Name: expression of functional recombinant hemagglutinin and neuraminidase proteins from the novel h7n9 influenza virus using the baculovirus expression system
Uploaded: 2013-11-06T23:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System at J

हम मोनोक्लोनल एंटीबॉडी CR9114 के लिए पैट्रिक सी. विल्सन को धन्यवाद देना चाहूंगा. हम भी मूल A/Anhui/1/13 plasmids के लिए जेनिफर Debeauchamp और रिचर्ड वेबी धन्यवाद. इस काम के लिए आंशिक समर्थन एलर्जी के लिए राष्ट्रीय संस्थान द्वारा प्रदान की गई और संक्रामक कार्यक्रम परियोजना अनुदान AI097092-01A1 और CEIRS (इन्फ्लूएंजा अनुसंधान और निगरानी के लिए उत्कृष्टता के केंद्र, HHSN26620070010C) रोग से वित्त पोषित किया गया था. FK ऑस्ट्रियाई विज्ञान कोष (FWF) से एक इरविन श्रोडिंगर फैलोशिप (जे 3232) द्वारा समर्थित किया गया.

1. संयोजक baculovirus की पीढ़ी <ol><li> Baculovirus स्थानांतरण plasmids में क्लोनिंग <ol><li> क्लोन H7 हा और संशोधित pFastBac स्थानांतरण plasmids में N9 NA ectodomain (या किसी भी अन्य हा या NA जीन) (परिचय देखें). हा एक एन टर्मिनल tetramerization डोमेन और hexahistidine टैग युक्त ए?...

