Name: minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts
Uploaded: 2014-02-11T18:00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أنوه إليانا Beraldi لأداء تنبيغ الفيروسية من خطوط الخلايا السرطانية وبن ديلي لتعليماته على استخدام منصة صغيرة التصوير بالموجات فوق الصوتية للحيوانات. وأيد هذا المشروع من قبل نظام المؤسسة الألمانية (DFG؛ JA 2117/1-1: 1)، ومعهد أبحاث جمعية السرطان الكندية، وجائزة العلماء إرشادهم طبيب من معهد بحوث صحة الساحلية فانكوفر. وقد تم تمويل منصة التصوير بالموجات فوق الصوتية من قبل المؤسسة الكندية للإبداع.

تم تنفيذ كافة الإجراءات الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية من المجلس الكندي للرعاية الحيوان (CCAC). تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة رعاية الحيوان من جامعة كولومبيا البريطانية (عدد البروتوكول: A10-0192). 1. إعداد خطوط الخليوي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التأكد من هوية من خطوط الخلايا السرطانية المثانة الإنسان منها عن طريق الحمض النووي أخذ البصمات 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل نمو الأورام طعم أجنبي من قبل تلألؤ بيولوجي، بالنقل خطوط الخلايا مع بناء lentiviral تحمل الجين luciferase المراسل اليراع 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد وتوسيع خطوط الخلايا الموجودة في تعديل متوسطة النسر Dulbecco و(DMEM) مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) عند 37 درجة مئوية في ترطيب 5٪ CO 2 الغلاف الجوي. مرور الخلايا 3X على الأقل ولكن تجنب أوقات الثقافة تزيد عن 3 أشهر. </li></ol> 2. إعداد تعليق خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد Matrigel. الحفاظ على درجة حرارة أقل من4 ° C لتجنب زيادة اللزوجة من هلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا في التقاء 70٪ ووقف في وسائل الاعلام النمو الطبيعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عدد الخلايا مع عدادة الكريات أو خلية مكافحة التلقائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور تعليق خلية لمدة 5 دقائق في 200 × ز. إزالة طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حجم مناسب من DMEM (10٪ FBS) وMatrigel (نسبة 1:1) من أجل الوصول إلى تركيز الخلية المطلوبة والتي تعتمد على خط الخلية المستخدمة وحركية النمو المنشود (8-15 × 10 6 / مل). فإن حجم حقن من ورم الخلايا التعليق سيكون 40 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج جيد من قبل pipetting صعودا وهبوطا (P1000)، وتجنب خلق فقاعات الهواء في التعليق. </li></ol> 3. إعداد الحيوانات ملاحظة: نظرا للحاجة المحتملة للقسطرة عبر الاحليل في الخطوة 4.7، إناث الفئران هي المفضلة بين الجنسين في هذا النموذج الحيواني. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران المنزل وفقا لالمؤسسية ورعاية الحيوان الوطنية غوidelines. الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات لجميع التجارب التي تنطوي على الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع 3٪ خليط isoflurane و/ الأوكسجين. تأكيد التخدير المناسبة من الحيوانات (على سبيل المثال عدم استجابتها لالقرصات أخمص القدمين). </li></ol> 4. الإعداد التجريبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع استقرار المثانة من أي نوع من المواد البلاستيكية المسطحة الجامدة [الشكل 2 I]. فحص دقيق للحزام وإزالة أي حواف حادة قبل تطبيق للفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الحيوان على الطاولة التصوير ساخنة [الشكل 1 I] من منصة التصوير حيوان صغير مع الرصد المستمر للعلامات الحيوية. إصلاح الأطراف السفلية مع الشريط المطاطي [الشكل 1 III]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير البطن مع 2٪ جلوكونات الكلورهيكسيدين ومسح الجلد مع طرف القطن المعقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شل المثانة مع حزام استقرار المثانة [الشكل 2 II]. وبالتالي، تهربامن المثانة خلال حقن جماعية في الخطوة 5.6 سيتم تجنبها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق العقيمة هلام الموجات فوق الصوتية لأسفل البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقترب ببطء scanhead الموجات فوق الصوتية (تردد 40 ميغاهيرتز) [الشكل 1 الرابع] على الجلد (طولية مع زاوية الجمجمة من 45-70 درجة) وتصور المثانة على الشاشة الموجات فوق الصوتية [الشكل 3 I]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت المثانة فارغة، وملء مع 50 ميكرولتر العقيمة، دافئة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) من خلال G angiocatheter عبر الاحليل 24. </li></ol> 5. الفصل بين طبقات جدار المثانة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق حقنة 1.0 مل مليئة برنامج تلفزيوني ومتصلة 30 G، ¾ في إبرة (شطبة الموجهة الأمامية) إلى المشبك حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الإبرة نحو الجلد فقط فوق عظم العانة في زاوية 30-45 درجة (80-90 درجة بالنسبة إلى المحور الطولي للscanhead الموجات فوق الصوتية [الشكل 1]). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف عن إبرةعلى الشاشة الموجات فوق الصوتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خرم ببطء الجلد وعضلات جدار البطن [الشكل 3 II]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل شطبة من الإبرة 180 درجة (توجه الآن الخلف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج غيض من الإبرة في جدار المثانة دون اختراق الغشاء المخاطي [الشكل 3 III] </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني بين طبقة العضلات والغشاء المخاطي من أجل خلق مساحة اصطناعية [الشكل 3 رابعا]. ملاحظة: إذا تم ثقب الغشاء المخاطي عن طريق الخطأ أثناء الخطوة 5.6، وسحب ببطء مرة أخرى الإبرة وحقن 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني بعد أن انقلبت الطبقة المخاطية إلى أكثر من طرف الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الإبرة. </li></ol> 6. جماعية تلقيح خلايا سرطان المثانة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الثاني 1.0 مل حقنة (مليئة الخلايا السرطانية معلقة في Matrigel) مع 30 G، ¾ في الإبرة إلى حقنة المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه رأس الإبرة إلى نفسالفضاء PBS مليئة الذي تم إنشاؤه في الخطوة 5.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 40 ميكرولتر من تعليق خلية في هذا الفضاء [3 أرقام الخامس والسادس]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الإبرة. </li></ol> 7. الرعاية الداعمة آخر التدخلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب الماوس من منصة التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الحيوانات في بيئة دافئة ومريحة تحت المراقبة المستمرة بينما يتعافى من تأثير المخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن إستعاد وعيه واستئناف التمشي العادي، وضع الحيوان مرة أخرى في قفص وطنه. </li></ol>

