Name: single-plant, sterile microcosms for nodulation and growth of the legume plant medicago truncatula with the rhizobial symbiont sinorhizobium meliloti 
Uploaded: 2013-10-01T09:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti at JoVE.

Dette arbeidet ble finansiert av USDA National Institute of Food and Agriculture, Landbruks-og matdepartementet Forskningsinitiativet stipend 2010-65108 - 20582 til KMJ Vi takker Brian K. Washburn for kritisk gjennomgang av manuskriptet.

Utføre trinnene 1, 2, 4 og 6 i en steril laminær strømningshette er anbefalt. En. Utarbeidelse av M. truncatula A17 Frøplanter Merk: M. truncatula A17 frø anvendt i disse studiene er produsert under avkjølte drivhusbetingelser ved ~ 22 ° C, eller i et plantevekst rom opprettholdt ved 22-26 ° C med ~ 150 til 400 mmol / m -2 s -1 lys. <ol><li> Hell frøspiring plater: Bruk 100 mm firkantede plater (15 mm dype) og he...

<ol>
	<li>Galibert, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composite+genome+of+the+legume+symbiont+Sinorhizobium+meliloti.">The composite genome of the legume symbiont Sinorhizobium meliloti.</a> Science. 293, 668-672 (2001).</li><li>Young, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Medicago+genome+provides+insight+into+the+evolution+of+rhizobial+symbioses.">The Medicago genome provides insight into the evolution of rhizobial symbioses.</a> Nature. 480, 520-524 (2011).</li><li>Glazebrook, J., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+techniques+in+Rhizobium+meliloti.">Genetic techniques in Rhizobium meliloti.</a> Methods Enzymol. 204, 398-418 (1991).</li><li>Cheng, X., Wen, J., Tadege, M., Ratet, P., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+genetics+in+medicago+truncatula+using+Tnt1+insertion+mutants.">Reverse genetics in medicago truncatula using Tnt1 insertion mutants.</a> Methods Mol Biol. 678, 179-190 (2011).</li><li>Leigh, J. A., Signer, E. R., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exopolysaccharide-deficient+mutants+of+Rhizobium+meliloti+that+form+ineffective+nodules.">Exopolysaccharide-deficient mutants of Rhizobium meliloti that form ineffective nodules.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 6231-6235 (1985).</li><li>Wong, K. K. Y., Fortin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Petri+Dish+Technique+for+the+Aseptic+Synthesis+of+Ectomycorrhizae.">A Petri Dish Technique for the Aseptic Synthesis of Ectomycorrhizae.</a> Canadian Journal of Botany-Revue Canadienne De Botanique. 67, 1713-1716 (1989).</li><li>Barker, D. G., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Leonard, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Assembly+for+Use+in+the+Testing+of+Cultures+of+Rhizobia.">A Simple Assembly for Use in the Testing of Cultures of Rhizobia.</a> J Bacteriol. 45, 523-527 (1943).</li><li>Trung, B. C., Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+Leonard+jar+assembly+for+screening+of+effective+rhizobium.">Improvement of Leonard jar assembly for screening of effective rhizobium.</a> Soil Sci Plant Nutr. 29, 97-100 (1983).</li><li>Penmetsa, R. V., Cook, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+diverse+developmental+mutants+of+Medicago+truncatula.">Production and characterization of diverse developmental mutants of Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 123, 1387-1398 (2000).</li><li>Garcia, J., Barker, D. G., Journet, E. P., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Vincent, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Manual for the Practical Study of the Root-Nodule Bacteria. , (1970).</li><li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: a laboratory manual. , (1982).</li><li>Pladys, D., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+Development+and+Senescence+of+Effective+and+Plant+Gene-Controlled+Ineffective+Alfalfa+Nodules.">Proteolysis during Development and Senescence of Effective and Plant Gene-Controlled Ineffective Alfalfa Nodules.</a> Plant Physiology. 103, 379-384 (1993).</li><li>Vasse, J., de Billy, F., Truchet, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abortion+of+infection+during+the+Rhizobium+meliloti-alfalfa+symbiotic+interaction+is+accompanied+by+a+hypersensitive+reaction.">Abortion of infection during the Rhizobium meliloti-alfalfa symbiotic interaction is accompanied by a hypersensitive reaction.</a> The Plant J. 4, 555-566 (1993).</li><li>Johnson, L. E. B., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+and+Biochemical+Comparisons+of+Plant+Induced+Ineffective+Nodules.">Histological and Biochemical Comparisons of Plant Induced Ineffective Nodules.</a> Phytopathology. 71, 884 (1981).</li><li>Vance, C. P., Johnson, L. E. B., Hardarson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+Comparisons+of+Plant+and+Rhizobium+Induced+Ineffective+Nodules+in+Alfalfa.">Histological Comparisons of Plant and Rhizobium Induced Ineffective Nodules in Alfalfa.</a> Physiological Plant Pathology. 17, 167 (1980).</li><li>Van de Velde, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+legume+symbiosis.+A+molecular+view+on+nodule+senescence+in+Medicago+truncatula.">Aging in legume symbiosis. A molecular view on nodule senescence in Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 141, 711-720 (2006).</li><li>Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+production+of+the+exopolysaccharide+succinoglycan+enhances+Sinorhizobium+meliloti+1021+symbiosis+with+the+host+plant+Medicago+truncatula.">Increased production of the exopolysaccharide succinoglycan enhances Sinorhizobium meliloti 1021 symbiosis with the host plant Medicago truncatula.</a> J Bacteriol. 194, 4322-4331 (2012).</li><li>Queiroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+genomics+screen+identifies+a+Sinorhizobium+meliloti+1021+sodM-like+gene+strongly+expressed+within+host+plant+nodules.">A comparative genomics screen identifies a Sinorhizobium meliloti 1021 sodM-like gene strongly expressed within host plant nodules.</a> BMC Microbiol. 12, 74 (2012).</li></ol>

