Name: an improved method for the preparation of type i collagen from skin
Uploaded: 2014-01-21T22:00:00
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इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (डीबीसी के लिए HL068915), (कैप) के लिए गाहनेवाला रिसर्च फंड से एक नई शोधकर्ता पुरस्कार से एक शोध अनुदान, एक अनुदान सहायता (डीबीसी के लिए 12GRNT11910008) अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन से द्वारा समर्थित किया गया बच्चों का हार्ट फाउंडेशन (डीबीसी के लिए), और बोस्टन बच्चों के अस्पताल के हृदय चालन फंड, रयान परिवार बंदोबस्ती, और दाऊद पुलमैन द्वारा दान से एक शोध अनुदान.

यहाँ हम भेड़ त्वचा से col1 के अलगाव का प्रदर्शन करेंगे. लिखित रूप में, इस प्रोटोकॉल भी सफलतापूर्वक खरगोश और मानव त्वचा से Col1 अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. 1. त्वचीय नमूना तैयार <ol><li> उपयो...

<ol>
	<li>Nageotte, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coagulation+fibrillaire+in+vitro+du+collag&#232;ne+dissous+dans+un+acide+dilu&#233;.">Coagulation fibrillaire in vitro du collag&#232;ne dissous dans un acide dilu&#233;.</a> CR hebd. s&#233;ances Acad. Sei. 184, 115 (1927).</li><li>Schmitt, F. O., Hall, C. E., Jakus, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscope+investigation+of+the+structure+of+collagen.">Electron microscope investigation of the structure of collagen.</a> J. Cell Comp. Physiol. 20, 11-33 (1942).</li><li>Choi, Y. 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A. 67, 1033-1043 (2003).</li><li>Ber, S., Torun Kose, G., Hasirci, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+tissue+engineering+on+patterned+collagen+films:+an+in+vitro+study.">Bone tissue engineering on patterned collagen films: an in vitro study.</a> Biomaterials. 26, 1977-1986 (2005).</li><li>Liu, Y., Sun, S., Singha, S., Cho, M. R., Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-D+femtosecond+laser+patterning+of+collagen+for+directed+cell+attachment.">3-D femtosecond laser patterning of collagen for directed cell attachment.</a> Biomaterials. 26, 4597-4605 (2005).</li><li>Thakar, R. G., Ho, F., Huang, N. F., Liepmann, D., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+vascular+smooth+muscle+cells+by+micropatterning.">Regulation of vascular smooth muscle cells by micropatterning.</a> Biochem. Biophys. Res. Comm. 307, 883-890 (2003).</li><li>Leighton, J., Justh, G., Esper, M., Kronenthal, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-coated+cellulose+sponge:+three+dimensional+matrix+for+tissue+culture+of+Walker+tumor+256.">Collagen-coated cellulose sponge: three dimensional matrix for tissue culture of Walker tumor 256.</a> Science. 155, 1259-1261 (1967).</li></ol>

इस विधि के लिए एक महत्वपूर्ण घटक अतिरिक्त तरल निकालने के लिए चमड़े का नमूना के दोहराया कुशल संपीड़न है. यह नमूना compressing द्वारा 2.5 कदम में जितना संभव हो उतना सोडियम एसीटेट दूर करने के लिए महत्वपूर्ण है. हम ट?...

