Name: bone marrow-derived macrophage production
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00
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이 작품은 CNRS (PICS EG에 2012-2014)에 의해 Regione 캄파니아 (LR의 N.5, 지오 반나 모톨라에 2002년 3월 28일)에서 부여에 의해 지원되었다. 필리포 콘티 과학 협력 재단 &#39;Infectiopole 수드의 동료입니다.&#39;니콜라 Boucherit은 연구 및 기술에 대한 프랑스 정부의 동료입니다. 자금 출처는 연구 설계, 데이터 수집, 데이터 분석, 게시 할 수있는 의사 결정, 또는 원고 준비에 역할을했다.

윤리 정책 규칙에 맞는 엑스 마르세유 대학에서 동물 처리를위한 프로토콜이 우리의 기관 동물 윤리위원회 &quot;헌법위원회 Scientifique 뒤 센터 드 형성 등 드 공들인 실험 의학적 Chirurgical&quot;의 승인을 받았다 (CFREMC, 에릭 Ghigo에 프로젝트 허가 10-300122013) 의 Décret N은 1987년 10월 19일의 87-848을 °. 실험은 Faculté 드 MEDECI​​NE 드 라 티모네 (에릭 Ghigo에 실험 허가 번호 13.385)에서 ?...

<ol>
	<li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages:+chaos+revisited.">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li><li>Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4/80.">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li><li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phagosome:+compartment+with+a+license+to+kill.">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li><li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+microbes:+complexity+in+action.">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li><li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte/macrophage+proteomics:+recent+findings+and+biomedical+applications.">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li><li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+bacterial+infections.">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li><li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes.">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li><li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages.">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li><li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing.">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li><li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant.">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li></ol>

본원에 기재된 프로토콜은 BMDMs 다수 생산하는 방법을 상세. BMDM은 일차 전지이며 미성숙 대 식세포 세포주 달리, 성숙한 있기 때문에 생물학적 기능 및 단핵구로부터 분화 된 대식 세포의 특성을 갖는다. BMDMs는 유전자 검사 (RNAi의), 약물 스크리닝, 기능적 연구 기주 - 연구 및 조사의 많은 다른 분야에 사용될 수있다. 본원에 제시된 절차는 매우 간단하고 특수 장비를 필요로?...

대식 세포 기능의 중요한 측면은 타고난 및 적응 면역에서의 역할입니다. 때문에 불활성 입자, 세균이나 기생충을 탐식하는 그들의 능력으로, 대식 세포는 외국 침략자에 대한 방어의 첫 번째 라인이다. 일단 내면화, 미생물은 phagolysosomes 내에서 분해된다. 대 식세포는 또한 T 림프구 등의 면역 세포에 신규 모집을위한 신호와 현재의 항원을 보낼 수 있습니다. 대 식세포는 단핵 세포에서 파생됩니다. 단핵 세포는 골수 줄기 세포로부터 골수에서 발생하고이 대 식세포로 분화 말초 혈액과 여러 조직으로 마이그레이션 할 수 있습니다. 그것은 건강한 성인 마우스는 다양한 장기와 조직 (표 1) 1, 2에 몸 전체에 분포되어 약 10 8 대 식세포가 포함되어있는 것으로 추정된다. 대 식세포 때문에 자신의 미세 환경의 3,4에 적응하는 능력의 큰 표현형과 기능의 다양성을 표시합니다. 가장 중요한 macrophage 숙박 시설은 미생물을 탐식하고 파괴하는 그들의 능력에 의해 정의됩니다 자신의 살균 활동이다. 식세포 반응은 미생물의 접촉에 의해 자극 된 복잡한 시그널링 네트워크의 활성화에 의해 정의되며, 따라서, 식세포는 다양한 자극에 응답하여 적절하게 유전자 발현을 변조한다. 식균 작용 한 후, 미생물은 phagolysosome라는 구조에서 제거되고 있지만, 많은 병원성 미생물 식세포 5의 살균 기능을 파괴 할 수있는 전략을 개발했습니다. 다른 미생물 종에 의해 이용되는 파괴 메커니즘의 다양성은 식세포 과정 6의 복잡성과 phagolysosome 생합성의 증거입니다. 감염성 질환은 주요 인간의 건강 문제, 그리고 수많은 메커니즘과 분자는 대 식세포의 항균 활동에 참여한다. 또한, 미생물에 의해 납치 된 살균 속성의 목표는 알 그대로 남아 있고, 따라서 전자가대식 세포에 대한 과학적인 관심을 갱신했다 호스트 병원체 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에서 관심 XPLOSION. 현재 필드에서 연구의 대부분은 식세포 활성, 사이토킨 생산 및 산화 적 버스트의 조절에 기본 식세포 다를 대식 세포주에서 수행된다. 또한, 그들은 현미경 덜 적합하다. 상호 작용 식세포 - 병원균을 조사하기 위해 그것은 더 많은 생리적 기능을 나타내는 등 골수 유래 대 식세포 (BMDMs)와 같은 차 대식 세포를 사용하는 것이 좋습니다. 이 대식 세포는 형질 전환 마우스에서 직접 분리하고, 같은 렌티 바이러스 형질 전환과 같은 새로운 기술의 가용성을 할 수 있기 때문에 또한,이 유전자 변형 BMDMs에서 작동 할 수 있으며, 자신의 유전자 발현 프로파일이 유전자 과발현 또는 RNA 간섭에 의해 변경 될 수 있습니다. 여기, 우리는 쥐의 뼈 M을 차별화하는 절차를 설명기능이 같은 단백질 체학 7, transcriptomics 8로 분석하여 다양한위한 7 일에서 대식 세포의 큰 번호를 제공합니다 식세포에 화살표, 세포 내 인신 매매는 9, 동적 스터디 10, 유전 스크린 (RNAi의) 11 심사 약물을 연구.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>21969-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>10270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BEM515F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100/20 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td>culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35/10 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow-derived macrophage production

