Name: isolation of myeloid dendritic cells and epithelial cells from human thymus
Uploaded: 2013-09-19T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus at JoVE.com

Somos gratos aos cirurgiões do Departamento de Cirurgia Torácica e Cardiovascular, Clínica Universitária Tuebingen por nos fornecer as amostras de timo e Bruno Kyewski (DKFZ, Heidelberg, Alemanha) para fornecer o anticorpo CDR2. Gostaríamos também de agradecer a Hans-Jörg Bühring e Sabrina Grimm a partir da instalação de triagem (Universidade de Tuebingen). Este trabalho foi apoiado pelo SFB 685 e da Fundação Hertie.

1. Preparação de ferramentas, soluções enzimáticas e amortecedores Execute as seguintes etapas de preparação antes do início do protocolo. <ol><li> Ferramentas Limpo, seco e autoclave as seguintes ferramentas e mantê-los em embalagem estéril até o uso. <ol><li> Pequenas tesoura afiada com pontas ou curvas ou retas para cortar o tecido do timo. Pequenas pinças curvas com pontas serrilhadas para lidar com o tecido. </li><li> 50 ml de Oak Ridge centrífuga Tubos, PC, para a...

<ol>
	<li>Miller, J. F. A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+discovery+of+thymus+function+and+of+thymus-derived+lymphocytes.">The discovery of thymus function and of thymus-derived lymphocytes.</a> Immunological Reviews. 185, 7-14 (2002).</li><li>Klein, L., Hinterberger, M., Wirnsberger, G., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+presentation+in+the+thymus+for+positive+selection+and+central+tolerance+induction.">Antigen presentation in the thymus for positive selection and central tolerance induction.</a> Nat Rev Immunol. 9, 833-844 (2009).</li><li>Vandenabeele, S., Hochrein, H., Mavaddat, N., Winkel, K., Shortman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+thymus+contains+2+distinct+dendritic+cell+populations.">Human thymus contains 2 distinct dendritic cell populations.</a> Blood. 97, 1733-1741 (2001).</li><li>Gotter, J., Brors, B., Hergenhahn, M., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medullary+Epithelial+Cells+of+the+Human+Thymus+Express+a+Highly+Diverse+Selection+of+Tissue-specific+Genes+Colocalized+in+Chromosomal+Clusters.">Medullary Epithelial Cells of the Human Thymus Express a Highly Diverse Selection of Tissue-specific Genes Colocalized in Chromosomal Clusters.</a> The Journal of Experimental Medicine. 199, 155-166 (2004).</li><li>Rouse, R. V., Bolin, L. M., Bender, J. R., Kyewski, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+reactive+with+subsets+of+mouse+and+human+thymic+epithelial+cells.">Monoclonal antibodies reactive with subsets of mouse and human thymic epithelial cells.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 36, 1511-1517 (1988).</li><li>Stoeckle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+S+dominates+autoantigen+processing+in+human+thymic+dendritic+cells.">Cathepsin S dominates autoantigen processing in human thymic dendritic cells.</a> Journal of Autoimmunity. 38, 332-343 (2012).</li><li>Woods Ignatoski, K. M., Bingham, E. L., Frome, L. K., Doherty, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+trans-differentiation+of+thymus+cells+into+parathyroid-like+cells+without+genetic+manipulation.">Directed trans-differentiation of thymus cells into parathyroid-like cells without genetic manipulation.</a> Tissue Eng Part C Methods. 17, 1051-1059 (2011).</li><li>Williams, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Cell+Analysis+of+Complex+Thymus+Stromal+Cell+Populations:+Rapid+Thymic+Epithelia+Preparation+Characterizes+Radiation+Injury.">Single Cell Analysis of Complex Thymus Stromal Cell Populations: Rapid Thymic Epithelia Preparation Characterizes Radiation Injury.</a> Clinical and Translational Science. 2, 279-285 (2009).</li><li>Bendriss-Vermare, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+thymus+contains+IFN-&#945;-producing+CD11c-,+myeloid+CD11c+,+and+mature+interdigitating+dendritic+cells.">Human thymus contains IFN-&#945;-producing CD11c-, myeloid CD11c+, and mature interdigitating dendritic cells.</a> The Journal of Clinical Investigation. 107, 835-844 (2001).</li><li>Schmitt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+characterization+of+human+thymic+dendritic+cell+subsets.">Ex vivo characterization of human thymic dendritic cell subsets.</a> Immunobiology. 212, 167-177 (2007).</li><li>Dzionek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BDCA-4:+Three+Markers+for+Distinct+Subsets+of+Dendritic+Cells+in+Human+Peripheral+Blood.">BDCA-4: Three Markers for Distinct Subsets of Dendritic Cells in Human Peripheral Blood.</a> The Journal of Immunology. 165, 6037-6046 (2000).</li><li>Wu, L., Shortman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+thymic+dendritic+cells.">Heterogeneity of thymic dendritic cells.</a> Seminars in Immunology. 17, 304-312 (2005).</li><li>Seach, N., Wong, K., Hammett, M., Boyd, R. L., Chidgey, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+enzymes+improve+isolation+and+characterization+of+the+adult+thymic+epithelium.">Purified enzymes improve isolation and characterization of the adult thymic epithelium.</a> Journal of Immunological Methods. 385, 23-34 (2012).</li><li>Adamopoulou, E., Tenzer, S., Hillen, N., Klug, P., Rota, I. A., Tietz, S., Gebhardt, M., Stevanovic, S., Schild, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+MHC-peptide+matrix+of+central+tolerance+in+the+human+thymus.">Exploring the MHC-peptide matrix of central tolerance in the human thymus.</a> Nature Communications. , (2013).</li></ol>

