Name: a three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies
Uploaded: 2014-03-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af tilskud fra National Institutes of Health, National Cancer Institute (1R21CA141039), BD Biosciences Research Grant Award, American Cancer Society Institutional Research Grant (IRG # 58-006-53), til Purdue University Center for Cancer forskning, og den canadiske Institutes of Health Research og Alberta Cancer Board forskningsinitiativer Program. MP blev støttet af National Institutes of Health, National Cancer Institute, Cancer Prevention Praktik Program (R25CA128770, PI: D. Teegarden) administreres af Onkologiske Sciences Center og Discovery Learning Research Center ved Purdue University.

1.. Advance Forberedelse <ol><li> Hold sterile serologiske pipetter og pipettespidser ved 4 ° C. Problemløsning: Matrigel geler ved stuetemperatur (RT), ved hjælp af kolde pipetter og tips vil forhindre Matrigel fra geldannende under opsætningen kultur. </li><li> Optø en flaske Matrigel ved 4 ° C natten over. </li></ol> 2. Fremstilling af reagenser <ol><li> Udarbejdelse af fibronectin stamopløsning: Lav en 1 mg / ml stamopløsning af fibronectin ved at opløse 1...

<ol>
	<li>Carrel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Permanent+Life+of+Tissues+Outside+of+the+Organism.">On the Permanent Life of Tissues Outside of the Organism.</a> J. Exp. Med. 15, 516-528 (1912).</li><li>Harrison, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+living+developing+nerve+fiber.">Observations on the living developing nerve fiber.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 4, 140-143 (1907).</li><li>Earle, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+malignancy+in+vitro.+IV.+The+mouse+fibroblast+cultures+and+changes+seen+in+the+living+cells.">Production of malignancy in vitro. IV. The mouse fibroblast cultures and changes seen in the living cells.</a> J. Natl. Cancer Inst. 4, 165-212 (1943).</li><li>Gey, G. O., Coffman, W. D., Kubicek, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Culture+Studies+of+the+Proliferative+Capacity+of+Cervical+Carcinoma+and+Normal+Epithelium.">Tissue Culture Studies of the Proliferative Capacity of Cervical Carcinoma and Normal Epithelium.</a> Cancer Res. 12, 264-265 (1952).</li><li>Barcelloshoff, M. H., Aggeler, J., Ram, T. G., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional-Differentiation+and+Alveolar+Morphogenesis+of+Primary+Mammary+Cultures+on+Reconstituted+Basement-Membrane.">Functional-Differentiation and Alveolar Morphogenesis of Primary Mammary Cultures on Reconstituted Basement-Membrane.</a> Development. 105, 223-227 (1989).</li><li>Lamb, R., Ambler, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+propagated+in+serum-free,+feeder-free+culture+conditions+fail+to+form+stratified+epidermis+in+a+reconstituted+skin+model.">Keratinocytes propagated in serum-free, feeder-free culture conditions fail to form stratified epidermis in a reconstituted skin model.</a> PloS One. 8, (2013).</li><li>Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q. Z., Messadi, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+3-dimensional+culture+system+as+an+in+vitro+model+for+studying+oral+cancer+cell+invasion.">A novel 3-dimensional culture system as an in vitro model for studying oral cancer cell invasion.</a> Int. J. Exp. Pathol. 86, 365-374 (2005).</li><li>Kirshner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+three-dimensional+model+for+evaluating+the+impact+of+therapy+on+multiple+myeloma.">A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma.</a> Blood. 112, 2935-2945 (2008).</li><li>Gudjonsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+tumor-derived+myoepithelial+cells+differ+in+their+ability+to+interact+with+luminal+breast+epithelial+cells+for+polarity+and+basement+membrane+deposition.">Normal and tumor-derived myoepithelial cells differ in their ability to interact with luminal breast epithelial cells for polarity and basement membrane deposition.</a> J. Cell Sci. 115, 39-50 (2002).</li><li>Kirshner, J., Chen, C. J., Liu, P., Huang, J., Shively, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CEACAM1-4S,+a+cell-cell+adhesion+molecule,+mediates+apoptosis+and+reverts+mammary+carcinoma+cells+to+a+normal+morphogenic+phenotype+in+a+3D+culture.">CEACAM1-4S, a cell-cell adhesion molecule, mediates apoptosis and reverts mammary carcinoma cells to a normal morphogenic phenotype in a 3D culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 100, 521-526 (2003).</li><li>Weaver, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversion+of+the+malignant+phenotype+of+human+breast+cells+in+three-dimensional+culture+and+in+vivo+by+integrin+blocking+antibodies.">Reversion of the malignant phenotype of human breast cells in three-dimensional culture and in vivo by integrin blocking antibodies.</a> J. Cell Biol. 137, 231-245 (1997).</li><li>Gunn, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+products+parthenolide+and+andrographolide+exhibit+anti-cancer+stem+cell+activity+in+multiple+myeloma.">The natural products parthenolide and andrographolide exhibit anti-cancer stem cell activity in multiple myeloma.</a> Leukemia Lymphoma. 52, 1085-1097 (2011).</li><li>Hsiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=384+hanging+drop+arrays+give+excellent+Z-factors+and+allow+versatile+formation+of+co-culture+spheroids.">384 hanging drop arrays give excellent Z-factors and allow versatile formation of co-culture spheroids.</a> Biotechnol. Bioeng. 109, 1293-1304 (2012).</li><li>Meads, M. B., Gatenby, R. A., Dalton, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environment-mediated+drug+resistance:+a+major+contributor+to+minimal+residual+disease.">Environment-mediated drug resistance: a major contributor to minimal residual disease.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 665-674 (2009).</li><li>Golde, D. W., Cline, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+Human+Bone-Marrow+in+Liquid+Culture.">Growth of Human Bone-Marrow in Liquid Culture.</a> Blood. 41, 45-57 (1973).</li><li>Gartner, S., Kaplan, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Culture+of+Human-Bone+Marrow-Cells.">Long-Term Culture of Human-Bone Marrow-Cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. Biol. 77, 4756-4759 (1980).</li><li>Caligaris-Cappio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+bone+marrow+stromal+cells+in+the+growth+of+human+multiple+myeloma.">Role of bone marrow stromal cells in the growth of human multiple myeloma.</a> Blood. 77, 2688-2693 (1991).</li><li>Pike, B. L., Robinson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+colony+growth+in+agar-gel.">Human bone marrow colony growth in agar-gel.</a> J. Cell. Physiol. 76, 77-84 (1970).</li><li>Bug, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+family+small+GTPases+control+migration+of+hematopoietic+progenitor+cells+into+multicellular+spheroids+of+bone+marrow+stroma+cells.">Rho family small GTPases control migration of hematopoietic progenitor cells into multicellular spheroids of bone marrow stroma cells.</a> J. Leukocyte Biol. 72, 837-845 (2002).</li><li>Provenzano, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+reorganization+at+the+tumor-stromal+interface+facilitates+local+invasion.">Collagen reorganization at the tumor-stromal interface facilitates local invasion.</a> BMC Med. 4, (2006).</li><li>Tancred, T. M., Belch, A. R., Reiman, T., Pilarski, L. M., Kirshner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Expression+of+Fibronectin+and+Collagens+I+and+IV+in+Multiple+Myeloma+and+Monoclonal+Gammopathy+of+Undetermined+Significance.">Altered Expression of Fibronectin and Collagens I and IV in Multiple Myeloma and Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance.</a> J. Histochem. Cytochem. 57, 239-247 (2009).</li></ol>

RBM model giver et omfattende system, hvor cellulære sammensætning af BM opretholdes ex vivo i op til 30 dage. BM celler dyrket i rbM selvstændige stratificere efter deres funktion nøje efterligne BM arkitektur findes in vivo. Desuden er dette det første system, der giver mulighed for udvidelsen af myelom klon multiple 8. De mest kritiske skridt til at sikre den robuste vækst i BM celler og den samlede succes af kulturen er: 1) at opnå en sund bestand af BM celler med&gt; 70% levedygt...

