Name: highly resolved intravital striped-illumination microscopy of germinal centers
Uploaded: 2014-04-09T21:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers at JoVE.com

Nous remercions R. Heintzmann pour des discussions fructueuses lors de l&#39;élaboration de l&#39;approche-éclairage rayé, K. et A. Rajewsky Haberman pour fournir des souris transgéniques C57BL / 6 B1-8 GFP. Nous reconnaissons la Deutsche Forschungsgemeinschaft sous subvention NI1167/3-1 (RN), HA5354/4-1 et SFB633, A15 du projet (à AEH), la Charité sous-subvention Rahel Hirsch bourse (RN) pour le soutien financier. Nous reconnaissons en particulier le réseau JIMI pour des discussions fructueuses et soutien aux infrastructures

Configuration multi-faisceaux pour Striped-éclairage TPLSM Le montage utilisé ici est un multi-faisceaux à deux photons laser à balayage microscope spécialisé, tel que décrit précédemment 6,20. Le système est illustré sur la figure 1. L&#39;approche peut être appliquée à d&#39;autres microscopes à balayage laser à deux photons, qui sont capables de synchroniser l&#39;acquisition de la caméra avec le mouvement des miroirs de galvoscanner, même si el...

<ol>
	<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Siffrin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+partially+reversible+th17+cell-induced+neuronal+dysfunction+in+the+course+of+encephalomyelitis.">In vivo imaging of partially reversible th17 cell-induced neuronal dysfunction in the course of encephalomyelitis.</a> Immunity. 33 (3), 424-436 (2010).</li><li>Esplugues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Th17+cells+occurs+in+the+small+intestine.">Control of Th17 cells occurs in the small intestine.</a> Nature. 475 (7357), 514-518 (2011).</li><li>Hauser, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+germinal-center+B+cell+migration+in+vivo+reveals+predominant+intrazonal+circulation+patterns.">Definition of germinal-center B cell migration in vivo reveals predominant intrazonal circulation patterns.</a> Immunity. 26 (5), 655-667 (2007).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li><li>Herz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+two-photon+intravital+microscopy+to+the+infrared+by+means+of+optical+parametric+oscillator.">Expanding two-photon intravital microscopy to the infrared by means of optical parametric oscillator.</a> Biophys. J. 98 (4), 715-723 (2010).</li><li>Hell, S. W., Rittweger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy:+Light+from+the+dark.">Microscopy: Light from the dark.</a> Nature. 461 (7267), 1069-1070 (2009).</li><li>Ding, J. B., Takasaki, K. T., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraresolution+imaging+in+brain+slices+using+stimulated-emission+depletion+two-photon+laser+scanning+microscopy.">Supraresolution imaging in brain slices using stimulated-emission depletion two-photon laser scanning microscopy.</a> Neuron. 63 (4), 429-437 (2009).</li><li>Bianchini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-wavelength+two-photon+excitation+-+stimulated+emission+depletion+(SW2PE-STED)+super-resolution+imaging.">Single-wavelength two-photon excitation - stimulated emission depletion (SW2PE-STED) super-resolution imaging.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (17), 6390-6393 (2012).</li><li>Berning, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscopy+in+a+living+mouse+brain.">Nanoscopy in a living mouse brain.</a> Science. 335 (6068), 551 (2012).</li><li>York, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+doubling+in+live,+multicellular+organisms+via+multifocal+structured+illumination+microscopy.">Resolution doubling in live, multicellular organisms via multifocal structured illumination microscopy.</a> Nat. Methods. 9, 749-754 (2012).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advanced optical imaging. , (2001).</li><li>Cha, J. W., Ballesta, J., So, P. T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shack-Hartmann-wave+front-sensor-based+adaptive+optics+system+for+multi-photon+microscopy.">Shack-Hartmann-wave front-sensor-based adaptive optics system for multi-photon microscopy.</a> J. Biomed. Opt. 15 (4), (2010).</li><li>Booth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+in+microscopy.">Adaptive optics in microscopy.</a> Phil. Trans. R. Soc. A. 365, 2829-2843 (2007).</li><li>Niesner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+single+and+multibeam+two-photon+microscopy+for+high-resolution+and+high-speed+deep+tissue+and+intravital+imaging.">The power of single and multibeam two-photon microscopy for high-resolution and high-speed deep tissue and intravital imaging.</a> Biophys. J. 93 (7), 2519-2529 (2007).</li><li>R&#252;ckel, M., Mack-Bucher, J. A., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+wave-front+correction+in+TPM+using+coherence-gated+wave-front+sensing.">Adaptive wave-front correction in TPM using coherence-gated wave-front sensing.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 17137-17142 (2006).</li><li>Tang, J., Germain, R. N., Cui, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superpenetration+optical+microscopy+by+iterative+multiphoton+adaptive+compensation+technique.">Superpenetration optical microscopy by iterative multiphoton adaptive compensation technique.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109 (22), 8434-8439 (2012).</li><li>Ji, N., Milkie, D. E., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+via+pupil+segmentation+for+high+resolution+imaging+in+biological+tissues.">Adaptive optics via pupil segmentation for high resolution imaging in biological tissues.</a> Nat. Methods. 7, 141-147 (2009).</li><li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+laser+scanning+microscopy+through+spatiotemporal+modulation.">Super-resolution laser scanning microscopy through spatiotemporal modulation.</a> Nano Lett. 9 (11), 3883-3889 (2009).</li><li>Andresen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+intravital+microscopy.">High-resolution intravital microscopy.</a> PLoS ONE. 7 (12), (2012).</li><li>Debarre, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+for+structured-illumination.">Adaptive optics for structured-illumination.</a> Opt. Exp. 16 (13), 9290-9305 (2008).</li></ol>

