Name: dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production
Uploaded: 2014-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production at JoVE.com

Мышей дикого типа (Mavs + / +) и нокаут (Mavs - / -) дикого типа (Mavs + / +) и нокаут (Mavs - - /) MEFs были любезно предоставлены доктором Zhijian Дж. Чен (Университет Техас Юго-западного медицинского центра) 13. Эта публикация основана на работы, финансируемой за счет грантов от NIH (R01 CA134241 и R01 DE021445) и Американского общества рака (RSG-11-162-01-MPC).

Заявление по этике: Все животные Работа выполнена при строгом соответствии с рекомендациями, содержащимися в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных Институтов Здоровья. Протокол был утвержден на уходу и использованию животных комитета инст...

<ol>
	<li>Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+recognition+and+innate+immunity.">Pathogen recognition and innate immunity.</a> Cell. 124, 783-801 (2006).</li><li>Kato, H., Takahasi, K., Fujita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIG-I-like+receptors:+cytoplasmic+sensors+for+non-self+RNA.">RIG-I-like receptors: cytoplasmic sensors for non-self RNA.</a> Immunol. Rev. 243, 91-98 (2011).</li><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IPS-1,+an+adaptor+triggering+RIG-I-+and+Mda5-mediated+type+I+interferon+induction.">IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction.</a> Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).</li><li>Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+MAVS,+a+mitochondrial+antiviral+signaling+protein+that+activates+NF-kappaB+and+IRF+3.">Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3.</a> Cell. 122, 669-682 (2005).</li><li>Xu, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VISA+is+an+adapter+protein+required+for+virus-triggered+IFN-beta+signaling.">VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling.</a> Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).</li><li>Meylan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardif+is+an+adaptor+protein+in+the+RIG-I+antiviral+pathway+and+is+targeted+by+hepatitis+C+virus.">Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus.</a> Nature. 437, 1167-1172 (2005).</li><li>Speck, S. H., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+and+viral+genetics+of+chronic+infection:+a+mouse+model+of+gamma-herpesvirus+pathogenesis.">Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis.</a> Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma-herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+initiate+lytic+replication.">Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication.</a> PLoS Pathog. , (2010).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma+herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+abrogate+NFkappaB+activation+and+antiviral+cytokine+production.">Murine gamma herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to abrogate NFkappaB activation and antiviral cytokine production.</a> PLoS Pathog. 7, (2011).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gammaherpesvirus+68+evades+host+cytokine+production+via+replication+transactivator-induced+RelA+degradation.">Murine gammaherpesvirus 68 evades host cytokine production via replication transactivator-induced RelA degradation.</a> J. Virol. 86, 1930-1941 (2012).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Host-virus+Interaction+in+Lytic+Replication+of+a+Model+Herpesvirus.">Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinase-3+determines+cellular+necrotic+response+to+TNF-alpha.">Receptor interacting protein kinase-3 determines cellular necrotic response to TNF-alpha.</a> Cell. 137, 1100-1111 (2009).</li><li>Sun, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specific+and+essential+role+of+MAVS+in+antiviral+innate+immune+responses.">The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses.</a> Immunity. 24, 633-642 (2006).</li></ol>

Вирусный иммунная уклонение является одним из самых динамичных и увлекательных взаимодействий, взаимодействующими вирусной преступление и защиту хозяина 9. Принимающие врожденные иммунные компоненты структурированы таким образом, что передача сигнала эффективно инициировал ...

Недавние исследования изложены общие сигнальных каскадов по монтажу узлов врожденные иммунные реакции. Проживание в отдельных отсеках, рецепторы распознавания образов (РРСС) обнаружения патогенов связанных молекулярных моделей (PAMPs) различного происхождения, чтобы вызвать врожденные иммунные сигнализации 1. Ген ретиноевой кислоты, вызванной я (RIG-I) и дифференциация антигена меланомы 5 (MDA5) белки цитозольные датчики, которые распознают РНК видов с определенными структурными особенностями 2. После активации RIG-I взаимодействует со своими вниз по течению MAVS (также известный как IPS-1, VISA, и Кардиф) адаптера, что, в свою очередь, активирует IKK (IKKαβγ) и IKK связанных киназы (TBK1 и IKKε, также известный как IKKI ) комплексы 3-6. Активированные врожденной иммунной киназы фосфорилировать ключевых регуляторов экспрессии генов, в том числе факторов транскрипции и их ингибиторов, а также включить активацию транскрипции генов хост противовирусных (например, IL-6, TNF и #945;, CCL5 и IFNβ). Эти сигнальные каскады представляют собой мощные внутренние врожденные иммунные реакции, которые устанавливают антимикробного состояние ограничить распространение патогенных микроорганизмов на ранних стадиях инфекции. Мышиные γHV68 тесно связана с человеческой онкогенного KSHV и ВЭБ. Таким образом, γHV68 инфекция мышей обеспечивает послушный маленький животную модель для изучения иммунного ответа на вирус герпеса гамма-инфекции в естественных условиях 7. Использование γHV68, наша лаборатория обнаружила сложную стратегию которой γHV68 захватывает пройдет врожденную иммунную сигнализации для включения вирусной инфекции. С одной стороны, γHV68 активирует путь MAVS-IKKβ способствовать активизации вирусной транскрипции через направляя активированный IKKβ фосфорилировать трансактиватор репликации (RTA), вирусный ключевым фактором транскрипции для γHV68 репликации 8. С другой стороны, IKKβ-опосредованного фосфорилирования простые числа отношений для деградации и срокinates NFΚB активации 9. Таким образом, γHV68 инфекция эффективно предотвращает противовирусной продукцию цитокинов. Интересно, что скрининг с использованием выражения библиотеку γHV68 определены RTA как E3 лигазы индуцировать деградацию отношений и отменить активацию NFΚB 10. Эти выводы раскрыть сложную стратегию иммунную уклонение которой вверх по течению событий иммунные сигнальные запряженной γHV68 отрицать конечную противовирусной продукцию цитокинов. Здесь мы опишем протокол для измерения антивирусной продукции цитокинов у мышей, инфицированных γHV68 как в естественных условиях и экс Львов о. В протоколе мы дополнительно изучить &quot;восстановленного&quot; выражение врожденных иммунных компонентов в плей-эмбриональных фибробластов на лентивирусным трансдукции, которая выявляет функцию специфических врожденных иммунных молекул в регуляции противовирусной продукцию цитокинов. Этот протокол может быть легко адаптирована к другой ВируСЭС и сигнальные пути.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="684">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">Mouse CCL5 ELISA kit</td>
			<td style="width:211px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://www.rndsystems.com/Products/DY478">DY478</a></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">1.0 mm Zirconia/Silica beads</td>
			<td style="width:211px;">BioSpec Products</td>
			<td style="width:223px;">11079110z</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">TRIzol</td>
			<td style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://products.invitrogen.com/ivgn/en/US/adirect/invitrogen?cmd=catProductDetail&amp;productID=15596018">15596-018</a></td>
		</tr>
		<tr height="79">
			<td height="98" rowspan="2" style="height:98px;width:251px;">SuperScript II Reverse Transcriptase</td>
			<td rowspan="2" style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="2" style="width:223px;">18064-014</td>
		</tr>
		<tr height="19">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"> </td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">CCL5 quantitative real-time PCR primers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CCTGCTGCTTTGCCTACCTCTC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ACACACTTGGCGGTTCCTTCGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production