<ol>
	<li>Krammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+carboxy-terminal+trimerization+domain+stabilizes+conformational+epitopes+on+the+stalk+domain+of+soluble+recombinant+hemagglutinin+substrates.">A carboxy-terminal trimerization domain stabilizes conformational epitopes on the stalk domain of soluble recombinant hemagglutinin substrates.</a> PLoS One. 7, e43603 (2012).</li><li>Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Margine, I., Palese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+hemagglutinin+influenza+virus+vaccine+constructs+elicit+broadly-protective+stalk-specific+antibodies.">Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly-protective stalk-specific antibodies.</a> J. Virol. , (2013).</li><li>Leyva-Grado, V. H., Mubareka, S., Krammer, F., C&#225;rdenas, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+virus+infection+in+Guinea+pigs+raised+as+livestock,+ecuador.">Influenza virus infection in Guinea pigs raised as livestock, ecuador.</a> Emerg. Infect. Dis. 18, 1135-1138 (2012).</li><li>Margine, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H3N2+influenza+virus+infection+induces+broadly+reactive+hemagglutinin+stalk+antibodies+in+humans+and+mice.">H3N2 influenza virus infection induces broadly reactive hemagglutinin stalk antibodies in humans and mice.</a> J. Virol. , (2013).</li><li>Miller, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1976+and+2009+H1N1+Influenza+Virus+Vaccines+Boost+Anti-Hemagglutinin+Stalk+Antibodies+in+Humans.">1976 and 2009 H1N1 Influenza Virus Vaccines Boost Anti-Hemagglutinin Stalk Antibodies in Humans.</a> J. Infect. Dis. 652, (1976).</li><li>Pica, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinin+stalk+antibodies+elicited+by+the+2009+pandemic+influenza+virus+as+a+mechanism+for+the+extinction+of+seasonal+H1N1+viruses.">Hemagglutinin stalk antibodies elicited by the 2009 pandemic influenza virus as a mechanism for the extinction of seasonal H1N1 viruses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 2573-2578 (2012).</li><li>Sangster, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+B+cell+response+and+hemagglutinin+stalk-reactive+antibody+production+in+different+age+cohorts+following+2009+H1N1+influenza+vaccination.">The B cell response and hemagglutinin stalk-reactive antibody production in different age cohorts following 2009 H1N1 influenza vaccination.</a> Clin. Vaccine Immunol. , (2013).</li><li>Tan, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pan-h1+anti-hemagglutinin+monoclonal+antibody+with+potent+broad-spectrum+efficacy+in+vivo.">A pan-h1 anti-hemagglutinin monoclonal antibody with potent broad-spectrum efficacy in vivo.</a> J. Virol. 86, 6179-6188 (2012).</li><li>Ekiert, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+recognition+of+a+highly+conserved+influenza+virus+epitope.">Antibody recognition of a highly conserved influenza virus epitope.</a> Science. 324, 246-251 (2009).</li><li>Xu, X., Zhu, X., Dwek, R. A., Stevens, J., Wilson, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+characterization+of+the+1918+influenza+virus+H1N1+neuraminidase.">Structural characterization of the 1918 influenza virus H1N1 neuraminidase.</a> J. Virol. 82, 10493-10501 (2008).</li><li>Stevens, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+uncleaved+human+H1+hemagglutinin+from+the+extinct+1918+influenza+virus.">Structure of the uncleaved human H1 hemagglutinin from the extinct 1918 influenza virus.</a> Science. 303, 1866-1870 (2004).</li><li>Wei, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+efficacy+of+neutralizing+antibodies+elicited+by+recombinant+hemagglutinin+proteins+from+avian+H5N1+influenza+virus.">Comparative efficacy of neutralizing antibodies elicited by recombinant hemagglutinin proteins from avian H5N1 influenza virus.</a> J. Virol. 82, 6200-6208 (2008).</li><li>Krammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trichoplusia+ni+cells+(High+Five)+are+highly+efficient+for+the+production+of+influenza+A+virus-like+particles:+a+comparison+of+two+insect+cell+lines+as+production+platforms+for+influenza+vaccines.">Trichoplusia ni cells (High Five) are highly efficient for the production of influenza A virus-like particles: a comparison of two insect cell lines as production platforms for influenza vaccines.</a> Mol. Biotechnol. 45, 226-234 (2010).</li><li>Palmberger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+cells+for+antibody+production:+evaluation+of+an+efficient+alternative.">Insect cells for antibody production: evaluation of an efficient alternative.</a> J. Biotechnol. 153, 160-166 (2011).</li><li>Santiago, F. W., Lambert Emo, K., Fitzgerald, T., Treanor, J. J., Topham, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+and+immunogenic+properties+of+recombinant+hemagglutinin+proteins+from+H1N1+A/Brisbane/59/07+and+B/Florida/04/06+when+produced+in+various+protein+expression+systems.">Antigenic and immunogenic properties of recombinant hemagglutinin proteins from H1N1 A/Brisbane/59/07 and B/Florida/04/06 when produced in various protein expression systems.</a> Vaccine. 30, 4606-4616 (2012).</li><li>Wrammert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broadly+cross-reactive+antibodies+dominate+the+human+B+cell+response+against+2009+pandemic+H1N1+influenza+virus+infection.">Broadly cross-reactive antibodies dominate the human B cell response against 2009 pandemic H1N1 influenza virus infection.</a> J. Exp. Med. 208, 181-193 (2011).</li><li>Treanor, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+efficacy+of+a+trivalent+recombinant+hemagglutinin+protein+vaccine+(FluBlok)+against+influenza+in+healthy+adults:+a+randomized,+placebo-controlled+trial.">Protective efficacy of a trivalent recombinant hemagglutinin protein vaccine (FluBlok) against influenza in healthy adults: a randomized, placebo-controlled trial.</a> Vaccine. 29, 7733-7739 (2011).</li><li>Dalakouras, T., Smith, B., Platis, D., Cox, M., Labrou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+recombinant+protein-based+influenza+vaccine.+Expression+and+affinity+purification+of+H1N1+influenza+virus+neuraminidase.">Development of recombinant protein-based influenza vaccine. Expression and affinity purification of H1N1 influenza virus neuraminidase.</a> J. Chromatogr. A. 1136, 48-56 (2006).</li><li>Krammer, F., Grabherr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+influenza+vaccines+made+by+insect+cells.">Alternative influenza vaccines made by insect cells.</a> Trends Mol. Med. 16, 313-320 (2010).</li><li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Infection+with+a+Novel+Avian-Origin+Influenza+A+(H7N9)+Virus.">Human Infection with a Novel Avian-Origin Influenza A (H7N9) Virus.</a> N. Engl. J. Med. , (2013).</li><li>Goff, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cross-reactive+antibodies+to+novel+H7N9+influenza+virus+by+recombinant+Newcastle+disease+virus+expressing+a+North+American+lineage+H7+subtype+hemagglutinin.">Induction of cross-reactive antibodies to novel H7N9 influenza virus by recombinant Newcastle disease virus expressing a North American lineage H7 subtype hemagglutinin.</a> J. Virol. , (2013).</li><li>Weldon, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+immunogenicity+of+stabilized+trimeric+soluble+influenza+hemagglutinin.">Enhanced immunogenicity of stabilized trimeric soluble influenza hemagglutinin.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Dreyfus, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+conserved+protective+epitopes+on+influenza+B+viruses.">Highly conserved protective epitopes on influenza B viruses.</a> Science. 337, 1343-1348 (2012).</li><li>Steel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+attenuated+influenza+viruses+containing+NS1+truncations+as+vaccine+candidates+against+H5N1+highly+pathogenic+avian+influenza.">Live attenuated influenza viruses containing NS1 truncations as vaccine candidates against H5N1 highly pathogenic avian influenza.</a> J. Virol. 83, 1742-1753 (2009).</li><li>Fouchier, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avian+influenza+A+virus+(H7N7)+associated+with+human+conjunctivitis+and+a+fatal+case+of+acute+respiratory+distress+syndrome.">Avian influenza A virus (H7N7) associated with human conjunctivitis and a fatal case of acute respiratory distress syndrome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 1356-1361 (2004).</li><li>Kost, T., Condreay, J., Jarvis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+as+versatile+vectors+for+protein+expression+in+insect+and+mammalian+cells.">Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 23, 567-575 (2005).</li></ol>

