Name: use of galleria mellonella as a model organism to study legionella pneumophila infection
Uploaded: 2013-11-22T14:00:00
Duration: 12 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection at JoVE.com

وأيد CR هاردينغ من قبل studentship WT086724 يلكوم ترست.

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

غاليريا mellonella نموذج اليرقات لعدوى البكتيريا المستروحة هو أداة مفيدة لفي الدراسات المجراة المرضية. هنا يظهر أن عددا من جوانب العدوى البلاعم يمكن تلخيصها في G. نموذج mellonella، بما في ذلك دور نقطة / آي سي إم T4BSS في الفوعة وتكرار البكتيرية وتوطين دوت / آي سي إم-المستجيب صدق. بالإضافة إلى ذلك، علينا أن نظهر أن المانع من الأكتين البلمرة الكيميائية يقلل بشكل ملحوظ وفيات اليرقات، ومحاكاة النتائج التي تم الحصول عليها في 47 macophages والأدلة المؤيدة التي تدخيل البكتيريا هو مطلوب ليسبب وفيات اليرقات. سابقا، وقد ثبت أن الاختلافات في الفوعة بين L. سلالات المستروحة ينظر في النماذج عدوى أخرى يمكن التحقق منها في G. مطلوب mellonella وأن تحريض عوامل الفوعة في مرحلة النمو بعد الأسي ل الفوعة البكتيرية <suع&gt; 36، مؤكدا أن G. mellonella هو نموذج مناسب لL. عدوى المستروحة. تحديد كفو من L. المستروحة من اليرقات المصابة إما منفردة أو التهابات مختلطة يزيد كثيرا من فائدة هذا النموذج. سابقا، وقد تم اكتشاف العديد من العوامل التي لها آثار خفية على النسخ المتماثل البكتيرية في نماذج واحدة أو أكثر من العدوى 29،48-51. على الرغم من أن اليرقات لا تمتلك نظام المناعة التكيفية، وجود استجابة مناعية فطرية يوفر اختيار أقوى مقارنة الضامة وحدها، والتي قد تؤدي إلى تضخيم الظواهر خفية. وبالتالي، فمن الممكن أنه في حين أن هذه السلالات ربما لن تؤثر بشكل كبير وفيات اليرقات، فإنها قد تثبت انخفض تكرار البكتيرية أو اللياقة البدنية في G. نموذج mellonella. وكذلك تكرار L. المستروحة في اليرقات، لقد أظهرنا استنزاف كرية دموية كبيرة في وقت متأخر من العدوى. كما L.ومن المتوقع أن ليز الخلايا المضيفة في نهاية دورة النسخ المتماثل الخاص به، وقياس نضوب كرية دموية قد تكون أيضا بمثابة القياس غير المباشر النسخ المتماثل البكتيرية المستروحة. وقد سبق أن ارتبط مع نضوب كرية دموية فيات الحشرات في العدوى 3،52، على الرغم من أن النتائج الأخيرة تشير إلى أن هذه الصورة هي أكثر تعقيدا من الأولى belived 37. في الآونة الأخيرة، وقد تبين أن تجويع اليرقات يؤدي إلى زيادة التعرض للإصابة من خلال قمع الاستجابات المناعية 53. في المقايسات وصفها هنا، واليرقات لا يتغذى طوال مدة الدراسة وليس من المعروف جيدا كيف اليرقات تتغذى سترد على L. عدوى المستروحة. واحدة من مزايا G. mellonella كما كائن النموذج هو سهولة استخراج والكمي للhemocytes من اليرقات المصابة. وقد أظهرت أشرطة الفيديو السابقة أساليب مختلفة لاستخراج hemocytes من الحشرات 54،55 ومع ذلك، فإن التقىهود المقدمة هنا هي بسيطة ومناسبة لمعالجته فورا. مرة واحدة المستخرج، hemocytes يمكن قياسها كميا بسهولة، وتستخدم لالمناعي، المجهر الإلكتروني النافذ 36 أو 56 أو التدفق الخلوي مثقف وأصاب فيفو السابقين 3 السماح للاستجابة الخلايا للإصابة ليتم التحقيق في التفاصيل. هذا يزيد بشكل كبير من المرونة للنموذج. واحد التحذير إلى المناعي في G. mellonella هو إمدادات محدودة من الأجسام المضادة ضد التحقق من صحة G. البروتينات mellonella. ومع ذلك، فقد أظهرت الدراسات خلق أجسام مضادة ضد بروتينات اليرقات 57 و الأجسام المضادة ضد البروتينات المرتبطة المناعة البشري عثر على الاعتراف G. البروتينات mellonella 11 مما يدل على إمكانية المناعي على G. hemocytes mellonella. سهولة G. يسمح للعدوى mellonella السريع، شاشات الإنتاجية المتوسطة التي يمكن أنيمكن استخدامها لمقارنة الفوعة من مختلف الأنواع والسلالات والبكتيريا يمكن استخدامها لمزيد من تحليل عوامل الفوعة التي سبق تحديدها مثل جزيئات الالتصاق 58 أو نظام إفراز نوع 2 59 التي مطلوبة من أجل الفوعة في نماذج أخرى. بالإضافة إلى ذلك، سوف استخدام هذا النموذج تسمح بتحديد وتوصيف مزيد من عوامل الفوعة الرواية بما في ذلك يفرز وtranslocated البروتينات المستجيب. في الآونة الأخيرة، وقد تبين أن فسفوليباز النشاط C من L. المستروحة له دور في G. mellonella الفوعة 60 والمطلوب من البروتين المستجيب دوت / آي سي إم SdhA لالفوعة 37. بالإضافة إلى ذلك، لقد أثبتنا في الآونة الأخيرة أن هناك علاقة بين الظواهر التي لوحظت في G. وmellonella في الماوس سلالة A / J 37. هذا يؤكد قيمة هذه الأداة لتكمل الأوالي البيئية وحيدة الخلية المضيفة ومورينماذج العدوى شمال شرق. وزاي سوف نموذج mellonella تصبح أكثر قيمة في المستقبل، وبمجرد أن التسلسل الجيني اليرقات وسوف تكون متاحة ويتم وضع المزيد من الأدوات الجينية. وتشمل الخطوات في هذا الاتجاه الذي نشر مؤخرا تفاصيل Transcriptome على المناعية ذات الصلة 61 وتشكيل مبادرة للنهوض إسكات الجينات في قشريات الجناح النيابة 62. باستخدام G. mellonella اليرقات، لدينا عدد من بسيطة، قراءات السريع لالفوعة البكتيرية التي يمكن استخدامها لتحقيق التسبب في L. المستروحة. إنشاء هذه المقايسات وفحص أوسع من L. سوف سلالات المستروحة والمصليين زيادة فائدة هذه الأداة الجديدة، وسوف تسهم في فهمنا لL. المستروحة المرضية.