Det er flere trinn i protokollen som er kritiske for suksess: 1) Nødvendigheten av å bruke renset, plantecellekultur testet agar kan ikke understrekes nok. Dette er ikke kritisk for alfalfa frøplanter, men det er kritisk for vekst av M. truncatula A17. 2) Det er viktig å spire frøplanter på vertikale agarplater som beskrevet i trinn 1.. Den utbredt teknikk for spirende frøplanter på en invertert horisontal flate i en 15 mm dyp tallerken 7 er ikke anbefales for denne protokollen fordi frøplan...

Samspillet mellom legume vertsplanten Medicago truncatula A17 og rhizobial bakterien Sinorhizobium meliloti 1021 er en av de mest medgjørlig modellsystemer for studier av root nodule utvikling og nitrogen-fixing symbiose. Genomene til både symbiotiske partnere har blitt sekvensert 1,2 og både anlegg og bakterien er mottagelig for genetisk manipulasjon 3,4. Analyse av de fenotyper av både plante-og bakterie mutanter krever evne til å observere stadier av nodul utvikling og for å kvantifisere det symbiotiske produktivitet over tid. Her beskriver vi en fremgangsmåte for observasjon av roten nodul utvikling av M. truncatula cv. Jemalong A17 inokulert med S. meliloti 1021 innenfor enkelte mikrokosmos laget av standard, runde 100 mm diameter, 15 mm dype laboratorie plater (figur 1A). The Shoot er eksponert og vokser gjennom en tann portal i siden av platen (Figures 1B, 1C, og 1E). Røtter er inneholdt i microcosms og holdes sterilt, samtidig som den tillater observasjon gjennom lokket av platen (fig. 1D). Siden shoot er tilgjengelig, er veksten ikke er begrenset, og det kan måles med jevne mellomrom uten at sterilitet av roten. Metoden for å lage hakk-plate microcosms ble opprinnelig utviklet av Leigh, et ​​al. Fem for dyrking av alfalfa planter, men det var ikke allment vedtatt til tross for sine mange fordeler fremfor andre metoder. En variant av denne metoden ble også utviklet for analyse av samspillet mellom planterøttene og mycorrhizae seks. Vi har nå tilpasses og optimaliseres denne metoden for vekst av M. truncatula planter. Fordelene ved denne protokollen over mer vanlig brukte fremgangsmåter er beskrevet nedenfor. Det er flere metoder som er i bred bruk for nodulation studier av M. truncatula inoculert med S. meliloti 7. Den mest brukte metoden for storskala utarbeidelse av nodulated røtter er vekst i aeroponic caissons 7. I denne metoden, blir plantene opphengt over et stort fartøy og røtter blir luftet med en blanding av S. meliloti og næringsstoff løsning 7. Denne metoden er praktisk dersom bare en genotype av S. meliloti er å bli testet. Siden det kreves aerosolisering av høye konsentrasjoner av bakterier, er det en høy sannsynlighet for kryss-forurensning mellom senkekasser inokulert med forskjellige bakteriestammer. En annen metode som ofte brukes til å tilberede store mengder inokulerte planter er vekst i kar eller potter av perlite, vermikulitt, sand eller brent leire som er fylt med næringsløsning og inokulert med S. meliloti 7. Denne metoden krever bruk av åpne kar eller potter, og krever vanning og påfyll av næringsløsningen. En annen ulempe med potter, er at plantenemå fjernes fra denne partikkel matrise for undersøkelse av røttene og knuter. En