Name: proprioception and tension receptors in crab limbs: student laboratory exercises
Uploaded: 2013-10-24T17:00:00
Duration: 12 min 58 s
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Gli autori sono grati per i contributi artistici di Hyewon Cooper.

<ol>
	<li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chordotonal+organs+in+Crustacea.">Chordotonal organs in Crustacea.</a> Nature. 187, 522-523 (1038).</li><li>Alexandrowicz, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+anatomy+of+leg+propriocetors+in+some+decapod+Crustacea.">The comparative anatomy of leg propriocetors in some decapod Crustacea.</a> J. Mar. Biol. Assoc. U.K. 52 (3), 605-634 (1972).</li><li>Hartman, H. B., Boettiger, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+organization+of+the+propys-dactylus+organ+in+Cancer+irroratus+Say.">The functional organization of the propys-dactylus organ in Cancer irroratus Say.</a> Comp. Biochem. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+proprioceptive+neurons+on+chordotonal+organs+in+the+crab,+Cancer+magister.">Mapping proprioceptive neurons on chordotonal organs in the crab, Cancer magister.</a> Crustaceana. 81 (4), 447-475 (2008).</li><li>Burke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+for+proprioception+and+vibration+sense+in+Carcinus+maenas.">An organ for proprioception and vibration sense in Carcinus maenas.</a> J. Exp. Biol. 31, 127-138 (1953).</li><li>Hill, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> First and Last Experiments in Muscle Mechanics. , (1970).</li><li>Stuart, D. G., Mosher, C. C., Gerlach, R. L., Reinking, R. 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Sci. 245 (725), 291-325 (1962).</li><li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+crustacean+proprioceptors.+II.+The+thoracico-coxal+organs+in+Carcinus,+Pagurus+and+Astacus.">The fine structure of crustacean proprioceptors. II. The thoracico-coxal organs in Carcinus, Pagurus and Astacus.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 248 (752), 437-456 (1965).</li><li>Leksrisawat, B., Cooper, A. S., Gilberts, A. B., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Receptor+Organs+in+the+Crayfish+Abdomen:+A+Student+Laboratory+Exercise+in+Proprioception.">Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception.</a> J. Vis. Exp. (45), e2323 (2010).</li><li>Baierlein, B., Thurow, A. L., Atwood, H. L., Cooper, R. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+molting+effects+on+a+proprioceptor+organ+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Regeneration and molting effects on a proprioceptor organ in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> J. Neurobiol. 25 (5), 461-471 (1994).</li><li>Hartman, H. B., Austin, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proprioceptor+organs+in+the+antennae+of+Decapoda+Crustacea.">Proprioceptor organs in the antennae of Decapoda Crustacea.</a> J. Comp. Physiol. 81 (2), 187-202 (1972).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+sensory+processes+during+limb+regeneration+in+adult+crayfish.">Development of sensory processes during limb regeneration in adult crayfish.</a> J. Exp. Biol. 201 (Pt 11), 1745-1752 (1998).</li><li>Chung, Y. -. S., Cooper, R. M., Graff, J., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+and+chronic+effect+of+low+temperature+on+survival,+heart+rate+and+neural+function+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+and+prawn+(Macrobrachium+rosenbergii)+species.">The acute and chronic effect of low temperature on survival, heart rate and neural function in crayfish (Procambarus clarkii) and prawn (Macrobrachium rosenbergii) species.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 2 (3), 75-86 (2012).</li><li>Blundon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+and+thermal+history+on+neuromuscular+properties+of+two+crustacean+species.">Effects of temperature and thermal history on neuromuscular properties of two crustacean species.