Name: methods for the modulation and analysis of nf-&#954;b-dependent adult neurogenesis
Uploaded: 2014-02-13T23:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for the Modulation and Analysis of NF-ÃŽÂºB-dependent Adult Neurogenesis at JoVE.com

Мы благодарим Ангела Kralemann-Келера за отличную техническую поддержку. Экспериментальная работа описано здесь проводили в нашей лаборатории и была поддержана грантами немецкого исследовательского совета (DFG) в СК и ВК и гранта немецкого Министерства науки и образования (BMBF) в БК.

Заявление Этика Это исследование было проведено в строгом соответствии с нормативно-правовыми актами правительства животного и аккуратно обращайтесь комитета, LANUV государственной Северный Рейн-Вестфалия, (Дюссельдорф, Германия). Все эксперименты на животных были утвер?...

<ol>
	<li>Gutierrez, H., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neural+process+growth,+elaboration+and+structural+plasticity+by+NF-kappaB.">Regulation of neural process growth, elaboration and structural plasticity by NF-kappaB.</a> Trends Neurosci. 34, 316-325 (2011).</li><li>Imielski, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regrowing+the+adult+brain:+NF-kappaB+controls+functional+circuit+formation+and+tissue+homeostasis+in+the+dentate+gyrus.">Regrowing the adult brain: NF-kappaB controls functional circuit formation and tissue homeostasis in the dentate gyrus.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahippocampal+injection+of+A+beta(1-42)+inhibits+neurogenesis+and+down-regulates+IFN-gamma+and+NF-kappaB+expression+in+hippocampus+of+adult+mouse+brain.">Intrahippocampal injection of A beta(1-42) inhibits neurogenesis and down-regulates IFN-gamma and NF-kappaB expression in hippocampus of adult mouse brain.</a> Amyloid. 20 (1-42), 13-20 (2013).</li><li>Denis-Donini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+adult+neurogenesis+associated+with+short-term+memory+defects+in+NF-kappaB+p50-deficient+mice.">Impaired adult neurogenesis associated with short-term memory defects in NF-kappaB p50-deficient mice.</a> J. Neurosci. 28, 3911-3919 (2008).</li><li>Bracchi-Ricard, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astroglial+nuclear+factor-kappaB+regulates+learning+and+memory+and+synaptic+plasticity+in+female+mice.">Astroglial nuclear factor-kappaB regulates learning and memory and synaptic plasticity in female mice.</a> J, Neurochem. 104, 611-623 (2008).</li><li>Koo, J. W., Russo, S. J., Ferguson, D., Nestler, E. J., Duman, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+factor-kappaB+is+a+critical+mediator+of+stress-impaired+neurogenesis+and+depressive+behavior.">Nuclear factor-kappaB is a critical mediator of stress-impaired neurogenesis and depressive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 2669-2674 (2010).</li><li>Fridmacher, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain-specific+neuronal+inhibition+of+nuclear+factor-kappaB+activity+leads+to+loss+of+neuroprotection.">Forebrain-specific neuronal inhibition of nuclear factor-kappaB activity leads to loss of neuroprotection.</a> J. Neurosci. 23, 9403-9408 (2003).</li><li>Whiteside, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-terminal+sequences+control+degradation+of+MAD3/I+kappa+B+alpha+in+response+to+inducers+of+NF-kappa.">C-terminal sequences control degradation of MAD3/I kappa B alpha in response to inducers of NF-kappa.</a> B activity. Mol. Cell. Biol. 15, 5339-5345 (1995).</li><li>Mayford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+memory+formation+through+regulated+expression+of+a+CaMKII+transgene.">Control of memory formation through regulated expression of a CaMKII transgene.</a> Science. 274, 1678-1683 (1996).</li><li>Rosenfeld, M. E., Prichard, L., Shiojiri, N., Fausto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+hepatic+apoptosis+and+embryonic+lethality+in+RelA/TNFR-1+double+knockout+mice.">Prevention of hepatic apoptosis and embryonic lethality in RelA/TNFR-1 double knockout mice.</a> Am. J. Pathol. 156, 997-1007 (2000).</li><li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat.">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J Neurosci. Methods. 11, 47-60 (1984).</li><li>Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+deficits+associated+with+senescence:+a+neurophysiological+and+behavioral+study+in+the+rat.">Memory deficits associated with senescence: a neurophysiological and behavioral study in the rat.</a> J. Compar. Physiol. Psychol. 93, 74-104 (1979).</li><li>Brun, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Place+cells+and+place+recognition+maintained+by+direct+entorhinal-hippocampal+circuitry.">Place cells and place recognition maintained by direct entorhinal-hippocampal circuitry.</a> Science. 296, 2243-2246 (2002).</li><li>Meshi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+neurogenesis+is+not+required+for+behavioral+effects+of+environmental+enrichment.">Hippocampal neurogenesis is not required for behavioral effects of environmental enrichment.</a> Nat. Neurosci. 9, 729-731 (2006).</li><li>Bakker, A., Kirwan, C. B., Miller, M., Stark, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+separation+in+the+human+hippocampal+CA3+and+dentate+gyrus.">Pattern separation in the human hippocampal CA3 and dentate gyrus.</a> Science. 319, 1640-1642 (2008).</li><li>Dupret, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+relational+memory+requires+hippocampal+adult+neurogenesis.">Spatial relational memory requires hippocampal adult neurogenesis.</a> PLoS One. 3, (2008).</li><li>Leutgeb, J. K., Leutgeb, S., Moser, M. B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pattern separation in the dentate gyrus and CA3 of the hippocampus. Science. 315. , 961-966 (2007).</li><li>Kaltschmidt, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB+regulates+spatial+memory+formation+and+synaptic+plasticity+through+protein+kinase+A/CREB+signaling.">NF-kappaB regulates spatial memory formation and synaptic plasticity through protein kinase A/CREB signaling.</a> Mol. Cell. Biol. 26, 2936-2946 (2006).</li><li>Clelland, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+role+for+adult+hippocampal+neurogenesis+in+spatial+pattern+separation.">A functional role for adult hippocampal neurogenesis in spatial pattern separation.</a> Science. 325, 210-213 (2009).</li><li>Kempermann, G., Jessberger, S., Steiner, B., Kronenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milestones+of+neuronal+development+in+the+adult+hippocampus.">Milestones of neuronal development in the adult hippocampus.</a> Trends Neurosci. 27, 447-452 (2004).</li></ol>

