Name: humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature
Uploaded: 2014-04-01T15:45:00
Duration: 11 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر جميع أعضاء المختبر Dumenil، ولا سيما سيلك سيلفا لقراءة نقدية للمخطوطة. قسم الجراحة في مستشفى Hôpital EUROPEEN جورج بومبيدو-(HEGP)، والدكتور ديفيد Maladry. مايكل Hivelin والدكتور باتريك Bruneval، قسم علم الأمراض في HEGP. مرفق الحيوانية في PARCC، برئاسة إليزابيث HUC. وأيد هذا العمل من قبل وكالات منحة التالي: ماري كوري الزمالة منتدى الطاقة الدولي لا. 273223 (KM)، ATIP-أفينير منحة من INSERM، المعدات CODDIM منحة (إيل دو فرانس المنطقة)، FRM (مؤسسة بحوث صب لا MEDICALE) منحة المعدات، مختبر IBEID التميز الكونسورتيوم ANR (الوكالة الوطنية صب لا بحوث) منحة &quot; الخلل في والتدفق &quot;. كان الممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

<ol>
	<li>Davis, C. E., Arnold, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+meningococcal+endotoxin+in+Meningococcal+purpura.">Role of meningococcal endotoxin in Meningococcal purpura.</a> J. Exp. Med. 140, 159-171 (1974).</li><li>Mairey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microcirculation+shear+stress+levels+determine+Neisseria+meningitidis+attachment+sites+along+the+blood-brain+barrier.">Cerebral microcirculation shear stress levels determine Neisseria meningitidis attachment sites along the blood-brain barrier.</a> J. Exp. Med. 203, 1939-1950 (2006).</li><li>Brandtzaeg, P., van Deuren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+and+pathogenesis+of+meningococcal+infections.">Classification and pathogenesis of meningococcal infections.</a> Methods Mol. Biol. 799, 21-35 (2012).</li><li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+diagnosis+of+human+meningococcal+disease+using+immunohistochemical+and+PCR+assays.">Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122, 754-764 (2004).</li><li>Hill, W. R., Kinney, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cutaneous+lesions+in+acute+meningococcemia;+a+clinical+and+pathologic+study.">The cutaneous lesions in acute meningococcemia; a clinical and pathologic study.</a> J. Am. Med. Assoc. 134, 513-518 (1947).</li><li>Capecchi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+NadA+is+a+new+invasin+which+promotes+bacterial+adhesion+to+and+penetration+into+human+epithelial+cells.">Neisseria meningitidis NadA is a new invasin which promotes bacterial adhesion to and penetration into human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 55, 687-698 (2005).</li><li>Merz, A. J., Enns, C. A., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+pili+of+pathogenic+Neisseriae+elicit+cortical+plaque+formation+in+epithelial+cells.">Type IV pili of pathogenic Neisseriae elicit cortical plaque formation in epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 32, 1316-1332 (1999).</li><li>Morand, P. C., Tattevin, P., Eugene, E., Beretti, J. L., Nassif, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+property+of+the+type+IV+pilus-associated+component+PilC1+of+pathogenic+Neisseria+is+supported+by+the+conformational+structure+of+the+N-terminal+part+of+the+molecule.">The adhesive property of the type IV pilus-associated component PilC1 of pathogenic Neisseria is supported by the conformational structure of the N-terminal part of the molecule.</a> Mol. Microbiol. 40, 846-856 (2001).</li><li>Taha, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+induces+the+expression+of+the+TNF-alpha+gene+in+endothelial+cells.">Neisseria meningitidis induces the expression of the TNF-alpha gene in endothelial cells.</a> Cytokine. 12, 21-25 (2000).</li><li>Kirchner, M., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PilC+adhesin+of+the+Neisseria+type+IV+pilus-binding+specificities+and+new+insights+into+the+nature+of+the+host+cell+receptor.">The PilC adhesin of the Neisseria type IV pilus-binding specificities and new insights into the nature of the host cell receptor.</a> Mol. Microbiol. 56, 945-957 (2005).</li><li>Mikaty, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+bacterial+pathogen+induces+host+cell+surface+reorganization+to+resist+shear+stress.">Extracellular bacterial pathogen induces host cell surface reorganization to resist shear stress.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Kirchner, M., Heuer, D., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46-independent+binding+of+Neisserial+type+IV+pili+and+the+major+pilus+adhesin,+PilC,+to+human+epithelial+cells.">CD46-independent binding of Neisserial type IV pili and the major pilus adhesin, PilC, to human epithelial cells.</a> Infect. Immun. 73, 3072-3082 (2005).</li><li>Noinaj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+iron+piracy+by+pathogenic+Neisseria.">Structural basis for iron piracy by pathogenic Neisseria.</a> Nature. 483, 53-58 (2012).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors+for+transferrin+in+pathogenic+bacteria+are+specific+for+the+host's+protein.">Receptors for transferrin in pathogenic bacteria are specific for the host's protein.</a> Can. J. Microbiol. 36, 145-147 (1990).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 26, 75-82 (1999).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infect. Immun. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dumenil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathog. 9, (2013).</li><li>Murray, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell-mediated+destruction+of+allogeneic+dermal+microvessels+in+a+severe+combined+immunodeficient+mouse.">Human T-cell-mediated destruction of allogeneic dermal microvessels in a severe combined immunodeficient mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 9146-9150 (1994).</li><li>Nassif, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+of+pilin+regulates+adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+human+epithelial+cells.">Antigenic variation of pilin regulates adhesion of Neisseria meningitidis to human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 8, 719-725 (1993).</li><li>Geoffroy, M. C., Floquet, S., Metais, A., Nassif, X., Pelicic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+analysis+of+the+meningococcus+genome+by+gene+disruption:+resistance+to+complement-mediated+lysis.">Large-scale analysis of the meningococcus genome by gene disruption: resistance to complement-mediated lysis.</a> Genome Res. 13, 391-398 (2003).</li><li>Ho, M., Hickey, M. J., Murray, A. G., Andonegui, G., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+Plasmodium+falciparum-endothelium+interactions+in+human+microvasculature:+mimicry+of+leukocyte+recruitment.">Visualization of Plasmodium falciparum-endothelium interactions in human microvasculature: mimicry of leukocyte recruitment.</a> J. Exp. Med. 192, 1205-1211 (2000).</li></ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