وقد أثبتت النماذج الحيوانية للعدوى لا تقدر بثمن في تحديد عوامل الفوعة البكتيرية. ومع ذلك، فقد اكتسبت نماذج اللافقارية اهتماما متزايدا كبديل عملي لنماذج الثدييات التقليدية للعدوى. يرقات عثة الشمع، يتزايد استخدام غاليريا mellonella لدراسة عدد من مسببات الأمراض البشرية الهامة، بما في ذلك إيجابية الجرام 1 والبكتيريا سالبة الجرام 2،3 والعديد من الفطريات المسببة للأمراض 4،5. باستخدام نموذج الحشرات لديها عدد من المزايا على نماذج الثدييات التقليدية، باعتبارها اللافقارية، G. mellonella لا تخضع لقيود أخلاقية من نماذج الثدييات. بالإضافة إلى ذلك، اليرقات يمكن الحفاظ بسهولة، المصابين عن طريق الحقن بدون تخدير، والخضوع المعالجة مع مثبطات الكيميائية 6 والحفاظ الحضانة عند 37 درجة مئوية 7. ومن المثير للاهتمام، وجود علاقة جيدة بين تسببها العديد من الكائنات الحية الدقيقة في G. ميلوقد أنشئت lonella ونماذج الثدييات العدوى 2،8. زيادة فهم نظام المناعة من G. mellonella ساعدت أيضا في توصيف هذا النموذج الحي. على الرغم من أن الحشرات لم يكن لديك جهاز المناعة التكيفية كما وجدت في الثدييات، لديهم الدفاعات الخلوية وعضدي متطورة بما في ذلك إنتاج الببتيدات المضادة للميكروبات 9. Hemocytes هي الوسيط الرئيسي للدفاعات الخلوية وهم الأكثر عددا نوع من الخلايا الموجودة في الدملمف (أو الدم) من G. mellonella 10، هذه الخلايا هي البالعات المهنية وتؤدي وظائف مشابهة لالضامة الإنسان والعدلات من قبل كل من تناول والمهينة البكتيريا في البلعمة؛ الأكل-الليزوزومية مقصورة 10،11 وتشكيل عقيدات حول غزو البكتيريا، وتقييد النسخ المتماثل جسديا البكتيرية 12. الليجيونيلا المستروحة هو الممرض في الجهاز التنفسي التي تسبب pneumoni شديدةو(مرض الفيالقة) في فئات سكانية حساسة مثل كبار السن أو ضعف المناعة 13. تم العثور على البكتيريا بتواجد مطلق في مصادر المياه من الناحيتين البيئية والتي من صنع الإنسان، حيث هو الممرض الأنواع المختلفة من المياه العذبة الأميبات 14،15. يبقى البكتيريا و يعيد ضمن هذه البالعات المهنية من خلال الاستفادة من مجمع متعدد البروتين المعروف باسم نقطة / آي سي إم (خلل في الاتجار عضية / تكاثر الخلايا) اكتب 4 نظام إفراز (T4SS) لنقل من أكثر من 275 البروتينات المستجيب في الخلية المضيفة 16-20. هذه البروتينات تعمل على تخريب طبيعية مسارات أكلة الخلية المضيفة، مما أدى إلى خلق فجوة تحتوي على البكتيريا (LCV). وLCV يتجنب الانصهار مع الجسيمات الحالة وتجند الشبكة الإندوبلازمية بدلا من ذلك (ER) الحويصلات المشتقة، مما أدى إلى حجرة المتخصصة التي تمثل ER الخام 21،22. L. يعتبر المستروحة مسار عرضي الإنسانogen، ونفس الاستراتيجيات التي تسمح لها لتكرار داخل الأميبات، كما تسمح تكرارها في الضامة السنخية الإنسان 23. وقد اتسمت المضيفين الثدييات كنماذج لعدوى البكتيريا الإنسان بما في ذلك الفئران والخنازير الغينية 24،25. ومع ذلك، فإن الغالبية العظمى من سلالات الفئران المقاومة للعدوى البكتيريا 26 مع استثناء من الفطرية البيضاء A / J الماوس، الذي يتطور، والعدوى ومحدودة ذاتيا خفيفة 24. على الرغم من أن نموذج خنزير غينيا أكثر شبها المرض الإنسان 25، وعدم وجود طفرات وزيادة تكلفة يشجع استخدامها 27. بالإضافة إلى ذلك، تم تطوير عدة نماذج اللافقارية للعدوى البكتيريا المستروحة بما في ذلك انواع معينة ايليجانس 28، الدروسوفيلاميلانوجاستر 29 وعدة أنواع من الأميبات 30-32. ومع ذلك، فإن هذه النماذج لديها نقاط ضعف، الفوعة في C. ايليجانس </em&gt; النظام ليس نقطة / آي سي إم تعتمد 28، مما يحد من فائدة هذا الطراز. وقد أثبت نموذج ذبابة الفاكهة فعالة في التحقيق في عوامل الفوعة البكتيرية 29 ويبدو أن واعدة ولكن هذا النموذج لم تتميز بشكل كامل. الأميبات الخلية واحد من المضيفين البيئية للL. المستروحة وتعتبر مثالية للتحقيق في عمل عوامل الفوعة على المستوى الجزيئي 33 ومع ذلك فهناك العديد من الوسطاء هامة للاستجابة الخلية المضيفة للإصابة الثدييات مثل caspases 34. نقاط الضعف في النماذج القائمة، جنبا إلى جنب مع ارتفاع تكلفة والشواغل الأخلاقية المتصلة التجريب الثدييات، أدى إلى البحث عن غيرها من الكائنات النموذج المناسب 29،35. لقد أثبتنا مؤخرا أن G. mellonella هو نموذج مناسب لL. المستروحة المرضية 36،37. هذا البروتوكول تفاصيل التقنيات التجريبية المستخدمة لتصيبG. جي mellonella اليرقات، وتحليل الأخلاق اليرقات، واستخراج hemocytes عن العد والمناعي وتحديد التكرار من قبل قابلة للحياة كفو يهم من اليرقات المصابة.

