Name: aplysia ganglia preparation for electrophysiological and molecular analyses of single neurons
Uploaded: 2014-01-13T13:00:00
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화이트홀 재단이 이 사업을 수행한 스크립스 연구소의 자금 지원과 스타트업 기금에 진심으로 감사드립니다.

1. 복 부 신경의 준비, 전기 생리 측정, 및 Aplysia californica의 복부 신경절에서 단일 식별 된 뉴런의 격리
<ol><li>12:12 빛:어두운 조건에서 16°C에서 인공 해수(ASW)를 순환하는 실험실 수족관에서 액량증을 유지합니다.</li>
	<li>복부 신경절의 격리.<ol>
<li>5-10 분 (동물의 체중의 30-35 %에 해당)에 대한 380 mM MgCl2 용액을 주입하여 동물을 마취.</li>
		<li>중추 신경계의 위치에 따라 복부 ?...

뉴런 R15는 심혈관 조절, 소화, 호흡기 및 생식시스템(30)에관여한다. AP의 정기적으로 리듬 파열 활동은 R15의 특징입니다. 결과 섹션에 도시된 바와 같이, R15 및 L7의 페어링된 레코딩은 신경리아 제제가 R15 뉴런의 활성을 보존하고 있음을 보여준다. R15 및 L7 뉴런은 Ach에 적절하게 반응했습니다. 이 신경질 제제는 8-10 시간까지 유지 될 수 있고 전기 생리 활성은 지속적으로 모니터링 될 수있?...

인간의 뇌는 거의 1,000억 개의 뉴런과 수조 개의 시냅스 연결로 매우 복잡합니다. 뉴런과 상호 작용하고 뇌에서 의 기능을 조절하는 비 신경 세포의 거의 동일한 수가 있습니다. 뉴런은 특정 행동을 조절하는 회로로 구성됩니다. 뇌 기능 및 신경 회로에 대한 이해의 발전에도 불구하고 특정 동작을 제어하는 회로 구성 요소의 정체성에 대해서는 알려진 것이 거의 없습니다. 회로의 다양한 구성 요소의 정체성에 대한 지식은 크게 행동의 세포 및 분자 기초의 우리의 이해를 용이하게하고 신경 정신 장애에 대한 새로운 치료 전략을 개발하는 데 도움이.
해양 달팽이 Aplysia californica는 특정 행동1-14의근본적인 신경 회로를 결정하기위한 주력이었다. Aplysia 신경계는 9개의 다른 신경통으로 조직되는 대략 20,000의 신경세포를 포함합니다. Aplysia의 뉴런은 크고 그들의 크기, 전기 적 특성 및 신경리아의 위치에 따라 쉽게 식별 할 수 있습니다. Aplysia는 연구할 수 있는 행동의 풍부한 레퍼토리가 있습니다. 잘 연구 된 행동 중 하나는 아가미 철수 반사 (GWR)입니다. 이 반사의 중앙 구성 요소는 복부 신경통에 위치하고 있습니다. GWR 회로의 구성 요소가 매핑되고 다양한 구성 요소의 기여가 결정되었습니다. 중요한 것은, GWR 회로는 연관 및 비연관적 학습5,6,15-19를겪는다. 이 반사에 대한 연구의 수십 년은 또한 학습및 기억20-24에중요한 역할을 여러 신호 경로를 확인했다.
Aplysia의 몇몇 다른 준비는 기억 저장의 세포 그리고 분자 기초를 공부하기 위하여 이용되었습니다. 여기에는 온전한 동물2,3,반전준비1,7,13,14,16 및 신경 회로의 주요 성분의재구성이 포함된다 25-29. 확인된 신경 회로의 전기 생리학적 및 분자 분석을 위한 Aplysia 신경리아를 탐구하기 위한 감소된 준비는 여기에서 기술됩니다. 다음 4 개의 확인 된 뉴런 을 공부 했다. R15, 파열 뉴런, L7 및 L11, 두 개의 다른 모터 뉴런과 R2, 콜린성 뉴런을 연구했다. R2는 무척추 동물 신경계에 설명 된 가장 큰 뉴런입니다. 간단히 말해서, 이 방법론은 신경리아의 프로테아제 치료, 약리학적 치료 전후의 전기 생리학적 측정, 유전자 발현의 정량적 분석을 위한 단일 뉴런의 분리를 포함합니다. 이 방법론은 분자 분석을 여러 뉴런의 동시 기록과 결합할 수 있게 해줍니다. 이 방법론은 성공적으로 쌍 세포 내 기록에 의해 아세틸 콜린 (Ach)에 R15 및 L7 뉴런의 응답을 연구하는 데 사용되었다. 전기생리학적 측정 에 이어 R15 및 L7 및 L11 및 R2와 같은 다른 확인된 뉴런은 메모리 저장에 중요한 전사 인크레B1의 발현의 정량적 폴리머라제 연쇄 반응(qPCR) 분석을 위해 격리되었다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="372">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:120px;">Aplysia</td>
			<td style="width:123px;">National Aplysia Resource Facility, University of Miami</td>
			<td style="width:129px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">NaCl</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA</td>
			<td style="width:129px;">S 3014-1KG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">KCl</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA</td>
			<td style="width:129px;">P 9333-500G</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:120px;">CaCl2&#8226;2H2O</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA</td>
			<td style="width:129px;">C5080- 500G</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:120px;">MgCl2&#8226;6H2O</td>
			<td style="width:123px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:129px;">BP 214-501</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:120px;">NaHCO4</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA</td>
			<td style="width:129px;">S 6297-250G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">HEPES</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA</td>
			<td style="width:129px;">H 3375-500G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">Protease</td>
			<td style="width:123px;">GIBCO</td>
			<td style="width:129px;">17105-042</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">Trizol</td>
			<td style="width:123px;">Ambion</td>
			<td style="width:129px;">15596-026</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">Chloroform</td>
			<td style="width:123px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:129px;">2194002</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">100% Ethanol</td>
			<td style="width:123px;">ACROS</td>
			<td style="width:129px;">64-17-5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:120px;">GlycoBlue</td>
			<td style="width:123px;">Ambion</td>
			<td style="width:129px;">AM9515</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">3 M NaOAc, pH 5.5</td>
			<td style="width:123px;">Ambion</td>
			<td style="width:129px;">AM9740</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">Nuclease free water</td>
			<td style="width:123px;">Ambion</td>
			<td style="width:129px;">AM9737</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:120px;">MessageAmp II aRNA Amplification Kit</td>
			<td style="width:123px;">Ambion</td>
			<td style="width:129px;">AM1751</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">qScript cDNA SuperMix</td>
			<td style="width:123px;">Quanta Biosciences</td>
			<td style="width:129px;">95048-100</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:120px;">Power SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td style="width:123px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:129px;">4367659</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:129px;">11252-20</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">Scissors</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:129px;">15000-08</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:120px;">Stainless Steel Minutien Pins&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:129px;">26002-10 or</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:129px;">26002-20</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">Veriti Thermal Cycler</td>
			<td style="width:123px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:129px;">Veriti Thermal Cycler</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">5430R Centrifuge</td>
			<td style="width:123px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:129px;">5430R Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:120px;">7900HT Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:123px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:129px;">7900HT Fast Real-Time PCR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:120px;">Amplifier</td>
			<td>BRAMP-01R</td>
			<td style="width:129px;">NPI Electronics</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:120px;">Digidata Converter</td>
			<td style="width:123px;">Instrutech ITC-18</td>
			<td style="width:129px;">HEKA ELEKTRONIK</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:120px;">Micro Manipulator</td>
			<td style="width:123px;">Patch Star</td>
			<td style="width:129px;">Scientifica</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aplysia ganglia preparation for electrophysiological and molecular analyses of single neurons

