Name: primary culture of human vestibular schwannomas
Uploaded: 2014-07-20T14:00:00
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サポート：NIDCD R01DC009801、P30DC010362、5T32DC000040-17

倫理声明：このプロトコルでのヒト腫瘍標本の使用は、アイオワ大学施設内倫理委員会（IRB）により承認された。 1。セットアップ腫瘍収穫前日<ol><li>コー​​ト細胞培養プレート：無菌培養フードにおいては、蓋を交換し、ポリスチレン/プラスチック培養ウェル/皿の底を覆うのに十分なポリ-L-オルニチン（0.01％溶液）を添加し、少なくとも室温で放置2時間。ガラス?...

<ol>
	<li>Arthurs, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+treatment+modalities+for+vestibular+schwannoma.">A review of treatment modalities for vestibular schwannoma.</a> Neurosurg Rev. 34 (3), 265-277 (2011).</li><li>Evans, G. R., Lloyd, S. K., Ramsden, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+type+2.">Neurofibromatosis type 2.</a> Adv Otorhinolaryngol. 70, 91-98 (2001).</li><li>Fong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+and+novel+treatments+of+vestibular+schwannomas.">The molecular biology and novel treatments of vestibular schwannomas.</a> J Neurosurg. 115 (5), 906-914 (2011).</li><li>Jacob, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+validation+of+AR42,+a+novel+histone+deacetylase+inhibitor,+as+treatment+for+vestibular+schwannomas.">Preclinical validation of AR42, a novel histone deacetylase inhibitor, as treatment for vestibular schwannomas.</a> Laryngoscope. 122 (1), 174-189 (2012).</li><li>Evans, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+2+[Bilateral+acoustic+neurofibromatosis,+central+neurofibromatosis.">Neurofibromatosis 2 [Bilateral acoustic neurofibromatosis, central neurofibromatosis.</a> NF2, neurofibromatosis type II]. Genet Med. 11 (9), 599-610 (2009).</li><li>Anniko, M., Noren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Acoustic+Neurinoma+in+Organ-Culture+.1.+Methodological+Aspects.">The Human Acoustic Neurinoma in Organ-Culture .1. Methodological Aspects.</a> Acta Oto-Laryngologica. 91 (1-2), 47-53 (1981).</li><li>Manent, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+cell+sorting+for+enriching+Schwann+cells+from+adult+mouse+peripheral+nerves.">Magnetic cell sorting for enriching Schwann cells from adult mouse peripheral nerves.</a> J Neurosci Methods. 123 (2), 167-173 (2003).</li><li>Nair, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cultures+of+human+vestibular+schwannoma:+selective+growth+of+schwannoma+cells.">Primary cultures of human vestibular schwannoma: selective growth of schwannoma cells.</a> Otol Neurotol. 28 (2), 258-263 (2007).</li><li>Baur, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+promotes+differentiation,+adhesion+and+proliferation+of+cell+cultures+derived+from+human+acoustic+nerve+schwannoma.">Laminin promotes differentiation, adhesion and proliferation of cell cultures derived from human acoustic nerve schwannoma.</a> Acta Otolaryngol. 115 (4), 517-521 (1995).</li><li>Cravioto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+neurinoma+in+tissue+culture.">Experimental neurinoma in tissue culture.</a> Acta Neuropathol. 21 (2), 154-164 (1972).</li><li>Kaasinen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+of+acoustic+neuroma--methodological+aspects.">Culturing of acoustic neuroma--methodological aspects.</a> Acta Otolaryngol Suppl. 520 Pt 1, 25-26 (1995).</li><li>Kredel, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Culture+of+Intracranial+Tumors+with+a+Note+on+the+Meningiomas.">Tissue Culture of Intracranial Tumors with a Note on the Meningiomas.</a> Am J Pathol. 4 (4), 337-340 (1928).</li><li>Murray, M. R., Stout, A. P., Bradley, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+versus+fibroblast+as+the+origin+of+the+specific+nerve+sheath+tumor:+Observations+upon+normal+nerve+sheaths+and+neurilemomas+in+vitro.">Schwann cell versus fibroblast as the origin of the specific nerve sheath tumor: Observations upon normal nerve sheaths and neurilemomas in vitro.</a> Am J Pathol. 16 (1), 41-60 (1940).</li><li>Cravioto, H., Lockwood, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behavior+of+acoustic+neuroma+in+tissue+culture.">The behavior of acoustic neuroma in tissue culture.</a> Acta Neuropathol. 12 (2), 141-157 (1969).</li><li>Lee, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+epigenetic+alterations+of+the+NF2+gene+in+sporadic+vestibular+schwannomas.">Genetic and epigenetic alterations of the NF2 gene in sporadic vestibular schwannomas.</a> PLoS One. 7 (1), 30418 (2012).</li><li>Wippold, F. J., 2nd, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathology+for+the+neuroradiologist:+Antoni+A+and+Antoni+B+tissue+patterns.">Neuropathology for the neuroradiologist: Antoni A and Antoni B tissue patterns.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 28 (9), 1633-1638 (2007).</li><li>Mennel, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+tissue+culture+observations+of+experimental+primary+and+transplanted+nervous+system+tumors.">Short-term tissue culture observations of experimental primary and transplanted nervous system tumors.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 39 (6), 639-660 (1980).</li><li>Rosenbaum, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+Schwann+cells+from+neurofibromatosis+type+2+patients.">Isolation and characterization of Schwann cells from neurofibromatosis type 2 patients.</a> Neurobiol Dis. 5 (1), 55-64 (1998).</li></ol>

in vitroでの神経鞘腫の文化の歴史 体外神経鞘腫培養で確立するための努力は、最初の聴神経腫のオープン外科的切除は1894 12に発生したわずか数十年後に始まった。最初に記録文化が1920年代にKredelであったが、失敗した「ハンギングドロップ法」12に刻まれた腫瘍を成長しようとした人。その後、博士。マレーとスタウト...

前庭神経鞘腫（VSS）は、全ての頭蓋内新生物は1-3の10％を犠牲にすること、前庭神経のシュワン細胞（SC）の腫瘍を表す。 VSSは、両方のNF2腫瘍抑制における不活性化の欠陥に関連する散発性または家族のどちらか（神経線維腫症2型、NF2）の形態で起こる 遺伝子。のVSの治療は、しかし、このような手順の罹患率は、難聴、顔面神経障害、脊髄液漏出、不均衡、および腫瘍の再増殖1と、一般的に外科的切除または放射線手術である。さらに、すべての患者が許容できる外科的または放射線の候補ではない。このような重大な病的状態だけでなく、代替療法がないことは、新たな治療の3,4の開発を期待してのVSのユニークな分子生物学の調査を推進してきました。 細胞培養は、潜在的な治療COMの分子や細胞の挙動やスクリーニング、迅速な容易、かつ詳細な分析が可能にポンド。歴史的に、新鮮な組織試料へのアクセスの欠如、および神経鞘腫細胞は不死化されていないという事実は、有意に神経鞘腫の腫瘍形成の調査のための一次培養物の使用を妨げている。一次培養物の限られた供給を克服するために、不死化VS HEI193細胞株は、HPV E6およびE7癌遺伝子5で形質導入によって生成した。この発癌性形質導入は、人間の神経鞘腫のモデルとしてそれらの使用を制限する細胞に重要な分子および表現型の変化を導入しました。官能NF2遺伝子を欠いているトランスジェニックマウス系統由来SC培養物は、 インビトロでNF2依存SC腫瘍形成を調査する別の代替を表す。これらの培養物は、しかし、人間の特定の動作のために、人間のVSSまたはアカウントの不均一な性質を再現することができない。ほとんどの前のVS培養技術は、比較的長い処理時間及び複雑な選択的な培養技術6-8を必要とした。ここでは、免疫染色によって決定された95％の腫瘍細胞の純度で、3時間の下に完全に処理した細胞培養VS原発のための簡単​​な、再現性のあるプロトコルを提示する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4957</td>
			<td style="width:167px;">Cell Culture Surface Treatment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laminin Mouse Protein&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">23017-015 / L2020</td>
			<td>Cell Culture Surface Treatment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C2674</td>
			<td>Dissociation Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td>Dissociation Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TPS 100mm Round Culture Dish</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP93100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Permanox 4 well slide</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1256521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Permanox 8 well slide</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1256522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Suction Filter Flask</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP99500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">15ml Conical Tube</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP91015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">50ml Conical Tube</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP91050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2mL Round Bottom Tube</td>
			<td style="width:71px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1620-2700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small Scissor</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel Handle</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">#11 Scalpel Blade</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-9801-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">50-820-904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">P1000 Pipetteman</td>
			<td style="width:71px;">Bioexpress</td>
			<td style="width:119px;">P3963-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Serological Pipetteman</td>
			<td style="width:71px;">Bioexpress</td>
			<td style="width:119px;">R3073-2P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TD1250R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insulated Ice Cooler</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Culture Hood&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Baker</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf -5810R</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">24020-117</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+)</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14170-112</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N2 Supplement</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">17502-048</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">26140-079</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin - Streptomycin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-163</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bovine Insulin (1mg/ml 200x)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I6634</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