대 식세포는 타고난 및 적응 면역 반응의 중요한 구성 요소이며, 그들은 때문에 그들의 강력한 살균 활동의 외국 침략자에 대한 방어의 첫 번째 라인이다. 대 식세포가 널리 몸 전체에 분포하고 림프 기관에 존재하는, 간, 폐, 위장관, 중추 신경계, 뼈, 피부. 때문에 그들의 재분할 건들은 생리적 및 병리 적 과정의 넓은 범위에 참여한다. 대 식세포는 미세 환경 변화를 인식하고 조직의 항상성을 유지하기 위해 수있는 매우 다양한 세포입니다. 수많은 병원체 생존에 복제 및 감염 인간과 동물 모두를 몸 전체에 전파하기 위해 트로이 목마로 대식 세포를 사용하는 메커니즘을 진화했다. 호스트 병원체 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에 대한 관심이 최근의 폭발은 대 식세포에 대한 과학적인 관심을 갱신했다. 여기에서, 우리는 설명호스트 병원체 상호 작용을 공부뿐만 아니라 다른 프로세스 대식 세포의 큰 번호를 제공합니다 쥐의 골수에서 대 식세포를 분리 및 배양하는 절차.

이 방법의 목적은 쉽게 몇 일 대식 세포의 큰 숫자를 얻을 수 있었다. 골수 세포의 제조는도 1에 도시되어있다. 뒷다리의 뼈를 수집 및 박격포에서 격돌했다. 상주 식세포는 골수 세포 제제로부터 제거 된 후에, 골수 세포를 GM-CSF (0 일)와 함께 배양 하였다. 3 일 후에, 문화 전 라운드와 비 접착 있던 세포, 대 식세포로 분화 및 (그림 1A)을 준수하기 시작합니다. 세포 계측법 ...

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Bone Marrow-derived Macrophage Production

대 식세포는 긴 타고난 및 적응 면역 반응의 중요한 구성 요소로 인식되고있다. 대식 세포와 미생물 사이의 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에 관한 지식의 최근의 폭발은 대 식세포에 과학적인 관심을 갱신했다. 이 문서에서는 마우스 골수에서 대식 세포를 구별하는 방법을 설명합니다.

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

활성 골수 - 유래 Macrophages과 Bradyzoite Toxoplasma gondii 약관의 낭종의 벽 형성

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

추적 연구 Qdot Nanocrystals와 Murine 골수 파생 돌기 세포의 생성 및 라벨링

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

골수 유래 대 식세포를 사용하여 대식 세포 분극 조사

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

분리 및 설치류 골수의 정맥 주사 유래 단핵구

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Murine Hind Limb Long Bone Dissection and Bone Marrow Isolation

쥐 뒷다리 긴 뼈 해부 및 골수 격리

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA 정제는 세포 내에서 재배<em&gt; 리스테리아</em&gt; 식세포 세포에

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 대 식 세포 세포 외 트랩을 시각화

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Murine 골 복 막 대 식 세포 활성화에 대 한 항 체 기반 약물 효과의 평가

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...