Name: bone marrow-derived macrophage production
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het CNRS (PICS 2012-2014 naar EG) en door een subsidie ​​van Regione Campania (LR n.5, 28.03.2002 om Giovanna Mottola). Filippo Conti is een fellow van de wetenschappelijke samenwerking Stichting&#39;&#39; Infectiopole Sud.&#39;&#39; Nicola Boucherit is een fellow van het Franse Ministerie van Onderzoek en Technologie. De financieringsbronnen had geen rol in de onderzoeksopzet, dataverzameling, data-analyse, besluit tot publicatie of manuscript voorbereiding.

Ethiek Verklaring Het protocol voor dier administratiekosten werd goedgekeurd door onze institutionele Animal Ethics Committee &quot;Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Experimentele Medico-Chirurgical&quot; (CFREMC, Project vergunning 10-300122013 Eric Ghigo) van Aix-Marseille University in overeenstemming met de regels van decreet nr. 87-848 van 1987/10/19. De experimenten werden uitgevoerd aan de Faculte de Medecine de la Timone (Experimenteren vergunning nummer 13,38...

<ol>
	<li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages:+chaos+revisited.">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li><li>Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4/80.">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li><li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phagosome:+compartment+with+a+license+to+kill.">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li><li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+microbes:+complexity+in+action.">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li><li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte/macrophage+proteomics:+recent+findings+and+biomedical+applications.">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li><li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+bacterial+infections.">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li><li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes.">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li><li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages.">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li><li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing.">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li><li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant.">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li></ol>

De hierin beschreven protocol detailleert een methode om grote aantallen BMDMs produceren. BMDM primaire cellen en de biologische werking en eigenschappen van macrofagen gedifferentieerd uit monocyten omdat er volwassen, in tegenstelling tot macrofaag cellijnen die onvolwassen zijn. BMDMs kunnen worden gebruikt voor genetische screening (RNAi), drug discovery, functionele studies, gastheer-pathogeen interactie studies en vele andere gebieden van onderzoek. De hierin voorgestelde procedure is...

Een belangrijk aspect van macrofagen is hun rol bij aangeboren en adaptieve immuniteit. Vanwege hun vermogen om inerte deeltjes, bacteriën of parasieten fagocyteren, macrofagen zijn een eerste lijn van verdediging tegen vreemde indringers. Eenmaal geïnternaliseerd, zijn microben afgebroken binnen phagolysosomes. Macrofagen ook werving signalen voor en presenteren antigenen sturen naar andere afweercellen, zoals T-lymfocyten. Macrofagen zijn afgeleid van monocyten. Monocyten ontstaan ​​in het beenmerg van myeloïde stamcellen en migreren naar perifere bloed en diverse weefsels waar ze differentiëren tot macrofagen. Geschat wordt dat een gezonde volwassen muis bevat ongeveer 10 8 macrofagen die zijn verdeeld over het lichaam in diverse organen en weefsels (Tabel 1) 1.2. Macrofagen weer grote fenotypische en functionele diversiteit vanwege hun vermogen aan te passen aan hun micromilieu 3,4. De belangrijkste macrophage eigenschap is hun microbicide activiteit, die wordt gedefinieerd door hun vermogen om microben fagocyteren en vernietigen. De fagocytische wordt gedefinieerd door de activering van complexe signaalnetwerken die worden gestimuleerd door microbiële contact, dus macrofagen moduleren genexpressie adequaat in reactie op verschillende stimuli. Na fagocytose worden geëlimineerd microben in een structuur die de fagolysosoom, maar hebben veel pathogene microben strategieën ontwikkeld om de microbicide werking van de macrofagen 5 ondermijnen. De diversiteit van subversie mechanismen die worden gebruikt door verschillende microbiële species is een bewijs van de complexiteit van het proces fagocytaire 6 en fagolysosoom biogenese. Infectieziekten zijn belangrijke problemen voor de volksgezondheid, en tal van mechanismen en moleculen deelnemen aan macrofaag antimicrobiële activiteiten. Verder zijn de doelstellingen van de microbicidal eigenschappen die worden gekaapt door microben blijven onbekend, dus is er een eXplosion van belang in de evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van gastheer-pathogeen interacties die wetenschappelijke aandacht met betrekking tot macrofagen heeft vernieuwd. Momenteel wordt het grootste deel van het onderzoek in het veld gedaan op macrofagen cellijnen, die verschillen van primaire macrofagen in de fagocytoseactiviteit, de cytokinen productie en de regulering van de oxidatieve burst. Bovendien zijn ze minder geschikt voor microscopie. Om de interactie macrofagen-pathogenen te onderzoeken is het aanbevolen om de primaire macrofagen, zoals beenmerg afgeleide macrofagen (BMDMs), die meer fysiologische kenmerken vertonen gebruiken. Bovendien is het mogelijk om te werken aan genetisch gemodificeerde BMDMs, omdat deze direct macrofagen kunnen worden geïsoleerd uit transgene muizen en, met de beschikbaarheid van nieuwe technologieën zoals lentivirale transfectie hun genexpressie profiel kan worden veranderd door overexpressie van de genen of RNA interferentie. Hier beschrijven we een werkwijze murine bone m differentiërenpijl in macrofagen die grote aantallen macrofagen zal 7 dagen voor verschillende functionele analyses uitgevoerd, zoals proteomics 7, transcriptomics 8, intracellulair verkeer bestudeert 9, dynamische studies 10, genetische screens (RNAi) en drug screening 11.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>21969-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>10270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BEM515F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100/20 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td>culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35/10 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow-derived macrophage production