النماذج الحيوانية هي ذات أهمية حاسمة لبحث المرضية البكتيرية. فمن المستحيل أن تحاكي تماما البيئة في الجسم الحي في خلية ثقافة وبات من الواضح أن التفاعل المضيف الممرض يتأثر العديد من العوامل الديناميكية. خصوصية الإنسان من بعض مسببات الأمراض الهامة سريريا، مثل N. السحائية، فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد C، المتصورة المنجلية، المستوحدة الليستيريا، والسالمونيلا التيفية ويقتصر استخدام في الجسم الحي نماذج لهذه الالتهابات. لكن، وكما أن نبدأ في فهم الخطوات التي تشارك المعدية في خصوصية، ويجري حاليا وضع نماذج أنسنة. بروتوكول الموصوفة هنا هو دليل على هذا مع الأخذ microvessels الإنسان في الفئران، مما يسمح للعدوى واسعة في الجسم الحي مع N. السحائية، مما أدى إلى تلف الأوعية الدموية وأحيانا تطور الطفح الجلدي الفرفري. باستخدام هذا النموذج،كنا قادرين على تحديد أن خصائص لاصقة من البرلمان الاتحادي الانتقالي يشاركون في الاستعمار الأوعية الدموية في الجسم الحي باستخدام المسوخ البكتيرية والتي يتم تقليل تلف الأوعية الدموية في غياب التصاق 18. سابقا، قد تورطت تعميم المنتجات البكتيرية في هذا الضرر ولكن تشير نتائجنا دورا حاسما للالتصاق المحلية والاستعمار الأوعية الدموية. هذا يفتح آفاقا جديدة لتطوير أهداف العلاج الرواية. إذا يمكن أن يكون قد تم حظره من التصاق البكتيريا المسببة للأمراض صيدلي يمكن أن ربما منع تطور آفات الجلد وتؤدي إلى نتائج أفضل للناجين من المكورات السحائية من حيث نخر الأنسجة، التنضير وبتر الأطراف. وقد أظهرت أعمال أيضا تعقيد العدوى وإشراك الاستجابة المناعية والتخثر تتالي. حددنا إشارات خلوى الإنسان في مصل الفئران المصابة على الرغم من كمية صغيرة نسبيا من البطانة الإنسان الحاضر 18.وأشارت هذه استجابة كبيرة خلوى، جنبا إلى جنب مع تسلل الفأر السكان الخلايا المناعية في المنطقة. يمكن أن النماذج الحيوانية بالطبع أبدا تكرار بالكامل الأمراض التي تصيب البشر وحصل كل النتائج منها يجب النظر مع هذا في الاعتبار. على سبيل المثال، في هذا النموذج الدم والخلايا المنتشرة هي من أصل الماوس ونحن لا نستبعد أنها قد تتصرف بشكل مختلف للخلايا البشرية. ميزة هذا ومع ذلك، كما هو موضح في منشور صدر مؤخرا لدينا 18، هو القدرة على التفريق إشارة تنشأ من البطانة الإنسان من أن من خلايا فأر المنتشرة. ان الخلفية المناعة من الفئران المستخدمة في هذا النموذج يسمح أيضا لنقل خيفي من السكان الخلايا المناعية البشرية، إضافة &#39;أنسنة&#39; جانب آخر. لكن الخلفية المناعة من الفئران قد تخفي دور للNK، T أو B الخلايا، التي تفتقر إلى كل أو خلل في هذا النموذج. والشور نسبيار زمني (24 ساعة) المستخدمة في هذا النموذج تتعلق أساسا استجابة فطرية، ولكن لالتهابات على المدى الطويل، ووضع حصانة الخيارات الأخرى قد تحتاج إلى من يكتشفها. الجلد هو موقع الإصابة المهم بالنسبة N. السحائية ولكن وجود كمية صغيرة نسبيا من السفن الإنسان يعني أيضا أن استقراء البيانات إلى العدوى النظامية التي تنطوي على العديد من الأجهزة أمر صعب. في حين أن هذا النموذج يسمح لدراسة التنمية الآفة الجلدية، ليست مدرجة الخطوات الهامة للعدوى المكورات السحائية مثل الظهارية والدم في الدماغ المعبر. هناك حاجة إلى مواصلة تطوير هذه النماذج أنسنة لمعالجة هذه الجوانب الأخرى من العدوى. ومع ذلك يقدم هذا النموذج إمكانات كبيرة للعديد من مسببات الأمراض المحددة الإنسان، لا سيما تلك التي تستهدف الأوعية الدموية.

