Name: dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production
Uploaded: 2014-03-02T14:00:00
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जंगली प्रकार (Mavs + / +) और पीटा (Mavs - / -) चूहों, जंगली प्रकार (Mavs + / +) और पीटा (Mavs - / -) MEFs कृपया डॉ. Zhijian जे चेन (विश्वविद्यालय के द्वारा प्रदान किया गया टेक्सास दक्षिण मेडिकल सेंटर) 13. इस प्रकाशन एनआईएच (R01 CA134241 और R01 DE021445) और अमेरिकन कैंसर सोसायटी (आर एसजी-11-162-01-एमपीसी) से अनुदान द्वारा वित्त पोषित काम पर आधारित है.

आचार विवरण: सभी जानवर काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान की प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड में सिफारिशों के साथ सख्त अनुसार के तहत किया गया था. प्रोटोकॉल दक्षिणी कैलिफोर्निया विश्व...

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	<li>Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+recognition+and+innate+immunity.">Pathogen recognition and innate immunity.</a> Cell. 124, 783-801 (2006).</li><li>Kato, H., Takahasi, K., Fujita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIG-I-like+receptors:+cytoplasmic+sensors+for+non-self+RNA.">RIG-I-like receptors: cytoplasmic sensors for non-self RNA.</a> Immunol. Rev. 243, 91-98 (2011).</li><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IPS-1,+an+adaptor+triggering+RIG-I-+and+Mda5-mediated+type+I+interferon+induction.">IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction.</a> Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).</li><li>Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+MAVS,+a+mitochondrial+antiviral+signaling+protein+that+activates+NF-kappaB+and+IRF+3.">Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3.</a> Cell. 122, 669-682 (2005).</li><li>Xu, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VISA+is+an+adapter+protein+required+for+virus-triggered+IFN-beta+signaling.">VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling.</a> Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).</li><li>Meylan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardif+is+an+adaptor+protein+in+the+RIG-I+antiviral+pathway+and+is+targeted+by+hepatitis+C+virus.">Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus.</a> Nature. 437, 1167-1172 (2005).</li><li>Speck, S. H., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+and+viral+genetics+of+chronic+infection:+a+mouse+model+of+gamma-herpesvirus+pathogenesis.">Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis.</a> Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma-herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+initiate+lytic+replication.">Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication.</a> PLoS Pathog. , (2010).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma+herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+abrogate+NFkappaB+activation+and+antiviral+cytokine+production.">Murine gamma herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to abrogate NFkappaB activation and antiviral cytokine production.</a> PLoS Pathog. 7, (2011).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gammaherpesvirus+68+evades+host+cytokine+production+via+replication+transactivator-induced+RelA+degradation.">Murine gammaherpesvirus 68 evades host cytokine production via replication transactivator-induced RelA degradation.</a> J. Virol. 86, 1930-1941 (2012).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Host-virus+Interaction+in+Lytic+Replication+of+a+Model+Herpesvirus.">Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinase-3+determines+cellular+necrotic+response+to+TNF-alpha.">Receptor interacting protein kinase-3 determines cellular necrotic response to TNF-alpha.</a> Cell. 137, 1100-1111 (2009).</li><li>Sun, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specific+and+essential+role+of+MAVS+in+antiviral+innate+immune+responses.">The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses.</a> Immunity. 24, 633-642 (2006).</li></ol>

वायरल प्रतिरक्षा चोरी वायरल अपराध और रक्षा मेजबान 9 interfacing सबसे गतिशील और आकर्षक बातचीत में से एक है. मेजबान सहज प्रतिरक्षा घटक संकेत पारगमन प्रभावी ढंग से शुरू किया और ईमानदारी से फैलता है कि इस तरह ?...

