Name: contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system in mice
Uploaded: 2014-03-01T15:45:00
Duration: 19 min 32 s
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Einige der hier gezeigten Daten wurden im Labor von Dr. Jacqueline N. Crawley in der US-amerikanischen National Institute of Mental Health erhalten und wir würden sie gerne für die Erlaubnis, die Daten in dem Papier zeigen, danken. Wir danken auch Kazuo Nakanishi für seine Hilfe bei der Entwicklung ImageFZ-Programm für Verhaltensanalyse. Diese Forschung wurde unterstützt von Grant-in-Aid for Scientific Research (B) (21300121), Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Anlagen (Comprehensive Brain Science Network) aus dem Ministerium für Bildung, Wissenschaft, Sport und Kultur Japans Finanzhilfe aus Neuro Japan Center (NIJC) und Zuschüsse von CREST von Japan Science and Technology Agency (JST).

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	<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's wrong with my mouse: behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , (2007).</li><li>Fanselow, M. S., Poulos, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuroscience+of+mammalian+associative+learning.">The neuroscience of mammalian associative learning.</a> Annu. Rev. Psychol. 56, 207-234 (2005).</li><li>LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotion+circuits+in+the+brain.">Emotion circuits in the brain.</a> Annu. Rev. 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Wir bestätigen, dass es keine bekannten Interessenkonflikte mit dieser Publikation verbunden und es wurde keine signifikante finanzielle Unterstützung für diese Arbeit, die ihr Ergebnis beeinflusst haben könnten.