</a> J. Comp. Physiol. B. 158 (6), 689-696 (1989).</li><li>Cooper, R. M., Schapker, H., Adami, H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+and+ventilatory+measures+in+crayfish+during+copulation.">Heart and ventilatory measures in crayfish during copulation.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 1 (3), 36-42 (2011).</li><li>Bierbower, S. M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanistic+action+of+carbon+dioxide+on+a+neural+circuit+and+NMJ+communication.">The mechanistic action of carbon dioxide on a neural circuit and NMJ communication.</a> Journal of Experimental Zoology. , (2013).</li><li>Bierbower, S. M., Shuranova, Z. P., Viele, K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+systems+and+environmental+change+on+behavior+during+social+interactions.">Sensory systems and environmental change on behavior during social interactions.</a> Brain Behav. 3 (1), 4-13 (2013).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Lo scopo di questa serie di esperimenti è 1) insegnare ed esporre i principi fondamentali di registrazioni extracellulari da un organo propriocettiva identificabile e la tensione nervosa e 2) per sottolineare l&#39;importanza della mappatura anatomica in relazione alla funzione fisiologica di particolari sistemi sensoriali. Questo approccio sperimentale e modelli animali utilizzati sono poco costoso e relativamente facile da condurre in laboratori didattici neurofisiologia. I neuroni di organi cordotonali sono di due tipi funzionali specifici, quelli che rispondono al movimento e coloro che rispondono a posizioni statiche. Registrazioni di cellule singole a partire da una varietà di organi cordotonali, non importa quale viene esaminato congiunta, hanno dimostrato che questo sia il caso di 3,5. Infatti, gli organi cordotonali associati alle articolazioni antennali di aragoste rivelano gli stessi due tipi sensoriali e anatomia di base 27. Oltre a ci siano due tipi di neuroni (movimento e position), i neuroni condividono la stessa disposizione anatomica sui rispettivi fili elastici. Il grande somata trova prossimale sul filamento tendono ad appartenere ai neuroni sensibili movimento dinamico. I neuroni che segnalano posizioni statiche hanno piccole somata e si trovano distale. Queste cellule sono tonico attivo. Il giunto PD contiene solo un singolo organo cordotonali mentre ci sono due organi cordotonali nel carpo-propodus (CP) e merus-carpo (MC) articolazioni. La dissezione di esporre le strutture propriocettivi in granchi blu (C. sapidus) per la registrazione elettrofisiologica richiede una strategia che permette movimenti articolari che si terrà nelle posizioni naturali, mentre la registrazione da neuroni sensoriali. Il nervo tensione per il muscolo opener nella gamba a piedi è un bellissimo nervo composto da diversi neuroni. A meno che non si fa attenzione, il nervo tensione nonché il nervo motore che innervano il muscolo da stimolare, possono essere danneggiati durante questa dissezione. Perregistrazioni ottimali gli elettrodi di aspirazione devono essere adattati alle dimensioni del nervo. Le registrazioni sono facilmente accessibili in un laboratorio studente utilizzando un microscopio ingrandimento di dissezione 30-40X e micromanipolatori di fascia bassa. Futuri esperimenti che sarebbe interessante proseguire con gli organi cordotonali comune sarebbe quello di esaminare i profili strutturali e fisiologiche durante la rigenerazione gamba in varie specie nelle diverse fasi del ciclo di vita come un follow-up a un primo studio che ha utilizzato Cancer magister 19,26 . Domande ancora da affrontare sono: 1) non effettua la distribuzione e l&#39;organizzazione dei neuroni artificiali dipendono dall&#39;età dell&#39;animale quando rigenerare un arto, 2) sono le proiezioni assonale al CNS (cordone nervoso ventrale) in un arto rigenerante funzionale o lo fa prendere tempo e l&#39;uso congiunto di stabilire connessioni funzionali, e 3) che cosa accade agli assoni mozzate prossimale al piano autotomy quando l&#39;arto è autotomized? 