Vævskultur blev udviklet til at studere celle adfærd i et kontrolleret miljø for at minimere systemisk variation, når man sammenligner forskellige processer i intakte organismer. Denne fremgangsmåde blev først etableret i begyndelsen af 1900 1,2 og henviser til en teknik, hvor vævseksplantater dyrkedes ex vivo i en glasskål. I midten af 1900&#39;erne blev systemet tilpasset til at vokse spredte celler snarere end fragmenter af intakte væv, og udtrykkene »vævskultur &#39;og&#39; cellekultur&quot; blev synonym 3. I sådanne konventionelle cellekultursystemer celler dyrket på overfladen af ​​vævsdyrkningsplastik overlejret med vækstmedium suppleret med forskellige vækstfaktorer. To typer af kulturer har vist baseret på adhæsionskapacitet af forskellige celler: adhærerende cellekultur, hvor cellerne vedhæfte og spredes på vævskulturplast og adhærente kulturer, hvor celler opformeres i suspension. Siden de tidlige dage af celleer blevet skabt kultur, flere udødelige cellelinier såsom HeLa 4, første human cancer cellelinie. Disse cellelinier har kapacitet til at formere sig i det uendelige i cellekultur, og de fleste ikke kræver nogen særlig behandling for at bevare levedygtigheden. Den reduktionistiske tilgang af de oprindelige celledyrkningsmetoder var designet til at forenkle systemet så meget som muligt ved kun at medtage de nøgne minimum komponenter, der kræves for at opretholde levedygtighed og proliferation. Men forenklede cellekultur tilgange undlader at støtte ex vivo fleste primære humane celletyper med endelig levetid. Derfor er nye dyrkningssystemer blive designet til at tilnærme vævet mikromiljø så tæt som muligt, således at celle eksplanteret til at vokse under fysiologiske betingelser. I modsætning til de konventionelle / reduktionistiske cellekultur fremgangsmåder, 3-dimensional (3-D) dyrkningssystemer er nu ved at blive en foretrukken fremgangsmåde til effektivt kultur forskelligehumane cellelinjer og primære celler til efterfølgende at undersøge mekanismer involveret i sundhed og sygdom, i forbindelse med en støttende mikromiljø. Sådanne 3-D-systemer er normalt sat op ved hjælp af rekonstruerede matricer og / eller medium suppleret med vækstfaktorer, for at rekapitulere vævet mikromiljø for at studere celletyper af interesse. Den første af disse 3-dimensional (3-D) kultur modeller blev udviklet til at studere mælkekirtlen udvikling. At give cellerne med native betingelser brystepitelceller celler blev indlejret i Matrigel, collagen IV og laminin-rig kilde af ekstracellulær matrix (ECM), og overlejret med vækstmedium. Under sådanne betingelser, brystkirtlerne epitelceller dannet klynger ligner yveret acini og efter stimulering med lactogenic hormoner disse acini udskilte kasein og andre mælkeproteiner, ind i den hule Lumena af acini-lignende strukturer. Kasein sekretion blev ikke observeret i standard kulturer, selv efter tilsætning af prolaktin 5Yderligere understreger den rolle mikromiljø bevare de morfologiske og fænotypiske egenskaber af celler. En anden demonstration af tabet af normale cellulære funktion, når cellerne er taget ud af den sammenhæng af deres fysiologiske mikromiljø er en demonstration af, at uden støttende mikromiljø, keratinocytter undlader at danne lagdelte epidermis 6. Der er oprettet en række andre 3-D modeller til at tillade ex vivo opformering af primærelementer 7,8. Den afgørende rolle mikromiljø celle adfærd var elegant demonstreret i en undersøgelse, hvor brystepitelceller dannede &quot;inside-out&quot;-acini, når de dyrkes i kollagen I matrix sammenlignet med korrekt polariseret acini, der blev dannet i Matrigel. Dette tab af ordentlig morfologi blev vendt når laminin-producerende myoepitelcellerne blev føjet til collagen kulturer 9. Desuden er korrekt mikromiljø kræves til nøjagtiggenotype manifestation. Dyrkes i et fad, MCF7 brystcancerceller transficeret med en celle-celle-adhæsionsmolekyle CEACAM1 opfører sig nøjagtig de samme som de transficerede CEACAM negative celler. Men når dyrkes i Matrigel, i kontakt med ECM, vildtype MCF7 danner tumor-lignende strukturer, mens MCF7-celler transficeret med CEACAM1 vende tilbage til en normal fænotype og formular acini med hul Lumena, som er blevet etableret med nonmalignant brystepitel 10. Ligeledes blokerer β1-integrin i brystkræftceller ændrer ikke deres adfærd under standard dyrkningsbetingelser, men det samme forsøg udført i 3-D kulturer viser, at blokering af β1-integrin vender tilbage maligne celler