Die inhaltliche und cued Angst Anlage Test ist einer der am häufigsten verwendeten Paradigmen auf Lernen und Gedächtnis zu beurteilen. Dieser Test ist eine Form der Pawlowschen Konditionierung, in der eine Zuordnung zwischen einem Kontext und / oder einem konditionierten Stimulus (Gehör cue) und einem aversiven Reiz (elektrisch Fußschock) gefertigt. Nach noch einer einzigen Paarung der Rahmen / Gehör Cue und Fußschock, Mäuse zeigen langanhaltende Einfrieren wenn sie entweder mit dem Kontext oder Cue konfrontiert. In diesem Test wird die Gefrierverhalten als ein Index der Angst Speicher verwendet. Pharmakologische Untersuchungen und Läsion zeigten, dass die Gedächtnisbildung, Konsolidierung und Retrieval von mehreren Hirnregionen, wie der Amygdala, Hippocampus und präfrontalen Kortex 3,33-35 geregelt. Darüber hinaus haben die Molekulargenetik Studien die Rolle von spezifischen Genen und Molekülen in Lernen und Gedächtnis in diesen Hirnregionen mit gentechnisch veränderten Mäusen 36 beteiligt demonstriert. Daher ist dieser Test Simple und nützlich für die Erkundung der neurobiologischen Grundlagen zugrunde liegende Angst Lernen und Gedächtnis. In diesem Film Artikel, unserem Protokoll haben wir zu Experimentatoren mit detaillierten Informationen zu verstehen und einfach den Test durchführen zu liefern. Gefrierverhalten wurde durch direkte Beobachtung durch menschliche Experimentatoren quantifiziert. Eine gut ausgebildete Experimentator wird erwartet, zuverlässige, stabile Ergebnisse über Beobachtungen zu produzieren. Jedoch beinhaltet dieses Verfahren potentielle Probleme, wie Unterschiede in der Beobachtungsmethode, Beobachter spannt und einfache Quantifizierung Fehler macht es schwierig, direkt vergleichen die Ergebnisse von unabhängigen Experimentatoren und verschiedenen Labors. Eine automatisierte Lichtstrahl-Computer Messsystem wurde verwendet, 26,30-32. Allerdings stellt dieses System auch mögliche Probleme bei der Messung Einfrieren Verhaltensweisen. Da der Sensoranordnung kann dieses System nicht in der Lage sein, kleine Kopfbewegungen, die Typica würde erkennenlly als &quot;aktiv&quot; durch die menschliche Beobachtung erzielt werden. Außerdem Zittern während Einfrieren könnte als frostsicher, weil, wenn ein Tier friert, intermittierende Unterbrechungen in der photobeam sind als Folge der zitternden beobachtet berücksichtigt werden. Als ein alternatives Verfahren, wurden automatisierte Bild-und Video-Analysesysteme entwickelt 17-20,37,38. 37 beschrieben, ein paar Systeme mit Bildanalyse-Software-Programme, die gut Gültigkeit haben und Gäste Einfrieren gut 17,20,37-38 Anagnostaras et al.. Allerdings haben die meisten dieser Systeme und Programme zur Analyse von gewerblichen Lieferanten erhalten werden und sind in der Regel teuer. Wir entwickelten die ImageFZ Software-Programm für die Analyse von Gefrierverhalten, und dieses Programm ist als kostenloser Software-Programm verteilt. ImageFZ erkennt die Maus als ein Körper von Pixeln (a-Teilchen) und unterscheidet, subtile Mausbewegung &quot;Einfrieren&quot; oder &quot;nicht-einfrieren&quot; in Abhängigkeit von der Menge derBereich der überlappenden Bereichen zwischen den Teilchen von jedem Paar von aufeinanderfolgenden Bildern. Wie in den repräsentativen Ergebnisse zeigen, sind Messungen mit dem Programm im Einklang mit ImageFZ oder genauer als mit anderen Methoden erhalten. So misst der ImageFZ Programm automatisch das Verhalten, dass menschliche Beobachter das Einfrieren anhand definierter Kriterien beurteilen. Darüber hinaus berechnet die ImageFZ Programm die Wegstrecke (cm) vor, während und nach dem Fußschock Belichtung erleichtert eine Beurteilung der Schockempfindlichkeit und Analyse der Gefrierverhalten. Methodische Unterschiede bestehen zwischen den Laboratorien. Diese Unterschiede können zu Schwierigkeiten beim Vergleich der Daten zwischen den Labors und in replizieren Ergebnisse in verschiedenen Labors führen. Stabilere und vergleichbare Daten zu erhalten, ist es erforderlich, das Testprotokoll so