O protocolo aqui descrito é uma modificação do protocolo publicado por Gotter et al 4. As etapas críticas no protocolo são a condição e a preparação inicial do tecido, bem como a separação de densidade de Percoll. É altamente recomendável para processar o tecido, assim que possível após a colheita. É importante trabalhar rapidamente mas cuidadosamente durante a limpeza e corte do tecido. Durante a lavagem de timócitos descrito na etapa 2.3, é crucial para encontrar o equilíbrio cer...

O timo é o órgão em que o desenvolvimento de células T ocorre. O seu tamanho relativo e absoluto diminui com a idade, quando se torna sucessivamente substituído por gordura, embora a actividade do timo pode ainda ser detectado na velhice. A sua importância para a resposta imune foi demonstrado na década de 1960 1. O repertório de células T é formada através da interacção dos receptores de células T com complexos de peptídeo-MHC em diferentes tipos de APC do timo, que fornecem sinais de sobrevivência ou morte para o desenvolvimento de células T, resultando em um repertório de células T funcionais e são amplamente auto-tolerante 2. Aproximadamente 98% das células do timo humano estão a desenvolver células T referidos como timócitos. Os restantes 2% são constituídos por um número de diferentes tipos de células, incluindo uma variedade de TCE (cortical, medular, subcapsular), mielóide e plasmocitï DC (MDC, pDC), macrófagos, células B, células T re-circulação maduras, granulócitos, fibroblasts, células endoteliais e células epiteliais muito raras com um fenótipo de expressão semelhante ao de células de outros tecidos tais como o músculo, os neurónios e epitélio respiratório (Figura 1). Destes, TEC e DC são os principais tipos de APC encontrados em um timo normal. Nos últimos anos, a purificação destes tipos da APC para a cultura e perfil molecular ganhou mais e mais interesse. Devido à sua baixa frequência, o isolamento de qualquer um destes tipos de células para análise detalhada requer um processo eficiente, reprodutível e de baixo custo. O método aqui apresentado é uma modificação a partir de estudos publicados anteriormente 3,4. Tal como acontece com qualquer outro tecido, extracção a partir de células do timo pode ser conseguida por via enzimática a desagregar-célula e redes de interacção célula-matriz, a fim de obter uma suspensão de células individuais. Existem certos parâmetros, como uma boa eficiência de dissociação, o rendimento celular, viabilidade celular e retenção de célula smarcadores urface que são cruciais e devem ser otimizados para o isolamento de sucesso destas populações de células raras. Neste protocolo, o isolamento de DC e subconjuntos TEC é realizada através de uma suspensão de uma única célula do tecido por perturbação mecânica e de digestão enzimática. Usamos colagenase A de Clostridium histolyticum, que tem uma proporção equilibrada de diferentes actividades enzimáticas, para quebrar o colagénio nativo que mantém o tecido em conjunto. ADNase I está incluído na solução de enzima para reduzir a agregação das células, devido a ADN isento de células mortas (timócitos são muito sensíveis). Também proporcionam uma abordagem alternativa para a digestão enzimática do tecido típica envolve o tratamento de tecidos mecânica e enzimática assistida por um Dissociator tecido. A suspensão de célula única é então sujeito a uma única centrifugação de densidade de Percoll para o enriquecimento da fracção de baixa densidade (LDF) de células. A partir desta fracção de células, DC pode ser isolado através de coloração fou DC marcadores de superfície (isto é, CD11c +) e utilizando separação magnética ou de células activadas por fluorescência (FACS). Ao contrário das células linfóides que compreendem a maioria das células no timo, o TEC não expressam CD45 em níveis elevados, mas são positivas para a adesão da célula epitelial molécula EpCAM. CTECs pode ser distinguido do TCE medular pela expressão de um antigénio ainda indefinido reconhecido pelo CDR-2 (dendrítica reticulócitos-2 cortical) de anticorpo de 4,5 e um pouco menor expressão EpCAM. O diferencial de co-expressão de EpCAM e CDR2 permite o isolamento eficaz desses subconjuntos TEC através de células de elevada velocidade de triagem 6. O protocolo aqui apresentado é otimizado para o tecido do timo humano. A duração do processo depende da quantidade de tecido e a capacidade do