Name: bone marrow-derived macrophage production
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי CNRS (PICS 2012-2014 לEG) ועל ידי מענק מRegione קמפניה (n.5 LR, -28.03.2002 לג&#39;ובאנה מוטולה). פיליפו קונטי הוא בחור של שיתוף הפעולה המדעי קרן&#39;&#39; Infectiopole Sud.&#39;&#39; ניקולה Boucherit הוא עמית של המשרד הצרפתי למחקר וטכנולוגיה. היו מקורות המימון לא היה תפקיד בעיצוב המחקר, איסוף נתונים, ניתוח נתונים, החלטה לפרסם, או הכנת כתב יד.

הצהרת אתיקה הפרוטוקול לטיפול בבעלי חיים אושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים &quot;גיבוש דה Conseil Scientifique מרכז du et de משוכלל ונדיר הניסויי מדיקו-Chirurgical&quot; המוסדי שלנו (CFREMC, היתר פרויקט 10-300,122,013 לאריק Ghigo) מאוניברסיטת Aix-Marseille בקנה אחד עם הכ...

<ol>
	<li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages:+chaos+revisited.">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li><li>Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4/80.">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li><li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phagosome:+compartment+with+a+license+to+kill.">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li><li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+microbes:+complexity+in+action.">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li><li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte/macrophage+proteomics:+recent+findings+and+biomedical+applications.">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li><li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+bacterial+infections.">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li><li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes.">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li><li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages.">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li><li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing.">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li><li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant.">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li></ol>

הפרוטוקול המתואר במסמך זה מפרט את שיטה להפקת כמויות גדולות של BMDMs. BMDM הם תאים ראשוניים ויש לי את הפונקציה ותכונות של מקרופאגים מובחנים ממונוציטים ביולוגיים כי יש בוגרים, בניגוד לשורות תאי מקרופאג, שהם לא בשלים. BMDMs עשוי לשמש לסינון גנטי (RNAi), הקרנת סמים, מחקרים פונקציונ...

היבט משמעותי של תפקוד מקרופאג הוא תפקידם בחסינות מולדת ובעלי כושר הסתגלות. בגלל היכולת שלהם phagocytose חלקיקים, חיידקים או טפילי אינרטי, מקרופאגים הם קו הגנה ראשון נגד פולשים זרים. הפנים פעם, חיידקים מפורקים בתוך phagolysosomes. המקרופאגים גם לשלוח אותות גיוס ולאנטיגנים הווה לתאים אחרים של מערכת חיסון, כגון לימפוציטים מסוג T. המקרופאגים נגזרים ממונוציטים. מונוציטים מתעוררים במח עצם מתאי גזע מיאלואידית ולהגר לדם היקפי ורקמות שונות שבו הם להתמיין מקרופאגים. הערכה היא כי בעכבר בוגר ובריא מכיל כ 10 8 מקרופאגים שמופצים בכל הגוף באיברים שונים ורקמות (טבלה 1) 1,2. המקרופאגים להציג פנוטיפי גדול ומגוון תפקודי בגלל היכולת שלהם להסתגל ל3,4 microenvironment שלהם. Macrop החשוב ביותררכוש Hage הוא פעילות microbicidal שלהם, אשר מוגדרת על ידי היכולת שלהם phagocytose חיידקים ולהשמיד אותם. תגובת phagocytic מוגדרת על ידי ההפעלה של רשתות איתות מורכבות שהם מגורה על ידי מגע של חיידקים, ולכן, מקרופאגים לווסת ביטוי גנים כראוי בתגובה לגירויים שונים. לאחר phagocytosis, חיידקים בוטלו במבנה שנקרא phagolysosome, עם זאת, רבים חיידקים פתוגניים פיתחו אסטרטגיות לערער את תפקוד microbicidal של מקרופאגים 5. המגוון של מנגנוני חתרנות שמנוצלים על ידי מינים של חיידקים שונים הוא עדות למורכבות תהליך phagocytic 6 וphagolysosome biogenesis. מחלות זיהומיות הן בעיות בריאות אדם גדולות, ומספר רבים של מנגנונים ומולקולות להשתתף בפעילויות מיקרוביאלית מקרופאג. יתר על כן, המטרות של מאפייני microbicidal שנחטפו על ידי חיידקים אינן ידועות, ולכן, יש דוארxplosion עניין בהיבטים אבולוציוניים, גנטיים, והביוכימי של אינטראקציות בין מאכסן לפתוגן שחדש את תשומת לב מדעית לגבי מקרופאגים. נכון לעכשיו, מרבית המחקר בתחום נעשה על שורות תאי מקרופאגים, אשר נבדלות ממקרופאגים העיקריים בפעילות phagocytic, ייצור ציטוקינים והרגולציה של פרץ חמצוני. בנוסף, הם פחות מתאימים למיקרוסקופ. כדי לחקור את מקרופאגים-פתוגנים האינטראקציה מומלץ להשתמש מקרופאגים עיקריים, כגון המקרופאגים מח העצם נגזרו (BMDMs), שמפגינים תכונות פיסיולוגיות יותר. יתר על כן, זה אפשרי לעבוד על BMDMs מהונדס גנטי, כי מקרופאגים אלו עשויים להיות מבודדים ישירות מעכברים הטרנסגניים ו, ​​עם הזמינות של טכנולוגיות חדישות כגון transfection lentiviral, פרופיל ביטוי הגנים שלהם ניתן לשנות על ידי ביטוי יתר של גן או התערבות RNA. כאן אנו מתארים הליך להבדיל מ &#39;עצם Murineחץ לתוך מקרופאגים שיספק מספר גדול של מקרופאגים ב -7 ימים לשונים פונקציונלי ניתוחים כגון פרוטאומיקה 7, transcriptomics 8, סחר תאיים מלומד 9 מחקרים, דינמיים 10, מסכי גנטיים (RNAi) וסמי הקרנת 11.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>21969-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>10270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BEM515F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100/20 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td>culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35/10 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow-derived macrophage production