til en normal fænotype 11. Derfor er vævet mikromiljø ikke kun nødvendig for at opretholde cellelevedygtighed, men også at opretholde korrekt cellefunktion. Ud over at tilvejebringe et system, hvor celle adfærd kan undersøges under fysiologiske tilstands, 3-D kulturer fungerer som robust og pålidelig medium præklinisk afprøvning af nye lægemidler 8,12,13. Dyrkning af celler i 3-D giver mulighed for screening af testpræparater forbindelser under betingelserne for miljø-medieret lægemiddel-modstand 14, hvor bidraget af celle-celle og celle-ECM vedhæftning kunne vurderes. Endvidere kan off-target toksicitet af nye forbindelser undersøges ved at inkorporere flere cellulære rum i forskellige væv. Sådanne skærme kan udføres hurtigere og er mere omkostningseffektive end de sammenlignelige undersøgelser in vivo 8. Her præsenterer vi en opsætning af en 3-D model af rekonstrueret knoglemarven (rbM), hvor den normale og maligne knoglemarv (BM)-celler prolifererer ex vivo i et system nøje efterligne mikromiljø human BM. Tidligere forsøg på voksende primære humane BM celler i 2-D kulturer, flydende eller omliggende cokulturer med forskellige komponenter af BM stromaEller 3-D, halvfaste agarkulturer har haft begrænset succes på grund af deres manglende evne til at forsyne cellerne med de komponenter væv mikromiljø 15-18. I disse systemer primære BM celler havde dårlig levedygtighed og undlod at formere sig ex vivo. Et andet system, hvor menneskerettigheder BM stamceller dyrkes i sfæroidpartikler cokulturer med BM stromalceller er en 3-D system, hvor levedygtighed og proliferation hæmatopoietisk stamcelletransplantation blev opretholdt i mindst 96 timer 19. Men selv yderst gavnlig for forståelsen af ​​den hæmatopoietiske stamcelle biologi, at dette system ikke trofast rekapitulere mikromiljø BM på grund af fravær af ECM komponenter derfor begrænse dens anvendelighed. RBM model beskrevet her præsenterer en omfattende ordning, hvor både cellulære og ekstracellulære rum i den menneskelige BM er rekonstrueret in vitro. Vi viser, at RBM kulturer kan understøtte ex vivo væksten af normale humane BM celler, som vill som celler isoleret fra patienter med forskellige hæmatologiske lidelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="877">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">CellTrace CFSE proliferation kit-for flow cytometry</td>
			<td style="width:239px;">Invitrogen/Life technologies</td>
			<td style="width:108px;">C34554</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Fibronectin from human plasma</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>NG1884448</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Ficoll-Paque PLUS</td>
			<td>GE Lifesciences</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Matrigel basement membrane matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354234</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:328px;">Rat tail collagen type I</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354249</td>
			<td style="width:203px;">Collagen I from Millipore does not polimerize properly using this protocol</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">Vectashield mounting medium for fluorescence (regular set)</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">SigmaFast Red TR/Napthol AS-MX tablets</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4648</td>
			<td style="width:203px;">For TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">SigmaFast BCIP/NBT tablets</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5655</td>
			<td style="width:203px;">For alkaline phosphatase staining</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Zeiss confocal LSM 510 microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">Zeiss 510 software</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Image analysis software for confocal analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Zeiss Axiovert 200M inverted microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">MetaMorph software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Image analysis software for Axiovert 200M</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">FACSort flow cytometer&#160;</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">CellQuest Pro software&#160;</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Software for the analysis of flow cytometry data</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies

Vævskultur har været et uvurderligt værktøj til at studere mange aspekter af cellefunktion fra normale udvikling af sygdom. Konventionelle celledyrkningsmetoder afhængige cellers evne til enten at binde sig til en fast substrat af en vævskulturskål eller til at vokse i suspension i flydende medium. Flere udødelige cellelinjer er blevet oprettet og dyrket ved hjælp af sådanne tiltag, men disse metoder ofte mislykkes, når primære celler skal dyrkes ex vivo. Sådanne svigt er blevet tilskrevet fraværet af de passende ekstracellulære matrix komponenter i vævet mikromiljø fra standard systemer, hvor vævskulturplast bruges som en overflade for cellevækst. Ekstracellulære matrix er en integreret del af vævet mikromiljø og dens tilstedeværelse er afgørende for opretholdelsen af ​​fysiologiske funktioner såsom celle polarisering, overlevelse og spredning. Her præsenterer vi en 3-dimensionel vævskultur metode, hvor primær knoglemarv cells dyrkes i ekstracellulær matrix formuleret til at rekapitulere mikromiljø den menneskelige knogle (rbM system). Indlejret i den ekstracellulære matrix cellerne forsynes med næringsstoffer gennem mediet suppleret med humant plasma, hvilket giver et samlet system, hvor celleoverlevelse og proliferation kan opretholdes i op til 30 dage og samtidig opretholde den cellulære sammensætning af det primære væv. Brug af rbM systemet har vi med succes vokset primære knoglemarvsceller fra normale donorer og patienter med amyloidose, og forskellige blodkræftsygdomme. RBM-systemet giver mulighed for direkte i matrix realtid visualisering af cellernes opførsel og evaluering af prækliniske effekt af nye lægemidler. Desuden kan celler isoleres fra rbM og efterfølgende anvendes til in vivo transplantation, cellesortering, flowcytometri, og nukleinsyre og protein analyse. Tilsammen RBM metode giver et pålideligt system til væksten i primær knogle Marrow celler under fysiologiske betingelser.

