Name: subretinal transplantation of macs purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina
Uploaded: 2014-02-22T14:00:00
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हम एनआरएल-जीएफपी चूहों, तकनीकी सहायता के लिए जोचेन हास, और पशुपालन के लिए सिंडी बोह्मे और एमली लेसमैन प्रदान करने के लिए आनंद स्वरूप का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं।	
	इस काम को ड्यूश फोर्स्चुंग्सगेमिन्सचैफ्ट (डीएफजी) द्वारा समर्थित किया गया था: एफजेडटी 111 - पुनर्योजी चिकित्सा ड्रेसडेन का केंद्र, सीआरटीडी सीड ग्रांट प्रोग्राम, एसएफबी 655, और प्रोरेटीना ई.वी. फाउंडेशन, DIGS-BB ग्रेजुएट प्रोग्राम ड्रेसडेन, और Fundação पैरा एक Ciência ई टेक्नोलोजिया (SFRH/BD/60787/2009)

नैतिक उपयोग और जानवरों के बयान की देखभाल:
सभी पशु प्रयोगों यूरोपीय संघ और जर्मन कानूनों (Tierschutzgesetz) के साथ सख्त अनुसार किया गया और नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में जानवरों के उपयोग के लिए ARVO बयान का पा?...

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	<li>Bartsch, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+cells+integrate+into+the+outer+nuclear+layer+and+differentiate+into+mature+photoreceptors+after+subretinal+transplantation+into+adult+mice.">Retinal cells integrate into the outer nuclear layer and differentiate into mature photoreceptors after subretinal transplantation into adult mice.</a> Exp. Eye Res. 86, 691-700 (2008).</li><li>MacLaren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+repair+by+transplantation+of+photoreceptor+precursors.">Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors.</a> Nature. 444, 203-207 (2006).</li><li>Eberle, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+segment+formation+of+transplanted+photoreceptor+precursor+cells.">Outer segment formation of transplanted photoreceptor precursor cells.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+photoreceptor+transplantation+in+models+of+the+childhood+retinopathy+Leber+congenital+amaurosis+using+flow-sorted+Crx-positive+donor+cells.">Cone and rod photoreceptor transplantation in models of the childhood retinopathy Leber congenital amaurosis using flow-sorted Crx-positive donor cells.</a> Hum. Mol. Genet. 19, 4545-4559 (2010).</li><li>Barber, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+the+degenerate+retina+by+photoreceptor+transplantation.">Repair of the degenerate retina by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 354-359 (2013).</li><li>Pearson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+vision+after+transplantation+of+photoreceptors.">Restoration of vision after transplantation of photoreceptors.</a> Nature. , (2012).</li><li>Singh, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+end-stage+retinal+degeneration+and+restoration+of+visual+function+by+photoreceptor+transplantation.">Reversal of end-stage retinal degeneration and restoration of visual function by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, (2013).</li><li>Eberle, D., Schubert, S., Postel, K., Corbeil, D., Ader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+integration+of+transplanted+CD73-positive+photoreceptor+precursors+into+adult+mouse+retina.">Increased integration of transplanted CD73-positive photoreceptor precursors into adult mouse retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 6462-6471 (2011).</li><li>Koso, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD73,+a+novel+cell+surface+antigen+that+characterizes+retinal+photoreceptor+precursor+cells.">CD73, a novel cell surface antigen that characterizes retinal photoreceptor precursor cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 5411-5418 (2009).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+transplantation+of+photoreceptor+precursor+cells+selected+via+cell+surface+antigen+expression.">Effective transplantation of photoreceptor precursor cells selected via cell surface antigen expression.</a> Stem Cells. 29, 1391-1404 (2011).</li><li>Akimoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+GFP+to+newborn+rods+by+Nrl+promoter+and+temporal+expression+profiling+of+flow-sorted+photoreceptors.">Targeting of GFP to newborn rods by Nrl promoter and temporal expression profiling of flow-sorted photoreceptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 3890-3895 (2006).</li><li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organizing+optic-cup+morphogenesis+in+three-dimensional+culture.">Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture.</a> Nature. 472, 51-56 (2011).</li><li>Nakano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+optic+cups+and+storable+stratified+neural+retina+from+human+ESCs.">Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs.</a> Cell Stem Cell. 10, 771-785 (2012).</li><li>Osakada, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+the+generation+of+rod+and+cone+photoreceptors+from+mouse,+monkey+and+human+embryonic+stem+cells.">Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 26, 215-224 (2008).</li><li>Lee, M. Y., Lufkin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+&amp;#34;Three-step+MACS&amp;#34;:+a+novel+strategy+for+isolating+rare+cell+populations+in+the+absence+of+known+cell+surface+markers+from+complex+animal+tissue.">Development of the &amp;#34;Three-step MACS&amp;#34;: a novel strategy for isolating rare cell populations in the absence of known cell surface markers from complex animal tissue.</a> J. Biomol. Tech. 23, 69-77 (2012).</li></ol>

