Name: in utero measurement of heart rate in mouse by noninvasive m-mode echocardiography
Uploaded: 2013-11-22T15:00:00
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Agradecemos Manon Laprise para treinamento em ecocardiografia e Ann Chamberland para tirar as fotos mostradas nas Figuras 1 e 2. Este trabalho foi financiado pela Canadian Institutes of Health Research concessão 44363 MOP e Canadá Presidente 950-216684.

Todos os procedimentos mostrados neste protocolo ter sido aprovado pelo Comitê Animal Care a IRCM. 1. O ultra-som do sistema e estação de preparação <ol><li> Inicie o sistema de imagiologia de ultra-sons e ligar a cabeça da sonda, assim como a unidade controladora da fisiologia de acordo com as instruções do fabricante (Figura 1). Escolha cardíaca Programa de medição e a cabeça da sonda que corresponde ao transdutor 30 MHz. </li><li> Encha o revólver da cabeç...

<ol>
	<li>Hoffman, J. I., Kaplan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+congenital+heart+disease.">The incidence of congenital heart disease.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 39, 1890-1900 (2002).</li><li>Miller, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+brain+development+in+newborns+with+congenital+heart+disease.">Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease.</a> N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).</li><li>Bruneau, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+genetics+of+congenital+heart+disease.">The developmental genetics of congenital heart disease.</a> Nature. 451, 943-948 (2008).</li><li>Wessels, A., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+anatomy+of+the+heart:+a+tale+of+mice+and.">Developmental anatomy of the heart: a tale of mice and.</a> 15, 165-176 (2003).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ENU+induced+mutations+causing+congenital+cardiovascular+anomalies.">ENU induced mutations causing congenital cardiovascular anomalies.</a> Development. 131, 6211-6223 (2004).</li><li>Seidah, N. G., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+therapeutic+targeting+of+the+proprotein+convertases.">The biology and therapeutic targeting of the proprotein convertases.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 11, 367-383 (2012).</li><li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+ventral+closure+and+axial+rotation+in+embryos+lacking+the+proprotein+convertase+Furin.">Failure of ventral closure and axial rotation in embryos lacking the proprotein convertase Furin.</a> Development. 125, 4863-4876 (1998).</li><li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+redundancy+of+the+proprotein+convertase+furin+in+mouse+liver.">Limited redundancy of the proprotein convertase furin in mouse liver.</a> J. Biol. Chem. 279, 53442-53450 (2004).</li><li>Kisanuki, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tie2-Cre+transgenic+mice:+a+new+model+for+endothelial+cell-lineage+analysis+in+vivo.">Tie2-Cre transgenic mice: a new model for endothelial cell-lineage analysis in vivo.</a> Dev. Biol. 230, 230-242 (2001).</li><li>Kim, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+endothelial+furin+leads+to+cardiac+malformation+and+early+postnatal+death.">Loss of endothelial furin leads to cardiac malformation and early postnatal death.</a> Mol. Cell Biol. 32, 3382-3391 (2012).</li></ol>

-Ecocardiograma modo M é um método simples e eficaz para medir a freqüência cardíaca útero de embriões de camundongos. Transdutores disponíveis comercialmente fornecer resolução suficiente para visualizar pequenos corações batendo. Assim, eles permitem que a medição da frequência cardíaca de alta precisão, em comparação com outros métodos, como a medição de pulso, e pode substituir a microscopia de vídeo de alta resolução. Contudo, as ferramentas atuais não permitem a análise...

