Name: minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts
Uploaded: 2014-02-11T18:00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts at JoVE.com

המחברים רוצים להכיר אליאנה Beraldi לביצוע התמרה ויראלית של שורות תאים סרטניים ובן Deeley להוראתו על שימוש בפלטפורמת ההדמיה אולטרסאונד בעלי החיים הקטנה. פרויקט זה נתמך על ידי מערכת הגרמנית הקרן (DFG; JA 2117/1-1: 1), האגודה למלחמה בסרטן הקנדית מכון המחקר ופרס מדען רופא המורה רוחני מונקובר חוף בריאות מכון מחקר. פלטפורמת ההדמיה אולטרסאונד מומנה על ידי הקרן הקנדית עבור חדשנות.

נהלי כל החיה המבוצעים על פי ההנחיות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים (CCAC). הפרוטוקול אושר על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת קולומביה הבריטית (מספר פרוטוקול: A10-0192). 1. הכנה של שורות תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר את זהותו של שורות תאי סרטן שלפוחית ​​השתן אנושית המתאימות על ידי טביעת אצבע DNA 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח צמיחה של גידולי xenograft ידי פליטת אור, transfect שורות תאים עם מבנה lentiviral נושא את גן גחלילית בלוציפראז 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו ולהרחיב את הקווים הקיימים של תאים במדיום של הנשר שונה Dulbecco (DMEM) עם 10% בסרום שור העובר (FBS) על 37 מעלות צלזיוס באווירת humidified 5% CO 2. מעבר התאים 3x לפחות פעמים, אך להימנע תרבות עולה על 3 חודשים. </li></ol> 2. הכנת תרחיף תא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו Matrigel. שמור על הטמפרטורה מתחת4 מעלות צלזיוס, כדי למנוע צמיגות מוגברת של ג&#39;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize התאים בנקודת מפגש של 70% ולהשעות בתקשורת צמיחה נורמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את המספר הסלולרי עם hemocytometer או דלפק תא אוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין ההשעיה תא דקות 5 ב 200 x גרם. הסר את supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת הנפח המתאים של DMEM (10% FBS) וMatrigel (1:1) כדי להגיע לריכוז התא הרצוי שהוא תלוי בשורת התאים מנוצל וקינטיקה צמיחה רצויה (8-15 x 10 6 / מיליליטר). הנפח המוזרק של השעיה תא הסרטני יהיה 40 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים היטב על ידי pipetting למעלה ולמטה (P1000), להימנע מיצירת בועות אוויר בהשעיה. </li></ol> 3. הכנת בעלי חיים שים לב: בשל צורך הפוטנציאל לצנתור דרך שופכה בשלב 4.7, נקבות עכברים הם המין המועדף במודל חיה זו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי בית לפי gu המוסדי וטיפול בבעלי חיים לאומיidelines. לקבל את אישור ועדת אתיקה לכל הניסויים מעורבים עכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים עם 3% תערובת isoflurane / חמצן. לאשר הרדמה תקינה של בעלי חיים (למשל חוסר תגובה לצובט הבוהן). </li></ol> 4. ניסיוני התקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את ייצוב שלפוחית ​​מכל סוג של חומר פלסטי קשיח שטוח [איור 2]. בזהירות לבדוק את הרצועה ולהסיר את כל קצוות חדים לפני הבקשה לעכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר את בעלי החיים על שולחן ההדמיה המחומם [איור אני 1] של פלטפורמת ההדמיה חיה הקטנה עם ניטור רציף של סימנים חיוניים. תקן את הגפיים התחתונים עם גומייה [איור 1 ג]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את הבטן עם 2% כלורהקסידין גלוקונאט ולנגב את העור עם קצה צמר גפן סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את שלפוחית ​​השתן עם רצועת ייצוב שלפוחית ​​[איור 2 ב &#39;]. לפיכך, התחמקותשל שלפוחית ​​השתן במהלך הזרקת ביצוע עצמית בשלב 5.6 יהיה להימנע מכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ג&#39;ל אולטרסאונד סטריליים לבטן התחתונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט מתקרב לscanhead אולטרסאונד (תדר 40 MHz) [איור 1 IV] לעור (אורכי עם זווית גולגולת של 45-70 °) ולדמיין את השלפוחית ​​על מסך אולטרסאונד [איור 3]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם השלפוחית ​​ריקה, למלא אותו עם 50 μl תמיסת מלח סטרילית, חמה שנאגרו פוספט (PBS) דרך angiocatheter G שופכת 24. </li></ol> 5. הפרדה של שלפוחית ​​השתן וול שכבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מזרק 1.0 מיליליטר מלא PBS ומחובר ל30 G, ¾ במחט (פוע מופנה anteriorly) למהדק המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את המחט לכיוון העור בדיוק מעל עצם הערווה בזווית 30-45 מעלות (80-90 ° ביחס לציר האורך של scanhead אולטרסאונד [איור 1]). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות את המחטעל מסך אולטרסאונד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לנקב את העור ואת שרירי דופן בטן [איור 3 ב &#39;]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את השיפוע של ° המחט 180 (כיום מופנה בדיעבד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה המחט לתוך קיר שלפוחית ​​השתן בלי לחדור לרירית [איור 3 ג] </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק 50 μl של PBS בין השכבה הרירית והרירית על מנת ליצור מרחב מלאכותי [איור 3 IV]. הערה: אם הרירית מחוררת בטעות במהלך שלב 5.6, לאט למשוך חזרה את המחט ולהזריק 50 μl של PBS לאחר השכבה הרירית שהתהפכה לאחור על קצה המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלוף את המחט. </li></ol> 6. ביצוע עצמי הרכבה של תאי סרטן שלפוחית ​​השתן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מזרק שני 1.0 מיליליטר (מלאים בתאי הסרטן התלויים בMatrigel) עם 30 G, ¾ במחט למהדק המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להנחות את קצה המחט לאותוחלל PBS המלא שיצר בשלב 5.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 40 μl של ההשעיה התא לתוך החלל הזה [איורים 3 V ו-VI]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלוף את המחט. </li></ol> 7. טיפול תומך שלאחר התערבותית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבטל את טעינת העכבר מפלטפורמת ההדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על בעלי החיים בסביבה חמימה ונוחה תחת מעקב רציף בזמן שהתאושש מההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהשיב את התודעה וחידוש ניידות רגילה, למקם את בעלי החיים בחזרה בכלוב בבית שלה. </li></ol>

