Name: a three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies
Uploaded: 2014-03-08T15:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato da sovvenzioni dal National Institutes of Health, National Cancer Institute (1R21CA141039), BD Biosciences Research Grant Award, l&#39;American Cancer Society Research istituzionale Grant (IRG # 58-006-53), al Centro Purdue University for Cancer La ricerca e la Canadian Institutes of Health Research e Alberta Cancer Consiglio Initiative di ricerca del programma. MP è stato sostenuto dal National Institutes of Health, National Cancer Institute, la prevenzione del cancro Programma di Tirocinio (R25CA128770; PI: D. Teegarden) amministrato dal Oncologico Sciences Center e il Discovery Learning Research Center presso la Purdue University.

1. Preparazione preliminare <ol><li> Tenere pipette sierologiche sterili e relativi puntali a 4 ° C. Risoluzione dei problemi: gel Matrigel a temperatura ambiente (RT); utilizzando pipette fredde e suggerimenti impediranno Matrigel di gelificazione durante l&#39;installazione cultura. </li><li> Scongelare una bottiglia di Matrigel a 4 ° C per una notte. </li></ol> 2. Preparazione dei reagenti <ol><li> Preparazione della fibronectina soluzione stock: Fare un / ml solu...

<ol>
	<li>Carrel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Permanent+Life+of+Tissues+Outside+of+the+Organism.">On the Permanent Life of Tissues Outside of the Organism.</a> J. Exp. Med. 15, 516-528 (1912).</li><li>Harrison, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+living+developing+nerve+fiber.">Observations on the living developing nerve fiber.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 4, 140-143 (1907).</li><li>Earle, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+malignancy+in+vitro.+IV.+The+mouse+fibroblast+cultures+and+changes+seen+in+the+living+cells.">Production of malignancy in vitro. IV. The mouse fibroblast cultures and changes seen in the living cells.</a> J. Natl. Cancer Inst. 4, 165-212 (1943).</li><li>Gey, G. O., Coffman, W. D., Kubicek, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Culture+Studies+of+the+Proliferative+Capacity+of+Cervical+Carcinoma+and+Normal+Epithelium.">Tissue Culture Studies of the Proliferative Capacity of Cervical Carcinoma and Normal Epithelium.</a> Cancer Res. 12, 264-265 (1952).</li><li>Barcelloshoff, M. H., Aggeler, J., Ram, T. G., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional-Differentiation+and+Alveolar+Morphogenesis+of+Primary+Mammary+Cultures+on+Reconstituted+Basement-Membrane.">Functional-Differentiation and Alveolar Morphogenesis of Primary Mammary Cultures on Reconstituted Basement-Membrane.</a> Development. 105, 223-227 (1989).</li><li>Lamb, R., Ambler, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+propagated+in+serum-free,+feeder-free+culture+conditions+fail+to+form+stratified+epidermis+in+a+reconstituted+skin+model.">Keratinocytes propagated in serum-free, feeder-free culture conditions fail to form stratified epidermis in a reconstituted skin model.</a> PloS One. 8, (2013).</li><li>Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q. Z., Messadi, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+3-dimensional+culture+system+as+an+in+vitro+model+for+studying+oral+cancer+cell+invasion.">A novel 3-dimensional culture system as an in vitro model for studying oral cancer cell invasion.</a> Int. J. Exp. Pathol. 86, 365-374 (2005).</li><li>Kirshner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+three-dimensional+model+for+evaluating+the+impact+of+therapy+on+multiple+myeloma.">A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma.</a> Blood. 112, 2935-2945 (2008).</li><li>Gudjonsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+tumor-derived+myoepithelial+cells+differ+in+their+ability+to+interact+with+luminal+breast+epithelial+cells+for+polarity+and+basement+membrane+deposition.">Normal and tumor-derived myoepithelial cells differ in their ability to interact with luminal breast epithelial cells for polarity and basement membrane deposition.</a> J. Cell Sci. 115, 39-50 (2002).