28 Crostacei conformi alle condizioni ambientali e la loro temperatura circostante, ma non è chiaro come si mantengono coordinamento all&#39;interno di un circuito neurale come neuroni alterano la loro attività in risposta alle variazioni di temperatura. Un basso tasso di cambiamento potrebbe permettere all&#39;animale po &#39;di tempo per acclimatarsi, mentre un rapido cambiamento può not29, 30. Cambiamenti fisiologici di pH o di osmolarità a causa di metabolismo, il comportamento 31, o l&#39;impatto ambientale, possono presentare problemi simili ai circuiti neurali coinvolti nella propriocezione. Queste preparazioni crostacei sono ideali per affrontare questi tipi di problemi perché la loro funzione è ben caratterizzata a livello di singola cellula. In questo protocollo abbiamo dimostrato l&#39;importanza fisiologica dei neuroni tensione in forza generata dal muscolo apri monitoraggio. Questi recettori di tensione possono essere ricondotte alla loro posizione all&#39;interno della apodeme utilizzando procedure di colorazione. Questeneuroni, come nei mammiferi, rilevano forza a vari livelli e reclutare neuroni addizionali come la forza aumenta. La frequenza di attività è correlata alla frequenza di stimolazione del motoneurone fino a saturazione in ricezione. Utilizzando un protocollo sgancio rapido con il giunto dactylus flessa, attività tensione sparisce rapidamente, ma poi torna sui riconquistare la tensione in un giunto completamente esteso. Questa è una procedura sperimentale classico per illustrare la forza misurata dai recettori di tensione. Vari neuromodulatori possono essere applicati alla preparazione di vedere come effettua lo sviluppo della forza e della risposta neuronale. Uno degli aspetti importanti è come le risposte neurali vengono elaborati e integrati nel sistema nervoso centrale e loro impatto sull&#39;attività dei neuroni motori. Le tecniche che abbiamo mostrato permettono di iniziare ad affrontare ulteriori informazioni sulla (sensoriale) Funzione circuito neurone nervo motore tensione, cioè il segnale in una gamba intatta al ganglio e ritornoal muscolo. Le procedure di colorazione sono dimostrati chiave per comprendere la fisiologia dei neuroni sensoriali che innervano organi propriocettivi. Disposizione anatomica dei neuroni in base alla funzione e la dimensione del soma sono simili nei vari organi cordotonali all&#39;interno delle gambe di granchio. Non è noto se accordi neuronali simili si trovano anche in altre specie di insetti o crostacei. Combinando le registrazioni fisiologiche da singole cellule e la mappatura della posizione permette relazioni funzionali struttura diretta. La conservazione a lungo termine del regime anatomica con CoCl 2 colorazione e dal fissaggio permette di fare ripetutamente le misure e valutare la disposizione strutturale. Propriocezione e ricezione tensione dei muscoli scheletrici sono modalità sensoriali che consentono comportamenti coordinati e risposte ambiente esterno ed interno per animali articolati in una varietà di configurazioni di muscolo scheletricos. L&#39;organo recettore muscolare nell&#39;addome del gambero è un altro preparato ben documentata (vedi il Progetto Crawdad, <a href="http://www.crawdad.cornell.edu/">http://www.crawdad.cornell.edu/</a> ) a fini didattici di propriocezione con soli due neuroni per addominali emi-segmento 23 . Essere in grado di registrare da singoli neuroni a fasci nervosi sensoriali fornisce ulteriori dettagli che aiuti a comprendere i principi fondamentali della percezione sensoriale. Questi relativamente semplici preparazioni di crostacei permettono di affrontare gli aspetti fondamentali della propriocezione e controllo tensione, con il potenziale per determinare i circuiti neurali che consentono l&#39;integrazione centrale di ingressi propriocettivi e altri sensoriali 9-12, 32, 33.

