Name: subretinal transplantation of macs purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina
Uploaded: 2014-02-22T14:00:00
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Wir danken Anand Swaroop für die Bereitstellung von Nrl-GFP-Mäusen, Jochen Haas für technische Unterstützung und Sindy Böhme und Emely Lessmann für die Tierhaltung.	
	Diese Arbeit wurde von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG): FZT 111 - Zentrum für Regenerative Therapien Dresden, dem CRTD Seed Grant Program, dem SFB 655 und dem ProRetina e.V. unterstützt. Stiftung, das DIGS-BB Graduate Program Dresden und die Fundaéo para a Ciéncia e Tecnologia (SFRH/BD/60787/2009)

Ethische Nutzung und Pflege von Tieren Aussage:
Alle Tierversuche wurden in strikter Übereinstimmung mit den Gesetzen der Europäischen Union und der Deutschen (Tierschutzgesetz) durchgeführt und hielten sich an die ARVO-Erklärung zur Verwendung von Tieren in der Augen- und Sehforschung. Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der TU Dresden und der Landesdirektion Dresden genehmigt (Zulassungsnummer: 24D-9168.11-1/2008-33).
1. Vor dem Starten der Zelldi...

<ol>
	<li>Bartsch, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+cells+integrate+into+the+outer+nuclear+layer+and+differentiate+into+mature+photoreceptors+after+subretinal+transplantation+into+adult+mice.">Retinal cells integrate into the outer nuclear layer and differentiate into mature photoreceptors after subretinal transplantation into adult mice.</a> Exp. Eye Res. 86, 691-700 (2008).</li><li>MacLaren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+repair+by+transplantation+of+photoreceptor+precursors.">Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors.</a> Nature. 444, 203-207 (2006).</li><li>Eberle, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+segment+formation+of+transplanted+photoreceptor+precursor+cells.">Outer segment formation of transplanted photoreceptor precursor cells.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+photoreceptor+transplantation+in+models+of+the+childhood+retinopathy+Leber+congenital+amaurosis+using+flow-sorted+Crx-positive+donor+cells.">Cone and rod photoreceptor transplantation in models of the childhood retinopathy Leber congenital amaurosis using flow-sorted Crx-positive donor cells.</a> Hum. Mol. Genet. 19, 4545-4559 (2010).</li><li>Barber, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+the+degenerate+retina+by+photoreceptor+transplantation.">Repair of the degenerate retina by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 354-359 (2013).</li><li>Pearson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+vision+after+transplantation+of+photoreceptors.">Restoration of vision after transplantation of photoreceptors.</a> Nature. , (2012).</li><li>Singh, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+end-stage+retinal+degeneration+and+restoration+of+visual+function+by+photoreceptor+transplantation.">Reversal of end-stage retinal degeneration and restoration of visual function by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, (2013).</li><li>Eberle, D., Schubert, S., Postel, K., Corbeil, D., Ader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+integration+of+transplanted+CD73-positive+photoreceptor+precursors+into+adult+mouse+retina.">Increased integration of transplanted CD73-positive photoreceptor precursors into adult mouse retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 6462-6471 (2011).</li><li>Koso, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD73,+a+novel+cell+surface+antigen+that+characterizes+retinal+photoreceptor+precursor+cells.">CD73, a novel cell surface antigen that characterizes retinal photoreceptor precursor cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 5411-5418 (2009).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+transplantation+of+photoreceptor+precursor+cells+selected+via+cell+surface+antigen+expression.">Effective transplantation of photoreceptor precursor cells selected via cell surface antigen expression.</a> Stem Cells. 29, 1391-1404 (2011).</li><li>Akimoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+GFP+to+newborn+rods+by+Nrl+promoter+and+temporal+expression+profiling+of+flow-sorted+photoreceptors.">Targeting of GFP to newborn rods by Nrl promoter and temporal expression profiling of flow-sorted photoreceptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 3890-3895 (2006).</li><li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organizing+optic-cup+morphogenesis+in+three-dimensional+culture.">Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture.</a> Nature. 472, 51-56 (2011).</li><li>Nakano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+optic+cups+and+storable+stratified+neural+retina+from+human+ESCs.">Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs.</a> Cell Stem Cell. 10, 771-785 (2012).</li><li>Osakada, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+the+generation+of+rod+and+cone+photoreceptors+from+mouse,+monkey+and+human+embryonic+stem+cells.">Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 26, 215-224 (2008).</li><li>Lee, M. Y., Lufkin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+&amp;#34;Three-step+MACS&amp;#34;:+a+novel+strategy+for+isolating+rare+cell+populations+in+the+absence+of+known+cell+surface+markers+from+complex+animal+tissue.">Development of the &amp;#34;Three-step MACS&amp;#34;: a novel strategy for isolating rare cell populations in the absence of known cell surface markers from complex animal tissue.</a> J. Biomol. Tech. 23, 69-77 (2012).</li></ol>