<table border="1">
 <tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Material/ Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>ACES yeast extract (AYE) broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>4 g ACES, 4 g yeast extract, 0.4 g &alpha;-ketoglutarate, pH 6.9, 400 ml H2O, autoclaved, 4 ml iron solution*, 4 ml cysteine solution* 
		 *add sterile ingredients after autoclaving</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Charcoal buffered yeast extract (CYE) plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>As above, with the addition of 0.6 g activated charcoal and 6 g agar</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile iron solution (Ferric Pyrophosphate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6526 </td>
			<td>0.6 mM solution, sterile filtered</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile cysteine solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7880</td>
			<td>3.3 mM solution, sterile filtered</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>G. mellonella (waxworms)</td>
			<td>Livefood UK</td>
			<td>W250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-HA-Tetramethyl Rhodamine Isothiocyanate (TRITC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9037</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-Legionella LPS</td>
			<td>Cambridge Biosciences</td>
			<td>PA1-7227 </td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-Rabbit IgG Alexa488</td>
			<td>Jackson Immunoreach</td>
			<td>711-485-152</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I6758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbeccos phosphate buffered saline (D-PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8662</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>R1026</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ammonium chloride (NH4Cl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9434</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Trypan Blue solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D141</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cytochalasin D</td>
			<td>Biomol International</td>
			<td>BML-T109-0001</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>[header]</td>
 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Material</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microtiter Syringe</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>24544</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cell counter, double, Improved Neubauer </td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0926</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For centrifuging plates </td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any microscope with appropriate filters for the required fluorophores</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For viable cell counting </td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Puncture-proof glove</td>
			<td>Turtleskin </td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
 </tbody>
 </table>