फोटोरिसेप्टर अग्रदूत कोशिकाओं का सबरेटिनल प्रत्यारोपण महत्वपूर्ण संख्या1,2में मेजबान रेटिना में इन प्रकाश-संवेदनशील कोशिकाओं के एकीकरण को प्राप्त करने के लिए एक विश्वसनीय उपकरण का प्रतिनिधित्व करता ह?...

दृष्टि मनुष्यों की प्रमुख इंद्रियों में से एक है। इस भावना और अंधापन की हानि औद्योगिक देशों में विकलांगता के लिए मुख्य कारणों में से एक हैं । दृष्टि हानि या अंधापन का प्रमुख कारण रेटिना अध: पतन है, जो फोटोरिसेप्टर सेल हानि की विशेषता है, क्योंकि इसे मैकुलर डिजनरेशन, रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा, शंकु-रॉड डिस्ट्रॉफी और अन्य स्थितियों में देखा जा सकता है। आज तक, खोई हुई दृष्टि को बहाल करने के लिए एक प्रभावी चिकित्सा उपलब्ध नहीं है। 2006 और 2008 में दो अलग-अलग प्रयोगशालाओं ने बताया, एक दूसरे से स्वतंत्र, वयस्क जंगली प्रकार के चूहों रेटिनास1,2में रॉड फोटोरिसेप्टर अग्रदूत कोशिकाओं का एक सफल प्रत्यारोपण। इस प्रकार, विकृत फोटोरिसेप्टर को बदलने और दृष्टि बहाल करने के लिए, एक विकृत रेटिना में फोटोरिसेप्टर प्रीकरनेटर सेल प्रत्यारोपण की संभावना उत्पन्न हो रही है। दरअसल, यह हाल ही में प्रदर्शन किया गया है, कि इस तरह के प्रत्यारोपित फोटोरिसेप्टर अग्रदूत कोशिकाओं परिपक्व जंगली प्रकार फोटोरिसेप्टर्स के रूपात्मक मानदंडों, जैसे ठीक से विकसित बाहरीखंडों 3,एंडोजेनस द्विध्रुवी कोशिकाओं के करीब निकटता में सिनैप्टिक टर्मिनलों और बाहरी परमाणु परत2-4में स्थित एक गोल सेल शरीर, साथ ही मेजबान तंत्रिका सर्किटरी5-7में कार्यात्मक रूप से एकीकृत करने की क्षमता प्रकाश में लाना । इस रणनीति के मुख्य सिद्धांतों में से एक प्रसव के बाद के दिन का उपयोग है 4 (पीएन 4, पीएन0 को जन्म दिन के रूप में परिभाषित किया गया है) युवा चूहों रेटिना, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्यारोपण के लिए विभिन्न सेल प्रकारों का मिश्रण होता है। भविष्य के चिकित्सीय अनुप्रयोग की पृष्ठभूमि पर, इस मिश्रण को फोटोरिसेप्टर अग्रदूत कोशिकाओं के लिए शुद्ध किया जाना चाहिए। CD73 रेटिना8-10में युवा फोटोरिसेप्टर्स के लिए विशिष्ट पहले सेल सतह मार्कर के रूप में वर्णित किया गया है । यहां, हम इस सेल सतह मार्कर के आधार पर और चुंबकीय से जुड़े सेल छंटाई (एमएसी) तकनीक के उपयोग के साथ एक फोटोरिसेप्टर सेल शुद्धिकरण विधि प्रदर्शित करते हैं। तेजी से छंटाई के समय और जीएमपी स्थितियों के लिए आसान समायोजन के कारण, एमएसी को फ्लोरोसेंट-सक्रिय सेल छंटाई तकनीकों की तुलना में फायदे हो सकते हैं। हम वयस्क जंगली प्रकार रेटिना में सबरेटिनल अंतरिक्ष में समृद्ध आबादी को प्रत्यारोपित करते समय ~ 90% संवर्धन और 3 गुना उच्च एकीकरण दर प्रदर्शित कर सकते हैं। इस प्रकार, एमएसी-आधारित फोटोरिसेप्टर अग्रदूत सेल संवर्धन और सबरेटिनल प्रत्यारोपण, रेटिना अध: पतन के उपचार के लिए पुनर्योजी चिकित्सीय रणनीति के विकास के लिए विश्वसनीय और आशाजनक तकनीकें हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="585">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Papain Dissociation System</td>
			<td style="width:111px;">Worthington&#160; Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:103px;">LK003150</td>
			<td style="width:176px;">supplied DNase I is not used in the method</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">purified rat anti-mouse CD73, clone TY/23</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">550738</td>
			<td style="width:176px;">Stock concentration 0.5mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Goat Anti-Rat IgG MicroBeads</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-048-501</td>
			<td style="width:176px;">Total volume of 2ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">PBS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">10010-015</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">DNase I</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">D5025-150KU</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">HBSS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">14025050</td>
			<td style="width:176px;">Used for dissociation of the retinas</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">Fluka93595</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:195px;">Vidisic</td>
			<td style="width:111px;">Dr. Mann Pharma / Andreae-Noris Zahn AG</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Domitor</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76579</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Ketamin 10%</td>
			<td style="width:111px;">Ratiopharm</td>