Baculovirus अभिव्यक्ति प्रणाली का उपयोग कर कीट कोशिकाओं में इन्फ्लूएंजा वायरस हा और एनए प्रोटीन की अभिव्यक्ति सीधे आगे आम तौर पर है, पर विचार करने के लिए कई महत्वपूर्ण बातें हैं. शुरूआत में बताया यह हा और एनए ?...

चीन में उपन्यास H7N9 इन्फ्लूएंजा वायरस तनाव के हाल ही के उद्भव के लिए पहली बार एक प्रतिक्रिया के रूप में, हम (हेक्टेयर) hemagglutinin और neuraminidase (एनए) के पहले दो आइसोलेट्स के जीनों के लिए जीनोमिक दृश्यों ले जाने plasmids हासिल कर ली. हम जल्दी से कीट कोशिकाओं में पुनः संयोजक हा और एनए के उत्पादन के लिए baculoviral अभिव्यक्ति वैक्टर का निर्माण करने में सक्षम थे इन plasmids का उपयोग करना. यह अभिव्यक्ति प्रणाली अच्छी तरह से हमारी प्रयोगशाला में स्थापित है और हमारे चल रहे अनुसंधान परियोजनाओं 1-8 से कई के लिए निर्णायक साबित हो गया है. कीट कोशिकाओं को सही ढंग से गुना और बाद translationally जटिल प्रोटीनों को संशोधित करने में सक्षम हैं. इन संशोधनों के कई वायरल ग्लाइकोप्रोटीन के लिए महत्वपूर्ण है जो उत्तर से जुड़े ग्लाइकोसिलेशन, शामिल हैं. जैसे, यह baculovirus प्रणाली काफी इन्फ्लूएंजा वायरस की सतह एंटीजन व्यक्त करने के लिए स्थापित किया गया है आश्चर्य की बात नहीं है. वास्तव में, हा और एनए क्रिस्टल संरचनाओं के कई कीट सेल व्यक्त प्रोटीन 9-11 का उपयोग कर हल किया गया है. का एक अन्य लाभमजबूत polyhedrin प्रमोटर से वायरस संक्रमण संचालित अभिव्यक्ति का एक परिणाम - प्रणाली (50 से अधिक विभिन्न हा प्रोटीन के साथ हमारे अनुभव के आधार पर) हा / एल सेल संस्कृति के लिए 30 मिलीग्राम की अपनी विश्वसनीय उच्च प्रोटीन पैदावार में निहित है. हा और एनए प्रोटीन की transmembrane और endodomain का हटाया प्रोटीन की secretable, घुलनशील संस्करणों की अभिव्यक्ति के लिए अनुमति देता है और इस प्रकार बहुत शुद्धिकरण की प्रक्रिया की सुविधा. इसके अलावा, इन ectodomains hexahistidine टैग कर रहे हैं और इसलिए नी 2 + राल का उपयोग आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी का उपयोग कर शुद्ध किया जा सकता है. हा और एनए प्रोटीन की transmembrane डोमेन क्रमशः, homotrimer और homotetramer गठन के लिए योगदान करते हैं. इन oligomerizations बनाए रखने के लिए, हम हा, और एनए के लिए एक एन टर्मिनल tetramerization डोमेन (चित्रा 1) constructs करने के लिए एक सी टर्मिनल trimerization डोमेन जोड़ें. हम इस तरह के एक trimerization डोमेन कार्यशील, नतीजे स्थिर कि अंतिम तौर से पता चला हैहा 1 के डंठल डोमेन पर गठनात्मक epitopes rved. एनए के सही tetramerization भी तह और एनए समारोह 10 को ठीक करने के लिए योगदान हो सकता है. Trimerization या tetramerization डोमेन शरण दृश्यों और baculo हस्तांतरण वैक्टर लेखकों से या क्षेत्र, 9,10,12 में अन्य प्रयोगशालाओं से अनुरोध किया जा सकता है. कीट कोशिकाओं में स्रावित प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए एक अन्य महत्वपूर्ण मुद्दा सही सेल लाइन का विकल्प है. स्पोडोप्टेरा frugiperda Sf9 कोशिकाओं को बहुत अच्छी तरह से baculovirus प्रतिकृति का समर्थन और आम तौर पर वायरस बचाव और प्रचार के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं व्युत्पन्न हैं, वे प्रोटीन की बड़ी मात्रा में स्रावित करने की क्षमता सीमित है. Trichoplusia नी (आमतौर पर उच्च पाँच के रूप में जाना) BTi-TN-5B1 -4 कोशिकाओं व्युत्पन्न एक उच्च स्राव क्षमता है और इस प्रोटोकॉल 13,14 में अभिव्यक्ति के लिए पसंद की सेल लाइन कर रहे हैं. इसके अलावा, यह भ्रूण गोजातीय सीरम कम या दूर करने के लिए उपयोगी है (अमेरिकन प्लानअभिव्यक्ति संस्कृतियों से एस). इसलिए हम वायरस काम कर रहे शेयरों में उगाने के लिए कम (3%) FBS सामग्री के साथ मीडिया का उपयोग, और हम सीरम मुक्त मीडिया में प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रदर्शन करते हैं. संयोजक हा और एनए प्रोटीन कई प्रतिरक्षाविज्ञानी तकनीक के लिए इस्तेमाल किया जाता है. शायद सबसे आम एक मनुष्य या पशुओं 4,6,7,15 में टीकाकरण पर सीरम रूपांतरण मापने के लिए एलिसा assays में है. गया है और NAS भी एंटीबॉडी स्रावित कोशिकाओं 16 के लिए stimulatory अणुओं और पता लगाने अभिकर्मकों के रूप में दोनों ELISPOT assays में उपयोग किया जाता है. आणविक फँसाना रूप में उनके उपयोग विशेष रूप से plasmablasts या तो (चिकित्सीय) मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (MAbs) को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि बी कोशिकाओं के अन्य प्रकार के लिए सॉर्ट करने