Da den primære knoglemarvsceller undlader at formere sig under standard vævskulturbetingelser blev rbM system skabt til nøje efterligner knoglen mikromiljø, at tilbyde et system til kultur og udvide BM celler in vivo. De vigtigste komponenter i BM ekstracellulære matrix, fibronektin, kollagen I, kollagen IV og laminin 21 blev indarbejdet i rbM matrix til at levere den strukturelle stillads til denne 3-D kultur. Endosteum, grænsefladen mellem knoglen og BM, rig på kollagen I og fibronectin blev...

Watch this Scientific Journal Video about A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies at JoVE.com

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

I standard-dyrkningsmetoder tages celler ud af deres fysiologiske miljø og dyrket på plastoverfladen af ​​en skål. For at undersøge opførslen af ​​primære humane knoglemarvsceller vi skabt en 3-D kultur system, hvor celler dyrkes under betingelser opridset native mikromiljø vævet.

Et tredimensionalt Tissue Culture Model til Study Primary human knoglemarv og dens Maligne

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Humane Neuroendokrine tumorcellelinier som en tredimensional model for studiet af den menneskelige Neuroendokrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Primær Culture of Human vestibulær schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Tredimensionelle Cultures: Et værktøj til at studere Normal Acinar Architecture vs malign transformation af brystkræft celler

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kvantificering af Breast Cancer Cell invasiv Ved hjælp af en tre-dimensionel (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Femoral knoglemarv Aspiration i levende mus

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tre-dimensionel Co-kultur Model for Tumor-stromale Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tre-Dimensional (3D) Tumor Sfæroide Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Tre-dimensionel Alginat-perle dyrkning af humane hypofyseadenom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Three-Dimensional Culture Assay to Explore Cancer Cell Invasiveness and Satellite Tumor Formation

Tre-Dimensional Kultur Assay til Udforsk Cancer Cell invasiv og satellit tumordannelse

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet måling af musen mesenterica arterie ved hjælp af Wire blodkar

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...