الإنتان هو عدوى المكورات السحائية الدم ولد قاتلة في كثير من الأحيان الناجمة عن مسببات الأمراض البكتيرية التهاب السحايا النيسيري. مرضى الإنتان المكورات السحائية غالبا ما تكون موجودة مع طفح دموية صغيرة أو برفريا على الجلد الذي سبق المرتبطة تدمير الأوعية الدموية التي تسببها البكتيريا المنتشرة والمنتجات البكتيرية 1. خزعات الجلد من المرضى السريرية تظهر البكتيريا المرتبطة microvessels، وغالبا ما يملأ الأوعية 2. وبصرف النظر عن تسرب البكتيريا والجلطة واسعة النطاق، تجلط الدم، واحتقان الأوعية الدموية وينظر في المناطق الفرفري 3-5. هذا تلف الأوعية الدموية يمكن أن يؤدي إلى نخر واسعة من الجلد والأنسجة المحيطة بها، مما أدى إلى بتر التنضير وحتى في الناجين السحائية. فهم كيف يسبب عدوى هذا الضرر الأوعية الدموية مهم لتحسين استراتيجيات الوقاية والعلاج. وقد أجريت غالبية الأبحاث على الإنتان المكورات السحائية في المختبر علىخطوط الخلايا البشرية نظرا لخصوصية الإنسان من N. السحائية. وقد تم دراسة العديد من الجوانب العدوى في المختبر بما في ذلك التصاق البكتيريا، استجابة الخلية المضيفة، وكذلك استجابة خلوى 6-9. النوع الرابع الشعرة (TFP) قد تورطت كما عضية التصاق الرئيسية للN. السحائية على كل من الخلايا الظهارية والبطانية 10. وقد تبين أيضا أن التصاق N. السحائية إلى الخلايا المضيفة هو إجهاد القص تعتمد وبالتالي يعتقد أن لهما صلة معدلات تدفق الدم في الأوعية الدموية الدقيقة 11. هذا يشير إلى الضغوط الحيوية مواجهة البكتيريا في الجسم الحي تعتبر حاسمة بالنسبة لإمراض. غير أنه من الصعب جدا لنموذج المكروية من السفن الصغيرة في المختبر. مستقبلات الالتصاق لالنيسيري البرلمان الاتحادي الانتقالي لا يزال مجهولا، وبالتالي الضربة القاضية في الاستراتيجيات الرامية إلى تحقيق التصاق البكتيريا في نموذج حيواني لا يمكن تصور في هذا الوقت. واقترح أن تكون CD46 تم إنتاج مستقبلات TFP والحيوانات المعدلة وراثيا لتكون بمثابة نماذج الماوس. ومع ذلك، لا تؤدي العدوى في هذه الحيوانات للإصابة واسعة أو طفح 12،13 التنمية. النماذج الحيوانية الأخرى التي تم وصفها من الناحية تجرثم الدم من العدوى النيسرية تأخذ في الاعتبار تفضيل البكتيرية لترانسفيرين الإنسان كمصدر للحديد 14،15. إما المكمل ترانسفيرين الإنسان أو التعبير عن ذلك من نتائج التحوير في زيادة الحمولة الجرثومية في مجرى الدم على مدى فترة زمنية طويلة، ولكن هذا النموذج لا يظهر التصاق البكتيريا أو تطوير طفح 16،17. في هذا البروتوكول، ونحن تصف نموذج الفأر أنسنة التي يتم فيها زرع جلد الإنسان، بما في ذلك الأوعية الدموية الدقيقة الجلدي، على الفئران المناعة 18،19. هذه النتائج في الأوعية الإنسان وظيفية، مع perfused تداول الماوس. جنبا إلى جنب مع مكملات ترانسفيرين الإنسان، وهذا محسابات مركز Odel لاثنين على الأقل من جوانب محددة من الإنسان N. السحائية، أي البطانة الإنسان وترانسفيرين الإنسان، في بيئة الجسم الحي. N. قدم السحائية عن طريق الوريد في هذا النموذج الالتزام على وجه التحديد إلى البطانة الإنسان، مما ينتج عنه أمراض مشابهة لما ورد في المرضى السريرية، بما في ذلك الضرر الأوعية الدموية والتنمية طفح الفرفري 18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="693">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">DMEM</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">31885-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ketamine 500</td>
			<td style="width:161px;">Virbac France&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">LOT N&#176;VAL4243</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylazine</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Bayer Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">AMM N&#176; FR/8146715 2/1980</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">LOT N&#176; KPO809S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">(Rompun 2%)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:247px;">Optigel&#160;&#160;&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Europhta</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">Medicament autoris&#233; N&#176;3400933521134</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Lacrigel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Tronothane</td>
			<td style="width:161px;">Lisa Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" rowspan="2" style="height:40px;width:247px;">GC agar Base</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Conda</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">1106</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human endothelium SFM media</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:161px;">P A A</td>
			<td style="width:119px;">A15-101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human transferrin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3309</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">UEA lectin - rhodamine</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">RL-1062</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H9627</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Eosin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E4009&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylene</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">534056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Equiptment Name</td>
			<td style="width:161px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sober Hand Dermatome</td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Animal housing</td>
			<td style="width:161px;">Innovive</td>
			<td style="width:119px;">M-BTM-C8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Biopsy punch (4 mm)</td>
			<td style="width:161px;">Dominic Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">30737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fast-Prep lysing matrix M tubes</td>
			<td style="width:161px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">116923050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer Green Beads</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358941001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358976001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vectashield mounting media</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vetbond</td>
			<td style="width:161px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Glue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">OCT tissue tek</td>
			<td style="width:161px;">Sakura</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature

النيسرية السحائية يسبب شديدة، وتعفن الدم قاتلة في كثير من الأحيان عندما يدخل مجرى دم الإنسان. العدوى يؤدي إلى أضرار واسعة النطاق في الأوعية الدموية مما يؤدي إلى تسرب الأوعية الدموية، وتطوير طفح فرفرية ونخر الأنسجة في نهاية المطاف. دراسة التسبب في هذا المرض كان محدودا من قبل خصوصية الإنسان من البكتيريا، الأمر الذي يجعل من الصعب في النماذج الحية. في هذا البروتوكول، ونحن تصف نموذجا أنسنة لهذا المرض الذي جلد الإنسان، التي تحتوي على microvessels الجلدي، وتطعم الفئران المناعة. هذه السفن يفاغر مع تداول الماوس مع الحفاظ على خصائص الإنسان. مرة واحدة أدخلت هذا النموذج، N. السحائية الالتزام حصرا لسفن الإنسان، مما أدى إلى تلف الأوعية الدموية واسعة، والتهاب في بعض الحالات تطور الطفح الفرفري. يصف هذا البروتوكول الخطوات التطعيم، والعدوى وتقييم هذا النموذج في كونتيXT من N. الإصابة السحائية. ويمكن تطبيق هذه التقنية في العديد من مسببات الأمراض التي تصيب الإنسان محددة مجرى الدم.