Взрослый нейрогенез, а также возможность его манипуляции через ингибирование NF-kB в нейронах, и его последующего возобновления через доксициклин, предлагает увлекательные систему для расследования новорожденных нейронов в головном мозге взрослых, а также в нейронной де-и повторного п...

Онтологически, гиппокамп является одним из старейших анатомических структур мозга известных. Он отвечает за различные сложных задач, таких как ключевых функций в регулировании долговременной памяти, пространственной ориентации, а также формирования и консолидации соответствующей памяти. Анатомически, гиппокампа состоит из пирамидальных слоев клеток (слой pyramidale), включая Корню Ammonis (СА1, СА2, СА3 и CA4) регионов и зубчатой ​​извилине (извилина Dentatus), который содержит гранулы клетки и несколько нейронных клеток-предшественников в пределах своей субгранулярной зоне . ЗК проецировать к области СА3 через так называемые моховых волокон (аксонов гранулярных клеток). До конца прошлого века, взрослый мозг млекопитающих не считается статический орган не хватает сотовой пластичность и нейрогенез. Тем не менее, в течение последних двух десятилетий, все большее количество доказательств ясно демонстрирует нейрогенез, происходящие в по крайней мере,две области мозга, субвентрикулярной зоне (СВЗ) и зернистым зона гиппокампа. Наши предыдущие исследования, и других групп, показали, что транскрипционный фактор NF-kB является одним из важнейших регуляторов молекулярной взрослого нейрогенеза, и что его результаты де-регулирования в тяжелых структурных гиппокампа дефектов и когнитивных нарушений 1-6. NF-kB является общее название индуцибельного фактора транскрипции состоит из различных димерных комбинаций пяти ДНК-связывающих субъединиц: p50, p52, с-Rel, RelB и p65 (RelA), последние три из которых имеют трансактивацию домены. В мозге, наиболее распространенная форма находится в цитоплазме является гетеродимером р50 и р65, которая хранится в неактивной форме на ингибитора каппа В (IκB)-белков. Для изучения и непосредственно управлять NF-kB-приводом нейрогенез, мы используем трансгенных модели мыши для того, чтобы простой ингибирование все subun NF-kBего, в частности, в переднем мозге 7 (см. рисунок 1). Для этой цели, мы пересекаем воспитанный следующие трансгенных линий мышей, IκB / - и -/tTA. Трансгенное IκB / - линия была сгенерирована с использованием транс-доминирующее негативное мутант NF-kB-ингибитора IκBa (супер-репрессор IκBa-AA1) 8. В отличие от дикого типа IκBα, IκBα-AA1 имеет два серина мутировал в аланинов (V32 и V36), которые препятствуют фосфорилирования и последующей протеасомной деградации ингибитора. Для переднего мозга нейрон-специфической экспрессии в IκBa-AA1-трансгена, IκB / - мышей скрещены с мышей укрывательство кальций-кальмодулин-зависимой киназы IIα (CAMKIIα)-промотор, который может управляться тетрациклина транс-активатора (TTA) 9. p65 нокаут-мыши имеют эмбриональную смертельную фенотип, в связи с массовым апоптоза печени 10, поэтому подход показано здесь обеспечивает элегантный методдля исследования роли NF-kB в послеродовом и взрослого нейрогенеза. Классический поведенческий тест изучать пространственное обучение и память была описана в 1980 году Richard Morris, испытании, известном как вода-лабиринте Морриса (MWM) 11. В этом открытом поле водяной лабиринт, животные узнать вырваться из непрозрачного воды на скрытой платформе, основанной на ориентации и экстра-лабиринт киев. Сухой вариант MWM является так называемый Barnes лабиринт (BM) 12. Этот тест использует круглую пластину с 20 круглых отверстий, расположенных на границе пластины, с одной определенной отверстие как бегство окне, и визуальные подсказки экстра-лабиринт для ориентации. Обе экспериментальные парадигмы полагаться на поведение полета индуцированного отвращения грызунов `ы к воде, или открытых, ярко освещенных пространств. Оба теста позволяют расследование пространственной ориентации, и связанное с этим производительность памяти. Хотя гиппокамп играет общее и существенную роль в формировании пространственной памяти, гиппокампа гegions участвующие отличаться в зависимости от теста применяется. Память испытания в BM возникает из нейронной активности между enthorinal коры (ЕС) и пирамидальных нейронов, расположенных в СА1-области гиппокампа без вклада DG 13-16. В частности, классический BM главным образом зависит от возможности навигации с помощью моносинаптического височно-аммиачной пути от EC III в СА1 к ЕС V. Важно отметить, что DG является решающим, участвующих в так называемой пространственной распознавания образов 17, что подразумевает не только обработку визуальное и пространственное информация, но и превращение подобных представлений или воспоминаний в разнородных, непересекающихся представлений. Эта задача требует функциональный три-синаптическую цепь от ЕС II к ГД в СА3 к СА1 и ЕС VI, которые не могут быть проверены в BM 15. Для решения этих задач, мы разработали SPS-BM в качестве теста поведенческой специально проверить зубчатой ​​извилине зависит от познавательное представление в сотрудничествеуправляете животные, а в IκB / TTA супер-репрессора модели следующем NF-kB торможения. Важно отметить, что в отличие от MWM или BM, СПС-БМ может выявить тонкие поведенческие дефициты в результате обесценения нейрогенеза. С пространственно-шаблон-разделение строго зависит от функциональной цепи между ЕС II и ГД и СА3 и СА1 и ЕС VI, этот тест очень чувствителен к возможным изменениям в нейрогенеза, модификаций моховой волокна пути или изменение тканевого гомеостаза в пределах DG. Технически, установка нашего теста основан на исследовании Clelland и соавт., В котором пространственная структура разделения был протестирован с помощью деревянного 8-руки радиально лабиринт (RAM) 19. В нашем модифицированной установки, восемь руки были заменены семь одинаковых желтых пищевых домов. Таким образом, методы показано здесь, в том числе анализ doublecortin-выражения (DCX +) клеток в гиппокампе, прогнозы моховой волокно, нервных клеток деATH и, в частности СПС-БМ, представленные здесь, могут быть применены к исследованию других мышиных моделях, включающих трансгены, которые оказывают влияние на взрослого нейрогенеза. Дальнейшие приложения могут включать в себя изучение фармакологических средств и оценке их влияния на ГД и пространственного разделения образов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Moria MC17 Perforated Spoon&#160;</td>