			<td style="width:103px;">7538843</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Antisedan</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76590</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:195px;">Phenylephrin 2.5%-Tropicamid 0.5%</td>
			<td style="width:111px;">University clinics Dresden pharmacy</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:103px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:176px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Pre-Separation Filters</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-041-407</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">LS Columns</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-401</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-303</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">QuadroMACS Separator</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-090-976</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">fire polish glass pasteur pipette</td>
			<td style="width:111px;">Brand</td>
			<td style="width:103px;">74777 20</td>
			<td style="width:176px;">The pipette&#8217;s tips need to be fire-polished and autoclaved.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS 15ml tube rack</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-091-052</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Cell count chamber</td>
			<td style="width:111px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:103px;">T728.1</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Sterile 15ml tubes</td>
			<td style="width:111px;">Greiner Bio-one</td>
			<td style="width:103px;">188271</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Leica M651 MSD</td>
			<td style="width:111px;">Leica</td>
			<td style="width:103px;">M651 MSD</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Olympus SZX10</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus SZX10</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">SZX10</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Leica M651 MSD</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus inverted stereo microscope CKX41</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">CKX41</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Cell culture hood Thermo Scientific MSC-Advance</td>
			<td style="width:111px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:103px;">51025411</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">1.5ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">727706400</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">2ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">72695</td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Eppendorf Centrifuge 5702</td>
			<td style="width:111px;">VWR (Eppendorf)</td>
			<td style="width:103px;">521-0733</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Mouse head holder</td>
			<td style="width:111px;">myNeurolab</td>
			<td style="width:103px;">471030</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">BD Microlance 3 30G 1/2&#8221;</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">304000</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton microliter syringe 5&#181;l, 75RN</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-7634-01</td>
			<td style="width:176px;">delivered without needles</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton RN special needle GA34</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-207434</td>
			<td style="width:176px;">Blunt, 12mm length</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors - 5mm Blades Straight</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">15003-08</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Dumont #7 Forceps - Titanium Biologie</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">11272-40</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Diamond pen</td>
			<td style="width:111px;">Tools-tech</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">15x15mm Cover slips</td>
			<td style="width:111px;">Sparks</td>
			<td style="width:103px;">MIC3366</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
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subretinal transplantation of macs purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina

रेटिना की प्रकाश-संवेदन कोशिकाओं के नुकसान के कारण दृष्टि हानि और अंधापन, यानी फोटोरिसेप्टर्स, औद्योगिक देशों में विकलांगता के मुख्य कारण का प्रतिनिधित्व करता है। सेल प्रत्यारोपण द्वारा विकृत फोटोरिसेप्टर का प्रतिस्थापन भविष्य के नैदानिक अनुप्रयोगों में एक संभावित उपचार विकल्प का प्रतिनिधित्व करता है। दरअसल, हाल ही में प्रीक्लीनिकल अध्ययनों से पता चला है कि प्रसवोत्तर दिन 4 में नवजात माउस रेटिना से अलग अपरिपक्व फोटोरिसेप्टर्स, सबरेटिनल प्रत्यारोपण के बाद वयस्क माउस रेटिना में एकीकृत करने की क्षमता है । दाता कोशिकाओं ने आंतरिक और बाहरी खंडों, बाहरी परमाणु परत पर स्थित एक गोल सेल शरीर, और एंडोजेनस बाइपोलर कोशिकाओं के करीब निकटता में सिनैप्टिक टर्मिनलों सहित एक परिपक्व फोटोरिसेप्टर आकृति विज्ञान उत्पन्न किया। दरअसल, हाल की रिपोर्टों से पता चला है कि दाता फोटोरिसेप्टर कार्यात्मक रूप से मेजबान चूहों के तंत्रिका सर्किटरी में एकीकृत होते हैं। इस तरह के सेल प्रतिस्थापन दृष्टिकोण के भविष्य के नैदानिक आवेदन के लिए, पसंद की कोशिकाओं के शुद्ध निलंबन उत्पन्न किया जाना है और आंख में उचित एकीकरण के लिए सही स्थिति में रखा जाना है। फोटोरिसेप्टर अग्रदूतों के संवर्धन के लिए, दाता कोशिकाओं के आनुवंशिक रिपोर्टर संशोधन से बचने के लिए छंटाई विशिष्ट कोशिका सतह एंटीजन पर आधारित होनी चाहिए। यहां हम चुंबकीय-संबद्ध सेल छंटाई (एमएएक्स) दिखाते हैं - कोशिका सतह मार्कर सीडी 73 के आधार पर फोटोरिसेप्टर-विशिष्ट रिपोर्टर चूहों के नवजात रेटिना से अलग प्रत्यारोपण योग्य रॉड फोटोरिसेप्टर अग्रदूत का संवर्धन। एंटी-सीडी 73 एंटीबॉडी के साथ इनक्यूबेशन माइक्रो-मनका संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के बाद एमएक्स द्वारा रॉड फोटोरिसेप्टर अग्रदूतों के संवर्धन को लगभग 90% तक की अनुमति दी गई। प्रवाह साइटोमेट्री की तुलना में, एमएएक्स को यह लाभ है कि इसे जीएमपी मानकों पर लागू करना आसान हो सकता है और उच्च मात्रा में कोशिकाओं को सापेक्ष कम समय अवधि में हल किया जा सकता है। वयस्क जंगली प्रकार के चूहों के सबरेटिनल अंतरिक्ष में समृद्ध सेल निलंबन के इंजेक्शन के परिणामस्वरूप अनसॉर्टेड सेल निलंबन की तुलना में 3 गुना उच्च एकीकरण दर हुई।

माउस रेटिना में एकीकृत करने के लिए रॉड फोटोरिसेप्टर्स की क्षमता का आकलन करने के लिए, एक माउस रिपोर्टर लाइन का उपयोग किया गया था, जिसमें जीएफपी तंत्रिका रेटिना ल्यूसिन जिपर (एनआरएल, एनआरएल-जीएफपी) प्रमो?...

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Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

सेल प्रत्यारोपण फोटोरिसेप्टर हानि की विशेषता रेटिना अध: पतन के उपचार के लिए एक रणनीति का प्रतिनिधित्व करता है। यहां हम प्रत्यारोपण योग्य फोटोरिसेप्टर्स के संवर्धन और वयस्क चूहों में उनके सबरेटिनल ग्राफ्टिंग के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं।

वयस्क माउस रेटिना में एमएएसएस शुद्ध फोटोरिसेप्टर अग्रदूत कोशिकाओं का उपरेटिनल प्रत्यारोपण

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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