<ol>
	<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+orthotopic+models+for+bladder+cancer+research.">Mouse orthotopic models for bladder cancer research.</a> BJU Int. 104, 1286-1291 (2009).</li><li>Kubota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+models+of+human+cancer+xenografted+in+the+nude+mouse:+the+importance+of+orthotopic+transplantation.">Metastatic models of human cancer xenografted in the nude mouse: the importance of orthotopic transplantation.</a> J. Cell. Biochem. 56, 4-8 (1994).</li><li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU Int. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Kang, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Bladder+Tumor+Model+and+the+Evaluation+of+Intravesical+saRNA+Treatment.">An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment.</a> J. Vis. Exp. (65), (2012).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder+Cancer.">An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer.</a> J. Vis. Exp. (48), (2011).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Bladder+Wall+Injection.">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), (2011).</li><li>Xiao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+novel+transplantable+orthotopic+rat+bladder+transitional+cell+tumour+model.">Characterization of a novel transplantable orthotopic rat bladder transitional cell tumour model.</a> Br. J. Cancer. 81, 638-646 (1999).</li><li>Iinuma, S., Bachor, R., Flotte, T., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+phototoxicity+of+5-aminolevulinic+acid-induced+PpIX+in+an+orthotopic+rat+bladder+tumor+model.">Biodistribution and phototoxicity of 5-aminolevulinic acid-induced PpIX in an orthotopic rat bladder tumor model.</a> J. Urol. 153, 802-806 (1995).</li><li>J&#228;ger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hiding+in+plain+view:+Genetic+profiling+reveals+decades+old+cross-contamination+of+bladder+cancer+cell+line+KU7+with+HeLa.">Hiding in plain view: Genetic profiling reveals decades old cross-contamination of bladder cancer cell line KU7 with HeLa.</a> J. Urol. (13), (2013).</li><li>Horiguchi, Y., Larchian, W. A., Kaplinsky, R., Fair, W. R., Heston, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+liposome-mediated+interleukin-2+gene+therapy+in+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene therapy in orthotopic murine bladder cancer model.</a> Gene Ther. 7, 844-851 (2000).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Black, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+bladder+cancer+xenograft+bioluminescence+with+magnetic+resonance+imaging:+the+significance+of+hypoxia+and+necrosis.">Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis.</a> BJU Int. 106, 1799-1804 (2010).</li></ol>