दशकों के लिए, शोधकर्ताओं और वाणिज्यिक विक्रेताओं इस्तेमाल किया जा सकता है कि संगठित Col1 तंतुओं के एक मैट्रिक्स के एक मेजबान में जो परिणाम निराकरण के बाद एक सरल एसिड निष्कर्षण प्रोटोकॉल, के कुछ बदलाव का उपयोग त्वचा और कण्डरा सहित ऊतक सूत्रों के एक वर्गीकरण से solubilized Col1 अलग है जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों 1-4 की एक भीड़ के लिए. Col1 के लिए नैदानिक ​​आवेदन के कई उदाहरण हैं, जबकि इस प्रोटीन की तैयारी 5-7 प्रदर्शन करने के लिए कई दिनों या हफ्तों लेने लंबा एक्सट्रेक्शन की आवश्यकता है, क्योंकि इनमें से कुछ autologously व्युत्पन्न Col1 रोजगार. नतीजतन, अनुसंधान जांचकर्ताओं और चिकित्सकों आम तौर पर इस तरह के चूहे, गोजातीय, या सुअर का यथार्थ त्वचा के रूप में nonhuman ऊतकों का उपयोग कर या शवों से हटा त्वचा का उपयोग कर या पुरुष खतना निम्नलिखित तैयार कर रहे हैं कि Col1 के महंगा, वाणिज्यिक तैयारियों का उपयोग करें. पुनर्योजी अनुप्रयोगों के लिए, अपनी क्षमता के संबंध में इन उत्पादों का प्रदर्शन परिवर्तनशीलता के कई ठोस रूप के लिएmatrices या सेल लगाव और विकास का समर्थन करने में सक्षम ऊतक निर्माणों. नतीजतन, जल्दी से सुलभ और भरपूर मात्रा में ऑटोलॉगस ऊतक स्रोतों से Col1 निकालने के लिए बनाया गया एक नया मानकीकृत पद्धति के लिए एक विशिष्ट आवश्यकता नहीं है. इस तरह की एक विधि Col1 ब्याज के पशु मॉडल से निकाला और कोलेजन आधारित scaffolds पर इकट्ठे इंजीनियर के ऊतकों के preclinical परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, जहां अनुसंधान की स्थापना में समय और पैसा दोनों बचा होगा. इसी समय, क्लिनिक में एक तेजी से पृथक, autologously व्युत्पन्न Col1 उपयोग करने का विकल्प होने अन्यथा अल्लोजीनिक या xenogeneic तैयारी प्राप्त होता है कि मरीजों के लिए समग्र सुरक्षा में वृद्धि होगी. एक autogeneic तैयारी प्राप्त रोगियों के लिए, इस सुव्यवस्थित विधि बहुत बायोप्सी संग्रह और कोलेजन आवेदन के बीच के अंतराल को कम करेगा. इन कारणों के लिए, हम उच्च गति एजी का उपयोग करके एक लंबे समय से स्थापित Col1 अलगाव और शुद्धीकरण पद्धति पर सुधार करने की मांग कीitation और आकार अपवर्जन centrifugation. यह विधि कई प्रयोगशालाओं में पाया मानक buffers और उपकरणों का उपयोग कर प्रदर्शन करने के लिए सरल है. उच्च गति आंदोलन से रोजगार, हमारे प्रोटोकॉल कम से कम 3 घंटे 8 के लिए लगभग 10 दिनों से घुलनशील, त्वचीय Col1 अलग करने के लिए आवश्यक समय कम कर देता है. महत्वपूर्ण बात, इस विधि आसानी प्रक्रियाओं का एक सेट के दौरान रोगियों में उपयोग के लिए autologously व्युत्पन्न Col1 तैयार करने के क्रम में नैदानिक ​​सेटिंग में प्रदर्शन किया जा सकता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="544">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:123px;">FastPrep-24 System</td>
			<td style="width:136px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:147px;">116004500</td>
			<td style="width:139px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="190">
			<td height="190" style="height:190px;width:123px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:136px;">Beckman</td>
			<td style="width:147px;">J6-MI</td>
			<td style="width:139px;">Swing bucket rotor to accommodate 50 mL conical tubes at 3200 g.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved method for the preparation of type i collagen from skin

घुलनशील टाइप 1 कोलेजन (col1) सेल संस्कृतियों के लिए एक चिपकने वाला सब्सट्रेट के रूप में और पुनर्योजी अनुप्रयोगों के लिए एक सेलुलर पाड़ के रूप में बड़े पैमाने पर प्रयोग किया जाता है. चिकित्सकीय, यह प्रोटीन व्यापक रूप से कॉस्मेटिक सर्जरी, चमड़े का इंजेक्शन, हड्डी कलम बांधने का काम, और पुनर्निर्माण सर्जरी के लिए प्रयोग किया जाता है. इन प्रक्रियाओं के लिए col1 के सूत्रों सूजन और अस्वीकृति के लिए क्षमता के साथ ही जीनोबायोटिक रोग संचरण बढ़ जाता है, जो आमतौर पर nonhuman हैं. इसे देखते हुए, कुशलतापूर्वक और जल्दी से autologously व्युत्पन्न ऊतकों की सीमित मात्रा से Col1 शुद्ध करने के लिए एक विधि इन मुद्दों के कई दरकिनार होगा, लेकिन, मानक अलगाव प्रोटोकॉल लंबी हैं और अक्सर श्लेषजनउत्पादी ऊतकों की बड़ी मात्रा की आवश्यकता होती है. यहाँ, हम कम से कम 3 घंटे के बारे में 10 दिनों से इस प्रोटीन को अलग और शुद्ध करने के लिए आवश्यक समय को कम कर देता है कि एक कुशल Col1 निष्कर्षण विधि का प्रदर्शन. हम कई सर्जिकल प्रक्रियाओं के दौरान की वजह से अपनी उपलब्धता के बारे में हमारी ऊतक स्रोत के रूप में डर्मिस चुना है. टीउसकी विधि यथार्थ त्वचा की थोड़ी मात्रा से अत्यधिक शुद्ध, घुलनशील Col1 प्राप्त करने के लिए सशक्त आंदोलन और केन्द्रापसारक निस्पंदन के साथ संयुक्त पारंपरिक निष्कर्षण बफ़र्स का उपयोग करता है. संक्षेप में, त्वचीय बायोप्सी वसा, संयोजी ऊतक, और बालों को हटाने के बाद ठंडा DH 2 हे में अच्छी तरह से धो रहे हैं. त्वचा के नमूनों 0.5 एम सोडियम एसीटेट और एक उच्च गति पीठ टॉप homogenizer का उपयोग noncollagenous प्रोटीन और polysaccharides के छीन रहे हैं. अवशिष्ट ठोस से कोलेजन बाद में homogenizer का उपयोग कर एक 0.075 एम सोडियम साइट्रेट बफर के साथ निकाला जाता है. इन निष्कर्षों तुलनीय या बेहतर व्यावसायिक उत्पादों के लिए गुणवत्ता या पारंपरिक प्रक्रियाओं का उपयोग कर प्राप्त उन की Col1 तैयारी उपज है कि 100,000 मेगावाट कट ऑफ केन्द्रापसारक फिल्टर का उपयोग कर शुद्ध किया जाता है. हम इस पद्धति अनुसंधान और नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के एक भीड़ के लिए autologously व्युत्पन्न Col1 के उपयोग की सुविधा होगी आशा.