annen ulempe med denne metoden er at et stort område av inkubator plass kreves da mange forskjellige S. meliloti genotyper som skal sammenlignes, fordi en separat potten må brukes for hver bakterie genotype. Den &quot;Leonard jar&quot; er en variant av denne metode 8,9. En Leonard slagverktøy er sammensatt av to steriliserte fartøy som er stablet den ene oppå den andre og er forbundet med en veke. Growth medium er plassert i den nedre beholderen og trekkes gjennom veken ved kapillærvirkning inn i en vekst matrise av perlitt, vermikulitt, sand og kalsinert leire i den øvre beholder. Frøplante (e) er plassert i vekst matrisen og inokulert med S. meliloti. Denne metoden krever ikke vanning, men undersøkelse av røtter og knuter krever at frøplante bli fjernet fra det partikkelvekst matrisen. Det er flere metoder som tillater enkel undersøkelse av roots. En av disse er den gjennomsiktig plast &quot;vekst pose&quot; 7. En ulempe ved denne metoden er at hyppig vanning er nødvendig siden bare ≤ 10 ml flytende medium som er optimale for vekst M. truncatula i poser 7. Pouch eksperimenter er også vanligvis begrenset til ~ 2 uker 7, på grunn av nedbryting av papiret veken i posen. To andre metoder som ofte brukes er lik vår metode i at plantene er dyrket på agar og røttene er synlige, men disse metodene har også ulemper at vår fremgangsmåte unngår. I disse fremgangsmåter, blir plantene fullstendig inne 24,5 cm x 24,5 cm agarplater forseglet rundt toppen med porøse kirurgisk tape eller dyrket i agar-skrå-rør proppet med bomullsplugger eller plasthylser 7. Begge disse fremgangsmåter tillater enkel undersøkelse av røtter, og kan holdes steril. Imidlertid er de agar skrå-rør vanligvis dyrket med bare 20 ml agarmedium 7 og krever vanning og et næringsstoffapparat.Foruten for langsiktig vekst av planter. Planter dyrket innenfor de 24,5 cm x 24,5 cm agarplate mikrokosmos har nok fuktighet og næringsstoffer for langsiktig vekst, men den økende skyte raskt blir begrenset innenfor den vedlagte plate mikrokosmos og etylen gass kan bygge opp hemme nodulation 7. I prosedyren som er beskrevet her, er det shoot utsatt og vokser fritt utenfor mikrokosmos som inneholder ~ 70 ml av media, slik at langsiktig vekst. Den fremgangsmåte som er beskrevet her, kan være nyttig ikke bare for å studere nodulation av legume planter, men også for studium av roten fenotyper av andre mellomstore anlegg. Forskjellen mellom disse microcosms og en tradisjonell polykarbonat plantevev-kultur glasset er at røtter i platen microcosms beskrevet her vokser på den vertikale overflaten av agar i stedet ned i et horisontalt lag av agar i bunnen av glasset. Dette gjør at roten til å løftes av fra agaroverflaten med minimal dAmage til rothår og minimal vedheft av agar til roten overflaten, noe som forenkler behandlingen av rothår ved mikroskopi.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Agar purified, plant cell culture-tested</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7921</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

single-plant, sterile microcosms for nodulation and growth of the legume plant medicago truncatula with the rhizobial symbiont sinorhizobium meliloti