הגישה פתוחה למאמר וידאו זה היא בחסות FUJIFILM VisualSonics, Inc

כמעט כל התקדמות גדולה בטיפול בסרטן תדרוש בדיקות במודלים של בעלי חיים לפני ביצוע ניסויים קליניים. מודלים של בעלי החיים של הסרטן הם כלים חיוניים המאפשרים לחוקרים ללמוד ביולוגיה גידול in vivo. המודלים xenograft Orthotopic יישארו הזהב סטנדרטי 1,2 וימשיכו להציע את הגמישות ביותר (במונחים של בחירה של שורות תאים) ויש להם את הכלי הכי הפרקטי. ההליך המאויר הוא שינוי פולשנית של מודל orthotopic תואר בעבר על ידי Dinney et al. 12 הקמנו גידולי xenograft בזריקה מלעורית אולטרסאונד המודרך של שלוש שורות תאים שונות עם שיעור הצלחה טכני של 100%. במהלך תקופת המעקב רציף, 98% מעכברים הראו עלייה מתמדת בנפח גידול. על ידי ביצוע טכניקה מינימאלית פולשנית היינו יכול לטפל במגבלות קיימות של מודל החומות. חוץ מrespecting רווחת בעלי חיים, הפולשנות מופחתת של הליך זה גם תורמת לשחזור של ניסויי in vivo על ידי הפחתת מספר הסיבוכים ניתוחיים. זה מאוד זמן יעיל, כדי למנוע laparotomy בטן וצורך הקשורים לסגירת פצעים. היינו יכול להקטין באופן משמעותי את זמן הליך לכל בעל חיים ל3.4 דקות (± 1.6). עם זאת, היתרון העיקרי של הגישה החדשנית שלנו הוא הדיוק שלה. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה מאפשר לנו לדמיין את החלל שנוצר על ידי הזרקה מי מלח מתחת לרירית של דופן השלפוחית. הזרקת הצעד ראשונה זה מקלה על הזרקת תאים סרטניים בשלב שני וממזערת את הסיכון של דליפה של תאים הסרטניים. זאת בניגוד לטכניקה של הזרקת ביצוע עצמית לאחר פיום בטן, שבו אי אפשר לדמיין מיקום מחט ותמיד יש אלמנט של חוסר ודאות לגבי עומק ההזרקה המדויק. כמו כן,, growt גידול כפי שאנו inoculating תאים סרטניים אך ורק לדופן השלפוחית ​​הקדמישעות על קיר שלפוחית ​​השתן האחורי הוא התחמק. כתוצאה מכך שיעור סיבוכים חסימתית בשל צמיחת גידול בקרבה של הפתחים בשופכן הוא נדיר ביותר. אפקט נלווה זה מאפשר תקופות גידול וטיפול ארוכות יותר. המגבלה העיקרית של חיסון גידול אולטרסאונד מונחה היא הצורך בציוד טכני מתאים. לכן הביצועים של הליך זה צפוי להיות מוגבל למרכזים המתמחים במודלים של בעלי חיים של סרטן אנושי. זה צריך לעודד שיתופי פעולה בין קבוצות מחקר מחוץ למוסדות אלה והקבוצות עם התמחות בדוגמנות בעלי חיים רומן כזה. אמנם תלוי בהיכרות עם ההדמיה אולטרסאונד וחלק מיומנות ידנית, מודל זה הוא קל ללמוד תחת הדרכה מוסמכת. צעד מפתח בתהליך הוא היצירה של submucosally מרחב מלאכותי בדופן השלפוחית ​​עם מי מלח. ברגע שהמרחב הזה נוצר בלי o הניקובf השכבה הרירית, הוא נשאר יציב במשך כמה דקות. הדרכתו של המחט השנייה לתוך המרחב הזה כדי לחסן את התאים הסרטניים היא יחסית פשוטה. הסיבוך העיקרי ביצירתו של מרחב Submucosal הוא ניקוב של המחט לתוך לומן שלפוחית ​​השתן. יצירת מרחב Submucosal, לעומת זאת, נשארת ריאלי. המחט צריכה להיות נסוגה לאט אל תוך קיר שלפוחית ​​השתן והמלוח מוזרק רק כאשר השכבה הרירית מתהפכת קצה המחט. לאחר תרגיל זה השטח Submucosal הוא פחות יציב (מלוח יברח ללומן השלפוחית ​​בתוך 30-60 שניות) וההזרקה של תאי גידול צריכה להתבצע במהירות. דליפה של תאים סרטניים לתוך לומן שלפוחית ​​השתן יכולה להתרחש במקרים אלה עם ניקוב של הרירית. למרות האובדן של תאים סרטניים ממקום ביצוע העצמי עלול להוביל לירידה בגידול במהלך מעקב נפח, יש לנו מעולם לא נצפה כל ספיגת גידול שלפוחית. אחר ג הפוטנציאליomplication היא דליפה של תאים סרטניים לחלל הצפק דרך ערוץ ההזרקה. אנו נצפו רק אחד הפצת תאים הסרטני intraperitoneal ב50 בעלי חיים, וזה קרה באחד מהניסיונות הראשונים שלנו. אנו מייחסים את זה לזריקה של גדול מדי תאים סרטניים השעיה נפח. זה נתמך על ידי העובדה שהקטנת הנפח 50-40 μl לא גרמה לדליפת intraperitoneal נוספת. חיסון פולשנית זו של xenograft סרטן שלפוחית ​​השתן orthotopic העכברית מייצג שינוי חדשני של &quot;מודל ביצוע העצמי&quot; הקיים, benefitting גם החוקר ובעלי החיים באותה מידה. היתרונות של מודל זה מעודדים את ההסתגלות שלה לאיברים אחרים כגון כליות, ערמונית וכבד על מנת לבסס גידולי xenograft orthotopic באופן מינימאלי פולשנית.