Die subretinale Transplantation von Photorezeptor-Vorläuferzellen stellt ein zuverlässiges Werkzeug dar, um die Integration dieser lichtempfindlichen Zellen in die Wirtsnetzhaut in signifikanten Zahlen1,2zu erreichen. Dies könnte die Etablierung einer Zelltherapie zur Behandlung von netzretinalen degenerativen Erkrankungen in Zukunft ermöglichen6. Die Spenderpopulation von Zellen, die derzeit aus PN 4-Retinas isoliert ist, ist eine Mischung aus verschiedenen Zelltypen, aus der sich nach subretinaler Injektion nur di...

Vision ist einer der wichtigsten Sinne des Menschen. Beeinträchtigung dieses Sinns und Blindheit sind einer der Hauptgründe für Behinderungen in Industrieländern. Die vorherrschende Ursache für Sehbehinderung oder Erblindung ist die Netzhautdegeneration, die durch Photorezeptorzellverlust gekennzeichnet ist, da sie bei Makuladegeneration, Retinitis pigmentosa, Kegelstabdystrophie und anderen Bedingungen beobachtet werden kann. Bis heute ist eine wirksame Therapie zur Wiederherstellung des verlorenen Sehvermögens nicht verfügbar. In den Jahren 2006 und 2008 berichteten zwei verschiedene Labore unabhängig voneinander über eine erfolgreiche Transplantation von Rod-Photorezeptor-Vorläuferzellen in adulte Wildtyp-Mäuse-Retinas1,2. So entsteht die Möglichkeit der Photorezeptor-Vorläuferzelltransplantation auch in eine degenerierte Netzhaut, um degenerierte Photorezeptoren zu ersetzen und das Sehvermögen wiederherzustellen. Tatsächlich wurde in jüngster Zeit gezeigt, dass solche transplantierten Photorezeptor-Vorläuferzellen morphologische Kriterien von reifen Wildtyp-Photorezeptoren entlocken, wie z. B. richtig entwickelte äußere Segmente3, synaptische Klemmen in unmittelbarer Nähe zu endogenen bipolaren Zellen und einem runden Zellkörper in der äußeren Kernschicht2-4, sowie die Fähigkeit, sich funktional in die neuronale Schaltanlage des Wirts zu integrieren5-7. Eines der Hauptprinzipien dieser Strategie ist die Verwendung von postnatalen Tag 4 (PN 4, PN0 ist definiert als Tag der Geburt) junge Mäuse Netzhaut, was zu einer Mischung von verschiedenen Zelltypen für die Transplantation. Vor dem Hintergrund einer zukünftigen therapeutischen Anwendung muss diese Mischung für Photorezeptor-Vorläuferzellen gereinigt werden. CD73 wurde als erster Zelloberflächenmarker speziell für junge Photorezeptoren in der Netzhaut8-10beschrieben. Hier zeigen wir eine Photorezeptor-Vorläuferzellreinigungsmethode auf Basis dieses Zelloberflächenmarkers und unter Verwendung der magnetisch-assoziierten Zellsortierungstechnik (MACS). MACS könnte aufgrund der schnellen Sortierzeiten und der einfacheren Anpassung an GMP-Bedingungen Vorteile gegenüber fluoreszierend aktivierten Zellsortiertechniken haben. Wir könnten eine Anreicherung von 90 % und eine bis zu dreifach höhere Integrationsrate nachweisen, wenn wir die angereicherte Population in den subretinalen Raum in erwachsenen Wild-Retinas transplantieren. So sind MACS-basierte Photorezeptor-Vorläuferzellanreicherung und subretinale Transplantation zuverlässige und vielversprechende Techniken für die Entwicklung einer regenerativen therapeutischen Strategie zur Behandlung der Netzhautdegeneration.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="585">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Papain Dissociation System</td>
			<td style="width:111px;">Worthington&#160; Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:103px;">LK003150</td>
			<td style="width:176px;">supplied DNase I is not used in the method</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">purified rat anti-mouse CD73, clone TY/23</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">550738</td>
			<td style="width:176px;">Stock concentration 0.5mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Goat Anti-Rat IgG MicroBeads</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-048-501</td>
			<td style="width:176px;">Total volume of 2ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">PBS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">10010-015</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">DNase I</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">D5025-150KU</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">HBSS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">14025050</td>
			<td style="width:176px;">Used for dissociation of the retinas</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">Fluka93595</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:195px;">Vidisic</td>