			<td style="width:127px;">FST</td>
			<td style="width:132px;">10370-18</td>
			<td style="width:167px;">removal of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dissecting microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi SV8</td>
			<td>removal of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical scissors&#160;</td>
			<td style="width:127px;">FST</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>removal of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical scissors&#160;</td>
			<td style="width:127px;">FST</td>
			<td>14381-43</td>
			<td>removal of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dumont #5 forceps</td>
			<td style="width:127px;">FST</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>removal of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">SuperFrost Slides</td>
			<td>Carl Roth&#160;</td>
			<td align="right">1879</td>
			<td>slides for immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>fixative</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">TissueTek OCT compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td style="width:132px;">1004200018</td>
			<td>embedding of the brains</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:447px;">Normal Goat Serum</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Immunolabs</td>
			<td style="width:132px;">005-000-001</td>
			<td>blocking in IHC</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:447px;">Normal Rabbit Serum</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Immunolabs</td>
			<td style="width:132px;">011-000-001</td>
			<td>blocking in IHC</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;">Normal Donkey Serum</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Immunolabs</td>
			<td style="width:132px;">017-000-001</td>
			<td>blocking in IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-Neurofilament-M antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>2H3</td>
			<td>IHC, Dilution 1:200</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-doublecortin&#160;antibody</td>
			<td>sc-8066</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>IHC, Dilution 1:800</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">anti-GFP antibody</td>
			<td>ab290</td>
			<td>abcam</td>
			<td>IHC, Dilution 1:2000</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">anti-BrdU antibody</td>
			<td>OBT0030G</td>
			<td>Accurate Chemicals</td>
			<td>IHC, Dilution 1:2000&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Fluoro Jade-C</td>
			<td>FJ-C</td>
			<td>HistoChem</td>
			<td>Determination of neuronal cell death</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Betadine</td>
			<td style="width:127px;">&#160;MUNDIPHARMA</td>
			<td>D08AG02&#160;</td>
			<td>disinfectant</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">cryomicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1900</td>
			<td>preparation of brain slices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Heparin sodium salt</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">H3393</td>
			<td>perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">circular plate made from hard-plastic (diameter 120 cm)</td>
			<td style="width:127px;">lab made</td>
			<td style="width:132px;">none</td>
			<td>plate for SPS-BM, diameter 120cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buraton rapid disinfectant&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Sch&#252;lke &#38; Mayr</td>
			<td style="width:132px;">113 911</td>
			<td>disinfectant</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">video-tracking system TSE VideoMot 2 with Software Package VideoMot2</td>
			<td>tse systems</td>
			<td style="width:132px;">302050-SW-KIT</td>
			<td>tracking and analysis of SPS-BM</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Triton X-100&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>permeabilisation/IHC</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:447px;">cryotome</td>
			<td style="width:127px;">Reichert&#160; Jung/Leica</td>
			<td style="width:132px;">Frigomobil 1206</td>
			<td>preparation of 40&#181;m brain slices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Mowiol 4-88</td>
			<td style="width:127px;">Carl Roth&#160;</td>
			<td>Art.-Nr. 0713</td>
			<td>embedding of the slides</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">SYTOX green</td>
			<td style="width:127px;">Invitrogen</td>
			<td>S7020</td>
			<td>Nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Food pellets (Kellog`s Froot Loops)</td>
			<td>Kellog`s</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td>SPS-BM</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:447px;">Prism, Version 3.0</td>
			<td style="width:127px;">Graph Pad Software, San Diego, USA&#160;</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td>Statistical evaluation of SPS-BM</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">Zen 2008 or Zen 2011 Software</td>
			<td style="width:127px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td>Software (Confocal microscope)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:447px;">D.P.X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">317616</td>
			<td>mounting medium for Fluoro Jade C staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for the modulation and analysis of nf-&#954;b-dependent adult neurogenesis