use of galleria mellonella as a model organism to study legionella pneumophila infection

الليجيونيلا المستروحة، العامل المسبب لالتهاب رئوي حاد يدعى مرض المحاربين &quot;، هو الممرض الذي يصيب الإنسان مهما ويعيد داخل الضامة السنخية. الفوعة، يتوقف على نظام نقطة / آي سي إم إفراز النوع الرابع (T4SS)، وهو أمر ضروري لإنشاء فجوة متساهلة تكرار المعروفة باسم البكتيريا التي تحتوي على فجوة (LCV). L. يمكن أن تكون على غرار العدوى المستروحة في الفئران ولكن معظم سلالات الفئران ليست متساهلة، مما أدى إلى البحث عن نماذج العدوى الرواية. أظهرنا مؤخرا أن يرقات عثة الشمع من غاليريا mellonella هي مناسبة للتحقيق في L. عدوى المستروحة. G. يستخدم mellonella متزايد لتكون نموذجا للعدوى مسببات الأمراض البشرية وجود علاقة جيدة بين الفوعة العديد من الأنواع البكتيرية في الحشرات والثدييات في النماذج. ومن المكونات الرئيسية من الدفاعات المناعية اليرقات هي hemocytes، والمهنةالبالعات القاعدة الذي يستغرق وتدمير الغزاة. L. المستروحة قادرة على إصابة، تشكيل LCV وتكرار داخل هذه الخلايا. نحن هنا لشرح البروتوكولات لتحليل L. الفوعة المستروحة في G. نموذج mellonella، بما في ذلك كيفية زراعة المعدية L. المستروحة، يمهد للمعالجة اليرقات مع مثبطات، تصيب اليرقات وكيفية استخراج الخلايا المصابة لتقدير والمناعي المجهري. نحن أيضا تصف كيفية قياس تكرار البكتيرية واللياقة البدنية في المقايسات المنافسة. هذه الأساليب تسمح للفحص السريع للالمسوخ لتحديد العوامل الهامة في L. الفوعة المستروحة، واصفا أداة جديدة لمساعدة فهمنا لهذا الممرض المعقدة.