В ответ на вирусную инфекцию, хост врожденного иммунного ответа активируется, чтобы активируют экспрессию гена и производство противовирусных цитокинов. С другой стороны, вирусы эволюционировали сложные стратегии, чтобы уклониться и эксплуатировать иммунную сигнализации для выживания и размножения. Вирусный иммунная уклонение, влекущие за собой защиту хозяина и вируса с уклонением от уплаты, обеспечивает один из самых увлекательных и динамичных интерфейсов различать хост-вируса взаимодействие. Эти исследования продвижения нашего понимания в врожденной иммунной регуляции и проложить наш путь к развитию новых противовирусные терапии. Мышиные γHV68 является естественным возбудитель мышевидных грызунов. γHV68 инфекция мышей обеспечивает послушный маленький животную модель для изучения противовирусной ответ на человека KSHV и ВЭБ из которых возмущение в естественных условиях вирус-хозяин взаимодействий является не применяется. Здесь мы опишем протокол для определения противовирусной продукцию цитокинов. Этот протокол может быть адаптирован к другой Virиспользует и сигнальных путей. В последнее время мы обнаружили, что γHV68 захватывает Mavs и IKKβ, ключевые врожденные компоненты иммунной сигнализации вниз по течению от цитозольным RIG-I и MDA5, отменить активацию NFΚB и противовирусной продукцию цитокинов. В частности, γHV68 инфекция активизирует IKKβ и что активируется IKKβ фосфорилирует отношений ускорить деградацию отношений. Таким образом, γ HV68 эффективно отсоединяет активации NFΚB от своего вышестоящего активированного IKKβ, отрицая выражение противовирусной генов цитокинов. Это исследование проливает свет сложную стратегию в результате чего перед врожденная иммунная активация перехвачены вирусной возбудителя свести на нет немедленного активацию вниз по течению транскрипции и уклониться от противовирусной продукцию цитокинов.

Три представительные фигуры показаны здесь, в том числе продукции цитокинов в легких γHV68-инфицированных Mavs + / + и Mavs-/ - мышей, секреции цитокинов и экспрессии генов уровень γHV68-инфицированных Mavs + / + и Mavs - / - MEFs и уровни цитокинов мРНК γHV68-инфицир...

Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production at JoVE.com

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

Мы опишем протокол для измерения противовирусной продукцию цитокинов у мышей, инфицированных модельного вируса герпеса, мышиного гамма герпеса 68 (γ HV68), тесно связанных с саркомой-ассоциированный вирус герпеса человеческого Капоши (KSHV) и вирус Эпштейна-Барр (EBV). Используя генетически модифицированные штаммы мыши и мышиных эмбриональных фибробластов (MEFs), мы оценили противовирусной продукцию цитокинов как в естественных условиях и Экс Vivo. &quot;О восстановлении&quot; выражение врожденных иммунных компонентов в нокаут эмбриональных фибробластов по лентивирусным трансдукции, мы далее определить конкретные врожденные иммунные молекулы и анализировать ключевые события сигнализации, который дифференциально регулируют противовирусной продукцию цитокинов.

Пройдя врожденной иммунной Сигнализация в Вирусный Уклонение продукция цитокинов

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Производство и Titering рекомбинантных адено-ассоциированные вирусные векторы

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Количественная оценка респираторный взрыв ответ как показатель врожденной иммунной здравоохранения в данио рерио

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Использование РНК-интерференции по расследованию врожденного иммунного ответа у мышей макрофагов

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic Poly(I:C)

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic PolyI:C

Индукция материнской иммунной активации у мышей в середине беременности Стадии с вирусными Mimic Poly (I: C)

Maternal immune activation (MIA) model is increasingly well appreciated as a rodent model for the environmental risk factor of various psychiatric ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Пройдя через сигнализации различных белковых комплексов, очищение сродства Bimolecular дополнения (BiCAP)

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Анализ одной ячейки иммунофенотип и производство цитокинов в периферической крови в целом через массовые цитометрии

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Мыши модель для оценки врожденный иммунный ответ инфекции стафилококк

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Модель администрирования Galleria mellonella устные Innate иммунных реакций Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Изоляция миндалевидных моноядерных клеток для изучения Ex Vivo Врожденные иммунные реакции в человеческой мукозальной лимфоидной ткани

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...