</li><li>Kirshner, J., Chen, C. J., Liu, P., Huang, J., Shively, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CEACAM1-4S,+a+cell-cell+adhesion+molecule,+mediates+apoptosis+and+reverts+mammary+carcinoma+cells+to+a+normal+morphogenic+phenotype+in+a+3D+culture.">CEACAM1-4S, a cell-cell adhesion molecule, mediates apoptosis and reverts mammary carcinoma cells to a normal morphogenic phenotype in a 3D culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 100, 521-526 (2003).</li><li>Weaver, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversion+of+the+malignant+phenotype+of+human+breast+cells+in+three-dimensional+culture+and+in+vivo+by+integrin+blocking+antibodies.">Reversion of the malignant phenotype of human breast cells in three-dimensional culture and in vivo by integrin blocking antibodies.</a> J. Cell Biol. 137, 231-245 (1997).</li><li>Gunn, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+products+parthenolide+and+andrographolide+exhibit+anti-cancer+stem+cell+activity+in+multiple+myeloma.">The natural products parthenolide and andrographolide exhibit anti-cancer stem cell activity in multiple myeloma.</a> Leukemia Lymphoma. 52, 1085-1097 (2011).</li><li>Hsiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=384+hanging+drop+arrays+give+excellent+Z-factors+and+allow+versatile+formation+of+co-culture+spheroids.">384 hanging drop arrays give excellent Z-factors and allow versatile formation of co-culture spheroids.</a> Biotechnol. Bioeng. 109, 1293-1304 (2012).</li><li>Meads, M. B., Gatenby, R. A., Dalton, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environment-mediated+drug+resistance:+a+major+contributor+to+minimal+residual+disease.">Environment-mediated drug resistance: a major contributor to minimal residual disease.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 665-674 (2009).</li><li>Golde, D. W., Cline, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+Human+Bone-Marrow+in+Liquid+Culture.">Growth of Human Bone-Marrow in Liquid Culture.</a> Blood. 41, 45-57 (1973).</li><li>Gartner, S., Kaplan, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Culture+of+Human-Bone+Marrow-Cells.">Long-Term Culture of Human-Bone Marrow-Cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. Biol. 77, 4756-4759 (1980).</li><li>Caligaris-Cappio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+bone+marrow+stromal+cells+in+the+growth+of+human+multiple+myeloma.">Role of bone marrow stromal cells in the growth of human multiple myeloma.</a> Blood. 77, 2688-2693 (1991).</li><li>Pike, B. L., Robinson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+colony+growth+in+agar-gel.">Human bone marrow colony growth in agar-gel.</a> J. Cell. Physiol. 76, 77-84 (1970).</li><li>Bug, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+family+small+GTPases+control+migration+of+hematopoietic+progenitor+cells+into+multicellular+spheroids+of+bone+marrow+stroma+cells.">Rho family small GTPases control migration of hematopoietic progenitor cells into multicellular spheroids of bone marrow stroma cells.</a> J. Leukocyte Biol. 72, 837-845 (2002).</li><li>Provenzano, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+reorganization+at+the+tumor-stromal+interface+facilitates+local+invasion.">Collagen reorganization at the tumor-stromal interface facilitates local invasion.</a> BMC Med. 4, (2006).</li><li>Tancred, T. M., Belch, A. R., Reiman, T., Pilarski, L. M., Kirshner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Expression+of+Fibronectin+and+Collagens+I+and+IV+in+Multiple+Myeloma+and+Monoclonal+Gammopathy+of+Undetermined+Significance.">Altered Expression of Fibronectin and Collagens I and IV in Multiple Myeloma and Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance.</a> J. Histochem. Cytochem. 57, 239-247 (2009).</li></ol>

Il modello RBM fornisce un sistema completo in cui la composizione cellulare della BM è mantenuta ex vivo per un massimo di 30 giorni. Cellule BM coltivate in RBM self-stratificare in base alla loro funzione mimando l&#39;architettura BM trovato in vivo. Inoltre, questo è il primo sistema che permette l&#39;espansione del mieloma multiplo clone 8. I passi più critici per assicurare la robusta crescita delle cellule BM e il successo complessivo della coltura sono: 1) per ottenere una popol...