هنا يتجلى أن G. mellonella هو النموذج المناسب، وسهلة الاستخدام لدراسة L. عدوى المستروحة. سابقا وقد تبين أن L. الفوعة المستروحة في الضامة، ونماذج الأميبات الثدييات يعتمد على وجود نظام إفراز دوت / آي سي إم 41-43. G. أصيب mellonella يرقات كما هو موضح أعلاه والفوعة من نوع البرية (WT) وسلالة دوت / آي سي إم التي تعاني من نقص مقارنة. العدوى مع 10 7 كفو من L. أسفرت سلالة المستروحة 130B في وفيات 100٪ في غضون 24 ساعة بعد العدوى (بي). ومع ذلك، فإن L. المستروحة Δ DOTA السلالة، التي ليس لديها نظام إفراز دوت / آي سي إم T4SS وظيفية، وكان عديم الفوعة في هذا الاختبار (الشكل 1). هذا يدل على أن L. الفوعة في المستروحة G. mellonella يعتمد على إزفاء من المستجيبات دوت / آي سي إم، مما يجعل هذا النموذج مناسبة لتوصيفوظيفة هذه البروتينات. في الآونة الأخيرة، فقد تبين أن تثبيط البلعمة بواسطة العلاج مثبط حركة الخلايا زاد susceptibly من اليرقات للعدوى الخميرة المبيضات البيض 6. كما L. المستروحة هو الممرض داخل الخلايا، فقد تقرر تحديد ما إذا كان الإقبال على البكتيريا هو أمر حاسم في التسبب في هذا النموذج. كانت سابقة التجهيز اليرقات مع 10 ميكرولتر من 100 ميكرومتر مثبط حركة الخلايا D (التنمية الشبابية المجتمعية) لمدة 4 ساعة عند 37 درجة مئوية، ثم المصابين 10 7 كفو من WT L. لم 130B المستروحة وفيات رصدها على مدار 24 ساعة العلاج بي مع المانع وحدها لا تؤثر على بقاء اليرقات. ومع ذلك، سابقة التجهيز، اليرقات المصابة عرض أكبر بكثير البقاء على قيد الحياة (P = 0.0066، المفردة T-اختبار) مقارنة مع المعالجة DMSO والحشرات المصابة (الشكل 2). تم إلغاء تأثير العلاج التنمية الشبابية المجتمعية بنسبة 48 بي ساعة (النتائج غير معروضة)، وهذا قد يكون راجعا إلى نصف عمر الدواء في G.mellonella. هذا يدل على أن الإقبال على L. المستروحة إلى G. mellonella hemocytes هو جانب هام من الفوعة الجرثومية. من أجل التحقق من صحة التعبير وتحديد توطين التحت خلوية من البروتين المستجيب في G. mellonella، تم استخراج hemocytes ومعالجتها لالمناعي المجهري. أصيب اليرقات مع WT وΔ DOTA L. المستروحة 130B تعبر عن جزء من المستجيب T4SS محددة جيدا، صدق 41-918، تنصهر إلى 4 علامات HA N-محطة. وقد تجلى هذا المستجيب لربط LCV عبر مجال ملزمة فسفوإينوزيتيد-4-44-الفوسفات. استخدام الألغام المضادة للHA (الحمراء)، ومكافحة البكتيريا (الأخضر) الأجسام المضادة، 4HA-صدق 41-918 مترجمة إلى LCV في hemocytes المصابة (الشكل 3). وقد سبق عرض هذا التعريب في discoideum الأميبات Dictyostelium والضامة في الثدييات 44،45 تؤكد جomparability من هذا الطراز. عادة ما يتم تحديد أهمية البروتينات لالفوعة بمقارنة حركية النمو من النوع البري والبكتيريا متحولة. من أجل متابعة حركية تكرار البكتيرية على مدى الإصابة، تم التضحية ثلاثة اليرقات في كل نقطة زمنية (0، 5، 18، و 24 ساعة بي)، الدملمف جمع وتجميع وCFU/0.1g من الدملمف المستخرج يحدد فيما بعد. بعد تراجع الأولي في 5 ساعة بي، وكفو من البكتيريا WT زيادات تصل إلى 24 ساعة بي ومع ذلك، فإن سلالة Δ DOTA لا يقع تحت تكرارها ويتم مسح في 18 ساعة بي (الشكل 4). قدرة L. منذ فترة طويلة وثقت المستروحة أن يسبب تحلل الضامة في الطريقة التي تعتمد على T4SS 46، ومع ذلك تم إجراء أي دراسات مشابهة في الجسم الحي. تم تحديد تركيز hemocytes المتداولة بنسبة 5، 18، و 24 ساعة بي أصيبوا اليرقات مع WT أو Δ <eم&gt; DOTA L. المستروحة 130B، hemocytes المستخرجة من الحشرات المصابة خلايا قابلة للحياة وعدها باستخدام أسلوب الاستبعاد التريبان الأزرق. في 5 ساعة بي يمكن أن ينظر لا فرق في التهم كرية دموية بين سلالات (الشكل 5). ومع ذلك، في 18 ساعة بي كان هناك انخفاض كبير في تركيز كرية دموية في WT، ولكن ليس Δ DOTA، اليرقات المصابة. هذا الفرق لا تزال قائمة في 24 ساعة بي الانخفاض في عدد كرية دموية، جنبا إلى جنب مع وجود البكتيريا داخل الخلايا كما يراها المناعي، يوحي بأن L. المستروحة يعيد داخل hemocytes ثم lyses لهم، مما يسمح للبكتيريا للخضوع لعدة جولات من النسخ المتماثل. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/50964/50964fig1.jpg" /> الشكل 1. الإصابة L. المستروحة يدفع دوت / آي سي إم التي تعتمد على وفيات اليرقات. أصيب 10 يرقات مع برنامج تلفزيوني وحدها أو 10 <sتصل&gt; 7 كفو من النوع البري (WT) أو Δ DOTA L. المستروحة 130B، حضنت في 37 درجة مئوية لمدة 72 ساعة ووقت وفاة سجلت اليرقات. جميع اليرقات المصابة مع WT يستسلم للإصابة خلال 24 ساعة آخر العدوى (بي)، ولكن كان ينظر أي وفيات في اليرقات تلقيح مع برنامج تلفزيوني وحدها أو سلالة Δ DOTA. النتائج هي متوسط ​​ثلاثة تجارب منفصلة، ​​± الانحراف المعياري. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/50964/50964fig2.jpg" /> الشكل 2. وفيات تعتمد على استيعاب البكتيرية. L. 10 كانت سابقة التجهيز المستروحة اليرقات مع 10 ميكرولتر من 100 ميكرومتر مثبط حركة الخلايا D (التنمية الشبابية المجتمعية) لمدة 4 ساعة عند 37 درجة مئوية ثم المصابين 10 7 WT وفيات رصدها على مدار 24 ساعة بي اليرقات سابقة التجهيز أظهرت معنويا (P = 0.0066، المفردة T-اختبار) انخفاض وفيات. تمثل نتائج شركة طيران الشرق الأوسطن من أربعة في تجارب مستقلة ± الانحراف المعياري مع 10 يرقات لكل حالة. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50964/50964fig3.jpg" /> الرقم 3. التصوير المناعي البروتينات المستجيب في hemocytes المستخرج. انتزعت Hemocytes من اليرقات المصابة مع L. كانت ملطخة المستروحة 130B WT أو Δ DOTA معربا عن 4HA-صدق 41-918 في 5 ساعة خلايا بي استخدام الألغام المضادة للHA (الحمراء)، ومكافحة البكتيريا (الأخضر) الأجسام المضادة والحمض النووي وصمة عار دابي (الأزرق) لتصور النوى. ولوحظ 4HA-صدق 41-918 WT المحيطة بها، ولكن ليس Δ DOTA، والبكتيريا. شريط النطاق 5 ميكرون. <img alt="الرقم 4" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/50964/50964fig4.jpg" /> الشكل 4. L. المستروحة يعيد داخل G. ميلوNELLA بطريقة دوت / آي سي إم تعتمد. أصيب اليرقات مع المستروحة WT أو Δ DOTA L. وعلى 0، 5، 18، و 24 ساعة بي الدملمف من ثلاثة الحشرات المصابة المجمعة، مطلي على لوحات CYE وتحديد كفو و تطبيع لقيحة ووزن الدملمف المستخرج. WT L. المستروحة تكرارها على مدى التجربة في حين تمت تبرئة سلالة Δ DOTA في غضون 18 ساعة بي النتائج هي متوسط ​​ثلاثة تجارب منفصلة ± الانحراف المعياري. <img alt="الرقم 5" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/50964/50964fig5.jpg" /> الرقم 5. عدوى مع WT L. النتائج المستروحة في تدمير كرية دموية كبيرة. انتزعت Hemocytes في 5، 18، و 24 ساعة من بي اليرقات المصابة مع المستروحة WT أو Δ DOTA L. خلايا قابلة للحياة وعدها باستخدام عدادة الكريات. لا فرق فيواعتبر عدد من الخلايا في 5 ساعة بي بين سلالات ولكن في 18 ساعة بي يبقى سوى 15٪ تقريبا من hemocytes في اليرقات المصابة بسلالة WT مقارنة مع سلالة Δ DOTA. النتائج هي متوسط ​​ثلاثة تجارب منفصلة، ​​± الانحراف المعياري.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection at JoVE.com

