Name: using microfluidics chips for live imaging and study of injury responses in drosophila larvae
Uploaded: 2014-02-07T14:00:00
Duration: 11 min 46 s
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यह काम (सीएसी करने के द्वारा करने के लिए R00MH080599, नेकां के लिए R21 NS062313, और NS069844) के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या सीएसी करने IOS-0842701), और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया. हम तकनीकी समर्थन के लिए जेम्स SCHUTT, एमिली हान, और लेनी Truong स्वीकार करना, और मक्खी लाइनों के लिए ब्लूमिंगटन स्टॉक केन्द्र होगा. सभी चिप्स मिशिगन विश्वविद्यालय में Lurie Nanofabrication सुविधा पर गढ़े गए थे.

<ol>
	<li>Pilling, A. D., Horiuchi, D., Lively, C. M., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-1+and+Dynein+are+the+primary+motors+for+fast+transport+of+mitochondria+in+Drosophila+motor+axons.">Kinesin-1 and Dynein are the primary motors for fast transport of mitochondria in Drosophila motor axons.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2057-2068 (2006).</li><li>Gunawardena, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40, 25-40 (2003).</li><li>Miller, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+demonstrates+that+Liprin-alpha+is+required+for+trafficking+of+synaptic+vesicles.">Direct observation demonstrates that Liprin-alpha is required for trafficking of synaptic vesicles.</a> Curr. Biol. 15, 684-689 (2005).</li><li>Zito, K., Parnas, D., Fetter, R. D., Isacoff, E. Y., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Watching+a+synapse+grow:+noninvasive+confocal+imaging+of+synaptic+growth+in+Drosophila.">Watching a synapse grow: noninvasive confocal imaging of synaptic growth in Drosophila.</a> Neuron. 22, 719-729 (1999).</li><li>Fuger, P., Behrends, L. B., Mertel, S., Sigrist, S. J., Rasse, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+synapse+development+and+measuring+protein+dynamics+using+two-color+fluorescence+recovery+after+photo-bleaching+at+Drosophila+synapses.">Live imaging of synapse development and measuring protein dynamics using two-color fluorescence recovery after photo-bleaching at Drosophila synapses.</a> Nat. Protoc. 2, 3285-3298 (2007).</li><li>Schmid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+site-specific+changes+of+glutamate+receptor+composition+in+vivo.">Activity-dependent site-specific changes of glutamate receptor composition in vivo.</a> Nat. Neurosci. 11, 659-666 (2008).</li><li>Fuentes-Medel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glia+and+muscle+sculpt+neuromuscular+arbors+by+engulfing+destabilized+synaptic+boutons+and+shed+presynaptic+debris.">Glia and muscle sculpt neuromuscular arbors by engulfing destabilized synaptic boutons and shed presynaptic debris.</a> PLoS Biol. 7, (2009).</li><li>Andlauer, T. F., Sigrist, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Building an imaging chamber for in vivo imaging of Drosophila larvae. , 476-480 (2012).</li><li>Sandstrom, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+reduces+excitability+of+Drosophila+larval+motoneurons+by+activating+a+hyperpolarizing+leak+conductance.">Isoflurane reduces excitability of Drosophila larval motoneurons by activating a hyperpolarizing leak conductance.</a> Anesthesiology. 108, 434-446 (2008).</li><li>Sandstrom, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+depresses+glutamate+release+by+reducing+neuronal+excitability+at+the+Drosophila+neuromuscular+junction.">Isoflurane depresses glutamate release by reducing neuronal excitability at the Drosophila neuromuscular junction.</a> J. Physiol. 558, 489-502 (2004).</li><li>Mondal, S., Ahlawat, S., Rau, K., Venkataraman, V., Koushika, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+in+vivo+neuronal+transport+in+genetic+model+organisms+using+microfluidic+devices.">Imaging in vivo neuronal transport in genetic model organisms using microfluidic devices.</a> Traffic. 12, 372-385 (2011).</li><li>Ghannad-Rezaie, M., Wang, X., Mishra, B., Collins, C., Chronis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+chips+for+in+vivo+imaging+of+cellular+responses+to+neural+injury+in+Drosophila+larvae.">Microfluidic chips for in vivo imaging of cellular responses to neural injury in Drosophila larvae.</a> PloS one. 7, (2012).</li><li>Schmid, A., Sigrist, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuromuscular+junctions:+histology+and+in+vivo+imaging.">Analysis of neuromuscular junctions: histology and in vivo imaging.</a> Methods Mol. Biol. 420, 239-251 (2008).</li><li>Xiong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+turnover+of+the+Wallenda/DLK+kinase+regulates+a+retrograde+response+to+axonal+injury.">Protein turnover of the Wallenda/DLK kinase regulates a retrograde response to axonal injury.</a> J Cell Biol. 191, 211-223 (2010).</li><li>Xiong, X., Collins, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conditioning+lesion+protects+axons+from+degeneration+via+the+Wallenda/DLK+MAP+kinase+signaling+cascade.">A conditioning lesion protects axons from degeneration via the Wallenda/DLK MAP kinase signaling cascade.</a> J. Neurosci. 32, 610-615 (2012).</li><li>Byrne, A. B., Edwards, T. J., Hammarlund, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Laser+Axotomy+in+C.+elegans.">In vivo Laser Axotomy in C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (51), (2011).</li><li>Williams, W., Nix, P., Bastiani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructing+a+Low-budget+Laser+Axotomy+System+to+Study+Axon+Regeneration+in+C.