experimentador, bem como a velocidade do classificador de células, se for utilizado separação FACS. Normalmente, o protocolo para o isolamento de DC pode ser concluída dentro de 5Hr -6 e para o isolamento do TCE em 8-10 horas. O isolamento de DC e subconjuntos do TEC a partir de tecido do timo é sensível ao tempo. Quanto mais rápido o processo de isolamento, a melhor o estado das células. Finalmente, as células isoladas podem ser utilizadas para outras investigações, como estudos comparativos de ARNm e a expressão da proteína, as experiências de PCR, o isolamento da proteína, o perfil molecular (isto é, transcritômica, análise de micro RNA), assim como a cultura de 6 células. Declaração de Ética A fim de ser capaz de trabalhar com o tecido do timo humano o pesquisador precisa obter a aprovação do comitê de ética local ou autoridades responsáveis, bem como um consentimento informado por escrito do doador (ou geralmente seus pais, uma vez que o tecido é geralmente obtida a partir de menor de idade crianças). Além disso, todos os tecidos humanos devem ser tratadas como sendo devem ser tomadas medidas potencialmente infecciosas e apropriados, tais como trabalhar com luvas, etc.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagents and Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>PAA</td>
			<td>E15-842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td>PAA</td>
			<td>H15-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum-Gold</td>
			<td>PAA</td>
			<td>A15-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>PAA</td>
			<td>K41-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10 103 586 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I, grade II bovine pancreatic</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10 104 159 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 10x in PBS</td>
			<td>PAA</td>
			<td>L11-001</td>
			<td>stock conc. 20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Protein Labelling kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A-10235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CDR2 (purified)</td>
			<td>Bruno Kyewski, DKFZ- Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>labeled with Alexa Fluor 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD45 (Pacific Blue)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>304022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human EpCAM (APC)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD11c (PE)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-PE Microbeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45 Microbeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-045-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS C Tubes</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td>for tissue dissociator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (density 1.130 g/ml)</td>
			<td>GE Healthcare, Life Sciences</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled Water (DNAse/ RNAse free)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10977-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamunex 10%</td>
			<td>Tajecris-Biotherapeutics</td>
			<td>G120052</td>
			<td>1:10 pre-dilution, use 20 &#956;l/1 x 106cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Millex GS</td>
			<td>SLGS033SS</td>
			<td>Syringe driven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup filter unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPU05RE</td>
			<td>Pump driven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml PC oak ridge centrifuge tubes</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>3118-0050</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml PP conical tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mm x 75 mm 5 ml test tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352058</td>
			<td>FACS stainings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>INSTRUMENTS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometer-Sorter (BD FACSAriaTMIIu)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Evolution R6 (rotor)</td>
			<td>Kendro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotator REAX 2</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093 235</td>
			<td>tissue dissociator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of myeloid dendritic cells and epithelial cells from human thymus