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

تأسست مؤخرا يرقة عثة الشمع من غاليريا mellonella باعتبارها في الجسم الحي نموذج لدراسة العدوى المستروحة البكتيريا. هنا، علينا أن نظهر التقنيات الأساسية لتوصيف المرضية من البكتيريا في اليرقات، بما في ذلك التلقيح، وقياس الفوعة البكتيرية والتكرار وكذلك استخراج وتحليل hemocytes المصابة.

استخدام<em&gt; غاليريا mellonella</em&gt; كما كائن نموذج لدراسة<em&gt; البكتيريا المستروحة</em&gt; عدوى

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

استخدام متوسط ​​البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في شروط أكثر ملاءمة لالرئة التليف الكيسي

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

والحشرات<em&gt; جاليريا mellonella</em&gt; نموذجا عدوى قوية المعنية بالتحقيق في إمراض البكتيرية

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

على<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة عدم تجانس التمايز بلعم الإنسان والاستقطاب

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

الأعور ربط والبزل التي يسببها تعفن الدم نموذجا لدراسة الالتهام الذاتي في الفئران

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

استخدام<em&gt; الشيجلا الفلكسنرية</em&gt; لدراسة التفاعلات الالتهام الذاتي الهيكل الخلوي

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

إنشاء والأمثل لإعداد إنتاجية عالية لدراسة<em&gt; المكورات العنقودية البشروية</em&gt; و<em&gt; المتفطرة البحرية</em&gt; عدوى نموذجا لاكتشاف المخدرات

Zebrafish are becoming a valuable tool in the preclinical phase of drug discovery screenings as a whole animal model with high throughput screening ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

اللثوية Porphyromonas كما كائن نموذج لتقييم تفاعل البكتيريا اللاهوائية مع خلايا المضيف

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

الزرد نموذجا لتقييم إمكانات المسخية من النطرون

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

البكتيريا المستروحة الخارجي غشاء الحويصلات: عزل وتحليل إمكاناتهم الموالية للالتهابات في الضامة

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...