Macrofagen zijn kritische componenten van het aangeboren en adaptieve immuunrespons, en zij zijn de eerste lijn van verdediging tegen vreemde indringers vanwege hun krachtige microbicidal activiteiten. Macrofagen zijn ruim verdeeld door het lichaam en in de lymfoïde organen, lever, longen, maagdarmkanaal, centraal zenuwstelsel, botten en huid. Door hun verdeling, zij aan diverse fysiologische en pathologische processen. Macrofagen zijn zeer veelzijdig cellen die in staat zijn de micro-omgeving veranderingen herkennen en om weefsel homeostase te behouden zijn. Vele pathogenen mechanismen ontwikkeld om macrofagen als Trojaanse paarden overleven repliceren en infecteren mens en dier en verspreiden door het hele lichaam. De recente explosie van interesse in evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van gastheer-pathogeen interacties heeft wetenschappelijke aandacht met betrekking tot macrofagen vernieuwd. Hier beschrijven we eenprocedure voor het isoleren en kweken van murine macrofagen beenmerg dat grote aantallen macrofagen zal voor het bestuderen gastheer-pathogeen interacties en andere processen.

Het doel van deze methode grote aantallen macrofagen gemakkelijk te vinden in een paar dagen. De beenmergcelinjectie bereiding wordt geïllustreerd in Figuur 1. Beenderen van het achterbeen werden verzameld en sloeg in een vijzel. Zodra de bewoner macrofagen werden uit het beenmerg celpreparaat, beenmergcellen werden geïncubeerd met GM-CSF (Dag 0). Na 3 dagen, de cellen, die rond en hechtende voor cultuur waren, beginnen te differentiëren tot macrofagen en hechten (figuur 1A). Cytomet...

Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrofagen zijn lang erkend als een kritische component van het aangeboren en adaptieve immuunsysteem. De recente explosie van kennis met betrekking tot evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van de interactie tussen macrofagen en microben heeft wetenschappelijke aandacht vernieuwd macrofagen. Dit artikel beschrijft een methode om macrofagen te onderscheiden van muizen beenmerg.

Bone Marrow-afgeleide macrofagen Productie

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyste muur Vorming in actieve beenmerg afgeleide Macrofagen en Bradyzoite voorwaarden

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Generatie en etikettering van Muriene Bone Marrow-afgeleide dendritische cellen met Qdot Nanokristallen voor Tracking Studies

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

Onderzoek van Macrophage Polarisatie behulp beenmerg afgeleide Macrofagen

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Isolatie en intraveneuze injectie van muizen beenmerg afgeleide Monocyten

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

Metabole karakterisering van gepolariseerde M1 en M2 Bone Marrow-afgeleide macrofagen met behulp van real-time extracellulaire Flux Analysis

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Murine Hind Limb Long Bone Dissection and Bone Marrow Isolation

Murine Hind Limb Long Bone Dissection en Bone Marrow Isolation

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Zuivering van Intracellulair Grown<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In macrofaag-cellen

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualiseren van extracellulaire Traps Macrophage met behulp van de Confocal Microscopie

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Beoordeling van antilichaam gebaseerde Drugs gevolgen voor lymfkliertest beenmerg en peritoneale Macrophage activering

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...