מחקר הסרטן תלוי במודלים של בעלי חיים של סרטן אנושי באמצעות שורות תאים שמקורם בגידולי מטופל על מנת להעמיק את ההבנה של ביולוגיה של גידול שלנו. לin vivo ניתוח צמיחה באסטרטגיות שונות לטיפול בסרטן שלפוחית ​​השתן מודלים העכברי orthotopic יישארו סטנדרטי 1,2 ההתייחסות. החיסון של תאי סרטן שלפוחית ​​השתן אנושיים בעכברי מדוכאי חיסון (מודל xenograft) מסתמך על החדרת שלפוחית ​​(&quot;מודל שלפוחית&quot;) 3,4,5 או הזרקה ישירה לתוך קיר שלפוחית ​​השתן (&quot;מודל בין חומות&quot;) 6,7. יכולות גם להתבצע בשתי טכניקות בחולדות 8,9. החדרת שלפוחית ​​גורמת להיווצרות של גידולים על פני urothelial של שלפוחית ​​השתן אשר לאחר מכן ניתנים להחדרת שלפוחית ​​הבאה של סוכני טיפול חדשניים. עם זאת, מספר שורות תאים אשר באופן מהימן tumorigenic כאשר מועברים באמצעות שיטה זו מוגבלד אחד של שורות תאים אלה, KU7, לאחרונה הוכח להיות הלה 4,10. החדרת שלפוחית ​​היא גם זמן רב בשל צורך להתעכב פעמים, וזה לעתים קרובות גורם לצמיחת גידולים באלמנטים הסמוכים של דרכי השתן, כולל שופכה, שופכן, ואגן הכליה 11. יתר על כן, החדרת שלפוחית ​​לעתים קרובות מובילה לצמיחה של גידול על רצפת השלפוחית ​​בי השופכנים להיכנס לשלפוחית ​​השתן, וזה יכול לגרום לחסימה בדרכי עליונה ואי ספיקת כליות במקביל. xenografts סרטן שלפוחית ​​השתן פולשנית העיקרית אשר מתאימות לטיפולים מערכתיים נוצרות על ידי הזרקה ישירה של תאי גידול לדופן שלפוחית ​​12. למרות ששורות תאים רבות לגדול כראוי במודל זה, הגבלתה היא הפולשנות של המודל הנוגע לצורך בחתך בבטן 13. המודל הוא גם מאתגר ללמוד בשל הקושי הטכני של הזרקת תאים בדיוק לקיר השרירשל שלפוחית ​​השתן. גישה חדשנית להקמת xenografts פולשנית העיקרית orthotopic סרטן שלפוחית ​​השתן בעכברים פותחה במחלקה שלנו על מנת לטפל בליקויים קיימים של &quot;המודל בין החומות&quot;. הצלחנו לייעל את ההזרקה של תאי סרטן שלפוחית ​​השתן מלעורית, אולטרסאונד מונחה לדופן השלפוחית ​​הקדמי וכתוצאה מכך טכניקה חדשנית זו כדי להחליף את המודל פולשנית הוקם בהצלחה. יתר על כן יש לנו פוטנציאל משופר הדיוק ושחזור של &quot;המודל בין החומות&quot;.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate (2%)</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:64px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3008101</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:64px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3007103</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Matrigel</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">356234</td>
			<td style="width:64px;">Keep between 2-4&#8304;C</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:64px;">Baxter Corporation</td>
			<td style="width:64px;">402-069-02</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Trypsin (0.25%)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3004202</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Syringe (1ml)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">309659</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Hypodermic needle (30G; &#190; inch)</td>
			<td style="width:64px;">Kendall</td>
			<td align="right" style="width:64px;">830340</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Angiocatheter (24G)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">381112</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Vevo 770 small animal imaging platform</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">RMV 706 ultrasound scanhead</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">IVIS Lumina III</td>
			<td style="width:64px;">&#160;Caliper Life Science</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts

xenografts סרטן שלפוחית ​​השתן Orthotopic הן סטנדרטי ללמוד מניפולציות מולקולריות תאיות וסוכנים טיפוליים חדשים בvivo זהב. שורות תאים מתאימות מחוסנות או על ידי החדרת שלפוחית ​​(מודל של צמיחה פולשנית nonmuscle) או הזרקת ביצוע עצמית לתוך קיר שלפוחית ​​השתן (מודל של צמיחה פולשנית). שני ההליכים מורכבים ומאוד זמן רב. בנוסף, יש לו את המודל השטחי חסרונותיו בשל החוסר של שורות תאים, כי הם החדרה הבאה tumorigenic. הזרקת ביצוע עצמי, ומצד שני, הוא נפגמה על ידי הפולשנות של ההליך והתחלואה הקשורים לעכבר המחשב המארח. עם החסרונות האלה בחשבון, שינינו שיטות קודמות לפתח גישה פולשנית ליצירת xenografts סרטן שלפוחית ​​השתן orthotopic. באמצעות הדרכת אולטרסאונד יש לנו לבצע חיסון מלעורית של שורות תאי סרטן שלפוחית ​​השתן UM-UC1, UM-UC3 וUM-בהצלחהUC13 ל50 עירום athymic. אנחנו כבר הצלחנו להוכיח כי גישה זו היא זמן יעיל, מדויק ובטוח. בעזרת טכניקה זו, תחילה נוצר מרחב מתחת לרירית שלפוחית ​​השתן עם PBS, ולאחר מכן תאים סרטניים מוזרקים לתוך החלל הזה בשלב שני. צמיחת גידול מנוטרת במרווחי זמן קבועים עם הדמיה פליטת אור ואולטרסאונד. כרכי הגידול הממוצע גדלו בהתמדה בכל אבל אחד 50 העכברים שלנו לאורך תקופת המחקר. במוסד שלנו, זו גישה חדשנית, המאפשרת חיסון xenograft סרטן שלפוחית ​​השתן באופן מינימאלי פולשנית, מהיר ומדויק ביותר, החליפה את המודל המסורתי.

<html> הזרקה עירונית של שלושה קווים שונים של תאי גידול (לוק UM-UC1, לוק UM-UC3 ולוק UM-UC13) בוצעה ב50 חיות תחת אולטרסאונד הדרכה על שלושה ימים רצופים. החיסון בוצע ביעילות רבה (זמן ממוצע 5.7 דקות / בעלי חיים) ולא היה קשור לכל סיבוכי התוך או פוסט התערבותית. ניטור של גידול בוצע על ידי ההדמיה אולטרסאונד ופליטת אור. ביום # 3 גידול יכול להיות מזוהה על ידי אולטרסאונד בשלפוחית ​​הקדמית של כל 50 חיות [איור 4]. 98% מעכברים הראו את צמיחת גידול מתמדת במהלך תקופת המעקב [איורים 4 ו -5]. בעקבות החיסון של לוק UM-UC3, עכבר אחד פיתח הפצת גידול intraperitoneal והגידול involuted אחרי היום # 7 בבעלי חיים שני [טבלת 1]. זו הייתה הקבוצה הראשונה של עכברים מחוסן עם טכניקה חדשה זו. NT &quot;&gt; העכברים הוקרבו ביום # 24, # 28, ו# 37 לאחר החיסון של לוק UM-UC3, לוק UM-UC1 ולוק UM-UC13, בהתאמה. גידולי xenograft נקצרו ונבדקו על hematoxylin ו eosin (H &amp; E סעיפים). כל הגידולים היו שריר פולשני וכמה חדרו לשומן perivesical, אבל אין פלישה לאיברים סמוכים נצפתה [איור 6]. 60% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC13 ו20% מעכברי נושאי לוק UM-UC3 גידולים פיתחו גרורות לימפה צומת retroperitoneal אשר אושרו על ידי H &amp; E [איור 6 ב &#39;] מכתים. <img alt="איור 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1.jpg" /> איור 1. תמונה ואיור סכמטי של הגדרת הניסוי. העכבר הוא רכוב על שולחן הניתוח המחומם (אני) והחזיק תחת הרדמה (&lt;strong&gt; השני) עם 3% תערובת isoflurane / חמצן. הגפיים התחתונים קבועים עם גומייה (III). לאחר מתקרב scanhead אולטרסאונד (IV) לעור (יישור אורכי עם זווית גולגולת של 45-70 °) בשלפוחית ​​השתן (V) הוא מדמיין על מסך אולטרסאונד. מזרק עם מחט G 30 (VI) מונחה על העור בזווית של 30-45 מעלות (80-90 ° ביחס לציר האורך של scanhead אולטרסאונד). <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2.jpg" /> איור 2. חוסר תנועה של שלפוחית ​​השתן. ממדים והמחשה לבנות את רצועת ייצוב שלפוחית ​​השתן (אני) הרצועה מחוברת לבטן התחתונה ומשתקים את שלפוחית ​​השתן (השני). כך התחמקות<html> שלפוחית ​​השתן במהלך הזרקת ביצוע עצמית הוא נמנע. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3.jpg" /> איור 3. חיסון ביצוע עצמי של תאים סרטניים. ויזואליזציה של שלפוחית ​​השתן על מסך אולטרסאונד (אני). ניקוב של העור ושרירים דופן בטן (השני). החדרת מחט לדופן השלפוחית ​​ללא חדירה של הרירית (III). PBS (50 μl) בין השכבה הרירית והרירית לאחר הזרקה איטית (IV). תאים סרטניים התלויים בMatrigel בחלל שנוצר באופן מלאכותי העצמי (V, VI). 1123fig4.jpg &quot;/&gt; איור 4. . מעקב על ידי אולטרסאונד מעקב רציף על ידי אולטרסאונד הראה גידול משמעותי בנפח גידול (אני: יום # 3, השני: יום # 7, III: יום # 13). <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5.jpg" /> איור 5. מעקב על ידי פליטת אור. מעקב רציף על ידי פליטת אור הראה עלייה מתמדת בהארה לאורך תקופת המחקר. <img alt="איור 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6.jpg" /> איור 6. היסטולוגיה של גידול xenograft וגרורות לימפה. בטוטו הסעיף H &amp; E של xenograft נציג tu<html> מור מפגין צמיחה חודרנית לתוך השריר ללא פלישה לאיברים סמוכים (אני). 60% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC13 ו20% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC3 גרורות הציגו retroperitoneal בלוטות לימפה (השנייה). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="320" style=";text-align:right;direction:rtl"><colgroup><col span="5" /></colgroup><tbody><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> שורת תאים מחוסנת </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> לוק UM-UC1 </td><td style="width:64px;"> לוק UM-UC3 </td><td style="width:64px;"> לוק UM-UC13 </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> מספר העכברים </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 20 </td><td style="width:64px;"> 15 </td><td style="width:64px;"> 15 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> נפח מוזרק, μL </td>idth: 64px; &quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> 40 </td><td style="width:64px;"> 50 </td><td style="width:64px;"> 50 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> ספירת תאים, מוחלט </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.6 x 10 5 </td><td style="width:64px;"> 6 x 10 5 </td><td style="width:64px;"> 5.5 x 10 5 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> זמן לכל בעל חיים, דקות </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.4 (± 1.6) </td><td style="width:64px;"> 7.7 (± 3.7) </td><td style="width:64px;"> 6.8 (± 2.9) </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> שיעור מקרים של הסרטן </td><td style="width:64px;"></td><td colspan="3" style="width:192px;"> 49 (98%) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"></td><td style="width:64px;"&gt; </td><td style="width:64px;"> 20 (100%) </td><td style="width:64px;"> 14 (93%) </td><td style="width:64px;"> 15 (100%) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> גרורות בלוטות לימפה </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 0 </td><td style="width:64px;"> 3 (20%) </td><td style="width:64px;"> 9 (60%) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> מעקב (ימים) </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 28 </td><td style="width:64px;"> 22 [לפני הטיפול] </td><td style="width:64px;"> 28 [לפני הטיפול] </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> נפח גידול (μL) </td><td style="width:64px;"> יום 4 </td><td style="width:64px;"> 11.6 (± 1.3) </td><td style="width:64px;"> 12.5 (± 1.7) </td><td style="width:64px;"> 14.4 (± 1.3) </td></tr><tr height="20"><td height="61" row&quot;גובה: 61px; רוחב: 64px;&quot; תוחלת = &quot;2&quot; style =&gt; </td><td style="width:64px;"> סוף </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 394.6 (± 72.4) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 288.7 (± 66.1) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 78.3 (± 13.4) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> מעקב </td></tr><tr height="56"><td height="100" rowspan="2" style="height:100px;width:64px;"> הארה גידול (פוטונים / sec) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> יום 4 </td><td style="width:64px;"> 4.6 x 10 8 </td><td style="width:64px;"> 2.0 x 10 8 </td><td style="width:64px;"> 5.8 x 10 8 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> (± 9.4 x 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 3.7 x 10 7) </td><td style="width:64px;"> (± 1.3 x 10 8) </td></tr><tr height="23"><td height="67" rowspan="2"style = &quot;גובה: 67px; רוחב: 64px;&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> סוף </td><td style="width:64px;"> 1.9 x 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.4 x 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.5 x 10 10 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> מעקב </td><td style="width:64px;"> (± 4.0 x 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 2.3 x 10 9) </td><td style="width:64px;"> (± 1.9 x 10 9) </td></tr></tbody></table> טבלת 1. הזרקת תאים סרטניים מונחה אולטראסאונד - הליך ותוצאות.

Watch this Scientific Journal Video about Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts at JoVE.com

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית ​​השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית ​​השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Primary Orthotopic Glioma Xenografts Recapitulate Infiltrative Growth and Isocitrate Dehydrogenase I Mutation

גליומה אורתוטופית ראשונית קסנוגרפטים recapitulate צמיחה הסתננות איזוציטראט דהידרוגנאז אני מוטציה

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

An Anatomical Study of Nerves at Risk During Minimally Invasive Hallux Valgus Surgery

המחקר האנטומי של עצבים בסיכון במהלך הניתוח Valgus בוהן פולשנית

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

לוקליזציה של גושים טרנסתורציים לניווט אלקטרומגנטי לניתוחי חזה זעיר פולשניים

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

הערכה של תאימות ודיוק של קו דגימה קפונוגרפיה בעת שימוש עם צג קפונוגרפיה נייד

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית השתן xenografts