में सक्षम थे । एक और अध्ययन में, हमारे TG30/GCTM-2 FACS प्रोटोकॉल का उपयोग कर चयनित विभेदित TG30 Neg-GCTM-2Neg कोशिकाओं के pluripotent स्टेम सेल मुक्त नमूनों एक बार प्रतिरक्षा समझौता चूहों में प्रत्यारोपित teratomas फार्म नहीं किया, हमारे प्रोटोकॉल की मजबूती का समर्थन । दूसरी ओर, TG30/GCTM-2 FACS-समृद्ध pluripotent TG30 हाय-GCTM-2हाय hESCs के लगातार पासिंग उनके लिए स्वयं को प्रभावित नहीं किया विट्रो या उनके आंतरिक pluripotency में नवीनीकृत । इसलिए, हमारे TG30/GCTM-2 FACS पद्धति की विशेषताओं को भेदभाव परख के लिए इनपुट के रूप में एचपीएससी की अत्यधिक समृद्ध आबादी प्राप्त करने के लिए और व्युत्पन्न कोशिका आबादी से संभावित ट्यूमरजेनिक (या अवशिष्ट) एचएसएससी से छुटकारा पाने के लिए एक संवेदनशील परख प्रदान करते हैं ।

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Enrichment and Purging of Human Embryonic Stem Cells by Detection of Cell Surface Antigens Using the Monoclonal Antibodies TG30 and GCTM-2

हम सकारात्मक चयन का उपयोग कर जीवित मानव भ्रूणस्टेम कोशिकाओं (एचएससी) की पहचान और संवर्धन के लिए फ्लोरेसेंस सक्रिय सेल छंटाई (FACS) के माध्यम से सेल सतह एंटीजन के संयुक्त पता लगाने के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडी TG30 (सीडी 9) और GCTM-2 के उपयोग का वर्णन करते हैं और मिश्रित कोशिका आबादी से एचईएससी को शुद्ध करने के लिए नकारात्मक चयन का उपयोग भी करते हैं।

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी टीजी30 और जीसीटीएम-2 का उपयोग करके सेल सरफेस एंटीजन का पता लगाकर मानव भ्रूणस्टेम कोशिकाओं का संवर्धन और शुद्धीकरण

Human embryonic stem cells (hESC) can self-renew indefinitely in vitro, and with the appropriate cues can be induced to differentiate into potentially all ...

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Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

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Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Passaging hues मानव भ्रूणीय स्टेम trypsin के साथ सेल लाइनों

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ते) के प्रचार - प्रसार

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

जैव फ्लिप चिप का प्रयोग भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के patterning

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

संस्कृति और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के रखरखाव

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं को ठंड और विगलन

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

वीडियो मानव भ्रूण स्टेम सेल कॉलोनी विकास के विश्लेषण बायोइनफॉरमैटिक्स

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Oligodendrocyte व्यापारियों में भेदभाव

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...