Name: in vivo two-photon microscopy of single nerve endings in skin
Uploaded: 2014-08-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin at JoVE.com

Yazarlar mali destek için teknik yardım, CIMO Vakfı ve FGSN için Neurotar Ltd teşekkür etmek istiyorum.

Hayvan denekleri prosedürleri Ulusal Hayvan Deney Kurulu, Finlandiya tarafından onaylanmıştır. Görüntüleme için 1. Hayvan hazırlanması <ol><li> Intraperitional ketamin (IP) enjeksiyon ile (vücut ağırlığı başına 0.08 mg) ve ksilazin (vücut ağırlığı başına 0.01 mg), bir fare anestezisi. Arka ayak tutam refleks ile anestezi edin. </li><li> Göz dehidratasyon gözleri korumak için (Viscotears) damlası halinde hayvanın gözleri daldırın. </li><li> Hipotermiyi önlemek için 37 ° C &...

<ol>
	<li>Lumpkin, E. A., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+sensory+transduction+in+the+skin.">Mechanisms of sensory transduction in the skin.</a> Nature. 445, 858-865 (2007).</li><li>Kennedy, W. R., Wendelschafer-Crabb, G., Johnson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+epidermal+nerves+in+diabetic+neuropathy.">Quantitation of epidermal nerves in diabetic neuropathy.</a> Neurology. 47, 1042-1048 (1996).</li><li>Wu, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morton's+interdigital+neuroma:+a+clinical+review+of+its+etiology,+treatment,+and+results.">Morton's interdigital neuroma: a clinical review of its etiology, treatment, and results.</a> J. Foot Ankle Surg. 35, 112-119 (1996).</li><li>Lauria, G., Lombardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+biopsy:+a+new+tool+for+diagnosing+peripheral+neuropathy.">Skin biopsy: a new tool for diagnosing peripheral neuropathy.</a> BMJ. 334, 1159-1162 (2007).</li><li>Cheng, C., Guo, G. F., Martinez, J. A., Singh, V., Zochodne, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+plasticity+of+axons+within+a+cutaneous+milieu.">Dynamic plasticity of axons within a cutaneous milieu.</a> J. Neurosci. 30, 14735-14744 (2010).</li><li>Wang, B., Zinselmeyer, B. H., McDole, J. R., Gieselman, P. A., Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+Imaging+of+Leukocyte+Homing+and+Migration+in+vivo.">Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo.</a> J Vis Exp. (46), e2062 (2010).</li><li>Sacconi, L., O'Connor, R. P., Jasaitis, A., Masi, A., Buffelli, M., Pavone, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+multiphoton+nanosurgery+of+cortical+neurons.">In vivo multiphoton nanosurgery of cortical neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 050502 (2007).</li><li>Robinson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+injury+to+peripheral+nerves.">Traumatic injury to peripheral nerves.</a> Muscle Nerve. 23, 863-873 (2000).</li><li>Feng, G., Mellor, R. H., Bernstein, M., Keller-Peck, C., Nguyen, Q. T., Wallace, M., Nerbonne, J. M., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Marinkovic, P., Reuter, M. S., Brill, M. S., Godinho, L., Kerschensteiner, M., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+deficits+and+degeneration+can+evolve+independently+in+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Axonal transport deficits and degeneration can evolve independently in mouse models of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 109, 4296-4301 (2012).</li><li>Amit, S., Yaron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+systems+for+in+vivo+monitoring+and+microenvironmental+investigations+of+diabetic+neuropathy+in+a+murine+model.">Novel systems for in vivo monitoring and microenvironmental investigations of diabetic neuropathy in a murine model.</a> J Neural Transm. 119, 1317-1325 (2012).</li><li>Yu, H., Fischer, G., Jia, G., Reiser, J., Park, F., Hogan, Q. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+gene+transfer+into+the+dorsal+root+ganglion+of+adult+rats.">Lentiviral gene transfer into the dorsal root ganglion of adult rats.</a> Mol Pain. 7, 63 (2011).</li><li>Yuryev, M., Khiroug, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+longitudinal+investigation+of+individual+nerve+endings+in+the+skin+of+anesthetized+mice+using+in+vivo+two-photon+microscopy.">Dynamic longitudinal investigation of individual nerve endings in the skin of anesthetized mice using in vivo two-photon microscopy.</a> J Biomed Opt. 17, 046007 (2012).</li></ol>