التهم كفو وN. سلالة السحائية المستخدمة في هذه النتائج هو ممثل N. السحائية 8013 استنساخ 12، وعزل السريرية المصلية C، معربا عن فئة I SB بايلين، أوبا -، بمسانده -، PilC1 + / + 20 PilC2. وقد تم تصميم سلالة للتعبير عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP) من الإدراج الكروموسومات 18. يتم تأسيس مستعمرة بكتيرية تشكيل التهم حدة عن طريق حساب عدد من المستعمرات على لوحات أجار وحساب إما كفو / مل من الدم أو كفو / ملغ من الأنسجة من وحدات التخزين المعروفة مطلي. وأظهرت التهم الدم الذي 5 دقائق بعد الحقن الرابع من 10 6 البكتيريا كفو كان هناك في المتوسط ​​1.5 × 10 5 كفو / مل في الدم (الشكل 1A). بعد 6 ساعة متوسط ​​التهم 4.8 × 10 4 كفو / مل. قبل 24 ساعة كان متوسط ​​تعداد 2.4 × 10 4 كفو / مل ولكن في هذه المجموعة من الفئران 10، 5 زيارتهالا يمكن كشفها تعميم البكتيريا بينما كان غيرها من التهم 5 مرتفعة نسبيا (الشكل 1A). التهم كفو المأخوذة من عينات الجلد تظهر غالبية من الفئران وجود تهمة كبيرة في الجلد البشري، حيث بلغ متوسطها 2.1 × 10 4 كفو / ملغ من الأنسجة في 6 ساعة و 4.4 × 10 2 كفو / ملغ من الأنسجة في 24 ساعة (الشكل 1B) . أظهرت عينات الجلد الماوس المقابل لم بكتيريا في 24 ساعة فقط وعدد قليل جدا في 6 ساعة، مما يدل على تفضيل قوي لN. السحائية في الأوعية الإنسان في الجلد المطعمة (الشكل 1B). بشكل عام كانت منخفضة جدا بكتيريا لnondetectable في الأجهزة الأخرى على الرغم من عينات الحيوانات 2 لم تظهر التهم التي يمكن أن تعزى إلى تلوث من الدم، كما أنها ترتبط مع ارتفاع تعميم أرقام البكتيرية (الشكل 1C). يمكن أن تستخدم أيضا نموذج لتحديد دور العوامل الفوعة في الجسم الحي، على سبيل المثال نوع IV بيلى. أدخلت سلالات بكتيرية مع طفرات في الجينات المحددة pilD 21، مما أدى إلى سلالة تفتقر إلى البرلمان الاتحادي الانتقالي، وكذلك الجين pilC1 8، تفتقر إلى البرلمان الاتحادي الانتقالي &#39;adhesin&#39; المقترحة في النموذج. أدت هذه الطفرات في أي التصاق البكتيريا في الكسب غير المشروع جلد الإنسان، مؤكدا على الدور الحاسم TFP يلعب في التصاق في الجسم الحي (الشكل 1D). المناعية / علم الأنسجة في هذه التجارب كنا N. سلالات السحائية التي تعبر عن البروتين مضان الخضراء (GFP) لتمكين الكشف الفلورسنت دون الحاجة لتلطيخ الثانوية. كانت ملطخة الأوعية الإنسان باستخدام علامة للحصول على البطانة الإنسان، إما CD31 (PECAM-1) أو كتين الجولق الأوروبي راصة (UEA) 18،22. كان مترافق في جامعة إيست أنجليا لرودامين السماح خطوة واحدة تلطيخ (أرقام 2A-C). نواة الخلية يمكن وصمة عارإد مع دابي للمساعدة في تحديد هياكل الأنسجة (أرقام 2A-B). تم إجراء الأنسجة باستخدام معيار الهيماتوكسيلين / يوزين تلطيخ. كانت الحدود البشرة / الجلد من الجلد يمكن التعرف عليها بوضوح. وتركزت التهاب، تخثر الأوعية الدموية وتسرب للسفن على مقربة من هذا الحدود 24 ساعة بعد الإصابة (الشكل 2D). كان تجلط الدم واضحة في العديد من الأوعية الجلدية الصغيرة، وغالبا ما يرافقه احتقان والالتهابات. يمكن أن ينظر تسرب خلايا الدم الحمراء إلى الأنسجة خارج، مما يدل على أن مستوى الضرر واسعة من السفينة. التشريح المرضي من الجلد في الفئران المطعمة غير مصاب ظهرت طبيعية مع عدم وجود التهاب مميزة 18. في حوالي 30٪ من الإصابات التصاق البكتيريا في الجلد يؤدي إلى تطوير فرفرية كشف ظاهريا (أرقام 2E و2F). <img alt="الشكل 1" fo:content-width=<html> &quot;5IN&quot; FO: SRC = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot; سرك = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot; /&gt; الشكل 1. كفو التهم. (A) التهم البكتيرية كفو لكل مليلتر من الدم في 5 دقائق، 6 ساعة، و 24 إصابة آخر ساعة. (B) البكتيرية كفو يهم من عينات الجلد مقارنة الجلد البشري (HS) والجلد الماوس (MS) في كلا 6 ساعة و 24 إصابة آخر ساعة. (C) البكتيرية كفو التهم من الأجهزة الأخرى المتخذة 24 إصابة آخر ساعة. (D) وبمقارنة تعداد كفو البكتيرية من عينات الجلد البشري والفأر التي اتخذت في إصابة 24 آخر ساعة من الفئران المصابة مع نوع N. البرية السحائية 2C43 صمة عار (WT)، سلالة مع طفرة في الجين pilD (pilD) أو سلالة مع طفرة في الجين pilC1 (pilC1). وتظهر جميع الرسوم البيانية كبيانات أولية مع الوسيط. تم تعديل الرقم من Melican وآخرون 18&quot;_blank&quot;&gt; اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> الشكل 2. المجهر. (A) الإسقاط من كومة متحد البؤر يظهر microvessel الإنسان ملطخة UEA كتين (الحمراء) على مقربة من الجلد (د) البشرة (ه) الحدود. إصابة السفينة مع N. السحائية (الأخضر) 2 عدوى آخر ساعة. (ب) شريحة البصرية وإسقاط شريحة (C) تظهر N. microcolonies السحائية (الأخضر) إصابة سفينة الإنسان (جامعة إيست أنجليا - أحمر) ضمن عدوى الجلد الكسب غير المشروع 2 ساعة آخر. (D) Haematoxylin / يوزين تلطيخ من الكسب غير المشروع الجلد البشري المصابة لمدة 24 ساعة مع N. السحائية. على البشرة (ه)، عن طريق الجلد (د) الحدود بشكل واضح تجلط الدم مرئية واسعة واحتقان microvessإلس (الأسهم) وينظر في الأدمة. ويمكن أيضا تحديد التهاب الأوعية الدموية وبعض تسرب (رأس السهم). (E) الكسب غير المشروع جلد الإنسان قبل العدوى. (F) نفس الكسب غير المشروع الجلد مثل (E) 24 إصابة آخر ساعة مع N. السحائية تظهر المناطق الفرفري (السهام). أرقام 2B، يتم تعديل 2D، 2E، و2F من Melican وآخرون 18 <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

