Name: humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature
Uploaded: 2014-04-01T15:45:00
Duration: 11 min 40 s
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लेखकों पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए Dumenil प्रयोगशाला के सभी सदस्यों, विशेष रूप से सिल्क सिल्वा को धन्यवाद देना चाहूंगा. Hôpital Europeen जार्ज-Pompidou (HEGP), डॉ. डेविड Maladry में सर्जरी विभाग. माइकल Hivelin और डॉ. पैट्रिक Bruneval, HEGP में पैथोलॉजी विभाग. एलिजाबेथ Huc की अध्यक्षता PARCC में जानवरों की सुविधा,. इस काम के बाद अनुदान एजेंसियों द्वारा समर्थित किया गया था: मैरी क्यूरी आईईएफ फेलोशिप नहीं. 273223 (किमी), INSERM से ATIP-Avenir अनुदान, CODDIM उपकरण अनुदान (Ile डी फ्रांस क्षेत्र), एफ आर एम उपकरण अनुदान, उत्कृष्टता संघ के IBEID प्रयोगशाला (Fondation ला सभ्य médicale डालना), ANR अनुदान &quot;(एजेंस नेशनल ला Recherche डालना) कीड़े में प्रवाह &quot;. funders अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि की तैयारी में कोई भूमिका नहीं थी.

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	<li>Davis, C. E., Arnold, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+meningococcal+endotoxin+in+Meningococcal+purpura.">Role of meningococcal endotoxin in Meningococcal purpura.</a> J. Exp. Med. 140, 159-171 (1974).</li><li>Mairey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microcirculation+shear+stress+levels+determine+Neisseria+meningitidis+attachment+sites+along+the+blood-brain+barrier.">Cerebral microcirculation shear stress levels determine Neisseria meningitidis attachment sites along the blood-brain barrier.</a> J. Exp. Med. 203, 1939-1950 (2006).</li><li>Brandtzaeg, P., van Deuren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+and+pathogenesis+of+meningococcal+infections.">Classification and pathogenesis of meningococcal infections.</a> Methods Mol. Biol. 799, 21-35 (2012).</li><li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+diagnosis+of+human+meningococcal+disease+using+immunohistochemical+and+PCR+assays.">Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122, 754-764 (2004).</li><li>Hill, W. R., Kinney, T. 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Microbiol. 40, 846-856 (2001).</li><li>Taha, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+induces+the+expression+of+the+TNF-alpha+gene+in+endothelial+cells.">Neisseria meningitidis induces the expression of the TNF-alpha gene in endothelial cells.</a> Cytokine. 12, 21-25 (2000).</li><li>Kirchner, M., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PilC+adhesin+of+the+Neisseria+type+IV+pilus-binding+specificities+and+new+insights+into+the+nature+of+the+host+cell+receptor.">The PilC adhesin of the Neisseria type IV pilus-binding specificities and new insights into the nature of the host cell receptor.</a> Mol. Microbiol. 56, 945-957 (2005).</li><li>Mikaty, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+bacterial+pathogen+induces+host+cell+surface+reorganization+to+resist+shear+stress.">Extracellular bacterial pathogen induces host cell surface reorganization to resist shear stress.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Kirchner, M., Heuer, D., Meyer, T. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infect. Immun. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dumenil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathog. 9, (2013).</li><li>Murray, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell-mediated+destruction+of+allogeneic+dermal+microvessels+in+a+severe+combined+immunodeficient+mouse.">Human T-cell-mediated destruction of allogeneic dermal microvessels in a severe combined immunodeficient mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 9146-9150 (1994).</li><li>Nassif, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+of+pilin+regulates+adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+human+epithelial+cells.">Antigenic variation of pilin regulates adhesion of Neisseria meningitidis to human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 8, 719-725 (1993).</li><li>Geoffroy, M. 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लेखक कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की घोषणा.