신경생물학의 주요 과제는 특정 행동을 지배하는 신경 회로의 분자 기초를 이해하는 것입니다. 특정 분자 메커니즘이 확인되면 퇴행성 질환이나 신경계 노화로 인한 특정 행동의 이상을 치료하기 위해 새로운 치료 전략을 개발할 수 있습니다. 해양 달팽이 Aplysia californica는 특정 행동의 근본적인 신경 회로가 쉽게 결정될 수 있고 회로의 개별 적인 분대가 쉽게 조작될 수 있기 때문에 행동의 세포 및 분자 기초의 조사에 적합합니다. Aplysia의 이러한 장점은 학습과 기억의 신경 생물학의 몇 가지 근본적인 발견으로 이어졌습니다. 여기에서 우리는 개별 적인 뉴런의 전기 생리및 분자 분석을 위한 Aplysia 신경계의 준비를 기술합니다. 간단히, 신경계에서 해부된 신경절은 신경세포가 노출되나 그대로 동물에서와 같이 신경 활성을 유지하도록 신경절 칼집을 제거하기 위해 프로테아제스에 노출된다. 이 준비는 단일 또는 다중 뉴런의 전기 생리학적 측정을 수행하는 데 사용됩니다. 중요한 것은, 간단한 방법론을 사용하여 기록을 따라, 뉴런은 유전자 발현 분석을 위해 신경질로부터 직접 분리될 수 있었다. 이러한 프로토콜은 L7 및 R15 뉴런으로부터 동시 전기 생리학적 기록을 수행하고, 아세틸콜린에 대한 반응과 분리된 단일 L7, L11, R15 및 Aplysia의R2 뉴런에서 CREB1 유전자의 양화 발현을 연구하는 데 사용되었습니다.

이 연구에서 사용 된 동물의 무게는 100-200 g에서 배열. 설명된 프로토콜에 따라, 우리는 2-5 g에서 200-300 g에 구역 수색하는 동물에서 분리된 복부 신경의 신경의 전기 생리학적 측정 및 분자 분석을 실시했습니다.
프로테아제 치료의 표준화는 신경교에서 뉴런의 성공적인 전기 생리학적 측정에 중요합니다. 처음에, 다중 프로테아제(Dispase) 농도 및 지속시간이 사용되었고 R15 뉴?...

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Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

해양 달팽이 Aplysia californica 널리 행동의 세포와 분자 기초에 연구에 대 한 신경 생물학 모델로 사용 되었습니다. 여기서 방법론은 확인된 신경 회로의 단일 뉴런의 전기 생리및 분자 분석을 위한 Aplysia의 신경계를 탐구하기 위해 설명된다.

아피시아 단일 뉴런의 전기 생리 및 분자 분석을 위한 신경리아 준비

A major challenge in neurobiology is to understand the molecular underpinnings of neural circuitry that govern a specific behavior. Once the specific ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

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