<ol>
	<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+orthotopic+models+for+bladder+cancer+research.">Mouse orthotopic models for bladder cancer research.</a> BJU Int. 104, 1286-1291 (2009).</li><li>Kubota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+models+of+human+cancer+xenografted+in+the+nude+mouse:+the+importance+of+orthotopic+transplantation.">Metastatic models of human cancer xenografted in the nude mouse: the importance of orthotopic transplantation.</a> J. Cell. Biochem. 56, 4-8 (1994).</li><li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU Int. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Kang, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Bladder+Tumor+Model+and+the+Evaluation+of+Intravesical+saRNA+Treatment.">An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment.</a> J. Vis. Exp. (65), (2012).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder+Cancer.">An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer.</a> J. Vis. Exp. (48), (2011).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Bladder+Wall+Injection.">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), (2011).</li><li>Xiao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+novel+transplantable+orthotopic+rat+bladder+transitional+cell+tumour+model.">Characterization of a novel transplantable orthotopic rat bladder transitional cell tumour model.</a> Br. J. Cancer. 81, 638-646 (1999).</li><li>Iinuma, S., Bachor, R., Flotte, T., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+phototoxicity+of+5-aminolevulinic+acid-induced+PpIX+in+an+orthotopic+rat+bladder+tumor+model.">Biodistribution and phototoxicity of 5-aminolevulinic acid-induced PpIX in an orthotopic rat bladder tumor model.</a> J. Urol. 153, 802-806 (1995).</li><li>J&#228;ger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hiding+in+plain+view:+Genetic+profiling+reveals+decades+old+cross-contamination+of+bladder+cancer+cell+line+KU7+with+HeLa.">Hiding in plain view: Genetic profiling reveals decades old cross-contamination of bladder cancer cell line KU7 with HeLa.</a> J. Urol. (13), (2013).</li><li>Horiguchi, Y., Larchian, W. A., Kaplinsky, R., Fair, W. R., Heston, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+liposome-mediated+interleukin-2+gene+therapy+in+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene therapy in orthotopic murine bladder cancer model.</a> Gene Ther. 7, 844-851 (2000).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Black, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+bladder+cancer+xenograft+bioluminescence+with+magnetic+resonance+imaging:+the+significance+of+hypoxia+and+necrosis.">Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis.</a> BJU Int. 106, 1799-1804 (2010).</li></ol>

