Name: visualization of endoplasmic reticulum subdomains in cultured cells
Uploaded: 2014-02-18T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells at JoVE.com

Forfatterne er takknemlige for Fondazione Filarete for sin hjelp og støtte i publikasjonen av denne artikkelen. Vi vil også gjerne takke Centro Europeo di Nanomedicina for bruk av Tecnai G2 transmisjonselektronmikroskop.

En. Plasmid, Cell Culture, og Transfection med ER Fluorescent Proteiner <ol><li> Plasmidet som anvendes i denne studien består av en forbedret versjon av GFP smeltet ved sin C-terminus til halen region av ER isoformen av rotte cytokrom b (5) (forkortet her som b (5)) via en linker-sekvens. Halen regionen inneholder hele sekvensen (Pro94-Asp134) som forblir membranassosiert etter trypsin-spalting av nativt b (5), blant annet av 17-residuet TMD (transmembrane domene), flankert av oppstrøms-og nedstrøms polare sekvens...

<ol>
	<li>Fasana, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+VAPB+mutant+linked+to+amyotrophic+lateral+sclerosis+generates+a+novel+form+of+organized+smooth+endoplasmic+reticulum.">A VAPB mutant linked to amyotrophic lateral sclerosis generates a novel form of organized smooth endoplasmic reticulum.</a> FASEB J. 24, 1419-1430 (2010).</li><li>Borgese, N., Francolini, M., Snapp, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+architecture:+structures+in+flux.">Endoplasmic reticulum architecture: structures in flux.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 18, 358-364 (2006).</li><li>Ronchi, P., Colombo, S., Francolini, M., Borgese, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmembrane+domain-dependent+partitioning+of+membrane+proteins+within+the+endoplasmic+reticulum.">Transmembrane domain-dependent partitioning of membrane proteins within the endoplasmic reticulum.</a> J. Cell Biol. 181, 105-118 (2008).</li><li>Lippincott-Schwartz, J., Snapp, E., Kenworthy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+protein+dynamics+in+living+cells.">Studying protein dynamics in living cells.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 444-456 (2001).</li><li>Lee, M. C., Miller, E. A., Goldberg, J., Orci, L., Schekman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-directional+protein+transport+between+the+ER+and.">Bi-directional protein transport between the ER and.</a> 20, 87-123 (2004).</li><li>Snapp, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+stacked+ER+cisternae+by+low+affinity+protein+interactions.">Formation of stacked ER cisternae by low affinity protein interactions.</a> J. Cell Biol. 163, 257-269 (2003).</li><li>Papiani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restructured+endoplasmic+reticulum+generated+by+mutant+amyotrophic+lateral+sclerosis-linked+VAPB+is+cleared+by+the+proteasome.">Restructured endoplasmic reticulum generated by mutant amyotrophic lateral sclerosis-linked VAPB is cleared by the proteasome.</a> J. Cell Sci. 125, 3601-3611 (2012).</li><li>Almsherqi, Z. A., Kohlwein, S. D., Deng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cubic+membranes:+a+legend+beyond+the+Flatland*+of+cell+membrane+organization.">Cubic membranes: a legend beyond the Flatland* of cell membrane organization.</a> J. Cell Biol. 173, 839-844 (2006).</li><li>Federovitch, C. M., Ron, D., Hampton, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamic+ER:+experimental+approaches+and+current+questions.">The dynamic ER: experimental approaches and current questions.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 17, 409-414 (2005).</li><li>Takei, K., Mignery, G. A., Mugnaini, E., Sudhof, T. C., De Camilli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inositol+1,4,5-trisphosphate+receptor+causes+formation+of+ER+cisternal+stacks+in+transfected+fibroblasts+and+in+cerebellar+Purkinje+cells.">Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor causes formation of ER cisternal stacks in transfected fibroblasts and in cerebellar Purkinje cells.</a> Neuron. 12, 327-342 (1994).</li><li>Feldman, D., Swarm, R. L., Becker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+study+of+rat+liver+and+liver+neoplasms+after+long-term+treatment+with+phenobarbital.">Ultrastructural study of rat liver and liver neoplasms after long-term treatment with phenobarbital.</a> Cancer Res. 41, 2151-2162 (1981).</li><li>Sprocati, T., Ronchi, P., Raimondi, A., Francolini, M., Borgese, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+and+reversible+restructuring+of+the+endoplasmic+reticulum+induced+by+PDMP+in+cultured+cells.">Dynamic and reversible restructuring of the endoplasmic reticulum induced by PDMP in cultured cells.</a> J. Cell Sci. 119, 3249-3260 (2006).</li><li>Costantini, L. M., Fossati, M., Francolini, M., Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+tendency+of+fluorescent+proteins+to+oligomerize+under+physiologic+conditions.">Assessing the tendency of fluorescent proteins to oligomerize under physiologic conditions.</a> Traffic. 13, 643-649 (2012).</li><li>Pyszniak, A. M., Welder, C. A., Takei, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+distribution+of+high-avidity+LFA-1+detected+by+soluble+ICAM-1-coated+microspheres.">Cell surface distribution of high-avidity LFA-1 detected by soluble ICAM-1-coated microspheres.</a> J. Immunol. 152, 5241-5249 (1994).</li><li>Taylor, J. P., Hardy, J., Fischbeck, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+proteins+in+neurodegenerative+disease.">Toxic proteins in neurodegenerative disease.</a> Science. 296, 1991-1995 (2002).</li><li>Winklhofer, K. F., Tatzelt, J., Haass, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+two+faces+of+protein+misfolding:+gain-+and+loss-of-function+in+neurodegenerative+diseases.">The two faces of protein misfolding: gain- and loss-of-function in neurodegenerative diseases.</a> EMBO J. 27, 336-349 (2008).</li><li>Borgese, N., Gazzoni, I., Barberi, M., Colombo, S., Pedrazzini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+a+tail-anchored+protein+to+endoplasmic+reticulum+and+mitochondrial+outer+membrane+by+independent+but+competing+pathways.">Targeting of a tail-anchored protein to endoplasmic reticulum and mitochondrial outer membrane by independent but competing pathways.</a> Mol. Biol. Cell. 12, 2482-2496 (2001).</li><li>Chudakov, D. M., Matz, M. V., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+and+their+applications+in+imaging+living+cells+and+tissues.">Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues.</a> Physiol Rev. 90, 1103-1163 (2010).</li><li>Bancaud, A., Huet, S., Rabut, G., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+perturbation+techniques+to+study+mobility+and+molecular+dynamics+of+proteins+in+live+cells+FRAP,+photoactivation,+photoconversion,+and+FLIP.">Fluorescence perturbation techniques to study mobility and molecular dynamics of proteins in live cells FRAP, photoactivation, photoconversion, and FLIP.</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, (2010).</li><li>Michida, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+endothelin+1+in+hemorrhagic+shock-induced+gastric+mucosal+injury+in+rats.">Role of endothelin 1 in hemorrhagic shock-induced gastric mucosal injury in rats.</a> Gastroenterology. 106, 988-993 (1994).</li></ol>

Protokollene og bildebehandling tilnærminger beskrevet i denne artikkelen har blitt brukt til å undersøke utbredelse og mobilitet av transfekterte TA fluorescerende proteiner bosatt i ER av levende celler. Vi har også analysert virkningen av over-ekspresjon av disse proteinene på arkitekturen av denne subcellulære rommet ved hjelp av ultra analyser. Kombinasjonen av live-cell confocal bildebehandling og elektronmikroskopi representerer er et veldig kraftig middel til å undersøke de d...

Oppdagelsen av grønt fluorescerende protein (GFP) og dets spektrale varianter, og den parallelle utviklingen av fluorescens mikroskopi, har åpnet opp helt nye muligheter for etterforskningen av protein atferd i cellene. Teknikker slik som fluorescens gjenvinning etter photobleaching (FRAP) og fluorescens tap i photobleaching (FLIP), noe som er mulig på grunn av den iboende kapasitet av fluoroforer til å slukke deres fluorescens under intens belysning, er basert på konfokal levende celler avbildning og bruk av transfekterte fluorescerende fusjon proteiner 1-3. De er mye brukt for å vurdere ikke bare lokalisering av proteiner, men også deres mobilitet og vesikulært transport, som kan avsløre viktige ledetråder om deres funksjon 4. Det unike med eukaryote celler er tilstedeværelsen av intracellulære rom som har bestemte lipid-og proteinsammensetningen. Selv om organeller er fysisk isolated, at de trenger å kommunisere med hverandre og dele molekylære komponenter for å opprettholde cellulær homeostase. Eliminasjonen garanterer at proteiner og lipider syntetisert i ER når den riktige endelige bestemmelsessted hvor de utøver sin funksjon. Intracellulære organeller kan også være forbundet med dynamiske kontaktsider som tillater molekyler (lipider) som skal direkte vekslet mellom avdelinger. Videre har mange proteiner har til sammen i store heteromeric komplekser eller knyttet til bestemte lipid arter (lipid flåter / microdomains) for å bli funksjonelt aktiv eller å bli fraktet til sin endelige destinasjon. Alle disse biologiske aspekter i stor grad påvirker de kinetiske egenskaper av proteiner, og kan derfor være hensiktsmessig undersøkes ved hjelp av de teknikker som er beskrevet nedenfor. Vår gruppe har mye brukt FRAP og Flip kombinert med elektronmikroskopi for å studere arkitektur av ER og dens forskjellige subdomener. ER er den første stasjonen i sekresjonssporet og spiller en nøkkelrolle i protein og lipid sortering fem. Det er en svært dynamisk organeller som tydelig underdomener reflektere sine mange forskjellige funksjoner (dvs. protein og lipid biosyntese og menneskehandel, protein folding, Ca 2 + lagring og slipp, og xenobiotic metabolisme). Imidlertid, selv om de er morfologisk, romlig og funksjonelt distinkte, disse domenene er kontinuerlige med hverandre, og deres relative overflod kan modifiseres på celler under fysiologiske og patologiske tilstander. Den best kjente og vanligvis romlig atskilte områder av ER er atom konvolutten, og glatt og ru ER, men har vi og andre har vist at det er ER strukturer med en mer forseggjort arkitektur og tredimensjonale organisasjon i forskjellige celletyper, og vev under fysiologiske betingelser, som også kan induseres ved hjelp av stressende stimuli som hypoksi, medikamentadministrasjon, eller over-uttrykk for ER-resident transmembrane proteiner 2,6 (og referanser deri). Vi har også nylig vist nærværet av slike strukturer i cellemodeller av humane sykdommer 1,7. Stammer fra den stablet cisternae av glatt ER, ble de gitt samlebetegnelsen for organisert glatte endoplasmatiske retikulum (OSER) i 2003 6, selv om de er også kjent som karmellae, lameller, og Krystalloide ER på grunnlag av sin arkitektur som i likhet med sin størrelse, kan variere. Etter at cellene er transfektert med GFP kondensert til den cytosoliske region av tail-ankret (TA) ER-resident proteiner (d EGFP-ER), den svakt dimerizing tendensen av GFP i trans endrer dramatisk organiseringen og strukturen av ER. FRAP og FLIP eksperimenter viste at d EGFP-ER er gratis å spre innenfor OSERs, og det faktum at den beveger seg fra den retikulære ER til OSER og vice versa &lt;/ Em&gt; viser at aggregatene er kontinuerlig med den omkringliggende retikulære ER. Ultrastructural analyse har tillatt oss å relatere fluorescens data med en detaljert beskrivelse av OSER arkitektur og organisasjon på nanoskala nivå: OSERs er alltid laget opp av stabler av paret cisternae av glatt ER, men kan ha ulike former for romlig organisering, for eksempel jevnlig arrangert sinusformet matriser eller spinnehjul, eller sekskantede &quot;krystalloide&quot; tubular arrays. Disse rearrangements føre til kubikk morfologi 8 som, som de har blitt funnet i celler under fysiologiske forhold 9 og følgende påkjenninger som hypoksi 10, medikamentell behandling 11, og kreft 9, kan ha betydelig potensial som ultrastructural markører. Etter denne første demonstrasjonen ved hjelp av GFP fusjon proteiner, brukte vi bildebehandling eksperimenter å analysere spredning av ER domener som svar på farmakologisk behandling 12, assess tendensen av fluorescerende proteiner til oligomerise i cellene 13, og for å undersøke hvilken rolle en mutant, ALS-linked TA protein i dannelsen av intracellulære aggregater av ER opprinnelse som kan være relevante for sin patogenitet 1,8. Det har blitt foreslått at dannelsen av intracellulære aggregater (som forekommer i mange nevrodegenerative sykdommer 14) kan være en beskyttende mekanisme utformet for å forhindre interaksjoner mellom toksiske mutante proteiner og de ​​omliggende cellekomponenter 15. Det som følger er en beskrivelse av en kombinasjon av optiske og elektronmikroskopi metoder for å undersøke konstruksjoner som C-terminal hydrofobe domener er satt inn i membranen av akuttmottaket, og en analyse av deres dynamiske oppførsel og virkningene av deres overuttrykk på ER domene Arkitekturen i dyrkede celler (se figur 1 for et flytskjema av den eksperimentelle protokollen).