Coltura tissutale è stato sviluppato per studiare il comportamento delle cellule in un ambiente controllato per ridurre al minimo la variabilità sistemica quando si confrontano i vari processi in organismi intatti. Questo metodo è stata fondata nei primi anni del 1900 a 1,2 e si riferisce ad una tecnica in cui espianti di tessuto sono state coltivate ex vivo in un piatto di vetro. A metà del 1900 il sistema è stato adattato per far crescere le cellule disperse piuttosto che frammenti di tessuti intatti, e &#39;la cultura del tessuto&#39; i termini e &#39;di coltura cellulare&#39; diventato sinonimo 3. In tali sistemi di colture cellulari convenzionali cellule sono cresciute sulla superficie della plastica coltura di tessuti sovrapposti con terreno di coltura addizionato con diversi fattori di crescita. Due tipi di colture sono emersi sulla base delle capacità di adesione di cellule diverse: coltura di cellule aderenti, in cui le cellule si attaccano e diffondono sulla plastica coltura tissutale e colture non aderenti, in cui le cellule vengono propagate in sospensione. Fin dai primi giorni di cellacultura, più linee cellulari immortali sono state create, come HeLa 4, la prima linea di cellule di cancro umano. Queste linee cellulari hanno la capacità di proliferare indefinitamente in coltura cellulare, e la maggior parte non richiedono alcun trattamento speciale per mantenere la vitalità. L&#39;approccio riduzionista dei metodi di coltura cellulare originale è stato progettato per semplificare il sistema, per quanto possibile includendo solo i componenti minimo necessario per mantenere la vitalità e la proliferazione cellulare. Tuttavia, gli approcci di coltura cellulare semplificati non riescono a sostenere ex vivo la maggior parte dei tipi principali di cellule umane con limitata durata. Pertanto, i nuovi sistemi di coltura sono stati progettati per approssimare il microambiente tissutale più vicino possibile, permettendo così espianti di cellule di crescere in condizioni fisiologiche. In contrasto con le / approcci convenzionali di coltura cellulare riduzioniste, 3-dimensionale (3-D) sistemi di coltura stanno diventando il metodo preferito per la cultura in modo efficiente varilinee cellulari umane e cellule primarie di studiare successivamente meccanismi coinvolti nella salute e malattia, nel contesto di un microambiente favorevole. Tali sistemi 3-D sono solitamente realizzate utilizzando matrici ricostruite e / o medie, completata con fattori di crescita, per ricapitolare microambiente tissutale per studiare tipi cellulari di interesse. La prima di queste 3 dimensioni (3-D) modelli di coltura è stato sviluppato per studiare lo sviluppo della ghiandola mammaria. Per fornire le cellule con condizioni native cellule epiteliali mammarie sono stati incorporati in Matrigel, collagene IV e ricca fonte-laminina di matrice extracellulare (ECM), e ricoperto con terreno di crescita. In tali condizioni, le cellule epiteliali mammarie formano cluster somiglianti acini mammaria, e dopo stimolazione con ormoni lattogenica, questi acini secreti caseina e altre proteine ​​del latte, nel Lumena cavità delle strutture acini simili. Secrezione di caseina non è stata osservata in culture normali anche dopo aggiunta di prolattina 5, Sottolineando ulteriormente il ruolo del microambiente nel preservare le caratteristiche morfologiche e fenotipiche delle cellule. Un&#39;altra dimostrazione della perdita della normale funzione cellulare quando le cellule sono prese fuori dal contesto della loro microambiente fisiologico è la dimostrazione che senza microambiente favorevole, cheratinociti non riescono a formare epidermide stratificati 6. Un certo numero di altri modelli 3-D è stato creato per permettere a ex vivo propagazione di pile 7,8. Il ruolo cruciale del microambiente nel comportamento cellulare era elegantemente dimostrata in uno studio in cui cellule epiteliali mammarie formate &quot;inside-out&quot; acini quando coltivate in collagene I matrice, rispetto al acini polarizzata corretto e che si sono formate in Matrigel. Questa perdita di corretta morfologia è invertita quando le cellule mioepiteliali-laminina produzione sono stati aggiunti alle colture collagene I 9. Inoltre, corretta microambiente è necessario per l&#39;accuratagenotipo