ويرعى الوصول المفتوح لهذه المادة عن الفيديو FUJIFILM VisualSonics، وشركة

وسوف تقدم كبير تقريبا كل في علاج السرطان تتطلب إجراء تجارب على نماذج حيوانية قبل بدء التجارب السريرية. النماذج الحيوانية من السرطان هي الأدوات الأساسية التي تمكن الباحثين لدراسة البيولوجيا الورم في الجسم الحي. تبقى نماذج طعم أجنبي مثلي الذهب القياسية 1،2 والاستمرار في تقديم أكثر مرونة (من حيث اختيار من خطوط الخلايا) ولها فائدة الأكثر عملية. الإجراء هو موضح هو تعديل الحد الأدنى الغازية من طراز مثلي وصفها من قبل ذ îè آخرون 12 أنشأنا الأورام طعم أجنبي بواسطة الموجات فوق الصوتية الموجهة حقن عن طريق الجلد من ثلاثة خطوط مختلفة من الخلايا مع معدل نجاح 100٪ من التقنية. خلال المتابعة المستمرة، أظهرت 98٪ من الفئران الزيادة المستمرة في حجم الورم. قبل تنفيذ تقنية الحد الأدنى الغازية كنا قادرين على معالجة أوجه القصور القائمة من طراز جماعية. إلى جانب respecting الرفق بالحيوان، والغزو خفضت من هذا الإجراء يسهم أيضا في استنساخ التجارب المجراة من خلال خفض عدد من المضاعفات الجراحية. فمن غاية الساعة فعالة لتجنب البطن البطن، والحاجة المرتبطة بها لإغلاق الجرح. كنا قادرين على خفض كبير في الوقت الداخلي للحيوان الواحد إلى 3.4 دقيقة (± 1.6). ومع ذلك، فإن الميزة الرئيسية لنهجنا الرواية دقتها. الموجات فوق الصوتية عالية الدقة يسمح لنا لتصور الفضاء التي أنشأتها حقن المياه المالحة تحت الغشاء المخاطي لجدار المثانة. هذه الخطوة الأولى يسهل حقن حقن الخلايا السرطانية في الخطوة الثانية، ويقلل من خطر تسرب الخلايا السرطانية. هذا يتناقض مع تقنية حقن جماعية بعد فتح البطن، حيث أنه من المستحيل أن تصور موضع إبرة وهناك دائما عنصر عدم اليقين بشأن عمق الدقيق للحقن. أيضا، ونحن بتلقيح الخلايا السرطانية بدقة في جدار المثانة الأمامي، growt الورميتم تجنب ساعة على الجدار الخلفي المثانة. بعد ذلك معدل حدوث مضاعفات الانسداد بسبب نمو الورم في القرب من فتحات الحالب نادرة للغاية. هذا التأثير المصاحب يسمح فترات النمو والعلاج لفترة أطول. القيد الرئيسي للورم التلقيح الموجهة بالأمواج فوق الصوتية هو الحاجة إلى معدات تقنية كافية. وبالتالي من المرجح أن يقتصر أداء هذا الإجراء إلى المراكز التي هي متخصصة في نماذج حيوانية من سرطان الإنسان. وهذا ينبغي تشجيع التعاون بين المجموعات البحثية خارج هذه المؤسسات والجماعات من ذوي الخبرة في مثل هذه النمذجة الحيوان الرواية. على الرغم من أن تعتمد على الألفة مع التصوير بالموجات فوق الصوتية وبعض البراعة اليدوية، وهذا النموذج من السهل تعلم بموجب تعليمات المختصة. الخطوة الرئيسية في هذا الإجراء هو إنشاء submucosally الفضائية الاصطناعية في جدار المثانة بمحلول ملحي. مرة واحدة يتم إنشاء هذا الفضاء دون انثقاب سو الطبقة المخاطية، إلا أنها تبقى مستقرة لعدة دقائق. توجيه الإبرة الثانية في هذا الفضاء من أجل تطعيم الخلايا السرطانية هي بسيطة نسبيا. المضاعفات الرئيسية خلال خلق مساحة تحت المخاطية هو ثقب الإبرة في التجويف المثانة. خلق مساحة تحت المخاطية، ومع ذلك، لا يزال ممكنا. الإبرة لابد من سحب ببطء في جدار المثانة وحقن المياه المالحة فقط عندما تقلب الطبقة المخاطية على رأس الإبرة. بعد هذه المناورة في الفضاء تحت المخاطية هي أقل استقرارا (لن المالحة الهرب إلى داخل التجويف المثانة 30-60 ثانية) وحقن الخلايا السرطانية لابد من تنفيذها بسرعة. يمكن أن يحدث تسرب الخلايا السرطانية في تجويف المثانة في هذه الحالات مع ثقب في الغشاء المخاطي. على الرغم من أن فقدان الخلايا السرطانية من الفضاء جماعية قد تؤدي إلى انخفاض حجم الورم خلال فترة المتابعة، ونحن لم يلحظ أي امتصاص الورم إينترفسكل. آخر ج المحتملةomplication هو تسرب الخلايا السرطانية إلى التجويف البريتوني من خلال قناة الحقن. لاحظنا داخل الصفاق نشر الخلايا السرطانية واحدة فقط في 50 الحيوانات، وهذا حدث في واحدة من أولى المحاولات لدينا. ونحن نعزو هذا لحقن حجم كبير جدا تعليق خلية الورم. وأيد هذا من حقيقة أن خفض حجم 50-40 ميكرولتر أدى إلى أبعد انسكاب داخل الصفاق. هذا التلقيح الغازية الحد الأدنى من الفئران طعم أجنبي مثلي سرطان المثانة يمثل التعديل مبتكرة من القائمة &quot;نموذج جماعية&quot;، يستفيد كل من المحقق والحيوانات على حد سواء. مزايا هذا النموذج تشجيع التكيف مع الأجهزة الأخرى مثل الكلى والبروستاتا والكبد من أجل إقامة الأورام طعم أجنبي مثلي بطريقة الحد الأدنى الغازية.

