Name: dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production
Uploaded: 2014-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production at JoVE.com

Yabani-tür (Mavs + / +) ve boşaltma (Mavs - / -) fareler, vahşi tip (Mavs + / +) ve boşaltma (Mavs - / -) MEF&#39;ler nezaketen Dr Zhijian J. Chen (University of tarafından sağlandı Texas Güneybatı Tıp Merkezi) 13.. Bu yayın NIH (R01 ve R01 CA134241 DE021445) ve Amerikan Kanser Derneği (RSG-11-162-01-MPC) hibe ile finanse çalışmalarına dayanmaktadır.

Etik Açıklama: Tüm hayvan çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu önerilerine sıkı göre altında yapıldı. Protokol Southern California Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1.. ΓHV68 enfeksiyonlu Farelerde ELISA ile kantitatif gerçek zamanlı PCR ve sitokin salgılaması tarafından Gene Expression <ol><li> Periton boşluğu içine ksilazin ket...

<ol>
	<li>Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+recognition+and+innate+immunity.">Pathogen recognition and innate immunity.</a> Cell. 124, 783-801 (2006).</li><li>Kato, H., Takahasi, K., Fujita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIG-I-like+receptors:+cytoplasmic+sensors+for+non-self+RNA.">RIG-I-like receptors: cytoplasmic sensors for non-self RNA.</a> Immunol. Rev. 243, 91-98 (2011).</li><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IPS-1,+an+adaptor+triggering+RIG-I-+and+Mda5-mediated+type+I+interferon+induction.">IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction.</a> Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).</li><li>Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+MAVS,+a+mitochondrial+antiviral+signaling+protein+that+activates+NF-kappaB+and+IRF+3.">Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3.</a> Cell. 122, 669-682 (2005).</li><li>Xu, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VISA+is+an+adapter+protein+required+for+virus-triggered+IFN-beta+signaling.">VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling.</a> Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).</li><li>Meylan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardif+is+an+adaptor+protein+in+the+RIG-I+antiviral+pathway+and+is+targeted+by+hepatitis+C+virus.">Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus.</a> Nature. 437, 1167-1172 (2005).</li><li>Speck, S. H., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+and+viral+genetics+of+chronic+infection:+a+mouse+model+of+gamma-herpesvirus+pathogenesis.">Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis.</a> Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma-herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+initiate+lytic+replication.">Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication.</a> PLoS Pathog. , (2010).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma+herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+abrogate+NFkappaB+activation+and+antiviral+cytokine+production.">Murine gamma herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to abrogate NFkappaB activation and antiviral cytokine production.</a> PLoS Pathog. 7, (2011).</li><li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gammaherpesvirus+68+evades+host+cytokine+production+via+replication+transactivator-induced+RelA+degradation.">Murine gammaherpesvirus 68 evades host cytokine production via replication transactivator-induced RelA degradation.</a> J. Virol. 86, 1930-1941 (2012).</li><li>Dong, X., Feng, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Host-virus+Interaction+in+Lytic+Replication+of+a+Model+Herpesvirus.">Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinase-3+determines+cellular+necrotic+response+to+TNF-alpha.">Receptor interacting protein kinase-3 determines cellular necrotic response to TNF-alpha.</a> Cell. 137, 1100-1111 (2009).</li><li>Sun, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specific+and+essential+role+of+MAVS+in+antiviral+innate+immune+responses.">The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses.</a> Immunity. 24, 633-642 (2006).</li></ol>

Viral bağışıklık kaçırma viral suç ve konak savunmasını 9 arayüz en dinamik ve etkileyici etkileşimleri biridir. Konak doğuştan gelen bağışıklık bileşenlerini sinyal iletimi etkili başlayan ve sadakatle iletilir şekilde yapılandırılmıştır. Kaskadlarını sinyal hiyerarşisini ve düzenleme çizen doğal bağışıklığın bir önde gelen konudur. Burada, sitokin üretiminin viral kaçırma bir doğuştan gelen bağışıklık bileşen, mavs, düzenleyici rolleri belirlemek için b...

Son çalışmalar konak doğuştan gelen bağışıklık yanıtlarını montaj genel sinyal kaskadlarını hatlarıyla. Ayrı bölmeleri içinde ikamet eden, örüntü tanıma reseptörleri (PRR&#39;ler) 1 sinyalizasyon doğuştan bağışıklık tetiklemek için farklı kökenli patojen ilişkili moleküler şekilleri (PAMPs) algılar. Retinoik asit-indüklenmiş gen I (Rig-I) ve melanoma farklılaşma antigen 5 (MDA5) proteinlerinin spesifik yapısal 2 RNA türlerinin, sitosolik sensörleridir. Aktivasyonu üzerine, Rig-I sırayla, aynı zamanda Ikki olarak bilinen IKK (IKKαβγ) ve IKK-ilişkili kinaz (TBK1 ve IKKε, aktive eder, adaptör (ayrıca IPS-1, VISA ve Cardif olarak da bilinir) alt Mavs ile etkileşime ) 3-6 kompleksleri. Aktif Doğuştan gelen bağışıklık kinazlar, transkripsiyon faktörlerinin ve bunların önleyicileri dahil olmak üzere, gen ekspresyonunun önemli regülatörleri, fosforile ve konakçı antiviral genlerin (örneğin IL-6, TNF ve içinde transkripsiyonel aktivasyonu sağlar945;, CCL5 ve IFNβ). Bu sinyal cascades enfeksiyonunun erken safhaları sırasında patojen yayılma sınırlamak için, bir anti-mikrobiyal devlet kurmak etkili iç doğuştan gelen bağışıklık tepkilerini oluşturmaktadır. Murin γHV68 yakın insan onkojenik KSHV ve EBV ile ilgilidir. Böylece, farelerin γHV68 enfeksiyonu in vivo 7 gamma herpes virüs enfeksiyonu bağışıklık tepkisini incelemek için izlenebilir küçük bir hayvan modeli sağlar. ΓHV68 viral enfeksiyon etkinleştirmek için doğuştan gelen bağışıklık sinyalizasyon ev sahipliği hijacks sayede γHV68 kullanarak, bizim laboratuvar karmaşık bir strateji ortaya çıkardı. Bir yandan, γHV68 çoğaltma transaktivatörü (RTA), γHV68 çoğaltma 8 viral transkripsiyon faktörü anahtar fosforile aktif IKKβ yönlendirilmesi ile viral kopyalama aktivasyonunu desteklemek üzere Mavs-IKKβ yolu aktive eder. Öte yandan, IKKβ aracılı fosforilasyonu bozulması ve bir dönem için göreceli hazırlarNFKB aktivasyonunu 9 inates. Bu nedenle, etkili bir anti-viral enfeksiyon γHV68 sitokin üretimini önler. İlginç bir şekilde, γHV68 bir ifade kütüphanesi kullanan bir tarama RelA bozulmasını uyarmak ve NFKB 10 aktivasyonunu ortadan kaldırmak için, bir E3 ligaz gibi RTA tespit edilmiştir. Bu bulgular üst bağışıklık sinyalizasyon olaylar nihai antiviral sitokin üretimini inkâr γHV68 tarafından boyunduruk sayede karmaşık bir bağışıklık kaçırma stratejisi ortaya çıkarmak. Burada in vivo ve ex viv o iki γHV68 ile enfekte edilmiş farelerdeki antiviral sitokin üretimini ölçmek için bir protokolü tarif eder. Protokolde, bundan başka, anti-viral sitokin üretiminin düzenlenmesinde belirli doğuştan gelen bağışıklık moleküllerin fonksiyonu saptar lentiviral transdüksiyon ile nakavt embriyonik fibroblastlar içinde doğal bağışıklık bileşenlerinin &quot;sulandırılmış&quot; ifade araştırmak. Bu protokol, kolayca diğer Viru uyarlanabilirses ve sinyal yolları.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="684">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">Mouse CCL5 ELISA kit</td>
			<td style="width:211px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://www.rndsystems.com/Products/DY478">DY478</a></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">1.0 mm Zirconia/Silica beads</td>
			<td style="width:211px;">BioSpec Products</td>
			<td style="width:223px;">11079110z</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:251px;">TRIzol</td>
			<td style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:223px;"><a href="http://products.invitrogen.com/ivgn/en/US/adirect/invitrogen?cmd=catProductDetail&amp;productID=15596018">15596-018</a></td>
		</tr>
		<tr height="79">
			<td height="98" rowspan="2" style="height:98px;width:251px;">SuperScript II Reverse Transcriptase</td>
			<td rowspan="2" style="width:211px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="2" style="width:223px;">18064-014</td>
		</tr>
		<tr height="19">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"> </td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">CCL5 quantitative real-time PCR primers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CCTGCTGCTTTGCCTACCTCTC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ACACACTTGGCGGTTCCTTCGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissecting innate immune signaling in viral evasion of cytokine production