+elegans.">Constructing a Low-budget Laser Axotomy System to Study Axon Regeneration in C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (57), (2011).</li><li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+worms,+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators.">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).</li><li>Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+intracellular+protein+movements+using+photoswitchable+fluorescent+proteins+PS-CFP2.">Tracking intracellular protein movements using photoswitchable fluorescent proteins PS-CFP2.</a> 2, 2024-2032 (2007).</li><li>Gurskaya, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+a+monomeric+green-to-red+photoactivatable+fluorescent+protein+induced+by+blue+light.">Engineering of a monomeric green-to-red photoactivatable fluorescent protein induced by blue light.</a> Nat. Biotechnol. 24, 461-465 (2006).</li><li>Rao, S., Lang, C., Levitan, E. S., Deitcher, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+neuropeptide+expression,+transport,+and+exocytosis+in+Drosophila+melanogaster.">Visualization of neuropeptide expression, transport, and exocytosis in Drosophila melanogaster.</a> J. Neurobiol. 49, 159-172 (2001).</li><li>Fujioka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-skipped,+acting+as+a+repressor,+regulates+axonal+projections+in+Drosophila.">Even-skipped, acting as a repressor, regulates axonal projections in Drosophila.</a> Development. 130, 5385-5400 (2003).</li><li>Rietdorf, J., Steitz, A., Heidelberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linear+unmixing+macro+for+ImageJ.">Linear unmixing macro for ImageJ.</a> European Advanced Light Microscopy Network. , (2004).</li><li>Koon, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoregulatory+and+paracrine+control+of+synaptic+and+behavioral+plasticity+by+octopaminergic+signaling.">Autoregulatory and paracrine control of synaptic and behavioral plasticity by octopaminergic signaling.</a> Nat. Neurosci. 14, 190-199 (2011).</li><li>Yarali, A., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neurogenetic+Dissociation+between+Punishment-,+Reward-,+and+Relief-Learning+in+Drosophila.">A Neurogenetic Dissociation between Punishment-, Reward-, and Relief-Learning in Drosophila.</a> Front. Behav. Neurosci. 4, (2010).</li><li>Kuo, C. T., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite-specific+remodeling+of+Drosophila+sensory+neurons+requires+matrix+metalloproteases,+ubiquitin-proteasome,+and+ecdysone+signaling.">Dendrite-specific remodeling of Drosophila sensory neurons requires matrix metalloproteases, ubiquitin-proteasome, and ecdysone signaling.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 15230-15235 (2005).</li><li>Mondal, S., Ahlawat, S., Koushika, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+Microfluidic+Devices+for+in+vivo+Imaging+of+C.+elegans,+Drosophila.">Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (67), (2012).</li><li>Xiong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+highwire+ubiquitin+ligase+promotes+axonal+degeneration+by+tuning+levels+of+nmnat+protein.">The highwire ubiquitin ligase promotes axonal degeneration by tuning levels of nmnat protein.</a> PLoS Biol. 10, (2012).</li><li>Shin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+leucine+zipper+kinase+is+required+for+retrograde+injury+signaling+and+axonal+regeneration.">Dual leucine zipper kinase is required for retrograde injury signaling and axonal regeneration.</a> Neuron. 74, 1015-1022 (2012).</li><li>Watkins, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLK+initiates+a+transcriptional+program+that+couples+apoptotic+and+regenerative+responses+to+axonal+injury.">DLK initiates a transcriptional program that couples apoptotic and regenerative responses to axonal injury.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 4039-4044 (2013).</li><li>Hammarlund, M., Nix, P., Hauth, L., Jorgensen, E. M., Bastiani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+regeneration+requires+a+conserved+MAP+kinase+pathway.">Axon regeneration requires a conserved MAP kinase pathway.</a> Science. 323, 802-806 (2009).</li><li>Guo, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+lab-on-a-chip+for+in+vivo+nerve+regeneration+studies.">Femtosecond laser nanoaxotomy lab-on-a-chip for in vivo nerve regeneration studies.</a> Nat. Methods. 5, 531-533 (2008).</li><li>O'Brien, G. S., Rieger, S., Martin, S. M., Cavanaugh, A. M., Portera-Cailliau, C., Sagasti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+axotomy+and+time-lapse+confocal+imaging+in+live+zebrafish+embryos.">Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li><li>Stone, M. C., Nguyen, M. M., Tao, J., Allender, D. L., Rolls, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+up-regulation+of+microtubule+dynamics+and+polarity+reversal+during+regeneration+of+an+axon+from+a+dendrite.">Global up-regulation of microtubule dynamics and polarity reversal during regeneration of an axon from a dendrite.</a> Mol. Biol. Cell. 21, 767-777 (2010).</li><li>Miller, D. L., Ballard, S. L., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+synaptic+growth+and+function+in+Drosophila+with+an+extended+larval+stage.">Analysis of synaptic growth and function in Drosophila with an extended larval stage.</a> J. Neurosci. 32, 13776-13786 (2012).</li></ol>

