Name: primary culture of human vestibular schwannomas
Uploaded: 2014-07-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas at JoVE.com

Поддержка: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17

Заявление по этике: использование человеческих образцов опухоли в этом протоколе было одобрено Университета Айовы Institutional Review Board (IRB). 1. Настройка за день до опухоли урожая <ol><li> Пальто Сотовые Культура Пластины: В стерильной капот культуре, добавить достаточно поли-L-ор...

<ol>
	<li>Arthurs, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+treatment+modalities+for+vestibular+schwannoma.">A review of treatment modalities for vestibular schwannoma.</a> Neurosurg Rev. 34 (3), 265-277 (2011).</li><li>Evans, G. R., Lloyd, S. K., Ramsden, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+type+2.">Neurofibromatosis type 2.</a> Adv Otorhinolaryngol. 70, 91-98 (2001).</li><li>Fong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+and+novel+treatments+of+vestibular+schwannomas.">The molecular biology and novel treatments of vestibular schwannomas.</a> J Neurosurg. 115 (5), 906-914 (2011).</li><li>Jacob, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+validation+of+AR42,+a+novel+histone+deacetylase+inhibitor,+as+treatment+for+vestibular+schwannomas.">Preclinical validation of AR42, a novel histone deacetylase inhibitor, as treatment for vestibular schwannomas.</a> Laryngoscope. 122 (1), 174-189 (2012).</li><li>Evans, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+2+[Bilateral+acoustic+neurofibromatosis,+central+neurofibromatosis.">Neurofibromatosis 2 [Bilateral acoustic neurofibromatosis, central neurofibromatosis.</a> NF2, neurofibromatosis type II]. Genet Med. 11 (9), 599-610 (2009).</li><li>Anniko, M., Noren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Acoustic+Neurinoma+in+Organ-Culture+.1.+Methodological+Aspects.">The Human Acoustic Neurinoma in Organ-Culture .1. Methodological Aspects.</a> Acta Oto-Laryngologica. 91 (1-2), 47-53 (1981).</li><li>Manent, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+cell+sorting+for+enriching+Schwann+cells+from+adult+mouse+peripheral+nerves.">Magnetic cell sorting for enriching Schwann cells from adult mouse peripheral nerves.</a> J Neurosci Methods. 123 (2), 167-173 (2003).</li><li>Nair, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cultures+of+human+vestibular+schwannoma:+selective+growth+of+schwannoma+cells.">Primary cultures of human vestibular schwannoma: selective growth of schwannoma cells.</a> Otol Neurotol. 28 (2), 258-263 (2007).</li><li>Baur, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+promotes+differentiation,+adhesion+and+proliferation+of+cell+cultures+derived+from+human+acoustic+nerve+schwannoma.">Laminin promotes differentiation, adhesion and proliferation of cell cultures derived from human acoustic nerve schwannoma.</a> Acta Otolaryngol. 115 (4), 517-521 (1995).</li><li>Cravioto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+neurinoma+in+tissue+culture.">Experimental neurinoma in tissue culture.</a> Acta Neuropathol. 21 (2), 154-164 (1972).</li><li>Kaasinen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+of+acoustic+neuroma--methodological+aspects.">Culturing of acoustic neuroma--methodological aspects.</a> Acta Otolaryngol Suppl. 520 Pt 1, 25-26 (1995).</li><li>Kredel, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Culture+of+Intracranial+Tumors+with+a+Note+on+the+Meningiomas.">Tissue Culture of Intracranial Tumors with a Note on the Meningiomas.</a> Am J Pathol. 4 (4), 337-340 (1928).</li><li>Murray, M. R., Stout, A. P., Bradley, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+versus+fibroblast+as+the+origin+of+the+specific+nerve+sheath+tumor:+Observations+upon+normal+nerve+sheaths+and+neurilemomas+in+vitro.">Schwann cell versus fibroblast as the origin of the specific nerve sheath tumor: Observations upon normal nerve sheaths and neurilemomas in vitro.</a> Am J Pathol. 16 (1), 41-60 (1940).</li><li>Cravioto, H., Lockwood, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behavior+of+acoustic+neuroma+in+tissue+culture.">The behavior of acoustic neuroma in tissue culture.</a> Acta Neuropathol. 12 (2), 141-157 (1969).</li><li>Lee, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+epigenetic+alterations+of+the+NF2+gene+in+sporadic+vestibular+schwannomas.">Genetic and epigenetic alterations of the NF2 gene in sporadic vestibular schwannomas.</a> PLoS One. 7 (1), 30418 (2012).</li><li>Wippold, F. J., 2nd, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathology+for+the+neuroradiologist:+Antoni+A+and+Antoni+B+tissue+patterns.">Neuropathology for the neuroradiologist: Antoni A and Antoni B tissue patterns.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 28 (9), 1633-1638 (2007).</li><li>Mennel, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+tissue+culture+observations+of+experimental+primary+and+transplanted+nervous+system+tumors.">Short-term tissue culture observations of experimental primary and transplanted nervous system tumors.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 39 (6), 639-660 (1980).</li><li>Rosenbaum, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+Schwann+cells+from+neurofibromatosis+type+2+patients.">Isolation and characterization of Schwann cells from neurofibromatosis type 2 patients.</a> Neurobiol Dis. 5 (1), 55-64 (1998).</li></ol>

История в пробирке шваннома культур Усилия по созданию в пробирке культур шваннома начал всего несколько десятилетий после первоначального невриномы слухового нерва открытая хирургическая резекция произошло в 1894 12. Первые записанные культур?...

Вестибулярные шванном (VSS) представляют Шванн клетки (СК) опухолей вестибулярного нерва, ущерба 10% всех внутричерепных новообразований 1-3. VSs произойти в любом спорадических или семейных (нейрофиброматоз типа 2, NF2) формах, как связанных с инактивирующих дефектов в супрессоров опухолей NF2 ген. Лечение VSS, как правило, хирургическая резекция или радиохирургия, однако заболеваемость таких процедур включает глухота, лица невропатии, утечка спинномозговой жидкости, дисбаланс и опухоли отрастания 1. Кроме того не все пациенты являются приемлемыми хирургические или радиационные кандидатов. Столь значительный заболеваемости, а также отсутствие альтернативных методов лечения загнал расследование уникальной молекулярной биологии VSS в надежде разработке новых методов лечения 3,4. Клеточные культуры позволяет быстро, легкому, и углубленного анализа молекулярной и клеточной поведения и скрининга потенциального терапевтического комфунтов. Исторически сложилось так, отсутствие доступа к образцов свежих тканей и тем, что шваннома клетки не увековечена значительно затрудняло использование первичных культур для исследования шваннома опухолей. Чтобы преодолеть ограниченный запас первичных культурах, увековечены клеточная линия HEI193 В.С. был сгенерирован трансдукции ВПЧ Е6 и Е7 онкогенов 5. Это онкогенного трансдукции внесены существенные молекулярные и фенотипические изменения в клетках, которые ограничивают их использование в качестве модели для опухолей шваннома человека. SC культуры, полученные из трансгенных линий мышей, которые не имеют функциональный ген NF2 представляют другую альтернативу для расследования УХЛ2-зависимую SC туморогенез в пробирке. Эти культуры, однако не в состоянии повторять гетерогенную природу человека VSS или счета для конкретного поведения человека. Большинство предыдущих методы VS культуры требуется относительно длинные сроки обработки и сложных методов селективного культуры 6-8.Здесь мы представляем простой, воспроизводимый протокол для первичной VS культуре клеток с полной переработки в рамках 3 часов, с 95%-ной чистоты опухолевых клеток, как определяется иммунной окраски.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4957</td>
			<td style="width:167px;">Cell Culture Surface Treatment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laminin Mouse Protein&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">23017-015 / L2020</td>
			<td>Cell Culture Surface Treatment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C2674</td>
			<td>Dissociation Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td>Dissociation Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TPS 100mm Round Culture Dish</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP93100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Permanox 4 well slide</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1256521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Permanox 8 well slide</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1256522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Suction Filter Flask</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP99500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">15ml Conical Tube</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP91015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">50ml Conical Tube</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TP91050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2mL Round Bottom Tube</td>
			<td style="width:71px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1620-2700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small Scissor</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel Handle</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">#11 Scalpel Blade</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-9801-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">50-820-904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">P1000 Pipetteman</td>
			<td style="width:71px;">Bioexpress</td>
			<td style="width:119px;">P3963-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Serological Pipetteman</td>
			<td style="width:71px;">Bioexpress</td>
			<td style="width:119px;">R3073-2P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips</td>
			<td style="width:71px;">Midwest Scientific</td>
			<td style="width:119px;">TD1250R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insulated Ice Cooler</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Culture Hood&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Baker</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf -5810R</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">24020-117</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+)</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14170-112</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11965-092</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N2 Supplement</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">17502-048</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">26140-079</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin - Streptomycin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-163</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bovine Insulin (1mg/ml 200x)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I6634</td>
			<td>Schwannoma Culture and Media Components</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