के लिए अनुमति देता है. संयोजक हा और एनए के अणुओं आगे इन mAbs 8 के लक्षण वर्णन में किया जाता है. अन्य उदाहरणों में पीएच स्थिरता या रिसेप्टर विशिष्टता अलग वायरस आइसोलेट्स द्वारा व्यक्त की है की, या मात्रात्मक आकलन विशिष्ट NA एंजाइमी अध्ययन में शामिलinhibitors के लिए गतिविधि या विरोध. इसके अलावा, पुनः संयोजक, शुद्ध हा निष्क्रिय इन्फ्लूएंजा वायरस टीके के हा सामग्री मानकीकृत करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. महत्वपूर्ण बात है, RHA (और कुछ हद तक एनए) वैक्सीन उम्मीदवारों वर्तमान में एक टीका उम्मीदवार 2013 2,17-19 में एफडीए द्वारा लाइसेंस प्राप्त किया जा रहा है साथ पशु मॉडल और मानव नैदानिक ​​परीक्षणों में परीक्षण किया जा रहा है. इन उपन्यास टीके का लाभ वजह से इन प्रोटीनों की पुनः संयोजक प्रकृति के कारण, उच्च विकास reassortant वायरस के सृजन का श्रम प्रधान प्रक्रिया से बचा जा सकता है, कि है. शायद और भी अधिक प्रासंगिक उनके हा उपज उच्च और तनाव से तनाव के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है कि इस तथ्य है. इन टीकों एक अंडा मुक्त प्रणाली में उत्पादित कर रहे हैं के बाद से ही, वे अंडा एलर्जी के साथ व्यक्तियों के लिए समस्याग्रस्त हैं कि प्रोटीन contaminants शामिल नहीं है. यहाँ हम उपन्यास चीनी H7N9 इन्फ्लूएंजा वायरस, ए / अन्ह के दो आइसोलेट्स से हा और एनए प्रोटीन व्यक्त करने के लिए चुनाui/1/13 और A/Shanghai/1/13 20,21. ये समय पर उदाहरण हैं, लेकिन वर्णित प्रोटोकॉल किसी भी इन्फ्लूएंजा ए और बी हा या NA प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और किसी भी अन्य secreted वायरल या सेलुलर प्रोटीन व्यक्त करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता. Trimeric या tetrameric transmembrane प्रोटीन क्रमशः, हा और एनए के लिए इस्तेमाल अभिव्यक्ति कैसेट में क्लोन किया जा सकता है. हालांकि, सबसे घुलनशील secreted सेलुलर प्रोटीन, उदाहरण के लिए इंटरफेरॉन की तरह, स्थिरीकरण के लिए एक अतिरिक्त डोमेन की जरूरत नहीं है और एक सी टर्मिनल hexahistidine टैग के साथ पूरी तरह से व्यक्त किया जा सकता है.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bac-to-Bac Baculovirus expression system</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10359-016</td>
			<td>Follow manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNM-FH insect medium</td>
			<td>Gemini Bioproducts</td>
			<td>600-311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone SFX-Insect</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>SH30278.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellfectin II Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P/N58760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F68</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1000702664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SimplyBlue SafeStain</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC6060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA Agarose</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra Centrigual filters Ultracel 30K</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC902024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Columns (5 ml)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>34964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Max efficiency DH10Bac bacteria</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10361-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink HiPure Plasmid Filter Midiprep Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>K210015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2399-100G</td>
			<td>for elution and wash buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sf9 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td><a href="http://www.atcc.org/Products/All/CRL-1711.aspx" target="_blank">CRL-1711</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Five cells</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>B85502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expression of functional recombinant hemagglutinin and neuraminidase proteins from the novel h7n9 influenza virus using the baculovirus expression system