أبحاث السرطان تعتمد على النماذج الحيوانية من السرطان البشرية باستخدام خطوط الخلايا المشتقة من الأورام المريض من أجل تعميق فهمنا للبيولوجيا الورم. لفي الجسم الحي تحليل النمو في ظل استراتيجيات العلاج المختلفة لا تزال النماذج سرطان المثانة مثلي الفئران على المعيار المرجعي 1،2. على تلقيح خلايا سرطان المثانة في الفئران المناعة البشرية (نموذج طعم أجنبي) تعتمد على تقطير إينترفسكل (&quot;نموذج إينترفسكل&quot;) 3،4،5 أو الحقن المباشر في جدار المثانة (&quot;نموذج جماعية&quot;) 6،7. ويمكن أيضا أن يؤديها كل من التقنيات في الفئران 8،9. تقطير إينترفسكل الحث على تشكيل أورام على سطح الظهارة البولية في المثانة التي هي قابلة للتقطير ثم إينترفسكل اللاحقة من وكلاء العلاج الرواية. ومع ذلك، فإن عدد من خطوط الخلايا التي هي مكون للأورام موثوق عند تسليمها عن طريق هذا الأسلوب يقتصر علىد واحدة من تلك خطوط الخلايا، KU7، وقد تم مؤخرا أظهرت أن هيلا (4،10). تقطير إينترفسكل هو أيضا تستغرق وقتا طويلا نظرا لمرات يسكن اللازمة، وأنه في كثير من الأحيان يؤدي نمو الورم في العناصر المجاورة في المسالك البولية، بما في ذلك الإحليل والحالب والحوض الكلوي 11. علاوة على ذلك، تقطير إينترفسكل غالبا ما يؤدي إلى نمو الأورام في الطابق المثانة حيث يدخل الحالب المثانة، وهذا يمكن أن يسبب انسداد المسالك العلوية والفشل الكلوي ما يصاحب ذلك. يتم إنشاء xenografts سرطان المثانة الغازية الأولية التي هي مناسبة للعلاجات الجهازية عن طريق الحقن المباشر للخلايا الورم في جدار المثانة 12. على الرغم من أن العديد من خطوط الخلايا تنمو بشكل كاف في هذا النموذج، محدوديته هو الغازية من طراز تتعلق الحاجة إلى شق في البطن 13. نموذج يمثل تحديا أيضا للتعلم بسبب صعوبة التقنية لحقن الخلايا بدقة في الجدار العضليفي المثانة. وقد تم تطوير وسيلة جديدة لإنشاء مثلي الأولية الغازية xenografts سرطان المثانة لدى الفئران في قسمنا من أجل معالجة أوجه القصور القائمة من &quot;النموذج جماعية&quot;. كنا قادرين على تحسين والحقن الموجهة بالأمواج فوق الصوتية عن طريق الجلد من خلايا سرطان المثانة في الجدار الأمامي المثانة مما يؤدي إلى هذا الأسلوب رواية ليحل محل النموذج الغازية أنشئت بنجاح. وعلاوة على ذلك قمنا يحتمل تعزيز دقة واستنساخ &quot;النموذج جماعية&quot;.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate (2%)</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:64px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3008101</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:64px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3007103</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Matrigel</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">356234</td>
			<td style="width:64px;">Keep between 2-4&#8304;C</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:64px;">Baxter Corporation</td>
			<td style="width:64px;">402-069-02</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Trypsin (0.25%)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3004202</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Syringe (1ml)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">309659</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Hypodermic needle (30G; &#190; inch)</td>
			<td style="width:64px;">Kendall</td>
			<td align="right" style="width:64px;">830340</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Angiocatheter (24G)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">381112</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Vevo 770 small animal imaging platform</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">RMV 706 ultrasound scanhead</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">IVIS Lumina III</td>
			<td style="width:64px;">&#160;Caliper Life Science</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts

مثلي xenografts سرطان المثانة هي المعيار الذهبي لدراسة التلاعب الخلوية الجزيئية وكلاء علاجية جديدة في الجسم الحي. يتم تلقيح خطوط الخلايا مناسبة إما عن طريق تقطير إينترفسكل (نموذج النمو الغازية nonmuscle) أو حقن جماعية في جدار المثانة (نموذج النمو الغازية). كلا إجراءات معقدة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. بالإضافة إلى ذلك، فإن النموذج سطحية لديه عيوبه نظرا لعدم وجود خطوط الخلايا التي هي مكون للأورام تقطير التالي. حقن جماعية، من ناحية أخرى، شابها الغازية الإجراء والمراضة المصاحبة للفأر المضيف. مع هذه العيوب في الاعتبار، ونحن تعديل الأساليب السابقة لوضع نهج مينيملي لخلق مثلي xenografts سرطان المثانة. باستخدام توجيه الموجات فوق الصوتية التي انجزنا بنجاح التلقيح عن طريق الجلد من خطوط الخلايا السرطانية المثانة UM-UC1، UM-UC3 وUM-UC13 في 50 athymic عارية. كنا قادرين على إثبات أن هذا النهج هو الوقت فعالة ودقيقة وآمنة. مع هذه التقنية، يتم إنشاء مساحة في البداية تحت الغشاء المخاطي المثانة مع برنامج تلفزيوني، ثم يتم حقن الخلايا السرطانية في هذه المساحة في الخطوة الثانية. ويتم رصد نمو الورم في فترات منتظمة مع التصوير تلألؤ بيولوجي والموجات فوق الصوتية. ارتفع متوسط ​​أحجام الورم بشكل مطرد في في كل واحد ولكن لدينا 50 الفئران خلال فترة الدراسة. في مؤسستنا، وهذا النهج الجديد، والذي يسمح طعم أجنبي سرطان المثانة التلقيح بطريقة الحد الأدنى الغازية وسريعة ودقيقة للغاية، قد حلت محل النموذج التقليدي.