पशु मॉडल बैक्टीरियल रोगजनन अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण हैं. यह पूरी तरह से सेल संस्कृति में vivo वातावरण में नकल करने के लिए असंभव है और यह मेजबान रोगज़नक़ बातचीत कई गतिशील कारकों से प्रभावित होता है कि स्पष्ट होता जा रहा है. ऐसी एन के रूप में कुछ नैदानिक ​​महत्वपूर्ण रोगजनकों के मानव विशिष्टता meningitidis, एचआईवी, एचसीवी, प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम, लिस्टेरिया monocytogenes, और साल्मोनेला typhi इन संक्रमणों के लिए vivo मॉडल का उपयोग सीमित है. हम संक्रामक कदम विशिष्टता में शामिल किया जाता है जो समझने के लिए शुरू के रूप में हालांकि, humanized मॉडल विकसित किया जा रहा है. यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल एन के साथ विवो संक्रमण में व्यापक लिए अनुमति देता है, चूहों में मानव microvessels की शुरूआत के साथ इस का एक प्रदर्शन है meningitidis, संवहनी नुकसान और कभी कभी शीतादि संबंधी चकत्ते के विकास में जिसके परिणामस्वरूप. इस मॉडल का उपयोग करना,हम TFP के चिपकने वाला गुण बैक्टीरियल म्यूटेंट का उपयोग और संवहनी नुकसान आसंजन 18 के अभाव में कम हो जाता है कि द्वारा vivo में संवहनी उपनिवेशन में शामिल कर रहे हैं परिभाषित करने में सक्षम है. इससे पहले, परिसंचारी बैक्टीरियल उत्पादों इस नुकसान में शामिल किया गया है लेकिन हमारे परिणाम बताते हैं कि स्थानीय आसंजन और संवहनी उपनिवेशन के लिए एक निर्णायक भूमिका सुझाव देते हैं. इस उपन्यास उपचार लक्ष्य के विकास के लिए नई संभावनाएं खुलती हैं. रोगजनक बैक्टीरिया के आसंजन pharmaceutically अवरुद्ध किया जा सकता है, तो यह संभवतः त्वचीय घावों के विकास को रोकने और ऊतक परिगलन, क्षतशोधन और amputations के मामले में मेनिंगोकोक्सल बचे के लिए बेहतर परिणाम के लिए ले जा सकता है. काम भी संक्रमण की जटिलता और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और जमावट झरना की भागीदारी का प्रदर्शन किया है. हम वर्तमान मानव अन्तःचूचुक 18 की अपेक्षाकृत छोटी राशि के बावजूद संक्रमित चूहों के सीरम में मानव साइटोकाइन संकेतन पहचान की.इस क्षेत्र में माउस प्रतिरक्षा सेल आबादी की घुसपैठ के साथ साथ, एक महत्वपूर्ण साइटोकाइन प्रतिक्रिया संकेत दिया. पशु मॉडल का पाठ्यक्रम पूरी तरह से मानव रोग दोहराने कभी नहीं कर सकते हैं और सभी के परिणाम को ध्यान में रखते विचार किया जाना चाहिए उन लोगों से हुई. उदाहरण के लिए, इस मॉडल में रक्त और परिसंचारी कोशिकाओं माउस मूल के हैं और हम वे मानव कोशिकाओं को अलग तरीके से व्यवहार कर सकते हैं कि नहीं छूट सकता है. इस का एक लाभ यह है कि हालांकि, हमारे हाल के प्रकाशन के 18 में प्रदर्शन के रूप में, परिसंचारी माउस कोशिकाओं की है कि मानव अन्तःचूचुक से संकेत उद्भव अंतर करने की क्षमता है. इस मॉडल में इस्तेमाल चूहों के प्रतिरक्षा में पृष्ठभूमि भी एक और &#39;मानवीकरण&#39; पहलू जोड़ने, मानव प्रतिरक्षा सेल आबादी के allogenic हस्तांतरण के लिए अनुमति होगी. चूहों के प्रतिरक्षा में पृष्ठभूमि हालांकि सभी की कमी या इस मॉडल में खराब कर रहे हैं जो एन.के., टी या बी कोशिकाओं, के लिए एक भूमिका मुखौटा हो सकता है. अपेक्षाकृत शोरइस मॉडल में इस्तेमाल टी समय सीमा (24 घंटे) मुख्य रूप से सहज प्रतिक्रिया का सवाल है, लेकिन लंबी अवधि के संक्रमण और प्रतिरक्षा अन्य विकल्प के विकास के लिए पता लगाया जाना पड़ सकता है. त्वचा एन के लिए एक महत्वपूर्ण संक्रमण साइट है meningitidis लेकिन मानव जहाजों की एक अपेक्षाकृत छोटी राशि वाले भी कई अंगों से जुड़े एक प्रणालीगत संक्रमण के लिए डेटा extrapolating मुश्किल है कि इसका मतलब है. इस मॉडल त्वचीय घाव विकास के अध्ययन के लिए अनुमति देता है, इस तरह के उपकला और रक्त मस्तिष्क को पार करने के रूप में मेनिंगोकोक्सल संक्रमण का महत्वपूर्ण कदम शामिल नहीं हैं. इन humanized मॉडल के आगे विकास के संक्रमण के इन अन्य पहलुओं का पता करने की जरूरत है. फिर भी इस मॉडल में कई मानव विशिष्ट रोगजनकों, रक्त वाहिकाओं को लक्षित विशेष रूप से उन लोगों के लिए महान क्षमता प्रदान करता है.