Bir viral enfeksiyona yanıt olarak, ana doğuştan gelen bağışıklık tepkisi antiviral sitokin gen ekspresyonu ve üretimi düzenlemek kadar aktive edilir. Tersine, virüsler hayatta kalma ve çoğalma için konakçı bağışıklık sinyalizasyon kaçmasına ve sömürmek için karmaşık stratejiler gelişmiştir. Viral bağışıklık kaçırma, konak savunması ve viral kaçırma gerektiren, ev sahibi-virüs etkileşimi ayırt etmek en büyüleyici ve dinamik arayüzler biri sağlar. Bu çalışmalar doğal bağışıklık düzenlenmesinde anlayışımızı ilerletmek ve yeni antiviral tedaviler geliştirmek için yol açmıştı. Murin γHV68 murin kemirgenler doğal bir patojendir. Farelerin γHV68 enfeksiyonu in vivo virüs-host etkileşimleri pertürbasyon geçerli değildir ki insan KSHV ve EBV antiviral yanıt incelemek için izlenebilir küçük bir hayvan modeli sağlar. Burada antiviral sitokin üretimini belirlemek için bir protokol açıklar. Bu protokol, diğer vir uyarlanabilirkullanır ve sinyal yolları. Son zamanlarda, γHV68 NFKB aktivasyonu ve antiviral sitokin üretimini ortadan kaldırmak için, mavs ve IKKβ, sitosolik Rig-I ve MDA5 alt akışında önemli bir doğuştan gelen bağışıklık sinyal bileşenleri ele geçirilmesini keşfettiler. Özellikle, γHV68 enfeksiyon IKKβ aktif hale gelir ve bu aktive IKKβ RelA bozulma hızlandırmak için ilişki fosforile eder. Bu nedenle, etkili bir anti-viral γ HV68 sitokin gen ekspresyonunu negating akış yukarı aktive IKKβ ikinci NFKB aktivasyon birbirinden ayrılacak. Bu çalışma memba bağışıklık aktivasyonu hemen aşağı transkripsiyonel aktivasyonu geçersiz ve antiviral sitokin üretimini kaçmasına viral patojen tarafından yakalanan sayede karmaşık bir strateji açığa kavuşturmaktadır.

Üç örnek şekiller γHV68 enfeksiyonlu Mavs akciğerinde sitokin üretimi de dahil olmak üzere, burada gösterilmektedir + / + ve Mavs-/ - / - - γHV68 enfekte Mavs + / + ve Mavs fare, sitokin salgılama ve gen ekspresyon seviyesi MEF&#39;ler ve γHV68-enfekte Mavs sitokin mRNA seviyeleri - / - MEF&#39;ler Mavs ile &quot;yeniden&quot;. Bu örnek deneyler, in vivo olarak anti-viral sitokin üretimini incelemek ve düzenl...

Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production at JoVE.com

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

İnsan Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) ve Epstein-Barr virüsü (EBV) ile yakından ilgili olan bir model herpesvirüs, kemirgen gamma herpes virüsü 68 (γ HV68) ile enfekte olan fareler içindeki antiviral sitokin üretimini ölçmek için bir protokolü tarif eder. Genetik olarak modifiye edilmiş olan fare soyları ve fare embriyonik fibroblastlar (MEF&#39;ler) kullanarak, biz antiviral sitokin üretimini in vivo ve ex vivo hem de değerlendirildi. Lentiviral transdüksiyonu ile nakavt embriyonik fibroblastlar içinde doğal bağışıklık bileşenlerinin ifade &quot;yeniden kurgulamak&quot;, daha fazla belirli doğuştan gelen bağışıklık moleküllerin kesin ve diferansiyel antiviral sitokin üretimini düzenler, anahtar sinyal olayları incelemek.

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Rekombinant Adeno ilişkili Viral Vektörlerin Üretimi ve Titering

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Zebra balığı Doğuştan Bağışıklık Sağlık Bir Göstergesi Olarak Solunum Burst Tepki Kantitasyonu

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Bir Zebra balığı Larva Modeli Doğuştan Bağışıklık Tepki Non-invaziv Görüntüleme<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Enfeksiyon

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic Poly(I:C)

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic PolyI:C

(C I) Viral Mimik Poli ile Orta gebelik Sahnesi&#39;nde Farelerde Anne Bağışıklık aktivasyonu indüksiyon

Maternal immune activation (MIA) model is increasingly well appreciated as a rodent model for the environmental risk factor of various psychiatric ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Bimolecular tamamlayıcı benzeşme arıtma (BiCAP) tarafından parçalanmış çok protein sinyal kompleksleri

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Tek hücreli Immunophenotype ve sitokin üretimde kitle sitometresi ile periferik tam kan analizi

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Bir Galleria mellonella Oral yönetim modeli için Study Commensal-Induced doğuştan gelen bağışıklık yanıtı

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Bademcikler Mononükleer Hücrelerin İzolasyon Ex Vivo Doğuştan Gelen Bağışıklık Yanıtları Bir İnsan Mukozal Lenfoid Doku Çalışma

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...