<html> تم إجراء حقن جماعية من ثلاثة خطوط الخلايا السرطانية مختلفة (UM-UC1 لوك، UM-UC3 لوك وUM-UC13 لوك) في 50 الحيوانات تحت التوجيه بالموجات فوق الصوتية على ثلاثة أيام متتالية. تم إجراء التلقيح بكفاءة (يعني الساعة 5.7 دقيقة / الحيوان) ولم يترافق مع أي مضاعفات داخل أو بعد التدخلية. تم إجراء رصد نمو الورم عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية وتلألؤ بيولوجي. في يوم # 3 يمكن أن يتم الكشف عن وجود ورم بواسطة الموجات فوق الصوتية في المثانة الأمامي من جميع الحيوانات 50 [الشكل 4 I]. وأظهرت 98٪ من الفئران نمو الورم مستمر خلال فترة المتابعة [أرقام 4 و 5]. بعد تلقيح UM-UC3 لوك، وضعت الماوس واحد نشر الورم داخل الصفاق والورم ملتف بعد يوم # 7 في الحيوان الثاني [المائدة 1]. وكان هذا أول مجموعة من الفئران الملقحة مع هذه التقنية الجديدة. الإقليم الشمالي &quot;&gt; تم التضحية الفئران في اليوم رقم 24، رقم 28، ورقم 37 بعد التلقيح من UM-UC3 لوك، UM-UC1 لوك وUM-UC13 لوك، على التوالي. كانت تحصد أورام طعم أجنبي ودرست على الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E و) أقسام. جميع أورام العضلات الغازية وبعض تسللوا الى الدهون حول المثانة، ولكن لم يلاحظ أي غزو إلى الأعضاء المجاورة [الشكل 6 I] 60٪ من الفئران الحاملة الأورام لوك UM-UC13 و 20٪ من الفئران الحاملة UM-UC3 لوك الأورام خلف الصفاق وضعت الانبثاث العقدة الليمفاوية والتي تم تأكيدها من قبل H &amp; E تلطيخ [الشكل 6 II]. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1.jpg" /> الشكل 1. صورة توضيحية والتخطيطي من الإعداد التجريبية. هي التي شنت على الماوس على الطاولة العملية ساخنة (I) والذي عقد تحت التخدير (&lt;قوية&gt; II) مع 3٪ خليط isoflurane و/ الأوكسجين. يتم إصلاح الأطراف السفلية مع الشريط المطاطي (III). بعد الاقتراب من scanhead الموجات فوق الصوتية (الرابع) على الجلد (محاذاة طولية مع زاوية الجمجمة من 45-70 درجة) وتصور المثانة (V) ​​على الشاشة الموجات فوق الصوتية. ويسترشد المحاقن مع إبرة G 30 (VI) على الجلد في زاوية من 30-45 درجة (80-90 درجة بالنسبة إلى المحور الطولي للscanhead الموجات فوق الصوتية). <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2.jpg" /> الشكل 2. الشلل في المثانة. الأبعاد والتوضيح لبناء حزام استقرار المثانة (I) ويرد حزام إلى أسفل البطن ويشل المثانة (II). وبالتالي التهرب من<html> يتم تجنب المثانة خلال حقن جماعية. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3.jpg" /> الرقم 3. التلقيح جماعية من الخلايا السرطانية. التصور من المثانة على الشاشة الموجات فوق الصوتية (I). ثقب في الجلد وعضلات جدار البطن (II). إبرة الإدراج في جدار المثانة دون اختراق الغشاء المخاطي (III). برنامج تلفزيوني (50 ميكرولتر) بين طبقة العضلات والغشاء المخاطي بعد الحقن البطيء (IV). الخلايا السرطانية معلقة في Matrigel في جماعية مصطنع الفضاء (الخامس والسادس). 1123fig4.jpg &quot;/&gt; الشكل 4. . المتابعة بواسطة الموجات فوق الصوتية المستمر المتابعة بواسطة الموجات فوق الصوتية أظهرت زيادة كبيرة في حجم الورم (الأول: يوم # 3، والثاني: يوم # 7، الثالث: اليوم رقم 13). <img alt="الرقم 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5.jpg" /> الرقم 5. المتابعة من قبل تلألؤ بيولوجي. المستمر متابعة تلألؤ بيولوجي أظهرت الزيادة المستمرة في التألق خلال فترة الدراسة. <img alt="الرقم 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6.jpg" /> الرقم 6. الأنسجة الورم طعم أجنبي والعقدة الليمفاوية ثانوي لورم خبيث. جملة وتفصيلا H &amp; E قسم من طعم أجنبي ممثل تو<html> مور يدل النمو الغازية في العضلات دون الغزو إلى الأجهزة المجاورة (I). 60٪ من الفئران الحاملة الأورام لوك UM-UC13 و 20٪ من الفئران الحاملة UM-UC3 الأورام لوك عرضت الانبثاث العقدة الليمفاوية خلف الصفاق (II). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="320" style=";text-align:right;direction:rtl"><colgroup><col span="5" /></colgroup><tbody><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> خط الخلية الملقحة </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> UM-UC1 لوك </td><td style="width:64px;"> UM-UC3 لوك </td><td style="width:64px;"> لوك UM-UC13 </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> عدد من الفئران </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 20 </td><td style="width:64px;"> 15 </td><td style="width:64px;"> 15 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> حجم حقن، ميكرولتر </td>idth: 64px؛ &quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> 40 </td><td style="width:64px;"> 50 </td><td style="width:64px;"> 50 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> عدد خلايا، مطلقة </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.6 × 10 5 </td><td style="width:64px;"> 6 × 10 5 </td><td style="width:64px;"> 5.5 × 10 5 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> الوقت لكل حيوان، دقيقة </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.4 (± 1.6) </td><td style="width:64px;"> 7.7 (± 3.7) </td><td style="width:64px;"> 6.8 (± 2.9) </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> حدوث الأورام </td><td style="width:64px;"></td><td colspan="3" style="width:192px;"> 49 (98٪) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"></td><td style="width:64px;"&gt; </td><td style="width:64px;"> 20 (100٪) </td><td style="width:64px;"> 14 (93٪) </td><td style="width:64px;"> 15 (100٪) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> العقدة الليمفاوية ثانوي لورم خبيث </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 0 </td><td style="width:64px;"> 3 (20٪) </td><td style="width:64px;"> 9 (60٪) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> متابعة (أيام) </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 28 </td><td style="width:64px;"> 22 [قبل العلاج] </td><td style="width:64px;"> 28 [قبل العلاج] </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> حجم الورم (ميكرولتر) </td><td style="width:64px;"> اليوم 4 </td><td style="width:64px;"> 11.6 (± 1.3) </td><td style="width:64px;"> 12.5 (± 1.7) </td><td style="width:64px;"> 14.4 (± 1.3) </td></tr><tr height="20"><td height="61" rowتمتد = &quot;2&quot; على غرار = &quot;الارتفاع: 61px؛ العرض: 64px؛&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> نهاية </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 394.6 (72.4 ±) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 288.7 (66.1 ±) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 78.3 (± 13.4) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> المتابعة </td></tr><tr height="56"><td height="100" rowspan="2" style="height:100px;width:64px;"> الورم التلألؤ (الفوتونات / ثانية) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> اليوم 4 </td><td style="width:64px;"> 4.6 × 10 8 </td><td style="width:64px;"> 2.0 × 10 8 </td><td style="width:64px;"> 5.8 × 10 8 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> (± 9.4 × 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 3.7 × 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 1.3 × 10 8) </td></tr><tr height="23"><td height="67" rowspan="2"النمط = &quot;الارتفاع: 67px؛ العرض: 64px؛&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> نهاية </td><td style="width:64px;"> 1.9 × 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.4 × 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.5 × 10 10 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> المتابعة </td><td style="width:64px;"> (± 4.0 × 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 2.3 × 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 1.9 × 10 9) </td></tr></tbody></table> الجدول 1. حقن الخلايا السرطانية الموجات فوق الصوتية الموجهة - الإجراءات والنتائج.