viel wie möglich zu standardisieren. Das Analysesystem mit ImageFZ führt zur Automatisierung von Testverfahren, die dazu beitragen kanndie Standardisierung der Protokolle über Laboratorien. Mehrere Verhaltensreaktionen muss bei der Analyse der Gefrierverhalten werden. Erstens, wenn die Tiere vor einer furchtbaren Situation, können sie statt der 39 Einfrieren fliehen. Flucht ist einer der Angstreaktionen, und ihr Auftreten wird unterschätzt Angst Speicher führen. Zweitens kann das Einfrieren auf eine allgemeine Aktivität abhängen und das Aktivitätsniveau in Versuchs-und Kontrollmäusen muss untersucht werden. Obwohl zum Beispiel Mäuse, denen der muskarinischen Acetylcholinrezeptor M1 zeigte reduzierte Mengen von Einfrieren im Vergleich zu Wildtyp-Mäusen zeigten verschiedenen Verhaltenstests, dass die Ergebnisse ihrer Hyperaktivität Phänotyp anstelle ihres Gedächtnisses 18 zurückgeführt werden. ImageFZ berechnet den Abstand (cm) von den Probanden gereist. Die Daten sind zu prüfen, ob Unterschiede in den allgemeinen Aktivitätsniveaus zwischen den Fächern gibt. Wenn es einen Unterschied in der Gruppedie zurückgelegte Strecke, eine mögliche Herangehensweise an das Problem ist zu prüfen, der Abstand während der ersten 2 Minuten des Trainings als Basisaktivität gereist und einen Unterdrückungsverhältnis / (Aktivität während der Baseline-Aktivität während + verwenden (Unterdrückungsverhältnis = (Aktivität während der Tests) Testen)) als Sekundärindex der Angst 17,40. Schließlich kann ein Unterschied in der Schmerzempfindlichkeit und induziert Veränderungen in der Reaktivität mit einer elektrischen Fuß-Schock, falls vorhanden, zu Variationen in Gefrierverhalten führen. ImageFZ berechnet auch die zurückgelegte Wegstrecke (cm) im Detail von 2 Sekunden vor einer Belichtung von 2 sec bis 2 sec Fuß-Schock nach der Belichtung (6 Sekunden), die als Index der Fußschock Empfindlichkeit verwendet werden können. Video-Analyse-Systeme wurden entwickelt, um die Gefrierverhalten von Albino, schwarz, Agouti zu messen und zu verdünnen braun Mäusen. ImageFZ verwendet eine schwarze Bodenwanne und schwarze Gitter auf weißen Mäusen zu untersuchen (siehe Abbildung 1B). Die schwarzen Gitter werden von Spezi gemacht<html> Verbündeter verarbeiteten Metalle mit beschichteter schwarzer Farbe und eine elektrische Leitfähigkeit ähnlich der von den unbeschichteten Metallgittern, die typischerweise für schwarze Mäuse verwendet werden. ImageFZ analysiert auch die Gefrierverhalten bei Ratten und andere Nagetiere durch Anpassungen der Programmparameter. In der aktuellen Version von ImageFZ wird das Verhalten der Person mit einer Videokamera von der oberen Wand, um ein Einfrieren zu analysieren aufgezeichnet. ImageFZ könnte auch in einem Set-up, wo die Bilder von der Seite der Kammer eingefangen werden. Darüber hinaus steuert die ImageFZ maximal 4 Vorrichtungen. Diese Funktion ermöglicht es dem Forscher, gleichzeitig untersuchen 4 Mäuse, spart Zeit und reduziert die möglichen Einflüsse aus Unterschieden in der Ausführungszeit jedes Thema und die Prüfung, um auf das Verhalten. Somit ImageFZ vereinfacht das Testverfahren und die Analyse von Gefrierverhalten, und dieses Programm erleichtert Tests mit weniger Arbeit und ohne Ausbildung der Verhaltensexperimenten. e_content &quot;&gt; In der Miyakawa Labor haben wir mehr als 110 Stämme von gentechnisch veränderten Mäusen und Wildtyp-Kontroll-Mäusen in der Kontext-und cued Angst Anlage Test mit der Videoanalysesystem, um die Auswirkungen eines bestimmten Gens auf Lernen und Gedächtnis aufzuklären bewertet 41-42 Wir haben eine große Menge von Rohdaten für mehr als 5.000 Mäusen erhalten die Rohdaten, die für veröffentlichte wissenschaftliche Artikel 4-16 verwendet wurde, sind in der &#39;Maus Phänotyp Datenbank&#39; als einer öffentlichen Datenbank (URL enthalten:.. http: / / www.mouse-phenotype.org/). Die vorliegende Film Artikel enthält detaillierte Informationen über die Details unserer experimentellen Verfahren und fördert das Verständnis für die Testsituation.