Propriocezione è la sensazione di posizione dell&#39;arto e movimento che consente comportamento coordinato motore. Propriocettori consistono in posizione (statico) e il movimento recettori (cinestetica). In insetti e crostacei, gli organi cordotonali sono le strutture che forniscono tali informazioni al sistema nervoso centrale 1. Non tutti gli organi cordotonali abbracciano una comune, ma possono ancora controllare i movimenti articolari a causa del loro attaccamento alle apodemes (come le strutture tendinee), che coprono il giunto e si muovono in associazione con il muscolo scheletrico e l&#39;articolazione congiunta. Granchio gambe hanno sei giunti, ciascuno con uno o due organi cordotonali 2. Tipicamente un organo cordotonali ha 60-100 o più neuroni sensoriali incorporati all&#39;interno di un filo elastico, i neuroni che segnalano la posizione comune statica, direzione e velocità di movimento 3-6. L&#39;ingresso da organi cordotonali ad ogni articolazione e la gamba viene poi elaborato centralmente permettendo movimenti coordinati da parte degli animali. <p class="jove_content"&gt; Le forze che muscoli delle gambe producono durante contrazioni isometriche e isotoniche vengono rilevati dai recettori di tensione associati alle fibre muscolari e dei loro allegati ai apodemes7-9. Nei protocolli gambe piedi crostacei che seguono vi presentiamo metodologia per registrazioni da neuroni sensoriali primari che controllano la propriocezione e neuroni che rispondono alle forze generate da fibre muscolari. Una tecnica per l&#39;attivazione movimenti delle gambe e quantificare generazione della forza è presentato anche, così come le tecniche anatomiche che possono essere utilizzati per caratterizzare la disposizione di queste strutture del sistema nervoso periferico. Le procedure illustrate in dettaglio successivamente consentire l&#39;analisi strutturale e funzionale dei neuroni che innervano entrambi i tipi di recettori relativi alla loro posizione su un filo elastico cordotonali e apodeme. Per illustrare, usiamo il propodite-dactylopodite (PD) organo cordotonali, l&#39;organo che attraversa il segmento più distale della gamba granchio 3.Anche se studi elettrofisiologici dettagliati iniziarono nel 1930 e sono ancora in corso oggi, alcuni aspetti sono diventati noti per le connessioni segmentale dei propriocettori nelle varie articolazioni e il loro ruolo nel controllo coordinato di muscles10-16. Stabilire il rapporto struttura-funzione tra gli organi propriocettivi, i muscoli e il sistema nervoso ulteriormente aiutare a definire questi ruoli. Ad esempio, l&#39;etichettatura del somata e terminazioni distali dei neuroni tensione inserite nel apodeme rivelerà la loro posizione rispetto alle fibre muscolari 8,17-21. Presentiamo tre tecniche di colorazione per le gambe dei crostacei che possono essere utilizzati nella ricerca o laboratori accademici. Metilene colorazione blu offre un contrasto adeguato per muscoli e nervi ed è raccomandato come una semplice tecnica per gli studenti di imparare l&#39;anatomia. Labs che hanno configurazioni microscopia a fluorescenza possono realizzare più selettivo colorazione neuronale esponendo brevemente il nervos al colorante vitale a 4-di-2-ASP. La terza alternativa è CoCl 2 di recupero, che colora e fissa i neuroni, e non necessita di imaging di fluorescenza. Anche se è lavoro e tempo intenso, questo processo di colorazione conferisce un elevato contrasto e specificità per i nervi che sono pieni. Insieme, queste tecniche possono essere utilizzate per la comparazione dei vari organi cordotonali, non solo all&#39;interno di un arto o tra gli arti, ma anche tra le altre specie di crostacei e insetti 20-22. Granchi blu (C. sapidus) utilizzati nelle registrazioni fisiologiche e anatomiche per la colorazione sono facilmente disponibili in tutto il confine meridionale e sud-est degli Stati Uniti. Questa specie funge da rappresentante del regime nervose cordotonali e la tensione si trovano nella maggior parte dei granchi. Laboratori sulla costa occidentale preferiscono utilizzare il molto più grande granchio Dungeness (Cancer magister) per questi esperimenti.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="686">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sylgard</td>
			<td style="width:184px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:119px;">182 silicone kit</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9333</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5670</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES acid</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">3375</td>
			<td style="width:167px;">Free acid, crystalline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES base</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G7021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M2643</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Na2SO4&#8226;10H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">246980</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bouin&#8217;s solution fixative</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">HT10-1-32</td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material (Special shipping cost required)</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">CoCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material. Please follow proper disposal according to local and federal regulations.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Methylene blue chloride</td>
			<td style="width:184px;">Matheson Co., Inc</td>
			<td style="width:119px;">Basic Blue 9, C.I. 52015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">4-Di-2-ASP</td>
