Name: bone marrow-derived macrophage production
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Detta arbete stöddes av CNRS (PICS 2012-2014 till EU) och genom ett bidrag från Regione Campania (LR N.5, 28.03.2002 till Giovanna Mottola). Filippo Conti är en kamrat av vetenskapligt samarbete Foundation&#39;&#39; Infectiopole Sud.&#39;&#39; Nicola Boucherit är en kamrat av det franska ministeriet för forskning och teknik. De finansieringskällor hade ingen roll i studiedesign, datainsamling, dataanalys, beslut att publicera, eller manuskript beredning.

Ethics Uttalande Protokollet för djurhantering godkändes av vårt institutionella Animal etikkommitté &quot;Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Experimentell Médico-kirurg&quot; (CFREMC, projekttillstånd 10-300.122.013 till Eric Ghigo) från Aix-Marseille universitetet i enlighet med de regler i décret nr 87-848 av 1987/10/19. Experimenten utfördes vid Faculté de Medecine de la Timone (Experimentation tillståndets nummer 13,385 till Eric Ghigo). <p class="jo...

<ol>
	<li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages:+chaos+revisited.">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li><li>Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4/80.">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li><li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phagosome:+compartment+with+a+license+to+kill.">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li><li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+microbes:+complexity+in+action.">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li><li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte/macrophage+proteomics:+recent+findings+and+biomedical+applications.">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li><li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+bacterial+infections.">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li><li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes.">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li><li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages.">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li><li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing.">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li><li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant.">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li></ol>

Protokollet som beskrivs häri specificerar en metod för att producera ett stort antal BMDMs. BMDM är primära celler och har den biologiska funktionen och egenskaperna hos makrofager differentierade från monocyter, därför att det är mogna, till skillnad mot makrofag-cellinjer, vilka är omogna. BMDMs kan användas för genetisk screening (RNAi), drog screening, funktionella studier, värd-patogen interaktionsstudier och många andra områden i undersökningen. Det förfarande som pres...

En viktig aspekt av makrofagfunktion är deras roll i medfödd och adaptiv immunitet. På grund av deras förmåga att phagocytose inerta partiklar, bakterier eller parasiter, makrofager är en första försvarslinje mot främmande inkräktare. När internaliseras, är mikrober ned inom phagolysosomes. Makrofager skickar också rekryterings signaler för och presentera antigener till andra immunceller såsom T-lymfocyter. Makrofager är härledda från monocyter. Monocyter uppstår i benmärgen från myeloida stamceller och migrera till perifert blod och olika vävnader där de differentierar till makrofager. Det uppskattas att en frisk vuxen mus innehåller ungefär 10 8 makrofager som distribueras i hela kroppen i olika organ och vävnader (Tabell 1) 1,2. Makrofager visar stora fenotypiska och funktionella mångfald på grund av deras förmåga att anpassa sig till sin mikromiljö 3,4. Den viktigaste macrophage egenskap är deras mikrobicid aktivitet, som definieras av deras förmåga att fagocytera mikrober och förstör dem. Den fagocytiska svar definieras genom aktiveringen av komplexa signaleringsnätverk som stimuleras av mikrobiell kontakt, alltså, macrophages modulera genexpression på lämpligt sätt som svar på olika stimuli. Efter fagocytos är mikrober elimineras i en struktur som kallas phagolysosome, men har många sjukdomsalstrande mikrober utvecklat strategier för att undergräva mikrobicidal funktion av makrofager 5. Mångfalden av subversion mekanismer som utnyttjas av olika mikrobiella arter är ett bevis på komplexiteten i den fagocytiska processen 6 och phagolysosome biogenesis. Smittsamma sjukdomar är stora hälsoproblem, och många mekanismer och molekyler deltar i makrofag antimikrobiella aktiviteter. Vidare är de mål för den mikrobicida egenskaper som kapas av mikrober fortfarande okända, och därför finns det en eXplosion av intresse för de evolutionära, genetiska och biokemiska aspekter av värd-patogen interaktioner som har förnyade vetenskaplig uppmärksamhet rörande makrofager. För närvarande är den största delen av forskningen på området görs på makrofager cellinjer, vilka skiljer sig från primära makrofager i den fagocytiska aktiviteten, cytokiner produktionen och regleringen av den oxidativa skuren. Dessutom är de mindre lämpliga för mikroskopi. För att undersöka de samspelsmakrofager-patogener rekommenderas att använda primära makrofager, som t.ex. benmärg härledda Makrofager (BMDMs), som uppvisar flera fysiologiska funktioner. Dessutom är det möjligt att arbeta på genetiskt modifierade BMDMs, eftersom dessa makrofager kan isoleras direkt från transgena möss och, med tillgång till ny teknik som t.ex. lentiviral transfektion, deras genuttryck profil kan ändras genom gen överuttryck eller RNA-interferens. Här beskriver vi ett förfarande för att skilja murin skelett marrow in i makrofager som kommer att ge ett stort antal makrofager i 7 dagar för olika funktionella analyser såsom proteomik 7, transcriptomics 8, studerar intracellulär människohandel 9, dynamiska studier 10, genetiska skärmar (RNAi) och drog screening 11.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>21969-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>10270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BEM515F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100/20 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td>culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35/10 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow-derived macrophage production