हाल के अध्ययनों से मेजबान सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया बढ़ते में समग्र cascades संकेत रेखांकित किया है. अलग डिब्बों के भीतर रहने, पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRRs) 1 संकेत सहज प्रतिरक्षा ट्रिगर करने के लिए विविध मूल के रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) का पता लगा. retinoic एसिड प्रेरित जीन मैं (RIG-I) और मेलेनोमा भेदभाव प्रतिजन 5 (MDA5) प्रोटीन विशिष्ट संरचनात्मक सुविधाओं 2 के साथ शाही सेना प्रजातियों को पहचाना कि साइटोसोलिक सेंसर कर रहे हैं. सक्रियण पर, रिग, मैं बारी में, भी Ikki के रूप में जाना IKK (IKKαβγ) और IKK से संबंधित kinase (TBK1 और IKKε, सक्रिय, अनुकूलक (भी आईपीएस -1, वीसा, और Cardif के रूप में जाना जाता है) इसके नीचे की ओर Mavs के साथ सूचना का आदान प्रदान ) 3-6 परिसरों. सक्रिय सहज प्रतिरक्षा kinases उसके प्रतिलेखन कारक और inhibitors सहित जीन अभिव्यक्ति का प्रमुख नियामकों, phosphorylate, और मेजबान एंटीवायरल जीन (जैसे IL6, TNF &amp; # के transcriptional सक्रियण सक्षम945;, CCL5, और IFNβ). ये cascades संकेत संक्रमण के प्रारंभिक दौर के दौरान रोगज़नक़ प्रचार प्रतिबंधित करने के लिए एक विरोधी माइक्रोबियल राज्य की स्थापना है कि शक्तिशाली आंतरिक सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का गठन. Murine γHV68 निकट मानव oncogenic KSHV और EBV से संबंधित है. इस प्रकार, चूहों के γHV68 संक्रमण विवो 7 में गामा दाद वायरस के संक्रमण के लिए मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच के लिए एक विनयशील छोटे पशु मॉडल उपलब्ध कराता है. ΓHV68 वायरल संक्रमण सक्षम करने के लिए सहज प्रतिरक्षा संकेतन मेजबानी hijacks जिससे γHV68 का प्रयोग, हमारी प्रयोगशाला एक जटिल रणनीति पर्दाफाश किया है. एक ओर, γHV68 प्रतिकृति transactivator (आरटीए), γHV68 प्रतिकृति 8 वायरल प्रतिलेखन कारक कुंजी phosphorylate को सक्रिय IKKβ निर्देशन के माध्यम से वायरल transcriptional सक्रियण को बढ़ावा देने के लिए Mavs-IKKβ मार्ग सक्रिय. दूसरी ओर, IKKβ की मध्यस्थता phosphorylation गिरावट और कार्यकाल के लिए असली primesNFΚB सक्रियण 9 inates. जैसे, γHV68 संक्रमण प्रभावी ढंग से एंटीवायरल cytokine उत्पादन से बचा जाता है. दिलचस्प है, γHV68 की अभिव्यक्ति के पुस्तकालय का उपयोग एक स्क्रीनिंग असली गिरावट प्रेरित और NFΚB सक्रियण 10 रद्द करने के लिए एक E3 ligase के रूप में आरटीए की पहचान की. इन निष्कर्षों को अपस्ट्रीम प्रतिरक्षा संकेत घटनाओं परम एंटीवायरल cytokine उत्पादन नकारना γHV68 से इस्तेमाल कर रहे हैं जिससे एक जटिल प्रतिरक्षा चोरी रणनीति उजागर. यहाँ हम vivo में और पूर्व विव ओ दोनों γHV68 से संक्रमित चूहों में एंटीवायरल cytokine उत्पादन को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. प्रोटोकॉल में हम आगे एंटीवायरल cytokine उत्पादन को विनियमित करने में विशिष्ट सहज प्रतिरक्षा अणुओं के समारोह pinpoints जो lentiviral पारगमन, से पीटकर भ्रूण fibroblasts में सहज प्रतिरक्षा घटकों के &quot;पुनर्गठन&quot; अभिव्यक्ति का पता लगाने. इस प्रोटोकॉल को आसानी से अन्य वीरू के लिए अनुकूलित किया जा सकता हैSES और संकेत दे रास्ते.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="684">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">Mouse CCL5 ELISA kit</td>
			<td style="width:211px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://www.rndsystems.com/Products/DY478">DY478</a></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">1.0 mm Zirconia/Silica beads</td>
			<td style="width:211px;">BioSpec Products</td>
			<td style="width:223px;">11079110z</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">TRIzol</td>
			<td style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://products.invitrogen.com/ivgn/en/US/adirect/invitrogen?cmd=catProductDetail&amp;productID=15596018">15596-018</a></td>
		</tr>
		<tr height="79">
			<td height="98" rowspan="2" style="height:98px;width:251px;">SuperScript II Reverse Transcriptase</td>
			<td rowspan="2" style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="2" style="width:223px;">18064-014</td>
		</tr>
		<tr height="19">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"> </td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">CCL5 quantitative real-time PCR primers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CCTGCTGCTTTGCCTACCTCTC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ACACACTTGGCGGTTCCTTCGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production