המקרופאגים הם רכיבים קריטיים של תגובות חיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות, והם קו הגנה הראשון נגד פולשים זרים בשל פעילות microbicidal החזקה שלהם. המקרופאגים מופצים באופן נרחב בכל הגוף ונמצאים באיברים הלימפה, כבד, ריאות, מערכת עיכול, מערכת עצבים מרכזית, עצם, ועור. בגלל חלוקה מחודשת שלהם, הם משתתפים במגוון רחב של תהליכים פיסיולוגיים ופתולוגיים. המקרופאגים הם תאים תכליתיים מאוד שהם מסוגלים לזהות שינויי microenvironmental ולשמור על הומאוסטזיס רקמות. פתוגנים רבים התפתחו מנגנונים להשתמש מקרופאגים כמו סוסים טרויאניים כדי לשרוד, לשכפל, ולהדביק גם בני אדם ובעלי חיים ולהפיץ בכל הגוף. הפיצוץ האחרון של עניין בהיבטים אבולוציוניים, גנטיים, והביוכימי של אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן חידש את תשומת לב מדעית לגבי מקרופאגים. כאן, אנו מתאריםהליך לבודד ולטפח מקרופאגים ממח עצם עכברי שיספק מספר גדול של מקרופאגים לחקר אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן, כמו גם תהליכים אחרים.

מטרתה של שיטה זו הייתה להשיג בקלות מספר גדול של מקרופאגים בכמה ימים. הכנת תא מח העצם מודגמת באיור 1. עצמות מהרגל האחורית נאספו וניפצו במכתש. ברגע שמקרופאגים תושב הוצאו מהכנת התא במח העצם, תאי מח עצם הודגרו עם GM-CSF (יום 0). לאחר 3 ימים, התאים, שהיו עגולים nonadherent ולפנ...

Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Bone Marrow-derived Macrophage Production

המקרופאגים כבר מזמן מוכרים כמרכיב קריטי של תגובות חיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות. הפיצוץ האחרון של ידע הנוגע להיבטים אבולוציוניים, גנטיים, והביוכימי של האינטראקציה בין מקרופגים וחיידקים חידש את תשומת לב מדעית למקרופאגים. מאמר זה מתאר שיטה להבדיל מקרופאגים ממח העצם של עכבר.

מח עצם נגזרות Macrophage הפקה

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma וול gondii ציסטה כינונה ב הופעל מח עצם הנגזרות המקרופאגים והגבלות Bradyzoite

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

הדור וסימון של Murine מח עצם הנגזרות תאים דנדריטים עם nanocrystals Qdot ללימודי מעקב

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

חקירה של קיטוב Macrophage שימוש המקרופאגים נגזרים מח עצם

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

המונוציטים בידוד והזרקה תוך ורידית של Murine מח העצם נגזר

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

אפיון חילוף חומרים של מקוטב M1 והמקרופאגים נגזר מח עצם M2 באמצעות ניתוח תאי שטף בזמן אמת

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Murine Hind Limb Long Bone Dissection and Bone Marrow Isolation

Murine הינד לימב ארוך עצם Dissection ובידוד מח העצם

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA טיהור מן intracellularly Grown<em&gt; חיידקי ליסטריה</em&gt; בתאי Macrophage

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

להמחיש מלכודות חוץ-תאי מקרופאג באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

הערכה של נוגדן מבוססי תרופות השפעות על מח העצם מאתר והפעלה מקרופאג הצפק

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...