primary culture of human vestibular schwannomas

前庭神経鞘腫（VSS）は、全ての頭蓋内新生物の10パーセントを損なう、前庭神経のシュワン細胞（SC）の腫瘍を表​​す。 VSSは、両方のNF2腫瘍抑制における不活性化の欠陥に関連する散発性または家族のどちらか（神経線維腫症2型、NF2）の形態で起こる 遺伝子。 、VSSの治療は、しかし、このような手順の罹患率は、低侵襲治療法の調査を推進してきました、一般的には外科的切除や放射線手術である。歴史的に、新鮮な組織試料へのアクセスの欠如、および神経鞘腫細胞は不死化されていないという事実は、有意に神経鞘腫の腫瘍形成の調査のための一次培養物の使用を妨げている。一次培養物の限られた供給を克服するために、不死化VS HEI193細胞株は、HPV E6およびE7癌遺伝子による形質導入により作製した。この発癌性形質導入は、人間のためのモデルとしてのそれらの使用を制限する細胞に重要な分子および表現型変化を導入chwannoma腫瘍。そこで我々は、細胞のVS初代ヒトの培養のための単純化され、再現性のあるプロトコルを示しています。この簡単に習得技術は、より正確に、VS疾患の複雑さを再現分子や細胞の研究が可能になります。

正しい腫瘍の断片化は、組織培養皿で播種し、最適な成長（ 図1）に必須である。めっき後の最初の日の間に神経鞘腫細胞の同定は、細胞残屑および赤血球の量を不明瞭に、しばしば困難である。 4 回目か5 日目では、付着性の腫瘍断片近いセルの拡張機能は、残骸の中からパターンを「レーシング」に認識が作成されます。その後のメディアの変更は、一般的に...

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Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

人間の前庭神経鞘腫の初代培養

前庭神経鞘腫（VSS）がNF2腫瘍抑制遺伝子における変異に関連するシュワン細胞（SC）由来の非悪性腫瘍である。私たちは、分子や細胞の実験操作および分析を可能にし、ヒトの疾患の不均一な性質を再現細胞培養VS初代ヒトのための再現可能な、効率的なプロトコルを報告します。

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

プライマリーヒト線維芽細胞の導出のために皮膚パンチ生検植文化

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

細胞培養のための人間の削減乳房形成や乳房切除組織の処理

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

プライマリマウス大腸腫瘍のin vitroオルガノイド培養で

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

ヒト胎児膵臓細胞クラスターの単離、培養、およびイメージング

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

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Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

ヒト下垂体腺腫細胞の三次元アルギン酸ビーズ文化

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犬の動脈と静脈からの初代内皮細胞の単離および培養

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Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

用語胎盤の胎児膜から主のひと脱落膜細胞の分離

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Muscle Imbalances: Testing and Training Functional Eccentric Hamstring Strength in Athletic Populations

筋肉の不均衡: テストと競技人口の機能的な偏心ハムスト リングの筋力トレーニング

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Surgical Labyrinthectomy of the Rat to Study the Vestibular System

前庭系を研究するラットの手術なるほど

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