इस Col1 अलगाव प्रोटोकॉल को पूरा करने के बारे में 2 घंटे और 15 मिनट की आवश्यकता है. चित्रा 1 इस प्रक्रिया में प्रमुख कदम रूपरेखा एक योजनाबद्ध आरेख दिखाता है. नमूना तैयार कर रहा है और उच्च गति आंदोलन के 7 चक्रों प...

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An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

त्वचा से टाइप I कोलेजन की तैयारी के लिए एक बेहतर तरीका

घुलनशील टाइप 1 कोलेजन (col1) के अलगाव के लिए पारंपरिक प्रक्रियाओं की वजह से लंबा बफर incubations और तंतुओं की श्रमसाध्य resuspensions के शुरू से खत्म करने के बारे में 10 दिन की आवश्यकता होती है. यहाँ, हम कम से कम 3 घंटे में छोटे त्वचीय बायोप्सी से Col1 शुद्ध करने के लिए एक साधन के वर्णन.

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Organotypic कोलेजन मैं परख: एक निंदनीय के लिए एक संदर्भ 3 आयामी में सेल व्यवहार का आकलन करने के लिए एक मंच

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

स्टेम सेल से भरी हुई Chitosan microspheres की डिलिवरी के लिए एक कोलेजन Hydrogel का निर्माण करना

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Constant Pressure-controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Lipid Vesicles

लगातार दबाव नियंत्रित नैनो आकार लिपिड vesicles की तैयारी के लिए बाहर निकालना विधि

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

विधि रक्त मस्तिष्क बाधा के एक मानव कोशिका आधारित, संपर्क माडल की तैयारी के लिए बेहतर

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

विकृत कोलेजन किस्में इमेजिंग<em&gt; में विवो</em&gt; और<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; कैद कोलेजन अनुकरण करनेवाला पेप्टाइड्स के फोटो ट्रिगर संकरण के माध्यम से

Collagen is a major structural component of the extracellular matrix that supports tissue formation and maintenance. Although collagen remodeling is an ...

An Improved Mechanical Testing Method to Assess Bone-implant Anchorage

अस्थि प्रत्यारोपण लंगर का आकलन करने के लिए एक बेहतर मैकेनिकल परीक्षण विधि

Recent advances in material science have led to a substantial increase in the topographical complexity of implant surfaces, both on a micro- and a ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

संवहनी ऊतक उत्थान के लिए इंजीनियरिंग 3 डी Cellularized कोलेजन जैल

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

संकुचित कोलेजन में कीमा बनाया हुआ ऊतक: एकल मंचन पुनर्निर्माण मरम्मत के लिए एक सेल युक्त Biotransplant

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

3 डी बातचीत का अध्ययन के लिए 3 डी कोलेजन जैल और microchannels की तैयारी<em&gt; Vivo</em

Historically, most cellular processes have been studied in only 2 dimensions.  While these studies have been informative about general cell signaling ...

Evaluation of Keratinocyte Proliferation on Two- and Three-dimensional Type I Collagen Substrates

Keratinocyte प्रसार के दो और तीन आयामी प्रकार मैं कोलेजन Substrates पर मूल्यांकन

Type I collagen, useful as a substrate for cell culture, exists in two forms: the two-dimensional, non-fibrous form and three-dimensional, fibril form. ...