			<td style="width:111px;">Dr. Mann Pharma / Andreae-Noris Zahn AG</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Domitor</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76579</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Ketamin 10%</td>
			<td style="width:111px;">Ratiopharm</td>
			<td style="width:103px;">7538843</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Antisedan</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76590</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:195px;">Phenylephrin 2.5%-Tropicamid 0.5%</td>
			<td style="width:111px;">University clinics Dresden pharmacy</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:103px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:176px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Pre-Separation Filters</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-041-407</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">LS Columns</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-401</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-303</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">QuadroMACS Separator</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-090-976</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">fire polish glass pasteur pipette</td>
			<td style="width:111px;">Brand</td>
			<td style="width:103px;">74777 20</td>
			<td style="width:176px;">The pipette&#8217;s tips need to be fire-polished and autoclaved.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS 15ml tube rack</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-091-052</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Cell count chamber</td>
			<td style="width:111px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:103px;">T728.1</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Sterile 15ml tubes</td>
			<td style="width:111px;">Greiner Bio-one</td>
			<td style="width:103px;">188271</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Leica M651 MSD</td>
			<td style="width:111px;">Leica</td>
			<td style="width:103px;">M651 MSD</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Olympus SZX10</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus SZX10</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">SZX10</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Leica M651 MSD</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus inverted stereo microscope CKX41</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">CKX41</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Cell culture hood Thermo Scientific MSC-Advance</td>
			<td style="width:111px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:103px;">51025411</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">1.5ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">727706400</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">2ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">72695</td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Eppendorf Centrifuge 5702</td>
			<td style="width:111px;">VWR (Eppendorf)</td>
			<td style="width:103px;">521-0733</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Mouse head holder</td>
			<td style="width:111px;">myNeurolab</td>
			<td style="width:103px;">471030</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">BD Microlance 3 30G 1/2&#8221;</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">304000</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton microliter syringe 5&#181;l, 75RN</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-7634-01</td>
			<td style="width:176px;">delivered without needles</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton RN special needle GA34</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-207434</td>
			<td style="width:176px;">Blunt, 12mm length</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors - 5mm Blades Straight</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">15003-08</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Dumont #7 Forceps - Titanium Biologie</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">11272-40</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Diamond pen</td>
			<td style="width:111px;">Tools-tech</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">15x15mm Cover slips</td>
			<td style="width:111px;">Sparks</td>
			<td style="width:103px;">MIC3366</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subretinal transplantation of macs purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina

Sehstörungen und Erblindung durch den Verlust der lichtempfindlichen Zellen der Netzhaut, d.h. Photorezeptoren, stellen den Hauptgrund für behinderungen in Industrieländern dar. Der Ersatz degenerierter Photorezeptoren durch Zelltransplantation stellt eine mögliche Behandlungsoption in zukünftigen klinischen Anwendungen dar. Tatsächlich haben jüngste präklinische Studien gezeigt, dass unreife Photorezeptoren, die am 4. Tag der Neugeborenen mausisoliert wurden, das Potenzial haben, sich nach subretinaler Transplantation in die netzretinale Netzhaut der erwachsenen Maus zu integrieren. Spenderzellen erzeugten eine ausgereifte Photorezeptormorphologie mit inneren und äußeren Segmenten, einem runden Zellkörper an der äußeren Kernschicht und synaptischen Terminals in unmittelbarer Nähe zu endogenen bipolaren Zellen. Tatsächlich haben jüngste Berichte gezeigt, dass Spenderphotorezeptoren sich funktionell in die neuronalen Schaltkreise von Wirtsmäusen integrieren. Für eine zukünftige klinische Anwendung eines solchen Zellersatzansatzes müssen gereinigte Suspensionen der Zellen der Wahl erzeugt und an die richtige Position für eine ordnungsgemäße Integration in das Auge gebracht werden. Für die Anreicherung von Photorezeptor-Vorläufern sollte die Sortierung auf bestimmten Zelloberflächenantigenen basieren, um eine genetische Reporterveränderung von Spenderzellen zu vermeiden. Hier zeigen wir magnetisch-assoziierte Zellsortierung (MACS) - Anreicherung von transplantierbaren Stabphotorezeptor-Vorläufern, die aus der neonatalen Netzhaut von photorezeptorspezifischen Reportermäusen auf Basis des Zelloberflächenmarkers CD73 isoliert sind. Die Inkubation mit Anti-CD73-Antikörpern gefolgt von mikro-bead-konjugierten sekundären Antikörpern ermöglichte die Anreicherung von Rod-Photorezeptor-Vorläufern durch MACS auf ca. 90%. Im Vergleich zur Durchflusszytometrie hat MACS den Vorteil, dass es einfacher auf GMP-Standards angewendet werden kann und dass große Mengen an Zellen in relativ kurzen Zeiträumen sortiert werden können. Die Injektion angereicherter Zellsuspensionen in den subretinalen Raum erwachsener Wildtypmäuse führte zu einer 3-fach höheren Integrationsrate im Vergleich zu unsortierten Zellsuspensionen.

Um die Fähigkeit von Stabphotorezeptoren zur Integration in die Mausnetzhaut zu beurteilen, wurde eine Mausreporterlinie verwendet, in der GFP vom neuronalen Retina-Leucin-Reißverschluss (Nrl, Nrl-GFP) Promotor11angetrieben wird. Nrl ist der früheste Marker von Stabphotorezeptoren, die seine Expression bei E12.5 während des gesamten Erwachsenenalters beginnen, was eine spezifische Kennzeichnung von Spenderstab-Photorezeptorzellen ermöglicht.
PN 4 Nrl-GFP Welpen wurden enthaupte...

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Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Die Zelltransplantation stellt eine Strategie zur Behandlung der Netzhautdegeneration dar, die durch Photorezeptorverlust gekennzeichnet ist. Hier beschreiben wir eine Methode zur Anreicherung von transplantierbaren Photorezeptoren und deren subretinaler Transplantation in erwachsene Mäuse.

Subretinale Transplantation von MACS gereinigten Photorezeptor-Vorläuferzellen in die adulte Maus-Retina

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Einem Mausmodell der In Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Forschung

Medizin

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation von Pulmonalklappe Mit einem Maus-Modell der heterotopen Herztransplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Maus Nierentransplantation: Modelle der Transplantatabstoßung

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation Thermogenic Präadipozyten für die Transplantation in Fettgewebe Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopische Hind Gliedmaßen Transplantation in der Maus

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Eine Schritt für Schritt-Protokoll für Subretinale Chirurgie in Kaninchen

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Transplantation in die Maus Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...