Neste protocolo, proporcionar um método para isolar as células dendríticas (DC) e células epiteliais (TEC) a partir do timo humano. DC e TEC são a principal célula apresentadoras de antígenos (APC) tipos encontrados em um timo normal e está bem estabelecido que desempenham papéis distintos durante a seleção do timo. Essas células estão localizadas em microambientes distintos no timo e cada tipo APC representa apenas uma pequena população de células. Para melhor compreender a biologia destes tipos de células, a caracterização dessas populações de células é altamente desejável, mas devido à sua baixa frequência, o isolamento de qualquer um destes tipos celulares requer um procedimento eficiente e reprodutível. Este protocolo detalha um método para obter células adequadas para a caracterização de diversas propriedades celulares. Tecido do timo é mecanicamente perturbado e após diferentes passos de digestão enzimática, a suspensão de células resultante é enriquecida com um passo de centrifugação de densidade de Percoll. Para o isolamento de mielóide DC (CD11c &lt;sup&gt; +), células da fração de baixa densidade (FDL) são immunoselected por separação de células magnéticas. O enriquecimento de populações TEC (Mtec, CTEC) é alcançada por esgotamento de hematopoiéticas (CD45 hi), as células da fração de baixa densidade celular Percoll permitindo a sua posterior isolamento através de fluorescência de células ativadas (FACS) utilizando marcadores específicos de células. As células isoladas podem ser usadas para diferentes aplicações a jusante.

Como material de partida neste protocolo que usamos tecido do timo removido crianças submetidas à cirurgia cardiovascular corretiva (Departamento de Cirurgia Torácica e Cardiovascular da Universidade Tuebingen Clinic) obtidos após consentimento informado e sob as diretrizes institucionais. Este material descartado pode variar muito em tamanho 2-30 g ou mais. O número de subconjuntos e mDC TEC (CTEC e Mtec) que são obtidos depende do tamanho assim como da idade da amostra de tecido do timo para o isolamento. <p...

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Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Este protocolo detalha um método para isolar células apresentadoras de antigénio a partir de timo humano por meio de diferentes passos de digestão enzimática do tecido seguida por centrifugação de densidade da suspensão de células individuais e finalmente separação magnética e / ou FACS das populações de células de interesse.

O isolamento de células dendríticas mielóides e células epiteliais de timo humano

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolamento de células dendríticas pulmonares do rato

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Imunologia e Infecção

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolamento e caracterização de células dendríticas e macrófagos a partir do intestino do rato

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

Isolamento, identificação e purificação de células epiteliais do timo murino

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

As células T Capturar Bactérias por Transinfection das dendríticas

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Caracterização de derivados de monócitos células dendríticas humanas por imagem Citometria de Fluxo: Uma Comparação entre dois protocolos de isolamento de monócitos

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

Geração de células dendríticas derivadas de monócitos humanos a partir de sangue inteiro

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Isolamento de células dendríticas do tracto reprodutivo feminino humano para estudos fenotípica e funcionais

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±

Desenvolvimento e validação de uma única molécula ultra-sensível de matriz Digital ensaio imunossorvente ligado à enzima para humana Interferon-α

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...

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Isolamento e transferência adotiva de sal alta trataram apresentadoras de células dendríticas

Excess dietary salt intake contributes to inflammation and plays a vital role in the development of hypertension. We previously found that ...

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

Isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como Salispheres ou monolayers

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...