Bu video protokolü biz tek bir sinir uçlarının non-invaziv uzunlamasına iki foton görüntüleme yöntemini göstermektedir. Cilt innervasyon dinamikleri, sedef hastalığı ve periferik nöropati 2, gibi hastalıkların, ve travmatik yaralanmalar 9 etkilenir. İki foton görüntüleme kollajen matris içinde sinir lifleri yapıların detaylı analiz sağlar. Transgenik raportör farelerin kullanılması sinir liflerinin boyama ile ilgili problemleri önler. Thy1-m...

Kutanöz sinir uçlarının farklı patofızyolojik altında dinamik değişikliklere uğrarlar. Sinir lifleri periferik nöropati 2 veya Morton nöroma 3 gibi hastalıkların seyrinde dejenerasyon ve rejenerasyon veya yeniden yapılanma sürecinde gidebilirsiniz. Travmatik yaralanma sonra, deri sinir uçlarının dinamiklerinin önemli bir parçası hasarlı alanın reinnervasyon olduğunu. Ancak, sinir uçlarının soruşturma ortak bir yaklaşım devam eden süreçler 4 gerçek-zamanlı bilgi eksikliği, ex vivo histolojik kesit olduğunu. Genetik olarak kodlanmış floresan markör kullanılarak, bu nedenle yapısal değişikliklerle ilgili zengin ve önemli ölçüde daha fazla ayrıntılı bilgi elde edilmesi, canlı hayvanların derisinde sinir uçlarını izlemek mümkündür. Deri altı sinir uçlarının araştırılması geleneksel fluoresan mikroskobu, ancak, cilt dokusunun güçlü ışık saçılım güçlü kalite zayıflatmaktadır kullanarak mümkündürVerilerin 5 satın almıştır. Multiphoton mikroskopi nedeniyle sadece objektif odak noktasından floresan emisyonu uyarma ışık fotonlarının enerjisi olmayan doğrusal toplamına kuvvetle saçılma dokularda yüksek çözünürlüklü görüntüler elde edilmesine izin verir. Bu etki, deri dokuları 6 ölçüm için sağlam bir penetrasyon derinliği artışı ve sinyal-gürültü oranının bir gelişmeye yol açar. Görüntüleme için kullanılan aynı lazer kullanarak, bu sinir liflerinin 7 seçici diseksiyon üretilmesi mümkündür. Aşağıdaki protokolde seçici lazer lezyonu ticari olarak temin multiphoton mikroskop sistemi kullanılarak raportör ile birlikte transjenik farelerde in vivo olarak deri altı sinir uçlarının uzunlamasına görüntüleme yöntemini göstermektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1231">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Round cover glass&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:119px;">72296-05</td>
			<td style="width:687px;">5 mm diameter #1.5 thickness</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eye drops Viscotears</td>
			<td style="width:209px;">Novartis</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2mg/g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Superglue Loctite 401</td>
			<td style="width:209px;">Henkel</td>
			<td>135429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketaminol</td>
			<td style="width:209px;">Intervet</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Ketamine 50 mg/ml, working solution 10 mg/ml (use it 80 &#181;g per gramm of animal weight)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rompun</td>
			<td style="width:209px;">Bayer Healthcare</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Xylazine 20 mg/ml, working solution 1.25 mg/ml (use it 10 &#181;g per gramm of animal weight)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:687px;">Working solution is a mixture of Ketamine 10 mg/ml and Xylazine 1.25 mg/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol 70%</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Distilled water or Milli-Q water</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes 1ml&#160;</td>
			<td style="width:209px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">300013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">30G 1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:209px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic packaging material</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Could be purchaized from general hardware store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FV-1000MPE microscope</td>
			<td style="width:209px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">FV-1000MPE</td>
			<td>Microscope with motorized stage and rigid metal bar for fixation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25X XLPlan objective</td>
			<td style="width:209px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">XLPLN 25XWMP</td>
			<td>Water imersion objective optimized for multiphoton imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mai-Tai DeepSee laser (2W)</td>
			<td style="width:209px;">SpectraPhysics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heating pad</td>
			<td style="width:209px;">Supertech</td>
			<td style="width:119px;">TMP-5b</td>
			<td>Heating pad with a temperature controller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Metal ring fixator</td>
			<td style="width:209px;">Neurotar Ltd.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ</td>
			<td style="width:209px;">NIH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Open source software for image processing and analysis, http://rsbweb.nih.gov/ij/&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thy1-YFPH mice strain</td>
			<td style="width:209px;">JaxLab</td>
			<td style="width:119px;">003782</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon microscopy of single nerve endings in skin

Deride sinir uçları, nöropatik ağrı 2 gibi 1 algılamak olarak hem de patolojik süreçlerde fizyolojik süreçlerde görev alır. Onların yakın-yüzey konumlandırma sağlam hayvan canlı cilt sinir uçlarının mikroskopik görüntüleme kolaylaştırır. Multiphoton mikroskopisi ile cilt dokusunun güçlü ışık saçılma sorunun üstesinden gelmek iyi görüntü elde etmek mümkündür. (Çevre duyu nöronları dahil olmak üzere) nöronlarda Thy-1 promotörünün kontrolü altında eksprese EYFP Raportör transgenik fareler ile birkaç aya kadar ya da yaşam boyu uzun bir süre boyunca tek tek sinir uçlarının uzunlamasına çalışmalar için uygundur. Ayrıca, görüntüleme için aynı femto saniye lazer kullanarak, bu sinir lifi yeniden çalışmalar için sinir lifleri yüksek ölçüde seçici lezyonlar üretmek mümkündür. Burada, in vivo görüntüleme uzunlamasına multiphoton için basit ve güvenilir bir protokolü vefare deri sinir uçları lazer tabanlı mikro.

Mümkündür Tarif edilen teknik kullanılarak, lezyon sonrası aynı elyaf izlemek ve hasarlı sinir uçları (Şekil 1) bozunmasını incelemek. 120-150 um&#39;lik bir kalınlığa sahip yığın elde edilmesi görüş alanı içinde bütün lif tutmak için birkaç gün boyunca tekrar görüntüleme için genellikle uygundur. Plastik ambalaj malzemesi cilt düzleştirmek için ayarlandığı zaman, genellikle lezyon öz üretilebilir, böylece kolajen tabakalar görüntü...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin at JoVE.com

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

Cilt Tek Sinir Endings Vivo İki-Foton Mikrokopisi

Dinamik boyuna görüntüleme ve muhabiri transgenik farelerin sinir uçlarının selektif lazer lezyon için protokol sunulmuştur.

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograd Floresan Etiketleme Belirlenen Nöronlar gelen Hedefli Hücre dışı Tek ünitesi Kayıt izin verir<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Ultrasonik Kan-beyin bariyeri bozulması ve Manganez kontrastlı MRG kullanma İşlevsel beyin görüntüleme

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

İki-Foton<em&gt; In vivo</em&gt; Bir inceltilmiş-kafatası Hazırlık kullanarak Fare Cortex dendritik dikenler Görüntüleme

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Eşzamanlı İki foton<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Retrosplenial kortekste sinaptik Girişlerin Görüntüleme ve postsinaptik Hedefler

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Saç Folikül hançer Endings Yaşam Sinir Terminal Etiketleme Optik İzleme<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Fare Kulak Cilt

A novel dissection and recording technique is described for optical monitoring staining and de-staining of lanceolate terminals surrounding hair follicles ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Vivo Yenidoğan farelerde kortikal nöronların iki fotonlu görüntüleme

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...