baculovirus अभिव्यक्ति प्रणाली पुनः संयोजक प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. (हेक्टेयर) hemagglutinin और neuraminidase (एनए) - यहाँ हम इन्फ्लूएंजा के सही ढंग से मुड़ा और ग्लाइकोसिलेटेड संस्करण एक वायरस की सतह ग्लाइकोप्रोटीन निर्माण करने के लिए इसका इस्तेमाल करते हैं. एक उदाहरण के रूप में, हम हाल ही में चीन में उभरा है कि उपन्यास H7N9 वायरस द्वारा व्यक्त हा और एनए प्रोटीन चुना है. हालांकि प्रोटोकॉल आसानी से किसी भी अन्य इन्फ्लूएंजा ए और बी वायरस उपभेदों द्वारा व्यक्त हा और एनए प्रोटीन के लिए अनुकूलित किया जा सकता. संयोजक हा (RHA) और एनए (आरएनए) प्रोटीन ऐसे ELISPOT और एलिसा रूप प्रतिरक्षाविज्ञानी assays के लिए महत्वपूर्ण अभिकर्मकों हैं, और टीका मानकीकरण, प्रतिरक्षी खोज, अलगाव और लक्षण वर्णन के लिए व्यापक प्रयोग में भी कर रहे हैं. इसके अलावा, पुनः संयोजक NA अणुओं छोटे अणु inhibitors के लिए स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया और एनए के enzymatic समारोह के लक्षण वर्णन है, साथ ही antivirals के लिए अपनी संवेदनशीलता के लिए उपयोगी होते हैं किया जा सकता है. संयोजक हा प्रोटीन भी बी हैंएनजी पशु मॉडल में प्रयोगात्मक टीकों के रूप में परीक्षण किया है, और पुनः संयोजक हेक्टेयर पर आधारित एक टीका हाल ही में मानव में इस्तेमाल के लिए एफडीए द्वारा लाइसेंस प्राप्त था. यह तेजी से और कम कीमत पर प्रोटीन की बड़ी मात्रा के उत्पादन के लिए अनुमति देता है के बाद से हम इन अणुओं का उत्पादन करने के लिए यहाँ का वर्णन विधि, सीधे आगे है और इन्फ्लूएंजा प्रयोगशालाओं में अनुसंधान की सुविधा कर सकते हैं. हम इन्फ्लूएंजा वायरस की सतह ग्लाइकोप्रोटीन पर ध्यान केंद्रित यहाँ हालांकि, इस विधि भी अन्य वायरल और सेलुलर सतह प्रोटीन का उत्पादन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