Die inhaltliche und cued Angst Anlage Test ist der Verhaltens-Paradigma verwendet, um Angst assoziativen Lernen und Gedächtnis bei Nagetieren 1-3 beurteilen. Dieser Test wurde in großem Umfang verwendet, um die neurobiologischen Mechanismen der Angst Lernen und Gedächtnis in transgenen und Knockout-Mäusen 1,4-16 verstehen. Einfrieren Verhalten, das als völligen Unbeweglichkeit mit Ausnahme der Atem definiert ist, ist eine gemeinsame Reaktion auf Situationen ängstlich. In diesem Verhaltensparadigma, nachdem die Tiere werden zu einer Paarung eines Gehör Cue mit einem elektrischen Fuß-Schock ausgesetzt wird, um die Angst erzeugenden Stimulus reagieren sie durch Anzeigen Gefrierverhalten, das als ein Index der assoziativen Lernen und Gedächtnis Angst gemessen wird. Dieser Test erfordert weniger aufwendige Ausrüstung, weniger körperliche Anstrengung durch den Prüfer, und viel weniger Trainingszeit für Mäuse als andere Lern-und Gedächtnisaufgaben, es erfordert in der Regel ca. 5-10 min / Tag pro Maus für 2 Tage. Obwohl das Testverfahren ist simple und erfordert wenig Zeit, um durchzuführen, muss der Prüfer sorgfältig beobachten und messen Mausverhalten, daher mehrere automatisierte Messsysteme wurden entwickelt, um die Verhaltensanalyse von 17 bis 20 durchzuführen. Unsere Video-Analyse-System, das wir mit dem Software-Programm entwickelt ImageFZ, ermöglicht es uns, einfach analysieren Gefrierverhalten und produzieren sehr zuverlässige Ergebnisse. Dieser Artikel enthält detaillierte Informationen zu unseren Testverfahren und beschreibt, wie die ImageFZ Software-Programm verwenden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="701">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#160;ImageFZ&#160; program</td>
			<td>Developed by Tsuyoshi Miyakawa</td>
			<td></td>
			<td>&#160;This program is available through O&#39;Hara &#38; Co., Tokyo, Japan and for free download at http://www.mouse-phenotype.org/. This software runs on 32-bit Windows XP/Vista/7.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioning chamber</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>CL-3002L</td>
			<td>For mouse.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cued test chamber</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>CLT-3002L</td>
			<td>For mouse.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interface</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>CL-1040</td>
			<td>The interface includes a white noise/tone generator, which can be controlled by ImageFZ program.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scrambled shock generator</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>SGA-2040</td>
			<td>The shock generator can be controlled by ImageFZ program.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shock grid tester (ammeter)</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>SG-T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB video capture device</td>
			<td>XLR8</td>
			<td>USB2IVOSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quad image splitter</td>
			<td>Wireless Tsukamoto Co., Ltd., Japan</td>
			<td>400AS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soundproof room</td>
			<td>O&#39;Hara &#38; co., Japan</td>
			<td>CL-4210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze Monitor</td>
			<td>San Diego Instruments, Inc., CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>16 x 16 photbeam array&#160; ( 2.5 cm spacing)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system in mice

