Name: an improved method for the preparation of type i collagen from skin
Uploaded: 2014-01-21T22:00:00
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この作品は、国立衛生研究所（DBCにHL068915）、（CAP）のスラッシャー研究基金からの新しい研究者賞、補助金、米国心臓協会（DBCへ12GRNT11910008）からの研究助成金によってサポートされていました（DBC）は、ボストン小児病院の心臓伝導基金、ライアンファミリー基金への寄付、そしてデビッド·プルマンによる子供の心臓財団からの研究助成金。

ここでは、子羊の皮からCOL1の分離のデモンストレーションを行います。書かれたように、このプロトコルはまた、正常ウサギおよびヒトの皮膚からCOL1を単離するために使用することができる。 1。皮膚のサンプルを準備します<ol><li>使用前に4℃にすべての試薬を平衡化させます。 </li><li>氷のように冷たいのdH 2 O中で真皮サンプル（25〜g）をすすぎ、脱毛クリ?...

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	<li>Nageotte, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coagulation+fibrillaire+in+vitro+du+collag&#232;ne+dissous+dans+un+acide+dilu&#233;.">Coagulation fibrillaire in vitro du collag&#232;ne dissous dans un acide dilu&#233;.</a> CR hebd. s&#233;ances Acad. Sei. 184, 115 (1927).</li><li>Schmitt, F. O., Hall, C. E., Jakus, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscope+investigation+of+the+structure+of+collagen.">Electron microscope investigation of the structure of collagen.</a> J. Cell Comp. Physiol. 20, 11-33 (1942).</li><li>Choi, Y. 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A. 67, 1033-1043 (2003).</li><li>Ber, S., Torun Kose, G., Hasirci, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+tissue+engineering+on+patterned+collagen+films:+an+in+vitro+study.">Bone tissue engineering on patterned collagen films: an in vitro study.</a> Biomaterials. 26, 1977-1986 (2005).</li><li>Liu, Y., Sun, S., Singha, S., Cho, M. R., Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-D+femtosecond+laser+patterning+of+collagen+for+directed+cell+attachment.">3-D femtosecond laser patterning of collagen for directed cell attachment.</a> Biomaterials. 26, 4597-4605 (2005).</li><li>Thakar, R. G., Ho, F., Huang, N. F., Liepmann, D., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+vascular+smooth+muscle+cells+by+micropatterning.">Regulation of vascular smooth muscle cells by micropatterning.</a> Biochem. Biophys. Res. Comm. 307, 883-890 (2003).</li><li>Leighton, J., Justh, G., Esper, M., Kronenthal, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-coated+cellulose+sponge:+three+dimensional+matrix+for+tissue+culture+of+Walker+tumor+256.">Collagen-coated cellulose sponge: three dimensional matrix for tissue culture of Walker tumor 256.</a> Science. 155, 1259-1261 (1967).</li></ol>

この方法の重要な要素は、過剰な液体を除去し、皮膚のサンプルを繰り返し効率的な圧縮です。これは、試料を圧縮することによって、ステップ2.5においてできるだけ酢酸ナトリウムを除去することが重要である。我々は、チューブの側面に対して皮膚を圧縮するためにスパチュラを使用しているが、チーズクロスを使用することもできる、これがチューブからのサンプルの除去を必要とし?...

何十年もの間、研究者や商業ベンダーが使用することができる組織化されたCOL1原線維のマトリックスの再懸濁、その結果中​​和し、単純な酸抽出プロトコルのいくつかのバリエーションを使用して皮膚や腱などの組織源の品揃えから可溶化COL1を単離した生物医学的応用1-4多数のため。 col1の臨床応用の多くの例がありますが、このタンパク質の調製は5-7を実行するために数日から数週間を取って長々抽出を必要とするので、これらのいくつかは自家由来COL1を採用しています。その結果、研究調査官や医師は、一般的には、ラット、ウシ、またはブタ真皮などの非ヒト組織を用いたか、死体から摘出皮膚を使用したり、男性の割礼に従って製造されたCOL1の高価な、市販製剤を使用しています。再生アプリケーション、固体形成する能力に関して、これらの製品の多くの展示可変性マトリックスまたは細胞の付着および成長を支持することが可能な組織構築物。そのため、すぐにアクセス可能で、豊富な自家組織源からCOL1を抽出するために設計された新しい標準化された方法のための明確な必要性がある。 そのような方法は、COL1は、関心のある動物モデルから抽出したコラーゲンベースの足場上で組み立て設計組織の前臨床試験を使用することができる研究環境で、時間とコストの両方を節約することになる。同時に、診療​​所で急速に分離された、自家由来COL1を使用するオプションを有する他の方法で同種または異種の準備を受け取ることになる患者のための全体的な安全性を増加させるであろう。自家調製を受けている患者の場合、この方法は非常に合理化された生検収集およびコラーゲンアプリケーションとの間の間隔を減少させるであろう。これらの理由から、我々は、高速AGを使用して、長い確立COL1の単離および精製方法を改善しようとしたitationおよびサイズ​​排除遠心分離。この方法は、多くの研究室で見られる標準バッファーと装置を使用して実行するのは簡単です。高速攪拌を用いることにより、我々のプロトコルは3未満〜8時間、約10日から可溶性、皮膚COL1を単離するために必要な時間を短縮する。重要なことに、この方法は、容易な手順の単一のセット中の患者に使用するための自​​家由来するCOL1を調製するために臨床設定で行うことができる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="544">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:123px;">FastPrep-24 System</td>
			<td style="width:136px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:147px;">116004500</td>
			<td style="width:139px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="190">
			<td height="190" style="height:190px;width:123px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:136px;">Beckman</td>
			<td style="width:147px;">J6-MI</td>
			<td style="width:139px;">Swing bucket rotor to accommodate 50 mL conical tubes at 3200 g.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved method for the preparation of type i collagen from skin

水溶性タイプ1コラーゲン（COL1）は、細胞培養用の接着基質として、再生アプリケーションのための携帯足場として広く使用されています。臨床的に、このタンパク質は、広く美容外科、皮膚注射、骨移植および再建手術のために使用される。これらの手順のcol1のソースは、炎症や拒絶反応の可能性だけでなく、生体異物疾病伝播を増加させる、一般的にヒト以外である。そこで、効率的かつ迅速に自家由来組織の限られた量からCOL1を精製する方法は、これらの問題の多くを回避するであろうが、標準の単離プロトコルが長いであり、多くの場合、コラーゲン様組織を大量に必要とする。ここでは、約10日から約3時間後に、このタンパク質を単離および精製するために必要な時間を短縮し、効率的なCOL1抽出方法を示す。我々は、多くの外科的処置の際に、その利用可能性の我々の組織源として真皮を選びました。 T彼の方法は、真皮、少量から高純度、溶解性のCOL1を得るための強力な撹拌及び遠心濾過と組み合わせた伝統的な抽出バッファを使用しています。簡潔には、皮膚生検、脂肪、結合組織、毛髪を除去した後、氷冷のdH 2 Oで十分に洗浄する。皮膚サンプルを0.5 M酢酸ナトリウムおよび高速ベンチトップホモジナイザーを用いて非コラーゲン性タンパク質及び多糖類から取り除かれる。残留固形物由来のコラーゲンは、その後、ホモジナイザーを用いて0.075 Mクエン酸ナトリウム緩衝液で抽出する。これらの抽出物は、100,000 MWカットオフ市販品または従来の手順を用いて得られたものと同等以上の品質のCOL1製剤を得る遠心フィルタを使用して精製される。我々は、この方法では、研究と臨床応用の多数のための自家由来COL1の利用を容易にするであろうと予想している。

このCOL1単離プロトコールは、完了するのに約2時間と15分が必要です。図1は、この手順の主なステップを概説する概略図を示す。試料を調製し、高速攪拌回転の7サイクルを実行し、酢酸ナトリウムでリンスすると、約35分（図1A-C）をとる。 1の攪拌を実施するとDH 2 Oですすぎサイクルは約5分（図1Dおよび1E）を取ります。クエン酸ナトリウムを加?...

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An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

皮膚からのI型コラーゲンの調製のための改良された方法

水溶性タイプ1コラーゲン（COL1）を単離するための伝統的な手続きが原因に長いバッファインキュベーションおよびフィブリルの面倒な再懸濁の開始から終了まで約10日を要する。ここでは、3時間未満の小さな皮膚生検からCOL1を精製するための手段を記載する。

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

器官型コラーゲンIアッセイ：3次元コンテキストでのセルの挙動を評価するための可鍛性プラットフォーム

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

幹細胞にロードされたキトサンミクロスフェアの配信のためにコラーゲンハイドロゲルの構築

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Constant Pressure-controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Lipid Vesicles

ナノサイズの脂質小胞の調製のための一定の圧力制御押出法

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

人間の細胞に基づく、血液脳関門の接触モデルの作製のための改善された方法

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

変性コラーゲンストランドを画像化する<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;生体外</em&gt;リテーナ入りコラーゲン模倣ペプチド写真·トリガブリダイゼーション経由

Collagen is a major structural component of the extracellular matrix that supports tissue formation and maintenance. Although collagen remodeling is an ...

An Improved Mechanical Testing Method to Assess Bone-implant Anchorage

骨 - インプラントアンカレッジ評価するために改良された機械的試験方法

Recent advances in material science have led to a substantial increase in the topographical complexity of implant surfaces, both on a micro- and a ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

エンジニアリング3D細胞化血管組織再生のためのコラーゲンゲル

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

圧縮されたコラーゲンで細分化した組織：シングル段再建修復のための細胞含有Biotransplant

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

3D相互作用の研究のための3Dコラーゲンゲルおよびマイクロチャネルの作製<em&gt;インビボ</em

Historically, most cellular processes have been studied in only 2 dimensions.  While these studies have been informative about general cell signaling ...

Evaluation of Keratinocyte Proliferation on Two- and Three-dimensional Type I Collagen Substrates

ケラチン生成細胞増殖の 2 次元と 3 次元の評価タイプ I コラーゲン基板

Type I collagen, useful as a substrate for cell culture, exists in two forms: the two-dimensional, non-fibrous form and three-dimensional, fibril form. ...