लेखक कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की घोषणा.

फल मक्खी, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर, 100 से अधिक वर्षों के लिए एक मॉडल जीव के रूप में उपयोग किया गया है, और मौलिक संकेतन और अकशेरुकी से मानव को संरक्षित कर रहे हैं कि विकास के रास्ते को परिभाषित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई साबित कर दिया है. विशिष्ट प्रकार की कोशिकाओं में fluorescently टैग प्रोटीन व्यक्त करने के लिए उपलब्ध कई आनुवंशिक उपकरण हैं, खासकर इसलिए लाइव इमेजिंग सेलुलर तंत्र के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण दृष्टिकोण है, और सरल शरीर योजना और ड्रोसोफिला लार्वा की पारदर्शी छल्ली यह लाइव इमेजिंग के लिए एक आकर्षक व्यवस्था करता है. लाइव इमेजिंग तकनीक के लिए एक महत्वपूर्ण चुनौती noninvasively स्थिर और माइक्रोस्कोपी के लिए एक जानवर की स्थिति है. परम्परागत स्थिरीकरण दृष्टिकोण जानवर को मार, जो दोनों के विच्छेदन 1,2 या क्लोरोफॉर्म का उपयोग शामिल है. निश्चेतक ईथर 4 और isofluorane 5-8 भी इस्तेमाल किया गया है. निश्चेतक कई लाभ प्रदान करते हैं, वे भी इसलिए अध्ययन प्रक्रिया को प्रभावित और जानवर पर तनाव बना सकते हैं, तंत्रिका गतिविधि और (दिल की धड़कन सहित) महत्वपूर्ण फिजियोलॉजी 9-11 रोकना. आकाश और isofluorane के साथ काम करने के लिए मानव सुरक्षा चिंताओं भी कर रहे हैं. हम &#39;लार्वा&#39; चिप 12 कॉल जो एक परत PDMS microfluidic डिवाइस, में ड्रोसोफिला लार्वा को स्थिर करने के लिए एक दवा मुक्त विधि विकसित की है. इस प्रोटोकॉल प्राप्त या लार्वा चिप बनाने का वर्णन कैसे होगा, और जल्दी मंचन 3 instar लार्वा में रहते इमेजिंग के लिए इसे उपयोग करने के लिए कैसे. चिप एक सिरिंज के माध्यम से एक निर्वात के आवेदन पर, कोमल यांत्रिक शक्ति के माध्यम से पशु immobilizes है, जो एक सुखद ढाले microchamber, के शामिल है. स्थिरीकरण विधि ऐसी एक गिलास coverslip के करीब निकटता के भीतर तंत्रिका कॉर्ड, कमानी नसों, और शरीर दीवार की मांसपेशियों के रूप में उदर संरचनाओं लाता है. इस उच्च संख्यात्मक कोल के साथ ऐसी संरचनाओं के उच्च संकल्प इमेजिंग के लिए अनुमति देता हैसंरचना (उच्च वृद्धि) के उद्देश्यों. (मैं) लार्वा चिप के प्रयोग unanesthetized जानवरों के vivo इमेजिंग के लिए अनुमति देता है, रसायनों के उपयोग को बदल देता है: अन्य परम्परागत तकनीकों से अधिक लार्वा चिप के लाभ में निम्न शामिल हैं. (Ii) लार्वा तुरंत (isofluorane 8,13 के लिए एक 2 घंटा वसूली की अवधि के विपरीत) चिप से रिहाई के बाद ठीक हो. इस घंटे और दिन के लिए, मिलीसेकंड से मिनट से लेकर व्यापक समय तराजू, अधिक इमेजिंग के लिए अनुमति देता है. (Iii) एक गैस पारगम्य सामग्री है जो PDMS, का उपयोग लार्वा शरीर में वातावरण से ऑक्सीजन / हवा के निरंतर प्रसार के लिए सक्षम बनाता है. (Iv) चिप का उपयोग करने के लिए आसान और सुरक्षित है, और (v) यह पुन: प्रयोज्य है, और एक कम कीमत पर निर्मित किया जा सकता. लार्वा चिप का उपयोग के लिए निर्देश के अलावा, इस प्रोटोकॉल 3 instar लार्वा में neuronal घटनाओं का अध्ययन करने के लिए इसके उपयोग के कई उदाहरण प्रदान करेगा. ये axona का जीना इमेजिंग शामिलएल परिवहन, चोट करने के लिए कैल्शियम की प्रतिक्रियाएं, और लंबी दूरी और समय के तराजू से अधिक फोटो परिवर्तनीय प्रोटीन की तस्करी का समय व्यतीत हो पढ़ाई. चिप का एक अन्य आवेदन axonal चोट करने के लिए neuronal प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए है. इस के लिए एक अतिरिक्त प्रक्रिया एक कमानी तंत्रिका कुचलने से परिधीय नसों के भीतर axons घायल के लिए (भाग 3) में वर्णित है. यह सरल परख एक ही समय में संसाधित करने के लिए कई जानवरों के लिए अनुमति देता है एक मानक विच्छेदन stereomicroscope के तहत दोनों तेजी से और reproducibly किया जा सकता है. चोट के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं लार्वा चिप में रहते इमेजिंग द्वारा अध्ययन किया जा सकता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1170">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:259px;">0.5 mm Polyethylene tubing</td>
			<td style="width:171px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:291px;">14-170-11B</td>