CHD é a causa não infecciosa mais comum de morte no nascimento 1. Várias cirurgias são muitas vezes necessárias para corrigir as deficiências estruturais em indivíduos cuja qualidade de vida pode ficar comprometida 1. Crianças com CHD freqüentemente desenvolvem distúrbios neurológicos, mesmo que não tenham sido submetidos a cirurgia, indicando importante em conseqüências útero em desenvolvimento 2,3. Ambos os fatores genéticos e ambientais, como a exposição a vírus ou produtos químicos (álcool) durante a gravidez, causa CHD. Estudar os contribuintes genéticos ainda está em sua fase inicial, mas crescendo rapidamente. Para identificar esses contribuintes e compreender o seu papel no desenvolvimento do coração, fenotipagem ratos mutantes com uma ferramenta simples e poderosa será altamente benéfico. Mouse é na verdade um modelo animal de escolha para estudar CHD, ea maioria dos casos humanos podem ser reproduzidas em camundongos 4,5. Consequentemente, rato fetal fenotipagem cardíaca tornou-se increasingly importante investigar a etiologia da doença coronária humana e requer ferramentas adequadas. Embora os estudos histológicos em espécimes fixados são de valor inestimável, imagens em tempo real de animais vivos é crucial para compreender a fisiologia do coração. Microscopia de vídeo oferece imagens ao vivo. No entanto, requer laparotomia para expor os embriões, comprometendo assim o seu estado fisiológico e hemodinâmico. Recentemente, tornou-se a ecocardiografia técnica de imagem padrão para as avaliações cardíacas na clínica, bem como em ratinhos. Rato ecocardiografia fetal é realizado com sistemas de ultra-som clínicos padrão, bem como sistemas de ultra-som ultra-alta freqüência. O último fornecer 30 MHz ou transdutores de frequências mais altas que geram imagens bidimensionais e permitem a avaliação das fases embrionárias precoces. Estes transdutores tem uma profundidade de penetração relativamente pobre (~ 13 mm), o que é, no entanto, suficiente para obter planos de imagiologia adequadas e determinar aa medula fundamentaltros, como a frequência cardíaca, o diâmetro interno do ventrículo esquerdo e direito na diástole e sístole e septo e espessura da parede, sem a realização de laparotomia. Em nosso estudo, nós usamos um sistema de ultra-som ultra-alta freqüência para avaliar a freqüência cardíaca de embriões de camundongos em E18.5 dia embrionário. Escolhemos um transdutor de 30 MHz, que proporciona um campo de visão de 20 mm x 20 mm, o que é ideal, dado o tamanho dos fetos, com uma distância focal de 12,7 mm. No entanto, um transdutor de frequência mais elevada pode ser escolhida para analisar as fases precoces do desenvolvimento. O M-modo selecionado permite a visualização de tecidos em movimento, graças a uma alta resolução temporal de 1000 frames / seg. O procedimento completo é simples e deve ser realizado tão rapidamente quanto possível para evitar qualquer perturbação dos estados fisiológicos e hemodinâmicos do feto. A análise de embriões de cerca de 8 exige cerca de 1 hora.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:164px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:160px;">Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td>
			<td style="width:104px;">CP0406v2</td>
			<td style="width:163px;">1-chloro-2,2,2-trifluoroethyl difluoromethyl ether</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ultrasound gel</td>
			<td>Parker Laboratories Inc.</td>
			<td>Aquasonic Clear</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Electrode gel</td>
			<td>Parker Laboratories Inc.</td>
			<td>Spectra 360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ophthalmic gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>Tear-Gel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Depilatory cream</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co., Inc.</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Gauze/cotton swap</td>
			<td>Q-tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Permanent marker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:164px;">High-Resolution In vivo Ultrasound Imaging System</td>
			<td style="width:160px;">Visual Sonics</td>
			<td style="width:104px;">Vevo770</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">30 MHz Transducer</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td>RMV707B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:164px;">Imaging platform and physiology controller unit</td>
			<td>Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Anesthetic System</td>
			<td>Cyprane North America Inc.</td>
			<td>312462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Infrared heating lamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in utero measurement of heart rate in mouse by noninvasive m-mode echocardiography

A doença cardíaca congênita (DCC) é a causa não infecciosa mais freqüente de morte ao nascer. A incidência de doença coronariana varia de 4 a 50/1, 000 nascimentos (doença e estimativas regionais lesão, Organização Mundial da Saúde, 2004). Cirurgias que muitas vezes comprometem a qualidade de vida são necessárias para corrigir defeitos do coração, lembrando-nos da importância de encontrar as causas da doença coronariana. Modelos de ratos mutantes e tecnologia de imagem ao vivo tornaram-se ferramentas essenciais para o estudo da etiologia da doença. Embora os métodos avançados permitem imagens ao vivo de corações anormais em embriões, os estados fisiológicos e hemodinâmicos destes últimos são muitas vezes comprometida devido a procedimentos cirúrgicos e / ou prolongados. Imagiologia de ultra-sons não-invasivo, no entanto, pode ser usado sem expondo cirurgicamente os embriões, mantendo assim a sua fisiologia. Aqui, nós usamos simples ultrassom modo-M para avaliar a freqüência cardíaca de embriões em E18.5 no útero. A detecção de ritmos cardíacos anormais é realmente uma boa indicator de disfunção do coração e, portanto, constitui uma primeira etapa na identificação de defeitos de desenvolvimento que podem levar a insuficiência cardíaca.

O método acima foi utilizado para avaliar o impacto da presença ou ausência da furina serina-protease em células endoteliais em frequências cardíacas de embriões de ratinho no E18.5 no útero. Furina pertence à família das convertases pró-proteína (PCs) que os precursores de proteína clivam depois de resíduos básicos. Furina e seus substratos são proteínas secretoras e clivagem pode ocorrer no aparelho de Golgi, endossomas ou na superfície da célula. Substratos chave de furina incluem TGFb, e ...

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In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

Ultra-alta freqüência ultra-som é uma ferramenta de imagem ao vivo poderoso para examinar anormalidades cardíacas em pequenos animais. Sua noninvasiveness permite manter o estado fisiológico de embriões. Aqui, vamos mostrar o uso do M-modo ultra-som para medir os batimentos cardíacos de embriões em E18.5 no útero.

Na medição utero da frequência cardíaca em rato por não invasiva em modo M Ecocardiografia

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

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