Гиппокамп играет ключевую роль в формировании и консолидации эпизодических воспоминаний, и в пространственной ориентации. Исторически сложилось, что взрослый гиппокамп был просмотрен как очень статического анатомической области мозга млекопитающих. Тем не менее, последние данные показали, что зубчатая извилина гиппокампа является областью огромной пластичности у взрослых, с участием не только модификации существующих нейронных цепей, но и нейрогенез. Эта пластичность регулируется сложных транскрипционных сетей, в которых фактор транскрипции NF-kB играет важную роль. Для изучения и манипулировать нейрогенез, трансгенного модель мыши для переднего мозга конкретных нейронов ингибирования NF-kB деятельности могут быть использованы. В этом исследовании, способы описаны для анализа NF-kB-зависимой нейрогенеза, в том числе его структурных аспектов, нейронов апоптоза и пролиферации предшественников и познавательного значения, whicч была специально установлена ​​с помощью зубчатой ​​извилине (DG)-зависимого теста поведенческой, пространственная модель сепарации-Барнс лабиринт (SPS-БМ). Протокол SPS-БМ может быть просто адаптированы для использования с другими трансгенных животных моделях, предназначенных для оценки влияния определенных генов на взрослого гиппокампа нейрогенеза. Кроме того, SPS-BM могут быть использованы в других экспериментальных условиях, направленных на изучение и манипулирования DG-зависимую обучения, например, с использованием фармакологических агентов.

Скрещивание из IκB / - и TTA трансгенных линий мышей приводит к условной ингибирования NF-kB активности в гиппокампе. Чтобы исследовать экспрессию IκBα-AA1-трансгена в двойной трансгенной мыши (фиг.1А), мозги были изолированы, cryosectioned и окрашивали с использован?...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for the Modulation and Analysis of NF-ÃŽÂºB-dependent Adult Neurogenesis at JoVE.com

Methods for the Modulation and Analysis of NF-ÃƒÅ½Ã‚ÂºB-dependent Adult Neurogenesis

Методы манипуляции и анализа NF-kB-зависимой взрослых гиппокампа нейрогенеза описаны. Подробный протокол представлен на зубчатой ​​извилине зависит от поведения теста (называется пространственной структуры разделения-Barnes лабиринт) для исследования когнитивного тестирования на мышах. Эта техника также должна помочь разрешить исследования в других экспериментальных установок.

Методы модуляции и анализа NF-kB-зависимой нейрогенез

The hippocampus plays a pivotal role in the formation and consolidation of episodic memories, and in spatial orientation. Historically, the adult ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods for the Modulation and Analysis of NF-&#954;B-dependent Adult Neurogenesis

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

Цереброваскулярные Литье взрослых мышь для 3D-визуализации и морфологический анализ

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

Функциональная Допрос взрослых гипоталамуса нейрогенеза с Focal радиологической ингибирования

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

Heat-Induced Antigen Retrieval: An Effective Method to Detect and Identify Progenitor Cell Types during Adult Hippocampal Neurogenesis

Traditional  methods of immunohistochemistry (IHC) following tissue fixation allow visualization  of various cell types. These typically proceed with the ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Ножевое ранение Травма данио рерио взрослых мозге: Метод по расследованию позвоночных мозг нейрогенеза и Регенерация

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

Immunohistochemistry and Multiple Labeling with Antibodies from the Same Host Species to Study Adult Hippocampal Neurogenesis

Иммуногистохимия и множественные Маркировка с антителами из того же вида-хозяина по изучению взрослых гиппокампа нейрогенеза

Adult neurogenesis is a highly regulated, multi-stage process in which new neurons are generated from an activated neural stem cell via increasingly ...

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Оценка первичного нейрогенеза в<em&gt; Xenopus</em&gt; Эмбрионы Использование Иммунологическое

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Анализ Synaptic модуляция<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Фоторецепторы после экспозиции продолжительному воздействию света

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

The Mouse Hindbrain As a Model for Studying Embryonic Neurogenesis

Задний мозг мыши как модель для изучения эмбриональных нейрогенез

The mouse embryo forebrain is the most commonly employed system for studying mammalian neurogenesis during development. However, the highly folded ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Метаболический Анализ Drosophila melanogaster Larval и взрослых мозги

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...

Isolation of Adult Spinal Cord Nuclei for Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

Изоляция взрослых спинной ядра для массивно параллельной сингл ядро РНК последовательности

Probing an individual cell&#39;s gene expression enables the identification of cell type and cell state. Single-cell RNA sequencing has emerged as a ...