النيسرية السحائية هو الممرض الذي يصيب الإنسان محددة الأوعية الدموية. في هذا البروتوكول يتم تقديمها microvessels الإنسان في الماوس عن طريق تطعيم الجلد البشري على الفئران المناعة. البكتيريا الالتزام على نطاق واسع في الأوعية الإنسان، مما يؤدي إلى تلف الأوعية الدموية وتطوير الطفح الفرفري احظ عادة في الحالات البشرية.

أنسنة نموذج الفأر لدراسة الالتهابات البكتيرية استهداف الأوعية الدموية الدقيقة

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

باستخدام الماوس BLT إنساني وساق الموديل خلية مقرها جين ورم العلاج

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

نموذج تجريبي لدراسة الملاريا والسل عدوى مرافقة على انتقال الطبيعية السل المتفطرة و المتصورة berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

في المختبر والمجراة نموذج لدراسة التصاق البكتيريا إلى سفينة ستريت تحت ظروف التدفق

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

الثقافات المشيمة وساقطي الجهاز الإنسان لدراسة العدوى في واجهة الأم والجنين

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

طرق لدراسة الدهون التعديلات في العدلات وتشكيل لاحقة من الفخاخ خارج الخلية العدلات

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

نموذج وينف - غير مكلفة و تراكتابل مصغر من المخاط توصيل القصبات لدراسة الأحياء الدقيقة من التهابات الرئة

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

أنسنة إيماءة/نظام/IL2rγفارغة الماوس (هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية) نموذج للنسخ المتماثل من فيروس نقص المناعة البشرية والدراسات الكمون

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...