			<td style="width:449px;">Polyethylene tubing, I.D. = 0.023&#8217;&#8217;, O.D. = 0.038&#8217;&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">1 mm Polyurethane tubing</td>
			<td style="width:171px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:291px;">BB521-63</td>
			<td style="width:449px;">Polyurethane tubing, I.D. = 0.063&#8217;&#8217;,&#160; O.D. = 0.125&#8217;&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">barb to barb connector</td>
			<td style="width:171px;">Bio Rad</td>
			<td style="width:291px;">732-8300</td>
			<td style="width:449px;">0.8 mm barb to barb connector</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">3-way stopcock valve</td>
			<td style="width:171px;">Bio Rad</td>
			<td style="width:291px;">732-8104</td>
			<td style="width:449px;">Screw on valve for the syringe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Syringe (20 ml)</td>
			<td style="width:171px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:291px;">14-817-33</td>
			<td style="width:449px;">Screw on 20 ml syringe for&#160; generating vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:259px;">Dispensing needles, 23 G (.4mm I.D., .6mm O.D.)</td>
			<td style="width:171px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:291px;">75165A684</td>
			<td style="width:449px;">Needle for outlet connection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:259px;">Dispensing needles, 21 G, (.6mm I.D.,&#160; .8mm O.D.)</td>
			<td style="width:171px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:291px;"><a href="http://www.mcmaster.com/#75165A679" title="Close">75165A679</a></td>
			<td style="width:449px;">Needle for outlet connection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Halocarbon oil</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:291px;">H8898</td>
			<td style="width:449px;">Halocarbon oil 700</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Dumostar Number 5 Forceps</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:291px;">RS-498</td>
			<td style="width:449px;">For nerve crush</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:259px;">PDMS Kit (Base and curing agent)</td>
			<td style="width:171px;">Ellsworth</td>
			<td style="width:291px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:449px;">Dow Corning Sylgard 184 Silicone Encapsulant 0.5 kg Kit Clear</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:259px;">Glass Coverslips</td>
			<td style="width:171px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:291px;">12-544-C</td>
			<td style="width:449px;">24 x 40 mm (thickness according to recommendation for your microscope objective)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Disposable Plastic Cup (9 oz.)</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:291px;"></td>
			<td style="width:449px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Plastic coffee stirrer stick</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:291px;"></td>
			<td style="width:449px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Razor Blade</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:291px;"></td>
			<td style="width:449px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">Grape juice agar plates</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:291px;"></td>
			<td style="width:449px;"><a href="http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/4/pdb.rec10925">See http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/4/pdb.rec10925 for recipe</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using microfluidics chips for live imaging and study of injury responses in drosophila larvae