मेनिंगोकोक्सल पूति जीवाणु रोगज़नक़ नेइसेरिया meningitidis की वजह से एक अक्सर घातक रक्त का जन्म संक्रमण है. मेनिंगोकोक्सल पूति रोगियों को अक्सर पहले से परिसंचारी बैक्टीरिया और बैक्टीरियल उत्पादों 1 के कारण संवहनी विनाश के साथ संबद्ध किया गया है कि उनकी त्वचा पर एक petechial या शीतादि संबंधी दाने के साथ मौजूद. नैदानिक ​​रोगियों से त्वचा बायोप्सी अक्सर वाहिकाओं 2 भरने, microvessels के साथ जुड़े बैक्टीरिया दिखा. इसके अलावा बैक्टीरिया, व्यापक घनास्त्रता, जमावट, भीड़ और संवहनी रिसाव से शीतादि संबंधी क्षेत्रों 3-5 में देखा जाता है. इस संवहनी नुकसान मेनिंगोकोक्सल बचे में क्षतशोधन और भी विच्छेदन में जिसके परिणामस्वरूप त्वचा और आसपास के ऊतकों की व्यापक गल जाना हो सकता है. संक्रमण के इस संवहनी नुकसान का कारण बनता समझ कैसे रोकथाम और उपचार रणनीतियों का अनुकूलन करने के लिए महत्वपूर्ण है. मेनिंगोकोक्सल पूति पर अनुसंधान के बहुमत पर इन विट्रो में प्रदर्शन किया गया हैएन के मानव विशिष्टता की वजह से मानव कोशिका लाइनों meningitidis. संक्रमण के कई पहलुओं बैक्टीरियल आसंजन, मेजबान सेल प्रतिक्रिया के साथ ही साइटोकाइन प्रतिक्रिया 6-9 सहित इन विट्रो में अध्ययन किया गया है. प्रकार चतुर्थ पिली (TFP) एन के प्रमुख आसंजन organelle के रूप में शामिल किया गया है meningitidis उपकला और endothelial कोशिकाओं 10 दोनों पर. यह भी एन की कि आसंजन दिखाया गया है मेजबान कोशिकाओं को meningitidis कतरनी तनाव निर्भर है और इसलिए microvasculature 11 में रक्त प्रवाह की दर से संबंधित माना जाता है. इस बैक्टीरिया विवो में सामना गतिशील तनावों रोगजनन के लिए महत्वपूर्ण हैं पता चलता है. यह इन विट्रो में छोटे जहाजों का microenvironment मॉडल पर फिर भी बहुत मुश्किल है. नेइसेरिया TFP के लिए आसंजन रिसेप्टर अभी भी अज्ञात है और इसलिए एक पशु मॉडल में बैक्टीरियल आसंजन प्राप्त करने के लिए दस्तक में रणनीति इस समय की परिकल्पना नहीं की जा सकती. CD46 TFP रिसेप्टर और ट्रांसजेनिक जानवर माउस मॉडल के रूप में कार्य करने के लिए तैयार किए गए होने का सुझाव दिया गया था. हालांकि, इन जानवरों में संक्रमण व्यापक संक्रमण के लिए नेतृत्व नहीं करता है या विकास 12,13 दाने को. नेइसेरिया संक्रमण की bacteremia पहलू के लिए वर्णित किया गया है कि अन्य पशु मॉडल के खाते में एक लोहे के स्रोत 14,15 के रूप में मानव transferrin के लिए जीवाणु वरीयता ले. मानव transferrin सप्लीमेंट या एक विस्तारित समय अवधि में रक्त प्रवाह में एक वृद्धि जीवाणु लोड में एक transgene परिणामों से यह व्यक्त, लेकिन इस मॉडल नहीं बैक्टीरियल आसंजन या दाने विकास 16,17 से पता चलता है या तो. इस प्रोटोकॉल में, हम चमड़े का microvasculature सहित मानव त्वचा, immunocompromised चूहों 18,19 पर प्रत्यारोपित किया जाता है, जिसमें एक humanized माउस मॉडल का वर्णन. इस माउस संचलन के साथ perfused कार्यात्मक मानव वाहिकाओं, में यह परिणाम है. मानव transferrin पूरकता के साथ संयुक्त, यह मीटरODEL एन के मानव विशिष्ट पहलुओं के कम से कम दो के लिए खातों meningitidis, एक vivo वातावरण में, मानव endothelium और मानव transferrin अर्थात्. एन meningitidis संवहनी नुकसान और शीतादि संबंधी दाने विकास 18 सहित नैदानिक ​​रोगियों में सूचना दी है क्या करने के लिए इसी तरह की है कि एक विकृति का निर्माण, मानव अन्तःचूचुक के लिए विशेष रूप से पालन करना इस मॉडल में नसों की शुरुआत की.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="693">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">DMEM</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">31885-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ketamine 500</td>
			<td style="width:161px;">Virbac France&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">LOT N&#176;VAL4243</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylazine</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Bayer Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">AMM N&#176; FR/8146715 2/1980</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">LOT N&#176; KPO809S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">(Rompun 2%)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:247px;">Optigel&#160;&#160;&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Europhta</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">Medicament autoris&#233; N&#176;3400933521134</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Lacrigel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Tronothane</td>
			<td style="width:161px;">Lisa Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" rowspan="2" style="height:40px;width:247px;">GC agar Base</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Conda</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">1106</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human endothelium SFM media</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:161px;">P A A</td>
			<td style="width:119px;">A15-101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human transferrin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3309</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">UEA lectin - rhodamine</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">RL-1062</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H9627</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Eosin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E4009&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylene</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">534056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Equiptment Name</td>
			<td style="width:161px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sober Hand Dermatome</td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Animal housing</td>
			<td style="width:161px;">Innovive</td>
			<td style="width:119px;">M-BTM-C8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Biopsy punch (4 mm)</td>
			<td style="width:161px;">Dominic Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">30737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fast-Prep lysing matrix M tubes</td>
			<td style="width:161px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">116923050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer Green Beads</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358941001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358976001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vectashield mounting media</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vetbond</td>
			<td style="width:161px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Glue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">OCT tissue tek</td>
			<td style="width:161px;">Sakura</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature

यह मानव रक्त प्रवाह में प्रवेश करती है जब नेइसेरिया meningitidis एक गंभीर, अक्सर घातक पूति का कारण बनता है. संक्रमण संवहनी रिसाव, शीतादि संबंधी चकत्ते और अंतिम ऊतक परिगलन के विकास में जिसके परिणामस्वरूप रक्त वाहिकाओं की व्यापक क्षति की ओर जाता है. इस संक्रमण के रोगजनन के अध्ययन के पहले से vivo मॉडल में कठिन बना देता है जो बैक्टीरिया के मानव विशिष्टता, द्वारा सीमित था. इस प्रोटोकॉल में, हम मानव त्वचा, चमड़े का microvessels युक्त, immunocompromised चूहों पर grafted है जिसमें इस संक्रमण के लिए एक humanized मॉडल का वर्णन. उनके मानव विशेषताओं को बनाए रखते हुए इन जहाजों माउस संचलन के साथ दो भागों का आपस में मिलाना. एक बार जब यह मॉडल, एन में पेश meningitidis व्यापक संवहनी नुकसान, सूजन और शीतादि संबंधी दाने के कुछ मामलों में विकास है, जिसके परिणामस्वरूप मानव वाहिकाओं के लिए विशेष रूप से पालन करें. इस प्रोटोकॉल Conte में इस मॉडल की ग्राफ्टिंग, संक्रमण और मूल्यांकन चरणों का वर्णनएन के xt meningitidis संक्रमण. तकनीक में रक्त प्रवाह को संक्रमित कि कई मानव विशिष्ट रोगजनकों के लिए लागू किया जा सकता है.