एक वायरल संक्रमण के जवाब में मेजबान सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया एंटीवायरल साइटोकिन्स के जीन अभिव्यक्ति और उत्पादन को विनियमित ऊपर से सक्रिय है. इसके विपरीत, वायरस अस्तित्व और प्रचार के लिए मेजबान प्रतिरक्षा संकेतन बचने और शोषण करने के लिए जटिल रणनीति विकसित किया है. वायरल प्रतिरक्षा चोरी, मेजबान रक्षा और वायरल चोरी entailing, मेजबान वायरस बातचीत विचार करने के लिए सबसे आकर्षक और गतिशील इंटरफेस में से एक प्रदान करता है. इन अध्ययनों से सहज प्रतिरक्षा विनियमन में हमारी समझ अग्रिम और उपन्यास एंटीवायरल उपचार विकसित करने के लिए हमारे मार्ग प्रशस्त हुआ. Murine γHV68 murine कृन्तकों की एक प्राकृतिक रोगज़नक़ है. चूहों के γHV68 संक्रमण में विवो वायरस मेजबान बातचीत की गड़बड़ी लागू नहीं है जो की मानव KSHV और EBV के लिए एंटीवायरल प्रतिक्रिया की जांच के लिए एक विनयशील छोटे पशु मॉडल उपलब्ध कराता है. यहाँ हम एंटीवायरल cytokine उत्पादन निर्धारित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. इस प्रोटोकॉल अन्य वीर के लिए अनुकूलित किया जा सकता हैका उपयोग करता है और रास्ते संकेतन. हाल ही में, हम γHV68 NFΚB सक्रियण और antiviral cytokine उत्पादन रद्द करने, Mavs और IKKβ, साइटोसोलिक रिग, मैं और MDA5 के बहाव कुंजी सहज प्रतिरक्षा संकेत घटकों hijacks कि खोज की है. विशेष रूप से, γHV68 संक्रमण IKKβ सक्रिय है और कि सक्रिय IKKβ असली गिरावट में तेजी लाने के लिए असली phosphorylates. जैसे, γ HV68 कुशलतापूर्वक एंटीवायरल साइटोकाइन जीन अभिव्यक्ति नकार अपने अपस्ट्रीम सक्रिय IKKβ से NFΚB सक्रियण uncouples. इस अध्ययन अपस्ट्रीम सहज प्रतिरक्षा सक्रियण तत्काल बहाव के transcriptional सक्रियण उठा देना और antiviral cytokine उत्पादन से बचने के लिए एक वायरल रोगज़नक़ से रोक दिया है जिससे एक जटिल रणनीति elucidates.

तीन प्रतिनिधि आंकड़े γHV68 संक्रमित Mavs के फेफड़ों में cytokine उत्पादन सहित, यहाँ दिखाए जाते हैं + / + और ​​Mavs-/ - / - - γHV68 संक्रमित Mavs + / + और ​​Mavs के माउस, cytokine स्राव और जीन अभिव्यक्ति के स्तर MEFs, और γHV...

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Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

हम मानव Kaposi है sarcoma-जुड़े herpesvirus (KSHV) और Epstein बर्र वायरस (EBV) को बारीकी से संबंधित है कि एक मॉडल दाद, murine गामा दाद 68 (γ HV68) से संक्रमित चूहों में एंटीवायरल cytokine उत्पादन को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस उपभेदों और माउस भ्रूणीय fibroblasts (MEFs) का उपयोग, हम एंटीवायरल cytokine उत्पादन विवो में और पूर्व vivo दोनों का आकलन किया. Lentiviral पारगमन से पीटकर भ्रूण fibroblasts में सहज प्रतिरक्षा घटकों की अभिव्यक्ति &quot;पुनर्गठन&quot;, हम आगे विशिष्ट सहज प्रतिरक्षा अणुओं तुच्छ और विभिन्न एंटीवायरल cytokine उत्पादन को विनियमित कि कुंजी संकेत घटनाओं काटना.

Cytokine उत्पादन के वायरल चोरी में सहज प्रतिरक्षा संकेतन विदारक

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

उत्पादन और पुनः संयोजक एडिनो जुड़े वायरल वैक्टर Titering

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Zebrafish में सहज प्रतिरक्षा स्वास्थ्य का एक संकेतक के रूप में श्वसन फट रिस्पांस की मात्रा

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

माउस मैक्रोफेज में सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए आरएनए हस्तक्षेप का प्रयोग

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

की एक zebrafish लारवल मॉडल में सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के गैर इनवेसिव इमेजिंग<em&gt; स्ट्रेप्टोकोकस iniae</em&gt; संक्रमण

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic Poly(I:C)

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic PolyI:C

(सी आई) वायरल नकल पाली के साथ मध्य हमल स्टेज पर चूहे में मातृ प्रतिरक्षा सक्रियण की प्रेरण

Maternal immune activation (MIA) model is increasingly well appreciated as a rodent model for the environmental risk factor of various psychiatric ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Bimolecular पूरित अपनत्व शुद्धि (BiCAP) द्वारा विदारक मल्टी प्रोटीन सिगनल कॉम्प्लेक्स

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Immunophenotype और परिधीय पूरे रक्त में Cytokine उत्पादन का एकल सेल विश्लेषण के माध्यम से मास Cytometry

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

स्टैफिलोकोकस ऑरियस संक्रमण के लिए जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए एक माउस मॉडल

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

एक गैलेरिया शलभ मौखिक प्रशासन मॉडल के अध्ययन के लिए commensal प्रेरित जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

एक मानव म्यूकोसल लिम्फोइड ऊतक में पूर्व वीवो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए टॉन्सिलर मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं का अलगाव

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...