Rhizobial bakterier danner symbiotiske, nitrogenfikserende knuter på røttene av kompatible verts legume planter. En av de mest velutviklede modellsystem for å studere disse interaksjonene er anlegget Medicago truncatula cv. Jemalong A17 og rhizobial bakterien Sinorhizobium meliloti 1021. Gjentatt avbildning av planterøttene og scoring av symbiotiske fenotyper krever metoder som er ikke-destruktiv til enten planter eller bakterier. Det symbiotiske fenotyper av noen plante-og bakterie mutanter viser seg etter relativt korte perioder av vekst, og ikke krever langsiktig observasjon av verten / symbiont samhandling. Men små forskjeller i symbiotiske effektivitet og nodule senescence fenotyper som ikke er tydelig i de tidlige stadier av nodulation prosessen krever relativt lange vekstperioder før de kan scores. Flere metoder har blitt utviklet for langsiktig vekst og observasjon av dette vert / symbiont pair.Imidlertid er mange av disse metoder krever gjentatt vanning, noe som øker muligheten for kontaminering av andre mikroorganismer. Andre fremgangsmåter krever at en forholdsvis stor plass for vekst av et stort antall planter. Metoden som beskrives her, symbiotiske vekst av M. truncatula / S. meliloti i sterile, single-plante mikrokosmos, har flere fordeler. Planter i disse microcosms har tilstrekkelig fuktighet og næringsstoffer for å sikre at vanning er ikke nødvendig for opp til ni uker, noe som forhindrer kryssforurensning under vanning. Dette gjør fenotyper som skal kvantifiseres som kan være savnet i kortsiktige vekst systemer, for eksempel subtile forsinkelser i nodule utvikling og tidlig nodule senescence. Dessuten er røttene og knuter i microcosm lett sees gjennom platen lokket, slik at opp-forankring av anlegg for observasjon er ikke nødvendig.

Fremstilling og inokulering av disse plate microcosms er relativt enkelt sammenlignet med de fleste andre metoder som er beskrevet i innledningen. Bruk av disse mikrokosmos tillater også langvarig plantevekst (opp til 9 uker) uten vanning eller næringstilskudd, vedlikehold av rot sterilitet, både enkel undersøkelse av røtter og beskyttelse av røtter fra lys, skyter ubegrenset vekst av anlegget, enkel tilgang til shoot for lengdemåling, og fjerning av planter fra microcosms med minimal skade på rothår. F...

Watch this Scientific Journal Video about Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti at JoVE.

Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

Vekst av Medicago truncatula planter i symbiose med nitrogenfikserende bakterier Sinorhizobium meliloti i individuelle, sterile mikrokosmos laget av standard laboratorie plater tillater hyppig undersøkelse av rotsystemer og knuter uten at det går sterilitet. Planter kan opprettholdes i disse vekstkammer i opp til 9 uker.

Single-anlegg, Sterile mikrokosmos for Nodulation og Vekst av legume Plant<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Med Rhizobial Symbiont<em&gt; Sinorhizobium meliloti</em

Rhizobial  bacteria form symbiotic, nitrogen-fixing nodules on the roots of compatible host  legume plants.  One  of the most well-developed model systems ...

Research

JoVE Journal

Environment

Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

Avskrift og Metabolitt Profilering for bedømmelse av tobakk Tree and Poplar som råstoff for bio-basert industri

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Bruk av høy oppløsning Infrarød termografi (HRIT) for studier av iskimdannende og Ice Formering hos planter

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Et nytt program av det elektriske Penetration Graph (EPG) for Anskaffelse og måling av elektriske signaler i barken Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

En folde Thermogradient Table å kontrollere jordtemperaturer for Vurderer Plantevekst og overvåking Jord Prosesser

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

Drift av et 25 KWth kalsium Looping Pilot-anlegg med høye Oksygenkonsentrasjoner i Calciner

Calcium looping (CaL) is a post-combustion CO2 capture technology that is suitable for retrofitting existing power plants. The CaL process uses limestone ...

Procedures of Laboratory Fumigation for Pest Control with Nitric Oxide Gas

Prosedyrer for laboratoriet utgassing til skadedyrbekjempelse med nitrogenoksid gass

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Anlegget infeksjon testen: Spray og såret-mediert Inoculation med anlegget patogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

A Flexible Low Cost Hydroponic System for Assessing Plant Responses to Small Molecules in Sterile Conditions

En fleksibel lavpris Hydroponic System for å vurdere anlegget Svar å små molekyler i Sterile forhold

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for ...

An Optimized Rhizobox Protocol to Visualize Root Growth and Responsiveness to Localized Nutrients

En optimalisert Rhizobox protokollen å visualisere rot vekst og respons på lokaliserte næringsstoffer

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive ...