Name: simulating pancreatic neuroplasticity: in vitro dual-neuron plasticity assay
Uploaded: 2014-04-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay at JoVE.com

Все авторы способствовали созданию и проверки представленной анализа и к проекту рукописи.

Все экспериментальные животные процедуры в протоколе следуйте рекомендациям по уходу за животными из Технического университета в Мюнхене, Германия. 1. СМИ / Extract Подготовка <ol><li> Ткань гомогенизации Качество ткани гомогенизации имеет решающее значение для последую...

<ol>
	<li>Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+plasticity+in+the+gastrointestinal+tract:+chronic+inflammation,+neurotrophic+signals,+and+hypersensitivity.">Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity.</a> Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).</li><li>Vasina, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+neuroplasticity+evoked+by+inflammation.">Enteric neuroplasticity evoked by inflammation.</a> Auton. Neurosci. 126-127, 264-272 (2006).</li><li>Lomax, A. E., Fernandez, E., Sharkey, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+the+enteric+nervous+system+during+intestinal+inflammation.">Plasticity of the enteric nervous system during intestinal inflammation.</a> Neurogastroenterol. Motil. 17, 4-15 (2005).</li><li>Demir, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neural Invasion in Pancreatic Cancer: The Past, Present and Future. 2, 1513-1527 (2010).</li><li>Demir, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microenvironment+in+chronic+pancreatitis+and+pancreatic+cancer+induces+neuronal+plasticity.">The microenvironment in chronic pancreatitis and pancreatic cancer induces neuronal plasticity.</a> Neurogastroenterol. Motil. 22, 480-490 (2010).</li><li>Schafer, K. H., Mestres, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GDNF-induced+neurite+outgrowth+and+neuronal+survival+in+dissociated+myenteric+plexus+cultures+of+the+rat+small+intestine+decreases+postnatally.">The GDNF-induced neurite outgrowth and neuronal survival in dissociated myenteric plexus cultures of the rat small intestine decreases postnatally.</a> Exp. Brain Res. 125, 447-452 (1999).</li><li>Schafer, K. H., Van Ginneken, C., Copray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+and+neural+stem+cells+in+the+enteric+nervous+system.">Plasticity and neural stem cells in the enteric nervous system.</a> Anat. Rec. 292, 1940-1952 (2009).</li><li>Liebl, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+severity+of+neural+invasion+is+associated+with+shortened+survival+in+colon+cancer.">The severity of neural invasion is associated with shortened survival in colon cancer.</a> Clin. Cancer Res. 19, 50-61 (2012).</li><li>Sch&#228;fer, K. H., Saffrey, M. J., Burnstock, G., Mestres-Ventura, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+isolation+of+myenteric+plexus+from+the+newborn+rat+gastrointestinal+tract.">A new method for the isolation of myenteric plexus from the newborn rat gastrointestinal tract.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 1, 109-113 (1997).</li><li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+growth+factor+and+artemin+are+paracrine+mediators+of+pancreatic+neuropathy+in+pancreatic+adenocarcinoma.">Nerve growth factor and artemin are paracrine mediators of pancreatic neuropathy in pancreatic adenocarcinoma.</a> Ann. Surg. 251, 923-931 (2010).</li><li>Demir, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+in+chronic+pancreatitis+is+mediated+via+the+neurturin/GFRalpha2+axis.">Neuronal plasticity in chronic pancreatitis is mediated via the neurturin/GFRalpha2 axis.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 303, 1017-1028 (2012).</li><li>Joseph, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glia+are+multipotent+in+culture+but+primarily+form+glia+in+the+adult+rodent+gut.">Enteric glia are multipotent in culture but primarily form glia in the adult rodent gut.</a> J. Clin. Invest. 121, 3398-3411 (2011).</li></ol>

Настоящий протокол предназначен для иллюстрации методики позади в пробирке поджелудочной Нейропластичность анализа, который был недавно разработанной нашей группой для изучения механизмов нейропластичности в РПЖ и CP 5. Протокол включает в себя процедуру трехдневный кото?...

Изменения в желудочно-кишечном (GI) нерва морфологии и плотности привлекли внимание гастроэнтерологов и патологоанатомов в течение длительного времени, но их актуальность для патофизиологии GI заболеваний остается неизвестной 1-3. Действительно, несколько весьма распространенных расстройств ЖКТ, такие как гастрит, рефлюкс-эзофагит, колит, дивертикулит, и аппендицита связаны с повышенной плотностью иннервации в воспаленные участки ткани 1. Однако ни подлинной внимание до сих пор не было уделено механизмам и значении нейропластичности в желудочно-кишечном тракте. У морфологически измененные нервы GI отличаются от нормальных нервов GI, то есть нормального состояния кишечной нервной системы, с точки зрения их функции? Каковы последствия измененным содержанием нейропептида / нейромедиатора в пластиковых кишечных нервов? Ли периферийная нейропластичность всегда влечет за собой измененную сигнализации для центральной нервной системы? А где центральные проекции пластиковой EXTRINSIC Г.И. нервные пути? Длинный ряд таких ключевых вопросов может быть легко сгенерирована при взгляде на малочисленность наших знаний о функциональных аспектах GI нейропластичности. Изучение GI нейропластичностью на функциональном уровне требуется действительные, воспроизводимые и до сих пор легко применимые экспериментальные модели. В эпоху большую популярность и признание генно-инженерных условных мышиных моделях (GECoMM), таких в настройках естественных условиях располагают потенциалом для выяснения ранее неизвестных аспектов GI нейропластичности в реалистической моды 1. Тем не менее, разработка и производство GECoMM остается дорогостоящим, трудоемким и, особенно, отнимает много времени. Кроме того, они требуют априорной выбор цели для условно модулированного в генетически измененной мыши (например, трансгенные суперэкспрессии фактора роста нервов / ФРН в кишечных эпителиальных клеток). Следовательно, для DESIGN успешного GECoMM, исследователи должны некоторые показатели (например, предыдущие экспериментальные данные) из стоящей цели, то есть, что молекула представляет интерес (здесь NGF), по крайней мере можно ожидать оказывать некоторые биологически соответствующие эффекты на ЖКТ нервов. Такие показатели могут быть легко получены из адекватным в пробирке моделей, в которых выделенные клеточные подтипы от комплексной микроокружении в естественных условиях системы могут быть выборочно совместно культивировали в гетеротипичной образом 4-7. Модуляция молекулярных мишеней в таком гетеротипичной обстановке культуры в среднем технически менее громоздким, быстрее, и, следовательно, может помочь в Префильтрация из достойных целей для проверки в естественных условиях исследования в. Недавно мы представили в пробирке Нейропластичность анализа, которая была разработана для имитации повышенную нервную плотность и гипертрофию intrapancreatic пеРВЭС в человеческой рака поджелудочной железы (РПЖ) и хронического панкреатита (CP) тканей. Здесь, нейроны, полученные из новорожденных крыс ганглиях задних корешков (DRG) или мышечной оболочки кишечника сплетения (МП) подвергали воздействию тканевых экстрактах из хирургически удаленных РПЖ или CP тканей образцов и по сравнению с теми культивировали в нормальной человеческой поджелудочной железы (NP) тканевых экстрактах 5. Вместо того, чтобы тканевые экстракты, можно также использовать клеточной линии супернатантами изучить влияние отдельных типов клеток на нейропластичности. В сочетании со стандартизированным измерения морфометрического, представлены нейропластичности анализ позволяет действительный и воспроизводимую оценку нейрональной пластичности в ответ на различные поджелудочной микросреды. В частности, она позволяет моделирование 1) морфологической нейропластичности, то есть изменения в аксонов, разветвления рисунка и размеров нейронов, и 2) функциональной нейропластичности, то есть изменения в возбудимости периферических нейронах. Более того, не только периферические (т.е. </em&gt; Кишечно), но и центральный (например DRG или второй спинной заказ) нейроны могут быть включены в настоящее анализа для оценки их морфологические и функциональные реакции на различным содержанием Г.И. ткани. В настоящем видео-учебник, мы продемонстрировать техническую протокол для выполнения этого анализа и обсуждения свои преимущества и недостатки. Кроме того, мы обращаем внимание на применимости основного понятия этом анализе к изучению нейропластичности в любой GI органа.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="817">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Poly-D-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:124px;">P1149</td>
			<td style="width:328px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ornithine/laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2533/L4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">13mm coverslips</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>For use in 24-well plates</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dismembranator S</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Beta-III-tubulin antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1637</td>
			<td>1:200 concentration</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-GFAP-antibody</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>M0761</td>
			<td>1:400 concentration</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RIPA buffer + protease inhibitor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Neurobasal medium</td>
			<td>Gibco/Life sciences</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">B-27 supplement</td>
			<td>Gibco/Life sciences</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Quality of B-27 is known to depend on the lot number</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gentamicin/Metronidazol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Minimal essential medium</td>
			<td>Gibco/Life sciences</td>
			<td>31095-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hank&#8217;s Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco/Life sciences</td>
			<td>24020133</td>
			<td>Improves collagenase activity when containing Ca/Mg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagenase type II</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>CLS-2</td>
			<td>Obtain lots with at least 200U/mg activity</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin-EDTA 0,25%</td>
			<td>Gibco/Life sciences</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4% Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">analySIS docu software</td>
			<td style="width:149px;">Olympus</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simulating pancreatic neuroplasticity: in vitro dual-neuron plasticity assay

Нейропластичность является неотъемлемой особенностью кишечной нервной системы и желудочно-кишечного (GI) иннервации при патологических состояниях. Тем не менее, патофизиологическая роль нейропластичности при расстройствах ЖКТ остается неизвестной. Новые экспериментальные модели, которые позволяют моделирования и модуляцию GI нейропластичностью может включить расширенное оценку вклада нейропластичности в частности GI заболеваний, таких как рак поджелудочной железы (РПЖ) и хронического панкреатита (ХП). Здесь мы приводим протокол для моделирования поджелудочной нейропластичности в условиях в пробирке с использованием новорожденного крысы ганглии задних корешков (DRG) и мышечной оболочки кишечника сплетение нейронов (MP). Эта двойная-нейрон подход не только позволяет осуществлять мониторинг как орган-внутренняя и внешняя-нейропластичности, но и представляет собой ценный инструмент для оценки нейронов и глиальных морфологию и электрофизиологии. Кроме того, она позволяет функциональную модуляцию поставляемых микроокружения содержания для изучения их Impacт на нейропластичности. После создания, настоящее нейропластичность анализ несет потенциал быть применимо к изучению нейропластичности в любой GI органа.

Морфологические нейропластичность В указанном возрасте от новорожденных крыс (Р2-12) и плотностей высева, MP и DRG нейроны уже построения плотных нейронные сети после 48 часов (рис. 2А). Сравнение плотности аксонов между нейронами, культивируемых в РПЖ, CP, и NP экс?...

Watch this Scientific Journal Video about Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay at JoVE.com

Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay

Нейронов пластичность более широкое признание, но недостаточно понимать особенность желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Здесь, в примере поджелудочной железы человека, приведены в пробирке нейропластичности анализа для изучения нейрональной пластичности в желудочно-кишечном тракте на обоих морфологической и функциональной уровне.

Имитация поджелудочной Нейропластичность:<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; Dual-нейрон Пластичность Анализ

Neuroplasticity is an inherent feature of the enteric nervous system and gastrointestinal (GI) innervation under pathological conditions. However, the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

В пробирке мезотелиальной Анализ просвет, что модели ранних стадиях рака яичников Метастазы

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Развитие Audio на основе виртуальной игровой среды для оказания помощи навыки навигации в слепых

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

A Murine Model of Cervical Spinal Cord Injury to Study Post-lesional Respiratory Neuroplasticity

Мышиной модели шейки травмы спинного мозга по изучению пост-поврежденной органов дыхания Нейропластичность

A cervical spinal cord injury induces permanent paralysis, and often leads to respiratory distress. To date, no efficient therapeutics have been developed ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Многоэлектродной массива Записи человека эпилептические Послеоперационный корковой ткани

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Оценка Трансмиссивные губчатой ​​энцефалопатии видов барьеров с<em&gt; In Vitro</em&gt; Prion Анализ белковом обмене

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

A High-content In Vitro Pancreatic Islet ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Replication Discovery Platform

Высокая-контент<em&gt; In Vitro</em&gt; Панкреатическими островками β-клеток репликации Discovery Platform

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Форсколин-индуцированной Отек в кишечном органоидов:<em&gt; In Vitro</em&gt; Анализ для оценки ответа на наркотики в больных муковисцидозом

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Application of End-to-end Anastomosis in Robotic Central Pancreatectomy

Применение анастомоза конец в конец в роботизированной Центральной Панкреатэктомия

Central pancreatectomy is carried out for the treatment of benign or low-malignant potential tumors located in the pancreatic neck or proximal part of ...

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Intraportal трансплантация панкреатических островков в мышиной модели

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...