primary culture of human vestibular schwannomas

Вестибулярные шванном (VSS) представляют Шванн клетки (СК) опухолей вестибулярного нерва, ущерба 10% всех внутричерепных новообразований. VSs произойти в любом спорадических или семейных (нейрофиброматоз типа 2, NF2) формах, как связанных с инактивирующих дефектов в супрессоров опухолей NF2 ген. Лечение VSS, как правило, хирургическая резекция или радиохирургия, однако заболеваемость таких процедур привела расследования менее инвазивных процедур. Исторически сложилось так, отсутствие доступа к образцов свежих тканей и тем, что шваннома клетки не увековечена значительно затрудняло использование первичных культур для исследования шваннома опухолей. Чтобы преодолеть ограниченный запас первичных культурах, увековечены клеточная линия HEI193 В.С. был сгенерирован трансдукции ВПЧ Е6 и Е7 онкогенов. Это онкогенного трансдукции внесены существенные молекулярные и фенотипические изменения в клетках, которые ограничивают их использование в качестве модели для человека сchwannoma опухоли. Поэтому мы иллюстрируют упрощенную, воспроизводимое протокол для культуры первичных человеческих VS клеток. Это легко освоен метод позволяет для молекулярных и клеточных исследований, которые более точно воспроизводят сложность заболевания VS.

Правильное фрагментации опухоли имеет важное значение для оптимального посева и выроста в чашках для культуры ткани (рис. 1). Идентификация шваннома клеток в течение первых дней после посева часто бывает трудно, из-за затемнения количество продуктов распада клеток и красных к?...

Watch this Scientific Journal Video about Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas at JoVE.com

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Первичная культура человека вестибулярного шванномы

Вестибулярная Шванномы (VSS) не являются злокачественные опухоли Шванн клеток (СК) происхождения, связанные с мутациями в гене опухолевого супрессора NF2. Мы сообщаем о воспроизводимой, эффективный протокол для первичных человеческих VS культуре клеток, которая позволяет молекулярной и клеточной экспериментальной манипуляции и анализа и повторяет гетерогенную природу болезни человека.

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Кожа биопсии эксплантата культуры для отвлечения Первичные человеческие фибробласты

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Обработка по правам Маммопластика сокращении и Мастэктомия тканей для культуры клеток

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

В пробирке Organoid культуры первичных опухолей толстой мыши

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

Изоляция, культура и Визуализация человека плода поджелудочной кластеров клеток

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Трехмерная Tissue Culture моделью для изучения первичного костного мозга человека и его злокачественных новообразований

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Трехмерная альгинат-шарик культуре человеческих клеток аденомы гипофиза

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Выделение и культуры первичных эндотелиальных клеток от клыка артериями и венами

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Изоляции первичных клеток человека децидуальной от плода мембраны термин Роль162

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Muscle Imbalances: Testing and Training Functional Eccentric Hamstring Strength in Athletic Populations

Мышечной дисбаланс: Тестирование и обучение функциональной эксцентричный подколенного сухожилия прочность спортивная(ый) популяции

Many hamstring injuries that occur during physical activity occur while the muscles are lengthening, during eccentric hamstring muscle actions. Opposite ...

Surgical Labyrinthectomy of the Rat to Study the Vestibular System

Хирургические Labyrinthectomy крысы учиться вестибулярной системы

To study the vestibular system or the vestibular compensation process, a number of methods have been developed to cause vestibular damage, including ...