manifestazione. Cresciuto in un piatto, cellule tumorali mammarie MCF7 trasfettate con una cellula-cellula molecola di adesione CEACAM1 si comportano esattamente come le cellule negative CEACAM non trasfettate. Tuttavia, quando coltivate in Matrigel, a contatto con la ECM, strutture tumore-come forma di tipo selvatico MCF7 mentre MCF7 cellule trasfettate con CEACAM1 ritornano ad un fenotipo e forma normale acini con Lumena vuoto, come è stato stabilito con nonmalignant epitelio mammario 10. Analogamente, il blocco-β1 integrine in cellule di carcinoma mammario non cambia il loro comportamento in condizioni standard di coltura, ma lo stesso esperimento condotto in colture 3-D dimostra che bloccare β1-integrina ritorna cellule maligne ad un fenotipo normale 11. Pertanto, microambiente tissutale non è necessaria solo per mantenere la vitalità cellulare, ma anche di mantenere corretta funzionalità delle cellule. Oltre a fornire un sistema in cui il comportamento delle cellule può essere studiato in condizioni fisiologiches, culture 3-D funzionano mezzo robusto e affidabile per la prova preclinica di nuove terapie 8,12,13. Coltura di cellule in 3-D permette lo screening di composti sperimentali nelle condizioni di ambiente mediata farmaco-resistenza 14, in cui potrebbe essere valutato il contributo di cellula-cellula e cellula-ECM adesione. Inoltre, la tossicità fuori bersaglio di nuovi composti può essere accertata incorporando diversi compartimenti cellulari di vari tessuti. Tali schermi possono essere eseguite più rapidamente e sono più conveniente rispetto gli studi comparabili in vivo 8. Qui vi presentiamo un impostazione di un modello 3-D di midollo osseo ricostruito (RBM), dove normale e maligna del midollo osseo (BM), le cellule proliferano ex vivo in un sistema mimando il microambiente del BM umana. Precedenti tentativi di crescita delle cellule umane primarie BM nelle culture 2-D, liquido o co-colture aderenti con i vari componenti della BM stroma, O 3-D, culture agar semisolido hanno avuto un successo limitato a causa della loro incapacità di fornire le cellule con i componenti del tessuto microambiente 15-18. In questi sistemi cellule midollari primarie hanno avuto scarsa vitalità e non è riuscito a proliferare ex vivo. Un altro sistema in cui le cellule progenitrici midollari umane sono coltivate in co-colture sferoidali con cellule stromali BM è un sistema 3-D in cui è stata sostenuta vitalità e la proliferazione di cellule staminali per almeno 96 ore 19. Tuttavia, anche se di grande beneficio per la comprensione della biologia progenitrici ematopoietiche, questo sistema non fedelmente ricapitolare il microambiente del BM per l&#39;assenza di componenti ECM, pertanto, limitando la sua utilità. Il modello RBM qui descritta presenta un sistema completo in cui entrambi i compartimenti cellulari ed extracellulari della BM umano sono ricostruiti in vitro. Abbiamo dimostrato che le culture meccanismi in grado di supportare la crescita ex vivo di cellule normali BM umane, come abbiamoll come cellule isolate da pazienti con vari disturbi ematologici.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="877">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">CellTrace CFSE proliferation kit-for flow cytometry</td>
			<td style="width:239px;">Invitrogen/Life technologies</td>
			<td style="width:108px;">C34554</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Fibronectin from human plasma</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>NG1884448</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Ficoll-Paque PLUS</td>
			<td>GE Lifesciences</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Matrigel basement membrane matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354234</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:328px;">Rat tail collagen type I</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354249</td>
			<td style="width:203px;">Collagen I from Millipore does not polimerize properly using this protocol</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">Vectashield mounting medium for fluorescence (regular set)</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">SigmaFast Red TR/Napthol AS-MX tablets</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4648</td>