CFU मायने रखता है एन इन प्रतिनिधि परिणामों में इस्तेमाल किया meningitidis तनाव एन है , OPC - - PilC1 + / PilC2 + 20 meningitidis 8013 क्लोन 12, एक सेरोग्रुप सी नैदानिक ​​अलग, मैं एस.बी. pilin, ओपा एक वर्ग व्यक्त. तनाव एक गुणसूत्र प्रविष्टि 18 से हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) व्यक्त करने के लिए अंजाम दिया गया था. बैक्टीरियल कॉलोनी बनाने इकाई मायने रखता है अगर प्लेटों पर कालोनियों की संख्या की गणना और रक्त की CFU / एमएल या चढ़ाया जाना जाता संस्करणों से ऊतक के CFU / मिलीग्राम या तो गणना के द्वारा स्थापित कर रहे हैं. खून की गिनती 5 मिनट 10 6 CFU बैक्टीरिया के चतुर्थ इंजेक्शन के बाद रक्त में घूम 1.5 x 10 5 CFU / एमएल के एक औसत (चित्रा 1 ए) वहाँ था कि पता चला है. 6 घंटे के बाद मायने रखता 4.8 x 10 4 CFU / एमएल औसत. 24 घंटा तक औसत मायने रखता 4 CFU / एमएल x 10 2.4 थे लेकिन 10 चूहों के इस समूह में, 5 पड़ाकोई detectable अन्य 5 अपेक्षाकृत अधिक मायने रखता है (चित्रा 1 ए) था, जबकि बैक्टीरिया परिसंचारी. त्वचा के नमूनों से लिया CFU मायने रखता चूहों 2.1 x 10 4 CFU 6 घंटा में ऊतक के / मिलीग्राम और 24 घंटे में ऊतक के 4.4 x 10 2 CFU / मिलीग्राम (चित्रा 1 बी) के औसत, मानव त्वचा में काफी मायने रखता होने के बहुमत दिखाने . contralateral माउस त्वचा के नमूने एन के लिए मजबूत वरीयता का प्रदर्शन, 24 घंटा और 6 घंटा में ही एक बहुत ही कम संख्या में कोई जीवाणु गिनती से पता चला grafted त्वचा (चित्रा 1 बी) में मानव वाहिकाओं को meningitidis. सामान्य में जीवाणु गिनती 2 जानवरों वे उच्च बैक्टीरियल संख्या (चित्रा 1C) परिसंचारी के साथ सहसंबद्ध के रूप में, खून के संक्रमण के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है जो शो में गिना जाता था हालांकि जांचा अन्य अंगों में nondetectable के लिए बहुत कम थे. मॉडल भी प्रकार चतुर्थ पीआई उदाहरण के लिए, विवो में विषैलापन कारकों की भूमिका निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैली. परिभाषित TFP कमी तनाव में जिसके परिणामस्वरूप pilD जीन 21 में म्यूटेशन, साथ ही प्रस्तावित TFP &#39;adhesin&#39; की कमी pilC1 जीन 8, साथ जीवाणु उपभेदों मॉडल में पेश किया गया. ये परिवर्तन TFP विवो (चित्रा -1) में आसंजन में खेल रहा है महत्वपूर्ण भूमिका की पुष्टि, मानव त्वचा भ्रष्टाचार में कोई बैक्टीरियल आसंजन में हुई. Immunohistochemistry / प्रोटोकॉल इन प्रयोगों में हम एन इस्तेमाल किया माध्यमिक धुंधला के लिए आवश्यकता के बिना फ्लोरोसेंट का पता लगाने के लिए सक्षम करने के लिए हरी प्रतिदीप्ति प्रोटीन (GFP) व्यक्त कि meningitidis उपभेदों. मानव वाहिकाओं, मानव endothelium के लिए एक मार्कर का उपयोग कर या तो CD31 (PECAM -1) या लेक्टिन Ulex europaeus agglutinin (UEA) 18,22 दाग रहे थे. UEA एक कदम धुंधला (आंकड़े 2A सी) की अनुमति rhodamine संयुग्मित किया गया था. सेल नाभिक दाग जा सकता हैDAPI के साथ एड ऊतक संरचनाओं (आंकड़े 2A बी) की पहचान में मदद करने के लिए. प्रोटोकॉल एक मानक hematoxylin / eosin धुंधला उपयोग किया गया था. त्वचा की एपिडर्मल / त्वचीय सीमा स्पष्ट रूप से पहचान योग्य था. सूजन, घनास्त्रता और संवहनी रिसाव संक्रमण (चित्रा 2 डी) के बाद यह सीमा 24 घंटा के करीब जहाजों के लिए ध्यान केंद्रित किया गया. घनास्त्रता अक्सर भीड़ और सूजन के साथ कई छोटे त्वचीय वाहिकाओं में दिखाई दे रहा था. ऊतकों में बाहर लाल रक्त कोशिकाओं के रिसाव वाहिनियों को नुकसान का एक व्यापक स्तर का संकेत है, देखा जा सकता है. noninfected चूहों में grafted त्वचा की ऊतकविकृतिविज्ञानी कोई अलग पहचाना सूजन 18 के साथ सामान्य दिखाई दिया. संक्रमण के बारे में 30% में त्वचा में बैक्टीरियल आसंजन macroscopically detectable चित्तिता (आंकड़े 2 ई और 2 एफ) का विकास होता है. <img alt="चित्रा 1" fo:content-width=<html> Src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot; /&gt;: के लिए &quot;5in&quot; चित्रा 1. CFU मायने रखता है. (ए) के 5 मिनट, 6 घंटा, और 24 घंटे के बाद संक्रमण पर रक्त की मिलीलीटर प्रति बैक्टीरियल CFU मायने रखता है. (बी) बैक्टीरियल CFU 6 घंटा और 24 घंटे के बाद संक्रमण दोनों में मानव त्वचा (एचएस) और माउस त्वचा (एमएस) की तुलना त्वचा के नमूनों से गिना जाता है. (सी) बैक्टीरियल CFU अन्य अंगों 24 घंटा बाद संक्रमण लिया से गिना जाता है. जंगली प्रकार एन से संक्रमित चूहों से 24 घंटे के बाद संक्रमण पर लिया मानव और माउस त्वचा के नमूनों से जीवाणु CFU मायने रखता मुकाबले (डी) meningitidis 2C43 दाग (WT), pilD जीन (pilD) या pilC1 जीन (pilC1) में एक परिवर्तन के साथ एक तनाव में एक परिवर्तन के साथ एक तनाव. सभी रेखांकन औसत के साथ कच्चे डेटा के रूप में दिखाया गया है. चित्रा Melican एट अल. 18 से संशोधित किया गया है&quot;_blank&quot;&gt; बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें. <img alt="चित्रा 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> चित्रा 2. त्वचीय (डी) एपिडर्मल (ई) की सीमा के करीब UEA लेक्टिन (लाल) के साथ दाग एक मानव microvessel दिखा एक confocal ढेर के माइक्रोस्कोपी. (ए) प्रोजेक्शन. पोत एन से संक्रमित है meningitidis (हरा) 2 घंटा बाद संक्रमण. (बी) एक ऑप्टिकल टुकड़ा और एन दिखा एक टुकड़ा प्रक्षेपण (सी) meningitidis microcolonies (हरा) संक्रमण एक मानव पोत (UEA - लाल) एक त्वचा भ्रष्टाचार 2 घंटा के बाद संक्रमण के भीतर. मानव त्वचा भ्रष्टाचार की (डी) Haematoxylin / eosin धुंधला एन के साथ 24 घंटे के लिए संक्रमित meningitidis. एपिडर्मल (ई), त्वचीय (डी) की सीमा स्पष्ट रूप से दिखाई और व्यापक घनास्त्रता और microvess की भीड़ हैएल्स (तीर) dermis में देखा जाता है. सूजन और कुछ संवहनी रिसाव (Arrowhead) भी पहचाना जा सकता है. (ई) पूर्व संक्रमण के लिए मानव त्वचा भ्रष्टाचार. (एफ) एन के साथ (ई) 24 घंटे के बाद संक्रमण के रूप में ही त्वचा भ्रष्टाचार शीतादि संबंधी क्षेत्रों (तीर) दिखा meningitidis. 2 बी, 2 डी, 2 ई, और 2 एफ Melican एट अल. 18 से संशोधित कर रहे आंकड़े <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें</a> .

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Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

नेइसेरिया meningitidis रक्त वाहिकाओं को संक्रमित करता है कि एक मानव विशिष्ट रोगज़नक़ है. इस प्रोटोकॉल में मानव microvessels immunocompromised चूहों पर मानव त्वचा कलम बांधने का काम करके एक चूहे में पेश कर रहे हैं. जीवाणु आमतौर पर मानव मामलों में मनाया शीतादि संबंधी दाने के संवहनी नुकसान और विकास के लिए अग्रणी मानव वाहिकाओं के लिए बड़े पैमाने पर कायम रहें.

Humanized माउस मॉडल microvasculature लक्ष्य निर्धारण जीवाणु संक्रमण का अध्ययन करने के लिए

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

चूहे में छवि बैक्टीरियल संक्रमणों के लिए luciferase का उपयोग

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

बैक्टीरियल आसंजन के अध्ययन में कतरें तनाव का परिचय

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

एक स्टेम सेल आधारित जीन थेरेपी ट्यूमर मॉडल के रूप में बीएलटी humanized माउस का प्रयोग

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

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प्राकृतिक ट्रांसमिशन पर क्षय रोग मलेरिया coinfection अध्ययन करने के लिए एक प्रयोगात्मक मॉडल माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग और प्लाज्मोडियम berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

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जनरेशन और मल्टी-प्ररूपी उच्च सामग्री स्क्रीनिंग<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon म्यूटेंट

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

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इन विट्रो में और vivo मॉडल में पोत दीवार के नीचे प्रवाह की स्थिति के लिए बैक्टीरियल आसंजन अध्ययन करने के लिए

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

मानव अपरा और decidual अंग संस्कृतियों मातृ-भ्रूण इंटरफेस पर संक्रमण का अध्ययन करने के लिए

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

विधियों का अध्ययन करने के लिए न्यूट्रोफिल में लिपिड बदलाव और न्युट्रोफिल कोशिकी जाल के बाद के गठन

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

WinCF मॉडल - एक बलगम का एक सस्ता और विनयशील मनुष्य का सूक्ष्म दर्शन फेफड़े संक्रमण के सूक्ष्म जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए bronchiole प्लग

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

मानवीय मंजूरी/SCID/IL2rγअशक्त (हू-एनएसजी) एचआईवी प्रतिकृति और विलंबता अध्ययन के लिए माउस मॉडल

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...