			<td style="width:184px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">4-(4-diethylaminostyryl)-N-methylpyridinium iodide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bleach</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To chloride silver wire</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221465</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H1758</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Materials</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dissecting tools</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">assortment</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Intracellular electrode probe</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Faraday cage</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools, Inc</td>
			<td style="width:119px;">26001-60</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting microscope (100X)</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fiber optic lamp</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Small adjustable mirror</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To direct light beam toward the preparation.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glass electrodes</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">CLS7095B5X</td>
			<td style="width:167px;">Box of 200, suction electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">MD4-M3-R</td>
			<td style="width:167px;">Can fix for base or on a metal rod</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Raised preparation stand</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Silver wire (10/1,000 inch)</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">782500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Computer</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">AC/DC differential amplifier</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">Model 3000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PowerLab 26T</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">27T</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Force transducer</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">0-50g</td>
			<td style="width:167px;">MLTF050/ST</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Head stage</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Comes with AC/DC amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LabChart7</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Electrical leads</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass tools</td>
			<td style="width:184px;">Make yourself</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">For manipulating nerves</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cable and connectors</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pipettes with bulbs</td>
			<td style="width:184px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7</td>
			<td style="width:167px;">Box of 500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Beakers</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Wax or modeling clay</td>
			<td style="width:184px;">Any company or local stores</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stimulator</td>
			<td style="width:184px;">Grass Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SD9 or S88</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="84" rowspan="2" style="height:84px;width:216px;">Plastic tip for suction electrode</td>
			<td rowspan="2" style="width:184px;">Local hardware store (Watt&#8217;s brand)</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">&#188; inch OD x 0.170 inch ID</td>
			<td style="width:167px;">Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proprioception and tension receptors in crab limbs: student laboratory exercises

Lo scopo principale di queste procedure è di dimostrare per fini didattici e di ricerca come registrare l&#39;attività dei neuroni sensoriali primari vivere responsabili della propriocezione come sono Rilevazione della posizione comune e il movimento, e la tensione muscolare. Attività elettrica da propriocettori crostacei e recettori di tensione viene registrata dalla strumentazione neurofisiologico di base, e un trasduttore viene utilizzato per misurare simultaneamente forza generata stimolando un nervo motore. Inoltre, dimostriamo come macchiare i neuroni per una rapida valutazione della loro organizzazione anatomica o per il fissaggio permanente. La colorazione rivela organizzazione anatomica che è rappresentativo di organi cordotonali nella maggior parte dei crostacei. Confrontando le risposte tensione nervose verso le risposte propriocettive è uno strumento didattico efficace nel determinare come questi neuroni sensoriali sono definiti funzionalmente e come l&#39;anatomia è correlata alla funzione. Tre tecniche di colorazionesono presentati consentendo ai ricercatori e istruttori di scegliere un metodo che è ideale per il loro laboratorio.

Quando l&#39;organo PD è allungato estendendo completamente il giunto, attività nel nervo PD è robusto durante il movimento come illustrato per il primo secondo in Figura 10. Alcune attività rimane mentre è tenuto fermo nella posizione di apertura. Questa attività è dai neuroni sensibili statici posizione (seconda metà di registrazione mostrato nella Figura 10). Movimento evoca una risposta durante lo spostamento, e la cottura è presente soprattutto durante l&#39;allungamento del filamento cordotonali (Figura 11). Ulteriori analisi delle punte può essere facilmente avvicinato di classificare le relative ampiezze. Questo è un approccio per dimostrare le diverse popolazioni di neuroni sensoriali essere reclutati per posizioni o tipi di movimenti 5. Ampiezze tipiche vanno 0,25-1,5 mV, ma questi valori dipendono dalla resistenza (cioè tenuta) della tenuta elettrodo di aspirazione. Frequenza dei picchi di tha varie gamme di dimensioni può anche essere rappresentato graficamente per l&#39;analisi. Forze generate dal muscolo apri rispetto alla frequenza di stimolazione possono essere confrontati sovrapponendo le rispettive tracce tensione-tempo sopra l&#39;altra (Figure 13A e B). Questo può anche essere eseguita per ogni posizione collettiva a ogni data frequenza di stimolazione. Attività del nervo tensione può poi essere correlato con la quantità di forza relativa generato per ciascuna frequenza di stimolazione, e per ogni posizione comune. Come nel nervo PD, una varietà di ampiezze picco sono considerati in risposta alla contrazione del muscolo apri (Figura 13C). Disposizione anatomica dei neuroni nella gamba a piedi è chiaramente osservata con colorazione blu di metilene (Figura 14). Notare il cordotonali filo e la tensione neurone elastico che si trova vicino al apodeme. Diversi somata con differenti diametri did località specifiche sono visibili anche in questa figura. L&#39;intero corso del nervo tensione e barella nervo motore sono mostrati in Figura 15. Neuroni individuali del nervo PD sono mostrati con maggiore contrasto utilizzando 4-Di-2-ASP (Figura 16) e CoCl 2 (Figura 17) di recupero informazioni tecniche. Ad alto ingrandimento le terminazioni sensoriali possono essere visti all&#39;interno delle scolopales di supporto (Figure 16B) 21,22,26. <img alt="Figura 10" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig10.jpg" width="500px" /> Figura 10. Spostare e tenere a 0 °. I neuroni dinamici sono robusti in cottura durante il movimento e picchi di neuroni sensibili all&#39;elettricità statica sono presenti mentre il comune è tenuto aperto. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig10highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita &lt;</a>/ A&gt;. <img alt="Figura 11" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig11.jpg" width="500px" /> Figura 11. Rapid aperto e chiusura da completamente flessa in posizione estesa (90-0 °). <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig11highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 12" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig12.jpg" width="500px" /> Figura 12. Extracellulari picchi registrati dal nervo PD. Il giunto è completamente estesa e poi rapidamente spostato in una ½ posizione flessa e poi tenendola ferma. Si noti l&#39;attività durante il movimento e la diminuzione dell&#39;attività quando statica. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig12highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire ima</a>ge. <img alt="Figura 13" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig13.jpg" width="500px" /> Figura 13. Le forze relative che si sviluppano con il giunto completamente flesse e stimolati alle varie frequenze. (A) tracce Voltage-time dal trasduttore di forza sono indicati con ogni frequenza di stimolazione. (B) Le tracce nel pannello A si sovrappongono in diversi colori per la facilità di confronto. (C) Tensione in tempo le tracce di attività elettrica registrate dal nervo tensione quando il nervo motore è stato stimolato a 80 Hz. Si noti la struttura regolare di manufatti come stimolo rispetto all&#39;attività neurale. Inoltre, notare le diverse ampiezze delle risposte neurali. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig13highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . Figura 14. Blu di metilene macchia della preparazione gamba a piedi. Somas individuali vengono mostrati con le loro terminazioni sensoriali proiettando nel filo elastico. Vicino alla apodeme un neurone tensione è mostrato. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig14highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 15" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig15.jpg" width="500px" /> Figura 15. Il nervo tensione derivante dalla estremità distale (frecce rosse) e unire il nervo motore (freccia verde). <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig15highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . Figura 16. (A) Un back-riempimento del nervo PD in Cancer magister con 4-Di-2-ASP. (B) Maggiore ingrandimento delle terminazioni sensitive. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig16highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <img alt="Figura 17" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig17.jpg" width="500px" /> Figura 17. I neuroni che sono stati riempiti con CoCl 2 e trattati (A). Contorno Tracciato della preparazione macchiato mostrato (B). <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig17highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> . <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot; width = &quot;392&quot;&gt; <colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:235px;"> Salino </td><td style="width:157px;"> g / L </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> NaCl </td><td style="width:157px;"> 27.29 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> KCl </td><td style="width:157px;"> 0.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> MgSO 4 • 7H 2 O </td><td style="width:157px;"> 4.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> CaCl 2 • 2H 2 O </td><td style="width:157px;"> 1.85 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> Na 2 SO 4 • 10H 2 O </td><td style="width:157px;"> 0.97 </td></tr><tr height=&quot;20&quot;&gt; <td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Destrosio (D-glucosio) </td><td style="width:157px;"> 1.982 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> L&#39;acido HEPES </td><td style="width:157px;"> 0,476 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> HEPES sale </td><td style="width:157px;"> 2.08 </td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:235px;"> Regolare a pH 8.1 con NaOH o HCl </td><td style="width:157px;"></td></tr></tbody></table> Tabella 1. Ricette per granchi salina.

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Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Tecniche fisiologiche e anatomiche sono dimostrati per affrontare funzione e la struttura per propriocettori articolari e recettori tensione muscolare degli arti crostacei piedi.

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