			<td style="width:203px;">For TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">SigmaFast BCIP/NBT tablets</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5655</td>
			<td style="width:203px;">For alkaline phosphatase staining</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Zeiss confocal LSM 510 microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">Zeiss 510 software</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Image analysis software for confocal analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">Zeiss Axiovert 200M inverted microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">MetaMorph software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Image analysis software for Axiovert 200M</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:328px;">FACSort flow cytometer&#160;</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:328px;">CellQuest Pro software&#160;</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td style="width:203px;">Software for the analysis of flow cytometry data</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies

Coltura di tessuti è stato uno strumento prezioso per studiare molti aspetti della funzione delle cellule, dallo sviluppo normale della malattia. Metodi di coltura cellulare convenzionali si basano sulla capacità delle cellule sia per legarsi a un substrato solido di un piatto di coltura di tessuti o di crescere in sospensione in mezzo liquido. Diverse linee cellulari immortali sono stati creati e coltivati ​​con tali approcci, tuttavia, questi metodi spesso falliscono quando le cellule primarie devono essere coltivate ex vivo. Tale guasto è stato attribuito alla mancanza dei componenti della matrice extracellulare appropriate del microambiente tessuto dai sistemi standard dove coltura tissutale di plastica è usato come superficie per la crescita cellulare. Matrice extracellulare è parte integrante del microambiente tissutale e la sua presenza è essenziale per il mantenimento delle funzioni fisiologiche come polarizzazione delle cellule, la sopravvivenza e la proliferazione. Qui vi presentiamo un metodo di coltura di tessuto a 3 dimensioni in cui il midollo osseo primario celLS sono cresciuti in matrice extracellulare formulato ricapitolare il microambiente dell&#39;osso umano (sistema RBM). Incorporato nella matrice extracellulare, cellule ricevono sostanze nutritive attraverso il mezzo supplementato con plasma umano, fornendo così un sistema completo in cui la sopravvivenza e la proliferazione cellulare possono essere mantenuti fino a 30 giorni, mantenendo la composizione cellulare del tessuto primario. Utilizzando il sistema RBM siamo cresciuti con successo le cellule del midollo osseo primarie da donatori sani che in pazienti con amiloidosi, e varie neoplasie ematologiche. Il sistema RBM permette, visualizzazione diretta in matrice tempo reale del comportamento delle cellule e la valutazione di efficacia preclinica di nuove terapie. Inoltre, le cellule possono essere isolate dal MLF e successivamente utilizzati per trapianto in vivo, selezione cellulare, citometria a flusso, e acido nucleico e proteina analisi. Nel loro insieme, il metodo RBM fornisce un sistema affidabile per la crescita di ossa primario Marrow cellule in condizioni fisiologiche.

Poiché le cellule del midollo osseo primario non riescono a proliferare in condizioni di coltura tissutale standard, il sistema di meccanismo è stato creato per imitare strettamente microambiente dell&#39;osso, fornendo un sistema di coltura ed espandere cellule BM ex vivo. I principali componenti della matrice extracellulare BM, fibronectina, collagene I, collagene IV, laminina e 21, sono state incorporate nella matrice meccanismi per fornire l&#39;impalcatura strutturale di questa cultura 3-D. En...

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A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Nei metodi standard di coltura le cellule sono presi dal loro ambiente fisiologico e cresciute sulla superficie di plastica di un piatto. Per studiare il comportamento delle cellule primarie midollo osseo umano è stato creato un sistema di coltura 3-D in cui le cellule sono coltivate in condizioni riassumono il microambiente nativo del tessuto.

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...