A/Shanghai/1/13 और A/Anhui/1/13 से हा अणुओं के बारे में 20 मिलीग्राम / एल संस्कृति की पैदावार के साथ अच्छी तरह से व्यक्त किया. दोनों उपभेदों के एनए अणुओं A/Shanghai/1/13 के लिए 0.2 मिलीग्राम / एल संस्कृति से A/Anhui/1/13 के लिए 0.7 मिलीग्राम / एल स?...

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Expression of Functional Recombinant Hemagglutinin and Neuraminidase Proteins from the Novel H7N9 Influenza Virus Using the Baculovirus Expression System

यहाँ हम कीट कोशिकाओं में उपन्यास चीनी H7N9 वायरस से व्युत्पन्न सही ढंग से मुड़ा और कार्यात्मक इन्फ्लूएंजा वायरस की सतह एंटीजन व्यक्त करने के लिए एक तरह का वर्णन. तकनीक किसी भी वायरल या सेलुलर सतह प्रोटीन की ectodomains व्यक्त करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता.

Baculovirus अभिव्यक्ति प्रणाली का उपयोग उपन्यास H7N9 इन्फ्लूएंजा वायरस से कार्यात्मक संयोजक Hemagglutinin और neuraminidase प्रोटीन की अभिव्यक्ति

The baculovirus expression system is a powerful tool for expression of  recombinant proteins. Here we use it to produce correctly folded and  glycosylated ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

पुनः संयोजक इन्फ्लुएंजा वायरस के डीएनए प्लाज्मिड से पीढ़ी

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Bioluminescent इमेजिंग बीच योगवाहिता जांच स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया इन्फ्लुएंजा और शिशु चूहे में एक वायरस

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs &amp; Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

पैकेजिंग एचआईवी या FIV आधारित Lentivector अभिव्यक्ति constructs और VSV जी Pseudotyped वायरल कणों की transduction

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient ...

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

संक्रमित कोशिकाओं की Chromatin से इन्फ्लुएंजा वायरस Ribonucleoprotein के परिसर संबंध शुद्धीकरण

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

माउस बृहदांत्रशोथ में इम्यून और गैर प्रतिरक्षा कोशिकाओं से अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण द्वारा जीन एक्सप्रेशन के कार्यात्मक भूमिका फर्क

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Rescue of Recombinant Newcastle Disease Virus from cDNA

सीडीएनए से संयोजक न्यूकासल रोग वायरस का बचाव

Newcastle disease virus (NDV), the prototype member of  the Avulavirus genus of the family Paramyxoviridae1, is a non-segmented,  negative-sense, ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

फेज-प्रदर्शित सिंथेटिक एंटीबॉडी पुस्तकालयों से स्केलेबल उच्च Throughput चुनाव

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

इन्फ्लुएंजा ए वायरस nucleoprotein के साथ माउस MX1 प्रोटीन की सह immunoprecipitation

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

स्वाइन से इन्फ्लुएंजा ए वायरस का पता लगाने और अलगाव के लिए नाक पोंछे

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

प्रतिदीप्ति आधारित neuraminidase निषेध परख विषाणु-विरोधी की neuraminidase अवरोध करनेवाला वर्ग के लिए इन्फ्लूएंजा वायरस की संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...