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts at JoVE.com

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

تقنية أنشئت لتطعيم الغازية مثلي xenografts سرطان المثانة الأولية يتطلب فتح البطن وتعبئة المثانة. هذا الإجراء يلحق قسط كبير من المراضة على الفئران، هي صعبة وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. لذا قمنا بتطوير الدقة العالية، عن طريق الجلد باستخدام نهج توجيه الموجات فوق الصوتية.

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Primary Orthotopic Glioma Xenografts Recapitulate Infiltrative Growth and Isocitrate Dehydrogenase I Mutation

الأولية العظام جليوما Xenografts خلاصة النمو المتسلل و Isocitrate Dehydrogenase الأول طفرة

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

المناظير مستعرض الأورطي انقباض في الفئران

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

An Anatomical Study of Nerves at Risk During Minimally Invasive Hallux Valgus Surgery

دراسة تشريحية للأعصاب المعرضة للخطر أثناء جراحة مينيملي إبهام Valgus

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

الملاحة الكهرومغناطيسية توطين العقيدات عبر الصدر لجراحة الصدر طفيفة التوغل

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

نموذج الفئران قبل السريرية لدراسة نقص التروية-ضخ الاصابه في جراحه المجهرية الترميمية

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

تقييم التوافق خط أخذ عينات Capnography والدقة عند استخدامها مع مراقبة كابنوغرافيا المحمولة

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...