Makrofager är viktiga komponenter i det medfödda och adaptiva immunsvar, och de är den första försvarslinjen mot främmande inkräktare på grund av deras starka mikrobicidala aktiviteter. Makrofager är vitt spridda i hela kroppen och är närvarande i de lymfoida organen, lever, lungor, mag-tarmkanal, centrala nervsystemet, ben och hud. På grund av deras fördelning, de deltar i en mängd olika fysiologiska och patologiska processer. Makrofager är mycket mångsidiga celler som har förmåga att känna igen microenvironmental förändringar och för att upprätthålla vävnads homeostas. Många patogener har utvecklats mekanismer för att använda makrofager som trojanska hästar för att överleva, replikera i och infektera både människor och djur och att propagera genom hela kroppen. Den senaste tidens explosion av intresset för evolutionära, genetiska och biokemiska aspekter av värd-patogen interaktioner har förnyat vetenskaplig uppmärksamhet rörande makrofager. Här beskriver vi enförfarande för att isolera och odla makrofager från murin benmärg som kommer att ge ett stort antal makrofager för att studera värd-patogen interaktioner liksom andra processer.

Syftet med denna metod var att enkelt erhålla ett stort antal makrofager i några dagar. Benmärgen cellberedningen illustreras i figur 1. Ben från bakbenet uppsamlades och krossas i en mortel. När de residenta makrofager avlägsnades från benmärgsceller framställning togs benmärgsceller inkuberades med GM-CSF (dag 0). Efter 3 dagar, cellerna, som var runda och nonadherent innan kulturen börjar att differentiera till makrofager och vidhäftar (Figur 1A). Cytometri analys med F4/...

Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Makrofager har länge setts som en viktig komponent i det medfödda och adaptiva immunsvar. Den senaste tidens explosion av kunskap som rör evolutionära, genetiska och biokemiska aspekter på samspelet mellan makrofager och mikrober har förnyat vetenskaplig uppmärksamhet på makrofager. Denna artikel beskriver en metod för att differentiera makrofager från mus-benmärg.

Härledd från benmärg Macrophage Production

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cysta Wall Bildning i aktiverade härledd från benmärg makrofager och Bradyzoite Villkor

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Generering och märkning av murina härledd från benmärg dendritiska celler med Qdot Nanokristaller för spårning studier

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

Utredning av Makrofag Polarisering Använda benmärg makrofager

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Isolering och intravenös injektion av murin benmärg härledda Monocyter

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

Metabolic karakterisering av polariserat M1 och M2 Benmärgs-härledda makrofager Användning av realtids Extracellulärt Flux Analys

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Bedömning av antikroppsläkemedel effekter på murina benmärg och Peritoneal makrofag aktivering

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Påvisande av Inflammasome aktivering och Pyroptotic celldöd i murina benmärg-derived makrofager

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

En In Vivo musmodell åtgärd naiva CD4 T-cellsaktivering, spridning och Th1 differentiering induceras av benmärgen-derived dendritiska celler

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

Isolering och in vitro-odling av benmärgs-härledda makrofager för studier av NO-redoxbiologi

Macrophages are derived from hematopoietic progenitor cells throughout the body, are central to inflammatory processes, and participate in innate and ...

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

Ekonomiskt och effektivt protokoll för isolering och odling av benmärgs-härledda dendritiska celler från möss

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...