लाइव इमेजिंग हालांकि यह जीवित पशुओं में चुनौतीपूर्ण हो सकता है सेल जैविक प्रक्रियाओं के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है. ड्रोसोफिला लार्वा की पारदर्शी छल्ली यह लाइव इमेजिंग अध्ययन के लिए एक आकर्षक मॉडल जीव बनाता है. बहरहाल, लाइव इमेजिंग तकनीक के लिए एक महत्वपूर्ण चुनौती noninvasively स्थिर और माइक्रोस्कोप पर एक जानवर की स्थिति है. इस प्रोटोकॉल एक polydimethylsiloxane हम &#39;लार्वा चिप&#39; कहते हैं (PDMS) microfluidic डिवाइस, पर ड्रोसोफिला लार्वा immobilizing और इमेजिंग के लिए एक सरल और प्रयोग करने में आसान विधि प्रस्तुत करता है. लार्वा चिप एक सिरिंज के माध्यम से एक निर्वात के आवेदन पर, पशु immobilizes और इस तरह के तंत्रिका कॉर्ड, कमानी नसों, और शरीर के रूप में उदर संरचनाओं लाता है, जो एक पतली गिलास coverslip, से जुड़ा हुआ है कि एक सुखद ढाले PDMS microchamber के शामिल है coverslip के करीब निकटता के भीतर दीवार की मांसपेशियों,. इस उच्च संकल्प इमेजिंग के लिए अनुमति देता है, और महत्वपूर्ण बात, ane के प्रयोग से बचा जाता हैशारीरिक प्रक्रियाओं की एक व्यापक श्रेणी के अध्ययन की सुविधा जो sthetics और रसायन,. लार्वा स्थिरीकरण से आसानी से उबरने के बाद से, वे आसानी से कई इमेजिंग सत्र के अधीन किया जा सकता है. इस घंटे से दिन को लेकर समय पाठ्यक्रम से अधिक अनुदैर्ध्य अध्ययन के लिए अनुमति देता है. इस प्रोटोकॉल कदम दर कदम चिप और कैसे 3 instar लार्वा में neuronal घटनाओं के लाइव इमेजिंग के लिए चिप का उपयोग करने के लिए तैयार करने के लिए कैसे करें. इन घटनाओं axons, चोट करने के लिए कैल्शियम की प्रतिक्रियाएं, और लंबी दूरी और समय के तराजू से अधिक फोटो परिवर्तनीय प्रोटीन की तस्करी का समय व्यतीत हो पढ़ाई में organelles की तेजी से परिवहन शामिल हैं. चिप का एक अन्य आवेदन पुनर्योजी और axonal चोट के अपक्षयी प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए है, इसलिए इस प्रोटोकॉल का दूसरा भाग एक कमानी तंत्रिका कुचलने से परिधीय नसों के भीतर axons घायल के लिए एक नया और सरल प्रक्रिया का वर्णन है.