Die inhaltliche und cued Angst Testanlage ist eine der Verhaltenstests, die die Fähigkeit der Mäuse zu lernen und zu erinnern, einen Zusammenhang zwischen Umweltreize und aversiven Erfahrungen beurteilt. In diesem Test werden Mäuse in einer Klimakammer angeordnet und Schnitzel eines konditionierten Stimulus (ein Gehör cue) und einen aversiven unkonditionierten Stimulus (ein elektrischer Fußschock) gegeben. Nach einer Verzögerungszeit werden die Mäuse auf die gleiche Behandlungskammer und einer anders geformten Kammer mit Darstellung des Gehör Cue ausgesetzt. Einfrieren Verhalten während der Prüfung wird als Index der Angst Speicher gemessen. Um das Verhalten automatisch zu analysieren, haben wir ein Video-Analysesystem mit der Anwendungssoftware ImageFZ, das als kostenloser Download unter http://www.mouse-phenotype.org/ verfügbar ist entwickelt. Hier, um die Details unseres Protokolls zeigen, demonstrieren wir unsere Verfahren für die inhaltliche und cued Angst Anlage Test in C57BL/6J-Mäusen mit der ImageFZ system. Zusätzlich validiert wir unser Protokoll und das Videoanalysesystem durch Vergleichen der Gefrierzeit ImageFZ System oder ein Lichtstrahl-Computer-Messsystem mit dem von einem menschlichen Betrachter hat gemessen. Wie in unserer repräsentative Ergebnisse gezeigt, waren die erhaltenen Daten durch ImageFZ ähnlich denen von einem menschlichen Betrachter untersucht, was anzeigt, dass die Verhaltensanalyse unter Verwendung des ImageFZ System ist sehr zuverlässig. Die vorliegende Film Artikel enthält detaillierte Informationen zu den Testverfahren und das Verständnis der experimentellen Situation zu fördern.

In der Furcht Anlage Test verwendet menschlichen Experimentatoren, um die Gefrierverhalten durch arbeitsintensive direkte Beobachtung 26-29 quantifizieren, aber vor kurzem photobeam-Computer Messung (z. B. die &quot;Freeze-Monitor&quot;-System) und Bildanalysesysteme zur automatischen worden messen die Gefrierverhalten 26,30-32. ImageFZ ist ein automatisiertes Bildanalysesystem, die Ergebnisse vergleichbar mit denen durch menschliche Beobachtung erhaltenen erzeugt, wie unten beschrieben. Hier verglichen wir die Ergebnisse der menschlichen Beobachtung mit denen ImageFZ Analyse unter variierenden Parameter: &#39;Rate (Bilder / s) &quot;und&quot; Einfrieren Kriterium (Pixel). &quot; In diesem Experiment fünf männliche C57BL/6J Mäusen (Mittelwert ± SD Körpergewicht (g), 31,4 ± 3,55, Durchschnittskörpergröße ± SD (Pixel), 351,6 ± 62,2) wurden bei 15 bis 27 Wochen alt verwendet. Die menschliche Beobachtung wurde mit einer ereignisAufnahmeProgramm (a Macintosh OS9-Software-Programm) gemacht, ein Schlüssel-Ereignis, das weiter drückend 2 s oder mehr, wenn eine Maus angezeigt einen Anfall von keiner Bewegung wurde als &quot;Einfrieren&quot;. Der Anteil der Gefrierpunkt wurde alle 60 Sekunden in jedem Test berechnet und verwendet für Korrelationsanalysen. Der Prozentsatz des Einfrierens der Beobachter 2 hat (Interobserver Zuverlässigkeit, zum Konditionieren, r = 0,879; kontext Test r = 0,957; für cued Test, r = 0,866, für alle Fälle, r = 0,888) wurden gemittelt, um einen Menschen zu erzeugen, punkten. Korrelationen zwischen den Gefrierpunkt Prozent durch ImageFZ mit jedem Bildrate (dh 1, 2, und 4 fps) gemessen und die durch menschliche Beobachtungen erhalten wurden untersucht. Wie in Fig. 4 dargestellt ist, wurden die Prozentsätze durch Einfrieren ImageFZ (1, 2, und 4 fps) berechnet stark mit dem Mittelwert aus den Messungen der Beobachter 2 erhalten korreliert. Bemerkenswert ist, die Aufnahme von Bildern mit einer höheren Framerate nicht immer die beste Korrelation zu produzieren. Bildanalyse bei 1 fps erzeugt ähnliche Ergebnisse wie die von menschlichen Beobachtern in E erhaltenach Test. Korrelationen zwischen den Gefrierpunkt Prozent durch menschliche Beobachtungen gemessen und mit ImageFZ unter jeder Bedingung der &quot;Einfrieren Kriterium (Pixel)&quot; (dh 20, 30 und 40 Pixel) untersucht. Die Gefrierprozente berechnet ImageFZ zu den &quot;Null Kriterium (Pixel)&quot; 20, 30 und 40 Pixel wurden in allen Fällen hoch mit denen durch menschliche Beobachtung erhalten (Fig. 5) korreliert. Wie in 5D, wenn das Einfrieren Kriterium auf einen niedrigen Wert, der subtilen Bewegung der Maus, werden als &quot;Einfrieren&quot; von menschlichen Betrachtern eingestellt angezeigt wird, würde als &quot;Nicht-Einfrieren&quot; mit ImageFZ werden. Umgekehrt, wenn das Kriterium auf einen hohen Wert gesetzt ist, die Bewegung der Maus, hat als &quot;nicht Einfrieren &#39;von menschlichen Beobachtern, würde als&quot; Einfrieren &quot;mit ImageFZ (5C, 5F und 5I). So, um verlässliche Ergebnisse zu erhalten, die einzelnen Parameter der ImageFZ Programm sollte uns kalibriert werdenten die durch menschliche Beobachtungen in jeder Testumgebung hat Daten. Außerdem verglichen wir die Ergebnisse durch einen menschlichen Beobachter erzeugt, mit einem photobeam-Computer-Messsystem (Freeze-Monitor-System), mit denen unter Verwendung ImageFZ erhalten (siehe Abbildung 6). Der menschliche Beobachter zu der Behandlungsgruppe und die Ergebnisse der Bewertungs ImageFZ geblendet. Für die Parametereinstellungen der Freeze-Monitor-System, haben wir drei Maßnahmen des Prozentsatzes des Einfrierens von einem zuvor validierten System 30. Kurz gesagt, die Anzahl von 10-Sekunden-Intervallen, in denen die Tiere benötigt mehr als 1 oder 2 Sekunden, um die erste neue Strahl des Intervalls (1s und 2s 10s 10s bezeichnet) und der Latenzzeit zwischen dem Beginn eines jeden Intervalls 5 Sekunden überschreiten und die dritte neue Strahlunterbrechung innerhalb dieses Intervalls (Latency3) gemessen. Die Prozentsätze der Intervalle, während der die Maus Einfrieren oder der Prozentsatz der Gesamtzeit required brechen die dritte photobeam berechnet. Die Prozentsätze des Einfrierens in jedem System gemessen sind in Fig. 6 dargestellt. Die Gruppen wurden unter Verwendung von Zweiweg-ANOVA mit wiederholten Messungen, gefolgt von t-Tests (siehe Tabelle 1) verglichen. Die Gefrierprozente gemessen mit ImageFZ (6B) waren ähnlich denen durch menschliche Beobachtung (6A) hat als die Verwendung eines Lichtstrahlbasiertes System (Fig. 6C-D) erhaltenen Daten. Die Prozentsätze Gefrierpunkt gemessen mit der ImageFZ Programm in jedem Test waren hoch mit den durch die menschliche Beobachtung hat korreliert (Anlage, r = 0,947; Kontext Test, r = 0,970; cued Test, r = 0.934), während die Korrelationen zwischen den Gefrierpunkt gemessen Prozent mit der photobeam-Computer-Messsystem (1sec 10sec, 10sec 2s oder Latency3) und die menschlichen Beobachter waren niedriger (Anlage, r = 0,503, 0,593, 0,761 und; Zusammenhang test, r = 0,772, 0,819, 0,912 und) im Vergleich zu den Korrelationen zwischen den Gefrierpunkt Prozentsätze gemessen mit ImageFZ und Menschenbeobachtung (7A und 7B). Zusätzlich Fig. 7 zeigt, dass die Unterschiede zwischen den Gefrierpunkt Prozent durch menschliche Beobachtung gewonnen und mit ImageFZ in jeder Maus wurden die geringsten Unterschiede. Diese Ergebnisse zeigten, dass die Gefrierprozente gemessen mit ImageFZ bei der Messung der Menge an Gefrier waren ähnlich wie jene, die durch menschliche Beobachtung und dass ImageFZ erhalten ist sehr genau. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50871/50871fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig1.jpg" /> Fig. 1 ist. Die Apparate für die inhaltliche und cued Angst Anlage Test. (A) Eine Acryl quadratischen Raum für die Konditionierung und Kontext-Test, ( <strong&gt; B) Metallgitter auf einem weißen Kunststoff-Boden für Schwarz, Agouti, oder verdünnte braune Mäuse (oben) und elektrifizierbaren schwarzen Metallgitter auf einem schwarzen Kunststoffboden für weiße Mäuse (unten); vergrößerte Bilder der Gitter in die richtige gezeigt Platte, (C) ein weißes Rauschen / Tongenerator und eine Schockgenerator, (D) ein schalldichter Raum, und (E) eine Acryldreieckige Kammer mit einem flachen Boden für die cued Test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig1highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Figur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50871/50871fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig2.jpg" /> 2. Schematische Darstellung des Protokolls. (A) Überblick über die inhaltliche und cued Angst Testanlage, (B) Anlage, (C) context Test, und (D) cued Test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig2highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Fig. 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50871/50871fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig3.jpg" /> 3. Bildanalyse durch die ImageFZ Softwareprogramm. Für jedes Paar von aufeinanderfolgenden Bildern, wird die Menge des Bereich (Pixel), durch die sich die Maus bewegt wird, indem ImageFZ berechnet. Wenn dieser Bereich unter einem bestimmten Schwellenwert (z. B. 30 Pixel) wird das Verhalten beurteilt werden &quot;Einfrieren&quot;. Wenn die Menge der Fläche entspricht oder den Schwellenwert überschreitet, wird das Verhalten als &quot;nicht-Einfrieren&quot; werden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig3highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Fig. 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig4highres.jpg" width="500" /> 4. Vergleiche der Gefrierpunkt Prozentsätze von den Bildern an unterschiedlichen Bildraten mit ImageFZ mit denen durch menschliche Beobachtung gemessen berechnet. Die Furchtkonditionierung Tests wurden mit männlichen C57BL/6J Mäusen (n = 5) durchgeführt. Während der Tests erzielte das Einfrieren Verhalten zwei Beobachter. Gleichzeitig wurden Live-Bilder bei 4 fps mit der ImageFZ Programm eingefangen. Die bei 4 fps aufgenommene Dateien wurden nach dem Extrahieren der Frames, um Bilder von 1 fps oder 2 Bilder pro Sekunde erfasst entsprechen verkleinert. Die Parameterwerte der &#39;Rate (Bilder / s) &quot;wurden auf 1, 2 oder 4 fps, und das Einfrieren Prozentangaben jeweils 60-sec bin wurden von Bilddateien mit ImageFZ Offline-Analyse berechnet. Jeder Punkt steht für einen Gefrierpunkt Prozentsatz von jedem 60-sec bin. Pearson-Korrelationskoeffizienten zwischen den von der menschlichen Beobachtung und ImageFZ Analyse erhaltenen Daten wurden berechnet.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig4highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Figur 5" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig5highres.jpg" width="500" /> 5. Die Gefrierprozente aus den Bildern bei unterschiedlichen Gefrierkriteriumswerte mit ImageFZ und die durch menschliche Beobachtungen gemessen wurde, berechnet wurden, verglichen. Die Angstkonditionierung Prüfungen wurden männliche C57BL/6J Mäuse (n = 5) durchgeführt. Während der Tests aufgezeichnet zwei Beobachter die Gefrierverhalten und die Live-Bilder wurden mit dem Programm ImageFZ gefangen genommen. Die Gefrierprozentangaben jeweils 60 Sekunden bin aus den Bilder (1 Bild / s) durch ImageFZ Offline-Analyse berechnet werden, die Einstellung der Parameterwerte &quot;Einfrieren Kriterium (Pixel)&quot; auf 20, 30 oder 40 Pixel. Jeder Punkt steht für einen Gefrierpunkt Prozentsatz von jedem 60-sec bin. Pearson-KorrelationskoeffizientenKoeffizienten zwischen den aus menschlichen Beobachtung und Analyse der ImageFZ erhaltenen Daten wurden in jedem Test berechnet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig5highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Fig. 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50871/50871fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig6.jpg" /> 6. Die Prozentsätze des Gefrierens wurden unter Verwendung automatisierter Systeme und menschliche Beobachtung unkonditionierten und konditionierten in Gruppen von männlichen C57BL/6J Mäuse (n = 5 pro Gruppe) gemessen. (A) Menschenbeobachtung, (B) ImageFZ, (C) Gefrier Monitor-System 1 (1sec 10sec), (D) Gefrier Monitor-System 2 (2 Sek. 10 Sek.) und (E) Gefrier-Monitor-System 3 (Latency3). Gruppenvergleiche wurden mit Zwei-Wege-ANOVA mit wiederholten Messungen, gefolgt von t-Tests (unkooperativnditioned-Gruppe vs Gruppe Anlage, *, P &lt;0,05; †, p &lt;0,01). Die Verwendung ImageFZ waren ähnlich wie die durch menschliche Beobachtung gewonnenen Daten erzielt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig6highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <img alt="Fig. 7" fo:content-width="4.3in" src="/files/ftp_upload/50871/50871fig7highres.jpg" width="420" /> Abbildung 7. Korrelation und Häufigkeitsverteilung der Unterschiede zwischen den Gefrierpunkt Prozentsätze, gemessen mit automatisierten Systemen und Menschenbeobachtung. (AB) Streudiagramme und Pearson-Korrelationskoeffizienten zwischen Einfrieren Prozent durch automatisierte Systeme und menschliche Beobachtung hat gezeigt. Die Prozentsätze Einfrieren, berechnet mit ImageFZ wurden hoch mit denen durch menschliche Beobachtung erhalten korreliert. (CF) Vorkommen von weniger als 10% verrenz zwischen den Gefrierpunkt Prozentsätze von automatisierten Systemen gegen menschliche Beobachtung erhalten wurden, waren am höchsten, wenn die Daten mit Hilfe ImageFZ wurden mit denen durch menschliche Beobachtung analysiert Vergleich analysiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50871/50871fig7highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> ANOVAs </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> Zustand </td><td> Zeit </td><td> Zustand x Zeit </td></tr><tr><td> Tag 1 (Konditionierung) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mensch </td><td> F (1,8) = 28.53, p = 0,0007 </td><td> F (7,56) = 20.79, p &lt;0,0001 </td><td> F (7,56) = 16.58, p &lt;0.0001 </td></tr><tr><td> ImageFZ </td><td> F (1,8) = 13,97, p = 0,0057 </td><td> F (7,56) = 21.40, p &lt;0,0001 </td><td> F (7,56) = 11.69, p &lt;0,0001 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (1sec10sec) </td><td> F (1,8) = 5,16, p = 0,0528 </td><td> F (7,56) = 2,39, p = 0,0329 </td><td> F (7,56) = 0,72, p = 0,6572 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (2sec10sec) </td><td> F (1,8) = 4,07, p = 0,0782 </td><td> F (7,56) = 3,44, p = 0,0039 </td><td> F (7,56) = 1,52, p = 0,1803 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (Latency3) </td><td> F (1,8) = 4,44, p = 0,0682 </td><td> F (7,56) = 9,94, p &lt;0,0001 </td><td> F (7,56) = 4,33, p = 0,0007 </td></tr><tr><td> Tag 2 (Kontext) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mensch </td><td> F (1,8) = 42.94, p = 0,0002 </td><td> F (4,32) = 1,91, p = 0,1336 </td><td> F (4,32) = 1,48, p = 0,2302 </td></tr><tr><td> ImageFZ </td><td> F (1,8) = 49,61, p = 0,0001 </td><td> F (4,32) = 2,06, p = 0,1087 </td><td> F (4,32) = 0,83, p = 0,5174 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (1sec10sec) </td><td> F (1,8) = 20,28, p = 0,002 </td><td> F (4,32) = 1,63, p = 0,1918 </td><td> F (4,32) = 0,55, p = 0,6997 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (2sec10sec) </td><td>F (1,8) = 40.20, p = 0,0002 </td><td> F (4,32) = 2,66, p = 0,0504 </td><td> F (4,32) = 1,20, p = 0,3306 </td></tr><tr><td> Freeze-Monitor (Latency3) </td><td> F (1,8) = 35.30, p = 0,0003 </td><td> F (4,32) = 2,49, p = 0,0626 </td><td> F (4,32) = 1,09, p = 0,3793 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Vergleiche von Statistiken.

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Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

Dieser Artikel stellt ein Protokoll für eine inhaltliche und cued Angst Anlage Test mit einem Videoanalysesystem, Angst zu Lernen und Gedächtnis bei Mäusen zu beurteilen.

Kontextuelle und Cued Angst Anlage Test mit einer Video-Analyse-System bei Mäusen

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Research

JoVE Journal

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Forschung

Verhalten

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Visual Classical Conditioning in Wood Ants

Visuelle Klassische Konditionierung in Waldameisen

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Fear Incubation Using an Extended Fear-Conditioning Protocol for Rats

Angst-Inkubation mit einem erweiterten Angst-Konditionierungsprotokoll für Ratten

Emotional memory has been primarily studied with fear-conditioning paradigms. Fear conditioning is a form of learning through which individuals learn the ...