Le but de l&#39;imagerie optique intravitale est de visualiser dynamiquement et fonctionnellement la motilité cellulaire et interactions pour comprendre le tissu et la fonction des organes en santé et la maladie 5. La technologie la plus puissante pour ce faire, multi-photons laser microscopie, doit encore surmonter les limitations liées à la vague distorsions avant, la diffusion, l&#39;acquisition lente, photoblanchiment et le photovieillissement, qui limitent la résolution spatiale, le contraste ainsi ...

Deux photons laser microscopie (TPLSM), avec ses avantages pour l&#39;imagerie des tissus profonds liés à infrarouge ultra-courte excitation pulsée 1, a révolutionné notre point de vue sur les processus vitaux sur un seul niveau cellulaire en révélant la motilité et l&#39;interaction de divers modèles sous-ensembles de cellules dans des animaux vivants 5.2. Cependant, la technologie actuelle est encore insuffisant pour élucider les mécanismes de fonctionnement des organes et le dysfonctionnement comme une condition préalable pour le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques, car il ne rend rares informations sur les bases moléculaires de la réponse cellulaire dans les tissus de la santé et de la maladie. La technologie actuelle permet seulement une fenêtre spatiale de quelques centaines de microns en raison de la dispersion des vagues et des effets de distorsion de front sur ​​la résolution spatiale et rapport signal à bruit de 6, ce qui est particulièrement évident dans le tissu très compact d&#39;animaux adultes. Ces vagues de diffusion et des effets de distorsion avant sont dues à une une très hétérogènesd la distribution anisotrope de l&#39;indice de réfraction dans le tissu, ce qui conduit dans une première étape à une dégradation de la résolution spatiale dépend de la profondeur en 3D, et enfin à la perte totale du signal provenant de photons d&#39;excitation balistiques, à savoir la perte de rapport signal à bruit. En termes de bioscientifiques et les applications biomédicales des tissus profonds, cela signifie que la technologie actuelle n&#39;est pas en mesure de révéler sans équivoque communication cellulaire parce que la mauvaise résolution entraîner des interactions faussement positifs alors que la diminution de rapport signal-sur-bruit causerait le système de négliger certains interactions entre les structures sombres. Afin de détecter sans équivoque interactions cellulaires de façon dynamique, une résolution spatiale très améliorée est nécessaire profond dans le tissu. Les techniques de nanoscopie puissants actuellement introduites sur la base d&#39;algorithmes numériques spéciaux, par exemple des approches structure éclairage, sur l&#39;épuisement du premier état ​​excité, par exemple </em&gt; STED, RESOLFT, ou sur la localisation molécule, par exemple dSTORM, PALM, ont trouvé de nombreuses applications dans les cellules fixes ainsi que dans des cultures de cellules vivantes 7. Toutefois, afin d&#39;étendre ces applications à des coupes de tissus, des tissus vivants et organismes que nous avons encore besoin de surmonter les difficultés techniques graves. Excitation à deux photons STED avec différentes longueurs d&#39;onde, ainsi que d&#39;une seule longueur d&#39;onde (sw2PE-STED) pour l&#39;excitation et l&#39;émission stimulée a été appliquée pour améliorer la résolution latérale dans des tranches de cerveau 8 ou dans des matrices artificielles à cellules incluses 9, respectivement, dans le même résolution axiale comme TPLSM standard. Utilisation d&#39;un photon STED, la dynamique des épines dendritiques peuvent être imagées à la surface du cortex cérébral (jusqu&#39;à 10 à 15 um de profondeur) dans une souris vivante Thy1 EGFP à une résolution de 67 nm 10. Un outil polyvalent pour la biologie du développement est fourni par la microscopie structuré-éclairage multifocale, qui fournit deux fois améliorée 2Drésolution. Cependant, cette technique peut être utilisée que dans les organismes avec une faible propension de diffusion de la lumière tels que des embryons de poisson zèbre 11. Cependant, aucune de ces techniques peut être appliquée dans le tissu très diffusant des animaux adultes à plusieurs centaines de micromètres, qui sont cruciales pour les modèles de la recherche biomédicale et clinique des maladies avec la survenue après la naissance. Indépendant de l&#39;approximation utilisée pour calculer la forme de l&#39;avant onde limitée par la diffraction, c&#39;est à dire la fonction d&#39;étalement de point (PSF), après focalisation par une lentille, la largeur de la PSF long de l&#39;axe optique (résolution axiale) est au moins trois fois plus grande que la largeur de la PSF perpendiculaire à l&#39;axe optique (résolution latérale) 12. Déformations de l&#39;onde avant d&#39;ordres différents quantifiés par les coefficients de Zernike modifier considérablement la forme du front d&#39;onde de l&#39;onde électromagnétique concentré dans l&#39;imagerie des tissus profonds menant à beaucoup plus PSF, en particulier le long de la fibreal axe 13-15. Par conséquent, à la fois les lois de la diffraction et les effets de distorsion de front d&#39;onde point à la résolution le long de l&#39;axe optique que le facteur limitant dans l&#39;imagerie des tissus profonds. Considérant que des techniques nanoscopie concentrent sur la lutte contre les limites de la diffraction seulement, une technologie qui améliore la résolution axiale et le contraste en compensant à la fois la diffraction et les effets de distorsion de front d&#39;onde est nécessaire pour intravitale imagerie à haute résolution. Idéalement, cette technique devrait également être suffisamment rapide pour permettre un suivi de la dynamique cellulaire. La correction en temps réel des aberrations PSF et la perte de contraste à l&#39;aide de l&#39;optique adaptative dans TPLSM a été largement étudié et amélioré dans la dernière décennie 13,14,16-18 et il est donc le meilleur choix actuellement disponibles conduisant à une meilleure gestion de l&#39;excitation balistique photons 14. Cependant, en raison du fait que la plupart des vagues avant correction approches utilisées en optique adaptative sont itérative et qu&#39;ils have être répété pour les petites surfaces (quelques 10 x 10 um 2) en raison de la forte hétérogénéité de l&#39;indice de réfraction dans le tissu, la vitesse d&#39;acquisition est significativement plus faible que nécessaire pour la motilité cellulaire et la communication d&#39;image. En outre, la limite physique en optique adaptative améliorée TPLSM est toujours déterminée par diffraction. Modulation spatiale de l&#39;illumination (SPIN) et modulation temporelle sur le côté de détection (SPADE) ont été théoriquement proposé à appliquer à la microscopie à balayage laser pour améliorer la résolution. Leur application pratique dans l&#39;imagerie intravitale reste encore à être démontrée 19. Dans l&#39;ensemble, il ya une forte demande pour le développement de technologies qui améliorent la résolution pour l&#39;imagerie des tissus profonds chez les animaux adultes vivant. Dans ce travail, nous obtenons la modulation spatiale du motif d&#39;excitation en commandant le processus de balayage à faisceaux multiples rayé-illumination multi-photons laser-smicroscopie de la conserve (Mo-SI-MPLSM) 20. Contrairement aux approches d&#39;éclairage structuré, dans lequel la section d&#39;excitation transversale du faisceau est modulé spatialement, on utilise seulement le processus de balayage pour réaliser la modulation spatiale de l&#39;excitation. En élargissant l&#39;excitation à une longueur d&#39;onde plus, nous sommes en mesure d&#39;améliorer à la fois la résolution spatiale et le rapport signal-sur-bruit dans les tissus profonds de haute diffusion tissulaire (par exemple des ganglions lymphatiques, chemin libre diffusion 47 um 6), indépendamment de l&#39;optique signal non-linéaire nous détectons, par exemple fluorescence, génération de second harmonique ou autre fréquence mélange phénomène. En utilisant cette approche à des longueurs d&#39;onde d&#39;excitation à 900 nm, nous sommes en mesure de façon dynamique l&#39;image des structures de protéines cellulaires à l&#39;échelle de quelques molécules dans les centres germinaux des ganglions lymphatiques de souris. Ainsi, on peut mieux visualiser l&#39;interaction entre les unités de support d&#39;antigène sur la surface des cellules dendritiques folliculaires et les cellules B dans le processus de palpage contre lagen au cours de la réponse immunitaire dans les organes lymphoïdes secondaires.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="600">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">ATTO590 &#8211; NSH for coupling</td>
			<td style="width:99px;">ATTO Tec, Germany</td>
			<td style="width:119px;">AD-590-35</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">CD21/35 &#8211; Fab fragment &#8211; ATTO590</td>
			<td style="width:99px;">DRFZ, Berlin</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">The coupling reaction was performed in the central lab of our institution.</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">B1-8 Jk-/- EGFP+</td>
			<td style="width:99px;">Prof. Anne Habermann, Yale Univ., CA, US</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">Can be also found at Jackson Laboratories (JAX).</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">EasySep Negative Selection Mouse B Cell Enrichment&#160;</td>
			<td style="width:99px;">StemmCell Technologies, Germany</td>
			<td style="width:119px;">19854</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Polystyren beads (605), 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:99px;">Life Technologies, Germany</td>
			<td style="width:119px;">F8803</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:99px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">TriMScope I</td>
			<td style="width:99px;">LaVision Biotec, Bielefeld, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">OPO (manual version)</td>
			<td style="width:99px;">APE, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Ti:Sa Laser Chameleon Ultra II</td>
			<td style="width:99px;">Coherent, Duisburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">water-immersion objective lens, 20x, NA 0.95, IR, WD 2 mm</td>
			<td style="width:99px;">Olympus Germany, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly resolved intravital striped-illumination microscopy of germinal centers

Suivi communication cellulaire par intravitale profond des tissus multi-microscopie biphotonique est la clé pour comprendre le destin des cellules immunitaires dans les échantillons de tissus et d&#39;organes d&#39;épaisseur dans la santé et la maladie. En contrôlant le motif de balayage dans la microscopie multi-photons et en appliquant des algorithmes numériques appropriés, nous avons développé une approche rayé-illumination, ce qui nous a permis d&#39;atteindre trois fois meilleure résolution axiale et une amélioration de rapport signal sur bruit, c&#39;est à dire l&#39;inverse, en plus de profondeur de 100 um de tissu dans le tissu des organes lymphoïdes haute diffusion par rapport à la microscopie multi-photons standard. La vitesse d&#39;acquisition ainsi que photoblanchiment et le photovieillissement effets sont similaires à la technique à base de photo-multiplicateur-standard, tandis que la profondeur d&#39;imagerie a été légèrement inférieure en raison de l&#39;utilisation de détecteurs de champ. En utilisant l&#39;approche-éclairage rayé, nous sommes en mesure d&#39;observer la dynamique des dépôts de complexes immuns sur les cellules dendritiques folliculaires secondaires ̵1; au niveau de quelques molécules de protéines dans les centres germinatifs.

La résolution spatiale dans les ganglions lymphatiques Les dimensions de la fonction d&#39;étalement de point efficace (EPSF) correspondent à la résolution spatiale d&#39;un microscope 12. Nous avons mesuré la fonction tridimensionnelle en acquérant le signal de deuxième génération d&#39;harmoniques de fibres de collagène dans les ganglions lymphatiques par notre MB-SI-TPLSM par rapport à l&#39;établis des techniques de microscopie à balayage laser à deux photons, c...

Watch this Scientific Journal Video about Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers at JoVE.com

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Très Résolu microscopie intravitale Striped-éclairage de centres germinaux

Haute résolution intravitale imagerie avec un contraste accru jusqu&#39;à 120 um de profondeur dans les ganglions lymphatiques de la souris adulte est obtenue en modulant spatialement le modèle d&#39;excitation d&#39;un multi-focal microscope à deux photons. En 100 profondeur pm nous avons mesuré des résolutions de 487 nm (latéraux) et 551 nm (axial), contournant ainsi les limites de diffusion et de diffraction.

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Microscopie intravitale du ganglion lymphatique inguinal

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Recherche

Immunologie et infection

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

Suivi des rampants neutrophiles intraluminale, migration trans et le chimiotactisme dans les tissus par microscopie intravitale Vidéo

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Imagerie intravitale du Thymus souris utilisant la 2-microscopie biphotonique

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Microscopie intravitale de la rate: Analyse quantitative de la mobilité des parasites et la circulation sanguine

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Microscopie intravitale imagerie du foie suivante<em&gt; Leishmania</em&gt; Infection: Une évaluation de l&#39;hémodynamique hépatiques

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Interactions Microscopie intravitale des leucocytes endothéliaux et plaquettes-leucocytes dans mésentériques veines chez les souris

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Imagerie neutrophiles et des monocytes dans les veines mésentérique par Microscopie intravitale sur des souris anesthésiées en temps réel

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Swab Méthode d&#39;échantillonnage pour la détection des norovirus humains sur les surfaces

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

Préparation du murin des glandes salivaires sous-maxillaires pour la microscopie intravitale verticale

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Imagerie cellulaire Interaction dans la muqueuse trachéale au cours de l’infection par le Virus grippal à l’aide de la microscopie intravitale biphotonique

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...