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Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

ड्रोसोफिला लार्वा के कारण उनके पारदर्शी छल्ली और शक्तिशाली आनुवंशिकी के रहते इमेजिंग के लिए एक आकर्षक मॉडल प्रणाली रहे हैं. इस प्रोटोकॉल 3 instar ड्रोसोफिला लार्वा के न्यूरॉन्स के भीतर सेलुलर प्रक्रियाओं के रहते इमेजिंग के लिए &#39;लार्वा चिप&#39; नामक एक एकल परत PDMS डिवाइस, उपयोग कैसे करें.

लाइव इमेजिंग और चोट जवाब का अध्ययन में लिए microfluidics चिप्स का उपयोग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा

Live imaging is an important technique for studying cell biological processes, however this can be challenging in live animals. The translucent cuticle of ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT)

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue EHT

इम्यून प्रतिक्रियाएँ इंजीनियर हार्ट ऊतक के आरोपण के बाद एसेसमेंट (EHT) के लिए bioluminescence इमेजिंग

Various techniques of cardiac tissue engineering have been pursued in the past decades including scaffolding strategies using either native or ...

Impulsive Pressurization of Neuronal Cells for Traumatic Brain Injury Study

घाव मस्तिष्क चोट अध्ययन के लिए neuronal कोशिकाओं की आवेगी दबाव

A novel impulsive cell pressurization experiment has been developed using a Kolsky bar device to investigate blast-induced traumatic brain injury (TBI). ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

के लिए सरल microfluidic उपकरणों<em&gt; Vivo में</em&gt; इमेजिंग<em&gt; सी. एलिगेंस</em&gt;<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; और Zebrafish

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Endothelialized Microfluidics for Studying Microvascular Interactions in Hematologic Diseases

Hematologic रोग में Microvascular सहभागिता का अध्ययन करने के लिए endothelialized Microfluidics

Advances in  microfabrication techniques have enabled the production of inexpensive and  reproducible microfluidic systems for conducting biological and ...

The Submerged Printing of Cells onto a Modified Surface Using a Continuous Flow Microspotter

एक सतत प्रवाह Microspotter का प्रयोग एक संशोधित सतह पर कोशिकाओं के जलमग्न मुद्रण

The printing of cells for microarray applications possesses significant challenges including the problem of maintaining physiologically relevant cell ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

मैट्रिक्स संशोधन द्वारा प्रेरित सेलुलर आसंजन और डी-आसंजन में वास्तविक समय परिवर्तन को मापने के लिए सेल सब्सट्रेट प्रतिबाधा और लाइव सेल इमेजिंग का उपयोग

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

एक multichannel दोहरे बिजली क्षेत्र microfluidic चिप का उपयोग कर लंग कैंसर कोशिकाओं के Electrotaxis अध्ययन

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Multicolor Fluorescence Detection for Droplet Microfluidics Using Optical Fibers

बूंद Microfluidics के लिए बहुरंगा प्रतिदीप्ति पता लगाने ऑप्टिकल फाइबर का उपयोग

Fluorescence assays are the most common readouts used in droplet microfluidics due to their bright signals and fast time response. Applications such as ...

Training Persons with Spinal Cord Injury to Ambulate Using a Powered Exoskeleton

रीढ़ की हड्डी में चोट के साथ व्यक्तियों को प्रशिक्षण एक संचालित Exoskeleton का उपयोग करने के लिए ambulate

Powered exoskeletons have become available for overground ambulation in persons with paralyses due to spinal cord injury (SCI) who have intact upper ...

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional PolyÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Âµ-caprolactone Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

पिघल Electrospinning तीन आयामी पाली (ε-caprolactone) ऊतक इंजीनियरिंग अनुप्रयोगों के लिए नियंत्रणीय Morphologies के साथ मचान के लेखन

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology ...