Name: humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature
Uploaded: 2014-04-01T15:45:00
Duration: 11 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke alle medlemmer af Dumenil lab, især Silke Silva for kritisk læsning af manuskriptet. Den kirurgiske afdeling på Hôpital Européen Georges-Pompidou (HEGP), Dr. David Maladry. Michael Hivelin og Dr. Patrick Bruneval, Pathology Department på HEGP. Dyret facilitet på PARCC, ledet af Elizabeth Huc. Dette arbejde blev støttet af følgende tilskud agenturer: Marie Curie IEF stipendium nej. 273.223 (KM), ATIP-Avenir Grant fra INSERM, CODDIM udstyr tilskud (Ile de France-regionen), FRM (Fondation pour la recherche médicale) udstyr tilskud, den IBEID Laboratory of excellence konsortium, ANR (Agence Nationale pour la Recherche) tilskud &quot; Bugs-i-flow &quot;. De finansieringskilderne havde ingen rolle i studie design, dataindsamling og-analyse, beslutning om at offentliggøre, eller udarbejdelse af manuskriptet.

1.. Risici og tilladelser <ol><li> Lokale etiske udvalg skal godkende alle animalske protokoller. Denne protokol blev gennemført i overensstemmelse med retningslinjer, der fastsættes af de franske og europæiske regler for pasning og anvendelse af forsøgsdyr (Décrets 87-848, 2001-464, 2001-486 og 2001-131 og europæiske direktiv 2010/63/UE) og godkendt af den lokale etiske komité Comité d&#39;ETHIQUE en matière d&#39;Eksperimenter Animale, Université Paris Descartes, Paris, Frankrig. Nr.: CEEA34.GD.002.11. </li><li> For den menneskelige hud, blev skriftligt informeret patient samtykke opnås, og alle procedurer blev udført i henhold til franske nationale retningslinjer, og godkendt af den lokale etiske komité, Comité d&#39;Evaluation ETHIQUE de l&#39;INSERM IRB 00003888 FWA 00005881, Paris, Frankrig Udtalelse: 11-048 . </li><li> N. meningitidis er en potentielt skadelig humant patogen og der skal træffes alle nødvendige sikkerhedsforanstaltninger ved håndtering af organisme. Disse forholdsregler omfatter vaccination og arbejder under biosikkerhed niveau 2 betingelser. </li></ol> 2. Hudtransplantat <ol><li> Saml huden så tæt på podning tid som muligt. Størstedelen af ​​huden i dette arbejde kommer fra plastikkirurgi operationer, der omfatter det abdominale område. Andre kilder såsom bryst, ben og endda ansigt har været anvendt med succes. </li><li> Den menneskelige hudprøven Forbered ved at rense hudoverfladen med 70% EtOH og liggende fladt på et godt rengjorte overflade, fortrinsvis under en strøm hætte. </li><li> Skær 200-400 um skiver fra toppen af ​​huden ved hjælp af en dermatom med forudindstillet tykkelse. </li><li> Kontroller huden skiver for integritet og skær dem i 2 cm x 2 cm firkanter, og derefter placere i PBS (uden divalente kationer) hvis podning straks eller ved 4 ° C i DMEM med 10% serum til kortvarig opbevaring (3-12 hr ). </li><li> Bedøve 6-8 uger gamle SCID.bg mus (ca. 20 g) med ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) injeCTED ip </li><li> Når musene bedøvet, så tjek for smerte reaktion ved at udføre en tå knibe, en standard metode til oprettelse af smerte refleks. Påfør gel til øjnene for at forhindre udtørring af hornhinden og barbere den venstre side af dyret bag skulderen, hvor implantatet skal placeres. Hold musen varmt på en varmepude under hele proceduren. </li><li> Efter prepping musen for kirurgi, rense barberede område med 70% EtOH. </li><li> Anvende lokalbedøvelse topisk til transplantatet stedet (Tronothane) og forberede graft stedet ved omhyggeligt at fjerne overfladiske lag af musehud med et par buede saks. Vær omhyggelig med ikke at forstyrre den underliggende kar. </li><li> Fjern huden i et område lidt mindre end arealet af den menneskelige hud skive. </li><li> Fjern hud skive fra PBS (eller DMEM) og placere løbet graft seng, hvilket sikrer den epidermale side vender opad. Trin 2,8-2,10 skal udføres så hurtigt som muligt, at sikre graft sengen ikke tørrer ud. </li><li> Juster det ene hjørneeller kant og fix med væv lim. Passer forsigtigt resten af ​​huden skive til transplantatet seng, placere små mængder af vævslim rundt om kanterne. Trim altid den menneskelige hud til størrelse snarere end at gøre graft sengen større. </li><li> Må ikke trække huden for stramt over graft seng som musen hud er meget fleksibel. </li><li> Sørg for, at protesen fast med væv lim i hvert hjørne. </li><li> Rengør området med en jodopløsning. </li><li> Påfør et plaster med puden området over transplantatet. Sørg for, at Band-Aid er fast, men ikke stramt, og at dyrets vejrtrækning påvirkes ikke. </li><li> Fastgør Band-Aid med dressing tape. </li><li> Lad så dyret kan komme på en varm overflade. </li><li> Når vågen, sende dyret tilbage til sit bur. Dyrene er opstaldet 2-3 per bur. </li><li> Tjek mus regelmæssigt under genopretning for tegn på smerte eller lidelse. 10-14 dage efter podning, fjerne Band-Aid, og pas på ikke at forstyrre graft. Det er vores erfaring postoperative smerter er minimal. Ikke desto mindre dyr bør overvåges hver dag, navnlig i de få dage efter operation. Kriterier for smerte eller lidelse er følgende. <ul><li> Tab af vægt over 10% </li><li> Fysiske udseende, pels, pukkelrygget position, øjne </li><li> Øget respiration eller hjerte satser </li><li> Nedsat eller usædvanlige bevægelser. </li><li> Stigning i kropstemperaturen </li><li> I tilfælde registreres tegn på smerte paracetamole administreres oralt (300 mg / kg hver 4. time). Humane endpoints overholdes strengt, hvis smerten fortsætter. </li></ul></li><li> Hvis transplantatet ser tør anvende babyolie hver 2-3 dage for at holde huden smidig. </li><li> Transplantatet er klar til forsøg 21 dage efter graft. </li></ol> 3. Infektion <ol><li> Dagen før infektion, forberede bakteriestamme ved udstrygning på GCB agarplader med passende antibiotika. Dyrk natten over ved 37 ° C i 5% CO2. </li><li> Bakterier forberedelse <ol&gt; <li> Ompodes bakterier i 5 ml human endotel SFM medier med 10% serum til en OD600 0,05. </li><li> Inkuber under omrystning i 2 timer i inkubator (37 ° C i 5% CO 2) med løst låg, indtil bakterietætheden omtrent OD600 0.1. </li><li> Centrifuger bakterierne i 3 minutter 15.000 rpm. </li><li> Fjern supernatanten og resuspender i PBS, centrifugeres igen. </li><li> Gentag vasketrinet (2.2.4-2.2.5) to gange. </li><li> Resuspender bakteriepellet i PBS. </li><li> Mål OD600. </li><li> Lav en kultur af enten OD600 0,1 (10 8 CFU / ml), eller OD600 1,0 (10 9 CFU / ml). Fra dette kendt koncentration, fortyndes til 10 7 CFU / ml. Forsøger at forberede bakterier så tæt på injektionsstedet som muligt. </li></ol></li><li> Mus <ol><li> Mus vejes. </li><li> Bedøve mus med ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) injiceret ip </li><li> Når søvn, cdælen, at smerten reaktion er fraværende ved en tå-knibe, holde musene varm med en varmepude og lægge øje salve på at forhindre udtørring. </li><li> Giv hver mus 8 mg humant transferrin, resuspenderet i saltvand eller PBS injiceret ip </li><li> Tag en lille dråbe blod fra halen og spredes på en agarplade at kontrollere blod er steril forud for infektion. </li><li> Sprøjt 100 ul 10 7 CFU / ml bakteriekultur (10 6 CFU alt) intravenøst ​​via retro-orbital eller hale vene. Målinger af CFU taget 5 min efter injektion er i overensstemmelse uanset injektionssted. </li><li> Efter et par minutter, snip enden og blodprøve spredes på agarplader med passende antibiotika med en 10 ganges fortynding for at etablere blod CFU umiddelbart efter infektion. </li><li> Forsegl hale med væv lim. </li><li> Efter injektion fortyndes den bakterielle inokulum og spredes på agarplader med passende antibiotika til at etablere CFU. </li><li> Lad musat inddrive på en varmepude, indtil de er op og bevæger sig </li><li> Ved 6 timer efter infektion trække en lille mængde blod fra halen, fortyndes og pladen for at etablere CFU på 6 timer. </li><li> Inkubér alle agarplader ved 37 ° C i 5% CO 2 natten over. </li></ol></li></ol> 4.. Sacrifice <ol><li> På det valgte tidspunkt for infektion, bedøve mus med ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) injiceret ip </li><li> Når søvn, holde musen varm med en varmepude. </li><li> Når smerterne refleks er gået (toe-knivspids), snip halespidsen og trække blod. </li><li> Spred blod på agarplader med passende antibiotika, 5 mikroliter direkte og 10 pi 1:10 fortynding for at etablere CFU. </li><li> Sacrifice musen ved cervikal dislokation. </li><li> Efter at ofre musen i henhold til alle relevante institutionelle og etiske retningslinjer, bekræft død ved manglende hjerteslag. Lav en midtlinjeincision, skære igennem brystkassen, og gøre et snit i høret. </li><li> Indsamle så meget blod som muligt fra hjertet / brysthulen og anbringes i et sterilt rør. </li><li> Fjern organer (fx lever, milt, hjerne) i en steril plade. </li><li> Fjern hudtransplantation og en sektion af musehud ind i den sterile plade. </li><li> Bortskaf musen kroppen. </li><li> Efter tappet blod har fået lov til at størkne i 15 min, centrifugeres den 15 min ved 3.000 rpm. </li><li> Fjern plasma fra blod og opbevares ved -80 ° C til senere analyse, for eksempel til cytokin påvisning ved ELISA eller FACS baserede metoder. </li></ol> 5.. Organ CFU Tæller <ol><li> Afvej homogenisering rør indeholdende 500 pi PBS hver, før der træffes biopsiprøver. </li><li> Tag 4 mm biopsi prøver fra hver væv ved hjælp af en steril biopsi punch. </li><li> Place biopsier i forvejet homogenisering rør indeholdende 500 pi PBS. Homogenisere hud prøver med 2 mm perler, bruge mindre perler til andre organer. </li><li> Placer de resterende tspørgsmål i 4% paraformaldehyd (PFA) og opbevares ved 4 ° C til mikroskopi (se nedenfor). </li><li> Afvej homogenisering rør indeholdende biopsier at etablere biopsi vægt (til senere beregning af CFU / mg væv). </li><li> Homogeniseres prøver. <ol><li> Homogenisere lever, milt og hjerne, ved 6.000 rpm i 30 sek. </li><li> Homogenisere hudprøver ved 6.000 rpm i 30 sek og gentag om nødvendigt. </li></ol></li><li> Spred fortyndinger fra hver homogenisering rør på agarplader og vokse natten over ved 37 ° C i 5% CO 2 for at etablere orgel kimtal. </li></ol> 6.. Histologi / Immunohistokemi <ol><li> Fiksering <ol><li> Fix væv i 4% PFA natten over ved 4 ° C. Fikseringen trin kan være længere, hvis opbevaring i længere perioder placere væv i 0,25% PFA. </li><li> Skyl væv i PBS og derefter placere i 20% sucroseopløsning og vende tilbage til 4 ° C natten over, eller indtil vævet er sunket i opløsningen. </li><li> Vask væv i PBS, tilskåret og sted i OCT-løsning (enten i et væv støbeform eller levet op til en base bord). </li><li> Hurtigt fryse væv på en petriskål flydende i flydende nitrogen. </li><li> Efter frysning, sætte væv på tøris før overførsel til -80 ° C til opbevaring. </li></ol></li><li> Slicing <ol><li> Fjern væv fra -80 ° C og gør det muligt at ækvilibrere til -20 ° C i en kryostat. </li><li> Skær væv med en tykkelse på ca 10-15 m og placere på coatede mikroskopi dias. </li><li> Store glider ved -20 ° C indtil brug. </li></ol></li><li> Farvning <ol><li> Tillad dias til at komme til stuetemperatur. </li><li> Tegn omkring skive på diaset med en hydrofob pen. Vent 5-10 min. </li><li> Rehydrere / vask skive i PBS i 5 minutter, gentages to gange. </li><li> Permeabilisere skive i 0,1% Triton i PBS i 10 min. </li><li> Vask i PBS 2-3x i 5 min. </li><li> Block i PBS0,1% Triton 1% BSA i mellem 10-60 min efter antistoffet eller plet, der skal anvendes. </li><li> Fjern blokerende buffer, og der tilsættes primært antistof fortyndet som krævet i blok buffer. Inkuber i bestemt tidsrum. (Ofte 1 time ved stuetemperatur eller natten over ved 4 ° C). </li><li> Vask i PBS 2-3x i 5 min. </li><li> Anvend sekundært antistof fortyndet passende i bock buffer, DAPI er typisk indgår i dette trin. Inkuber i bestemt tid, ofte 1-2 hr stuetemperatur i mørke. </li><li> Vask i PBS 2-3x i 5 min. </li><li> Mount i fade beskytter montering medier med et dækglas og forsegle med neglelak. </li><li> Billede farvede objektglas straks eller opbevares ved 4 ° C. </li><li> Udfør billeddannelse med en konfokal eller fluorescerende mikroskopi oprettet med filtre / lasere egnede til fluorophores brugt. </li></ol></li><li> Histologi <ol><li> Tillad objektglas skal anvendes til histologi til at komme til stuetemperatur. </li><li> Stain dias ved hjælp somtandard hæmatoxylin / eosin-farvning protokol. <ol><li> Placer dias i slide rack. </li><li> Overfør rack med dias mellem løsninger i følgende rækkefølge: </li><li> 2 sek i rindende vand. </li><li> 3 min i filtreret Hematoxylinopløsning. </li><li> 10 sek i rindende vand. </li><li> 10 sek i destilleret vand. </li><li> 10 sek til ethanol 100%. </li><li> 2 sek i filtreret eosin. </li><li> 10 sek i rindende vand. </li><li> 10 sek til ethanol 100% </li><li> 2 min i xylen x 3 (bad I, II, III). </li><li> Overfør straks og tilsæt nogle dråber af fiksering lim på hver dias, sted dækglasset på toppen, fjerne luftbobler, lad tørre i et par timer. </li><li> Billede glider under en standard hvidt lys mikroskop. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Davis, C. E., Arnold, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+meningococcal+endotoxin+in+Meningococcal+purpura.">Role of meningococcal endotoxin in Meningococcal purpura.</a> J. Exp. Med. 140, 159-171 (1974).</li><li>Mairey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microcirculation+shear+stress+levels+determine+Neisseria+meningitidis+attachment+sites+along+the+blood-brain+barrier.">Cerebral microcirculation shear stress levels determine Neisseria meningitidis attachment sites along the blood-brain barrier.</a> J. Exp. Med. 203, 1939-1950 (2006).</li><li>Brandtzaeg, P., van Deuren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+and+pathogenesis+of+meningococcal+infections.">Classification and pathogenesis of meningococcal infections.</a> Methods Mol. Biol. 799, 21-35 (2012).</li><li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+diagnosis+of+human+meningococcal+disease+using+immunohistochemical+and+PCR+assays.">Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122, 754-764 (2004).</li><li>Hill, W. R., Kinney, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cutaneous+lesions+in+acute+meningococcemia;+a+clinical+and+pathologic+study.">The cutaneous lesions in acute meningococcemia; a clinical and pathologic study.</a> J. Am. Med. Assoc. 134, 513-518 (1947).</li><li>Capecchi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+NadA+is+a+new+invasin+which+promotes+bacterial+adhesion+to+and+penetration+into+human+epithelial+cells.">Neisseria meningitidis NadA is a new invasin which promotes bacterial adhesion to and penetration into human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 55, 687-698 (2005).</li><li>Merz, A. J., Enns, C. A., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+pili+of+pathogenic+Neisseriae+elicit+cortical+plaque+formation+in+epithelial+cells.">Type IV pili of pathogenic Neisseriae elicit cortical plaque formation in epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 32, 1316-1332 (1999).</li><li>Morand, P. C., Tattevin, P., Eugene, E., Beretti, J. L., Nassif, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+property+of+the+type+IV+pilus-associated+component+PilC1+of+pathogenic+Neisseria+is+supported+by+the+conformational+structure+of+the+N-terminal+part+of+the+molecule.">The adhesive property of the type IV pilus-associated component PilC1 of pathogenic Neisseria is supported by the conformational structure of the N-terminal part of the molecule.</a> Mol. Microbiol. 40, 846-856 (2001).</li><li>Taha, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+induces+the+expression+of+the+TNF-alpha+gene+in+endothelial+cells.">Neisseria meningitidis induces the expression of the TNF-alpha gene in endothelial cells.</a> Cytokine. 12, 21-25 (2000).</li><li>Kirchner, M., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PilC+adhesin+of+the+Neisseria+type+IV+pilus-binding+specificities+and+new+insights+into+the+nature+of+the+host+cell+receptor.">The PilC adhesin of the Neisseria type IV pilus-binding specificities and new insights into the nature of the host cell receptor.</a> Mol. Microbiol. 56, 945-957 (2005).</li><li>Mikaty, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+bacterial+pathogen+induces+host+cell+surface+reorganization+to+resist+shear+stress.">Extracellular bacterial pathogen induces host cell surface reorganization to resist shear stress.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Kirchner, M., Heuer, D., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46-independent+binding+of+Neisserial+type+IV+pili+and+the+major+pilus+adhesin,+PilC,+to+human+epithelial+cells.">CD46-independent binding of Neisserial type IV pili and the major pilus adhesin, PilC, to human epithelial cells.</a> Infect. Immun. 73, 3072-3082 (2005).</li><li>Noinaj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+iron+piracy+by+pathogenic+Neisseria.">Structural basis for iron piracy by pathogenic Neisseria.</a> Nature. 483, 53-58 (2012).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors+for+transferrin+in+pathogenic+bacteria+are+specific+for+the+host's+protein.">Receptors for transferrin in pathogenic bacteria are specific for the host's protein.</a> Can. J. Microbiol. 36, 145-147 (1990).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 26, 75-82 (1999).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infect. Immun. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dumenil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathog. 9, (2013).</li><li>Murray, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell-mediated+destruction+of+allogeneic+dermal+microvessels+in+a+severe+combined+immunodeficient+mouse.">Human T-cell-mediated destruction of allogeneic dermal microvessels in a severe combined immunodeficient mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 9146-9150 (1994).</li><li>Nassif, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+of+pilin+regulates+adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+human+epithelial+cells.">Antigenic variation of pilin regulates adhesion of Neisseria meningitidis to human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 8, 719-725 (1993).</li><li>Geoffroy, M. C., Floquet, S., Metais, A., Nassif, X., Pelicic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+analysis+of+the+meningococcus+genome+by+gene+disruption:+resistance+to+complement-mediated+lysis.">Large-scale analysis of the meningococcus genome by gene disruption: resistance to complement-mediated lysis.</a> Genome Res. 13, 391-398 (2003).</li><li>Ho, M., Hickey, M. J., Murray, A. G., Andonegui, G., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+Plasmodium+falciparum-endothelium+interactions+in+human+microvasculature:+mimicry+of+leukocyte+recruitment.">Visualization of Plasmodium falciparum-endothelium interactions in human microvasculature: mimicry of leukocyte recruitment.</a> J. Exp. Med. 192, 1205-1211 (2000).</li></ol>

Forfatterne erklærer ingen konkurrerende finansielle interesser.

Dyremodeller er kritisk vigtigt at bakteriel patogenese forskning. Det er umuligt fuldstændigt at efterligne in vivo-miljøet i cellekultur, og det bliver tydeligt, at værtspatogene interaktionen påvirkes af mange dynamiske faktorer. Den menneskelige specificitet nogle klinisk vigtige patogener, såsom N. meningitidis, HIV, HCV, Plasmodium falciparum, Listeria monocytogenes og Salmonella typhi har begrænset anvendelsen af in vivo-modeller for disse infektioner. Men når vi begynder at forstå, hvilke smitsomme skridt er involveret i specificitet humaniserede modeller er under udvikling. Protokollen beskrevet her er en demonstration af dette med indførelsen af humane mikrokar i mus, der giver mulighed for omfattende in vivo-infektion med N. meningitidis, hvilket resulterer i vaskulær skade og lejlighedsvis udvikle purpuric udslæt. Anvendelse af denne modelvi har været i stand til at definere, at klæbeevne TFP er involveret i vaskulær kolonisering in vivo ved hjælp af bakterielle mutanter, og at den vaskulære skade reduceres i fraværet af friktion 18. Tidligere har cirkulerende bakterielle produkter været impliceret i denne skade, men vores resultater tyder på en afgørende rolle for den lokale vedhæftning og vaskulær kolonisering. Det åbner nye muligheder for udvikling af nye behandlingsmål. Hvis vedhæftning af sygdomsfremkaldende bakterier kan blive blokeret farmaceutisk det kunne muligvis forebygge udviklingen af ​​hudlæsioner og føre til bedre resultater for meningokok overlevende i form af vævsnekrose, débridement og amputationer. Arbejdet har også vist kompleksiteten af ​​infektionen og inddragelse af immunresponset og koagulationskaskaden den. Vi identificerede menneskelige cytokin signalering i serum fra inficerede mus på trods af den relativt lille mængde humant endotel nuværende 18 år.Dette indikerede en signifikant cytokin respons sammen med infiltration af muse immun cellepopulationer ind i området. Dyremodeller kan selvfølgelig aldrig helt replikere sygdom hos mennesker og alle resultater fået fra dem, skal betragtes med dette i tankerne. For eksempel, i denne model blodet og cirkulerende celler er af museoprindelse, og vi kan ikke rabat, at de kan opføre sig anderledes til humane celler. En fordel ved dette er imidlertid, som vist i vores nylige publikation 18, er evnen til at skelne signaler stammer fra den humane endotel fra de cirkulerende museceller. Den immunkompromitterede baggrund af de anvendte mus i denne model vil også give mulighed for allogen overførsel af humane immun cellepopulationer, tilføjer endnu en &quot;humanisering&quot; aspekt. Immunkompromitterede baggrund af musene kan dog maskere en rolle for NK, T-eller B-celler, som alle mangler eller defekte i denne model. Den relativt Short tidsramme (24 timer), der anvendes i denne model først og fremmest drejer sig om den medfødte respons, men for langsigtede infektioner og udvikling af immunitets andre muligheder kan være nødvendigt at blive udforsket. Huden er en vigtig infektion site for N. meningitidis men har en relativt lille mængde af menneskelige skibe betyder også, at ekstrapolere data til en systemisk infektion involverer mange organer er vanskelig. Mens denne model giver mulighed for studiet af dermal læsion udvikling, vigtige skridt for meningokok infektion såsom epitelial og blod-hjerne-passage ikke inkluderet. Videreudvikling af disse humaniserede modeller er nødvendig for at løse disse andre aspekter af infektionen. Ikke desto mindre er denne model tilbyder et stort potentiale for mange specifikke humane patogener, især rettet mod blodkarrene.

Meningokok sepsis er en ofte dødelig blod født infektioner forårsaget af bakterielt patogen Neisseria meningitidis. Meningokok sepsis patienter ofte til stede med en petekkier eller purpuric udslæt på deres hud, som tidligere har været forbundet med vaskulære ødelæggelser forårsaget af cirkulerende bakterier og bakterielle produkter 1. Hudbiopsier fra kliniske patienter viser bakterier forbundet med mikrokar ofte fylde beholderne 2. Bortset fra bakterier, omfattende trombose, koagulation, overbelastning og vaskulær lækage ses i purpuric regioner 3-5. Denne vaskulær skade kan føre til omfattende nekrose af huden og det omgivende væv, hvilket resulterer i débridement og endda amputation i meningokok overlevende. Forstå, hvordan infektion forårsager denne vaskulær skade er vigtigt at optimere forebyggelse og behandling strategier. Hovedparten af forskningen i meningokok sepsis er blevet udført in vitro påhumane cellelinier på grund af den menneskelige specificitet N. meningitidis. Mange aspekter af infektion er blevet undersøgt in vitro, herunder bakteriel adhæsion, værtscelle respons samt cytokin respons 6-9. Type IV pili (TFP) har været impliceret som den store friktion organel til N. meningitidis på begge epitel og endotelceller 10. Det er også blevet påvist, at adhæsion af N. meningitidis til værtsceller er forskydningsspænding afhængig og derfor menes at være relateret til blod flow i mikrovaskulaturen 11. Dette tyder dynamiske belastninger bakterierne står in vivo er afgørende for patogenese. Det er imidlertid meget vanskeligt at modellere mikromiljø små fartøjer in vitro. Vedhæftningen receptor for Neisseria TFP er stadig ukendt, og derfor ikke kan sendes knock-i strategier for at opnå bakteriel adhæsion i en dyremodel på dette tidspunkt. CD46 blev foreslået at være TFP-receptoren og transgene dyr blev fremstillet til at fungere som musemodeller. Men infektion i disse dyr ikke føre til omfattende infektion eller udslæt udvikling 12,13. Andre dyremodeller, der er blevet beskrevet for bakteriæmi aspekt af Neisseria-infektion tage hensyn til den bakterielle præference for human transferrin som en jernkilde 14,15. Enten supplere human transferrin eller udtrykker det fra et transgen resulterer i en øget bakteriel belastning i blodet over en længere periode, men denne model viser ingen bakteriel adhæsion eller udslæt udvikling 16,17. I denne protokol, beskriver vi en humaniseret musemodel, hvor den menneskelige hud, herunder dermal microvasculature er transplanteret på immunsvækkede mus 18,19. Dette resulterer i funktionelle menneskelige skibe perfused med musen cirkulation. Kombineret med den menneskelige transferrin tilskud, denne model tegner sig for mindst to af de menneskelige specifikke aspekter af N. meningitidis, dvs humant endotel og human transferrin i et in vivo miljø. N. meningitidis indført intravenøst ​​i denne model klæbe specifikt til humant endotel, der producerer en patologi, der svarer til hvad der er rapporteret i kliniske patienter, herunder vaskulær skade og purpuric udslæt udvikling 18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="693">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">DMEM</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">31885-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ketamine 500</td>
			<td style="width:161px;">Virbac France&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">LOT N&#176;VAL4243</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylazine</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Bayer Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">AMM N&#176; FR/8146715 2/1980</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">LOT N&#176; KPO809S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">(Rompun 2%)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:247px;">Optigel&#160;&#160;&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Europhta</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">Medicament autoris&#233; N&#176;3400933521134</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Lacrigel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Tronothane</td>
			<td style="width:161px;">Lisa Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" rowspan="2" style="height:40px;width:247px;">GC agar Base</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Conda</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">1106</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human endothelium SFM media</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:161px;">P A A</td>
			<td style="width:119px;">A15-101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human transferrin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3309</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">UEA lectin - rhodamine</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">RL-1062</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H9627</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Eosin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E4009&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylene</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">534056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Equiptment Name</td>
			<td style="width:161px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sober Hand Dermatome</td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Animal housing</td>
			<td style="width:161px;">Innovive</td>
			<td style="width:119px;">M-BTM-C8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Biopsy punch (4 mm)</td>
			<td style="width:161px;">Dominic Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">30737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fast-Prep lysing matrix M tubes</td>
			<td style="width:161px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">116923050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer Green Beads</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358941001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358976001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vectashield mounting media</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vetbond</td>
			<td style="width:161px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Glue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">OCT tissue tek</td>
			<td style="width:161px;">Sakura</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature

Neisseria meningitidis forårsager en alvorlig, ofte dødelig sepsis, når det kommer ind i humant blod stream. Infektion fører til omfattende beskadigelse af blodkar, hvilket resulterer i vaskulær lækage, udvikling af purpuric udslæt og eventuel vævsnekrose. Studer patogenesen af denne infektion var tidligere begrænset af den menneskelige specificitet af bakterierne, hvilket gør in vivo modeller vanskelig. I denne protokol, beskriver vi en humaniseret model for denne infektion, hvor den menneskelige hud, der indeholder dermale mikrokar, podes på immunsvækkede mus. Disse skibe anastomoserer med musen cirkulation og samtidig bevare deres menneskelige egenskaber. Når indført i denne model, N. meningitidis overholde udelukkende de menneskelige fartøjer, hvilket resulterer i omfattende vaskulær skade, inflammation og i nogle tilfælde udvikling af purpuric udslæt. Denne protokol beskriver podning, infektion og evaluering trin i denne model i Context af N. meningitidis infektion. Teknikken kan anvendes til en lang række specifikke humane patogener, der inficerer blodet.

CFU tællinger N. meningitidis stamme anvendes i disse repræsentative resultater er N. meningitidis 8013 klon 12, en serogruppe C klinisk isolat, der udtrykker en klasse I SB pilin, Opa - OPC -, PilC1 + / PilC2 + 20. Stammen var blevet manipuleret til at udtrykke grønt fluorescerende protein (GFP) fra en kromosomal insertion 18. Bakterielle kolonidannende unit tæller er etableret ved at tælle antallet af kolonier på agarplader og beregne enten CFU / ml blod eller CFU / mg af væv fra de kendte mængder udpladet. Blodtællinger viste, at 5 minutter efter intravenøs injektion af 10 6 CFU bakterier var der et gennemsnit på 1,5 x 10 5 CFU / ml i blodet (figur 1A). Efter 6 timer tællingerne i gennemsnit 4,8 x 10 4 CFU / ml. Ved 24 timer de gennemsnitlige tællinger var 2,4 x 10 4 CFU / ml, men i denne gruppe af 10 mus, 5 havdeingen påviselig cirkulerende bakterier, mens de andre 5 havde relativt høje tællinger (figur 1a). Kimtal taget fra hudprøverne viser hovedparten af mus, der har betydelige tællinger i den menneskelige hud, med et gennemsnit 2,1 x 10 4 CFU / mg væv ved 6 timer og 4,4 x 10 2 CFU / mg væv ved 24 timer (figur 1 B) . Den kontralaterale musehud prøver viste ingen kimtal ved 24 timer og kun et meget lavt antal på 6 timer, hvilket viser stærk præference for N. meningitidis til de menneskelige skibe i podede huden (figur 1B). Generelt kimtal var meget lav til nondetectable i andre organer i stikprøven selv 2 dyr gjorde show tæller, der kan henføres til forurening fra blodet, da de korreleret med høj cirkulerende antal bakterier (figur 1C). Modellen kan også anvendes til at bestemme den rolle virulensfaktorer in vivo, for eksempel type IV pili. Bakteriestammer med definerede mutationer i pilD gen 21, hvilket resulterer i en stamme, der mangler TFP, samt pilC1 gen 8, mangler den foreslåede TFP &#39;adhesin&#39; blev indført i modellen. Disse mutationer resulterede ikke i nogen bakteriel adhæsion i den menneskelige hud graft, bekræfter den afgørende rolle TFP spiller adhæsion in vivo (figur 1D). Immunohistokemi / Histologi I disse forsøg anvendte vi N. meningitidis-stammer, der udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP) for at muliggøre fluorescenspåvisning uden behov for sekundær farvning. Humane fartøjer blev farvet ved hjælp af en markør for den menneskelige endotel enten CD31 (PECAM-1) eller lectin Ulex europaeus agglutinin (UEA) 18,22. UEA blev konjugeret til rhodamin giver et-trins-farvning (figur 2A-C). Cellekerner kan pletteed med DAPI at hjælpe med at identificere vævsstrukturer (figur 2A-B). Histologi blev udført under anvendelse af en standard hematoxylin / eosin-farvning. Den epidermale / dermale grænse af hud var klart identificerbare. Inflammation, trombose og vaskulær lækage var koncentreret til fartøjer, tæt på denne grænse 24 timer efter infektion (figur 2D). Trombose var synlig i flere små dermal fartøjer, ofte ledsaget af overbelastning og inflammation. Lækage af røde blodlegemer ud i væv kunne ses, hvilket indikerer en stor grad af fartøj skader. Histopatologien podet hud-inficeret mus, syntes normale uden skelnes inflammation 18. I omkring 30% af infektionerne bakteriel adhæsion i huden fører til udvikling af makroskopisk påviselige purpura (figur 2E og 2F). <img alt="Figur 1" fo:content-width=<html> &quot;5in&quot; fo: src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot; /&gt; Figur 1. CFU tæller. (A) Bakteriel CFU tællinger pr ml blod på 5 min, 6 timer og 24 timer efter infektion. (B) Bakteriel CFU tæller fra hudprøver sammenligner menneskehud (HS) og musehud (MS) ved både 6 timer og 24 timer efter infektion. (C) Bakteriel CFU tæller fra andre organer taget 24 timer efter infektion. (D) Sammenligning bakterielle kimtal fra mennesker og mus hud prøver udtaget på 24 timer efter infektion fra mus inficeret med vildtype N. meningitidis 2C43 plet (WT), en stamme med en mutation i pilD genet (pilD) eller en stamme med en mutation i pilC1 genet (pilC1). Alle grafer er vist som rå data med median. Figur er modificeret fra Melican et al. 18.&quot;_blank&quot;&gt; Klik her for at se større billede. <img alt="Figur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> Figur 2. Mikroskopi. (A) projektion af et konfokalt stak viser et menneske mikrokar farvet med UEA lectin (rød) tæt på dermal (d), epidermal (e) grænse. Skibet er inficeret med N. meningitidis (grøn) 2 timer efter infektion. (B) En optisk skive og en skive fremspring (C) viser N. meningitidis mikrokolonier (grøn) infektion et menneske fartøj (UEA - rød) inden for en hudtransplantation 2 hr efter infektion. (D) Hæmatoxylin / eosin-farvning af humant hudtransplantat inficeret i 24 timer med N. meningitidis. Den epidermale (e), dermal (d) grænse er klart synlig og omfattende trombose og overbelastning af microvessels (pile) ses i dermis. Kan også identificeres inflammation og nogle vaskulær lækage (pilespids). (E) Menneskelig hudtransplantat før infektion. (F) Den samme hudtransplantation som (E) 24 timer efter infektion med N. meningitidis viser purpuric regioner (pile). Figurerne 2B, 2D, 2E og 2F er ændret fra Melican et al. 18 <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">Klik her for at se større billede</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis er en human specifikke patogen der inficerer blodkar. I denne protokol indføres menneskelige mikrokar i en mus ved podning menneskehud på immunkompromitterede mus. Bakterier overholde udstrakt grad til de menneskelige fartøjer, hvilket fører til vaskulær skade og udvikling af purpuric udslæt typisk observeret i humane tilfælde.

Humaniseret Mouse Model til Study bakterieinfektioner Målretning mikrovaskulaturen

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Brug af BLT Humaniseret Mouse som en stamcelle baseret genterapi tumormodel

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

En eksperimentel model til at studere tuberkulose-Malaria coinfektion på Natural Transmission af Mycobacterium tuberculosis Og Plasmodium berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation og Multi-fænotypisk High-indhold Screening af<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In vitro og in vivo model til at studere bakteriel adhæsion til karvæggen Under strømningsforhold

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

Humane placenta og decidua Organ kulturer til at studere Infektioner på Maternal-føtal interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

Metoder til at studere Lipidforandringer i neutrofiler og den efterfølgende dannelse af neutrofile ekstracellulær fælder

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

WinCF-modellen - en billig og traktabel mikrokosmos af en slimplugget bronchiole til at studere mikrobiologien af ​​lungeinfektioner

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humaniseret SCID-NOD-IL2rγnull (hu-NSG) mus Model for HIV replikation og Latency undersøgelser

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...