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41966029</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle medium (DMEM) w/o phenol red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>31053028</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>jetPEI</td>
			<td>Polyplus Transfection</td>
			<td>PP10110</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>OxyFluor</td>
			<td>Oxyrase Inc.</td>
			<td>OF-0005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glutaraldehyde Grade I</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5882</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium Cacodylate Trihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Osmium Tetroxide 4% solution</td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>19150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Uranyl Acetate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>73943</td>
			<td>slightly radioactive</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Propylene Oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>82320</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EPON embedding medium kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45359-1EA-F</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Lead Citrate </td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>17800</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bench top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415 D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectral Confocal Microscope </td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CO2 Microscope Cage Incubation System </td>
			<td>OkoLab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ultramicrotome </td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Diamond knife </td>
			<td>Diatome</td>
			<td>Ultra 45 &deg;</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Transmission Electron Microscope </td>
			<td>FEI</td>
			<td>Tecnai G2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>GraphPad Prism Software</td>
			<td>GraphPad Software, Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>steel culture cell chamber for 24 mm coverslip</td>
			<td>Bioscience Tools</td>
			<td>CSC-25</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Electron Microscopy grids</td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>G300Cu</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

visualization of endoplasmic reticulum subdomains in cultured cells

De lipider og proteiner i eukaryotiske celler er kontinuerlig utvekslet mellom cellekamre, selv om disse beholder sin karakteristiske sammensetning og funksjon til tross for den intense interorganelle molekyl trafikk. Teknikkene som beskrives i denne artikkelen er kraftige virkemidler for å studere protein og lipid mobilitet og trafficking in vivo og i deres fysiologiske miljø. Fluorescens restitusjon etter photobleaching (FRAP) og fluorescens tap i photobleaching (FLIP) er mye brukt direkte-celle avbildningsteknikker for å studere intracellulær trafikkering gjennom exo-endocytoseveien, kontinuiteten mellom organeller eller subcompartments, dannelsen av proteinkomplekser og protein lokalisering i lipid microdomains, kan alle bli observert under fysiologiske og patologiske tilstander. Begrensningene av disse metodene er i hovedsak på grunn av bruk av fluoriserende fusjon proteiner, og deres potensielle ulemper inkluderer kunstig over-expression i celler og muligheten for forskjeller i folding og lokalisering av kodede og native proteiner. Til slutt, som grense for oppløsning av optisk mikroskopi (ca. 200 nm) ikke tillater undersøkelse av den fine struktur av ER eller de spesifikke subcompartments som kan stamme fra cellene under stress (dvs. hypoksi, legemiddeladministrering, på over-ekspresjon av transmembrane ER bosatt proteiner) eller under patologiske tilstander, kombinerer vi live-cell avbildning av dyrkede transfekterte celler med ultrastructural analyser basert på transmisjonselektronmikroskopi.

Figur 2 viser et eksempel FRAP studie av protein mobilitet. Mobiliteten av d EGFP-ER protein er demonstrert av den raske fluorescens restitusjon etter photobleaching i bleket OSERs. For den kvantitative analysen ble den halve tid og mobile fraksjon avledet fra eksperimentelt målte data ved å montere følgende monoexponential ligning: F (t) = F innlegget + (F rec-F innlegg) (1-e-t / τ) der ...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells at JoVE.com

Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells

Vi beskriver de bildedannende metoder vi bruker for å undersøke fordelingen og bevegelsesfrihet av de transfekterte fluorescerende proteiner resident i det endoplasmatiske retikulum (ER) ved hjelp av konfokal avbildning av levende celler. Vi har også ultrastructurally analysere effekten av sitt uttrykk på arkitekturen i denne subcellulære rommet.

Visualisering av endoplasmatiske retikulum underdomener i dyrkede celler

The lipids and proteins in eukaryotic cells are continuously exchanged between cell compartments, although these retain their distinctive composition and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. A ...

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal (ICC) Network in Mice

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal ICC Network in Mice

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Visualisering av endoplasmatisk retikulum Lokalisert mRNAs i pattedyrceller

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

Chromosome Preparation From Cultured Cells

Kromosom Forberedelse Fra dyrkede celler

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport i Helstøpt<em&gt; Drosophila</em&gt; Celler: S2 Cell Line og Primær nevroner.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualisering av G3BP Stress Granulat Dynamics i Levende primære celler

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Massively Parallel Reporter Assays in Cultured Mammalian Cells

Massivt Parallelle Reporter Analyser i dyrkede pattedyrceller

The genetic reporter assay is a well-established and powerful tool for dissecting the relationship between DNA sequences and their gene regulatory ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Lokal Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Signaler i dyrkede pattedyrceller

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Overvåking endoplasmic nettet kalsiumhomeostase Ved hjelp av en<em&gt; Gaussia</em&gt; Luciferase SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Måling av kalsium svingninger i løpet av sarkoplasmatisk retikulum av dyrkede glatte muskelceller Bruke FRET basert Confocal Imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...