Name: highly resolved intravital striped-illumination microscopy of germinal centers
Uploaded: 2014-04-09T21:20:00
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Wir danken R. Heintzmann für fruchtbare Diskussionen während der Entwicklung des Streifenbeleuchtung Ansatz, K. Rajewsky und A. Habermann für die Bereitstellung von C57BL / 6 B1-8-GFP-transgenen Mäusen. Wir erkennen die Deutsche Forschungsgemeinschaft unter dem Förder NI1167/3-1 (RN), HA5354/4-1 und SFB633, Projekt-A15 (zum AEH), die Charité unter Gewährung Rahel-Hirsch-Stipendium (RN) für die finanzielle Unterstützung. Wir erkennen insbesondere die Netzwerk JIMI für fruchtbare Diskussionen und infrastrukturelle Unterstützung

Mehrstrahl-Einrichtung für Striped-Beleuchtung TPLSM Das hier verwendete Aufbau ist eine Mehrfachstrahl Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskops, wie oben beschrieben 6,20. Das System ist in Fig. 1 dargestellt. Der Ansatz kann auch für andere Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskope, die in der Lage Kameraerfassung mit der Bewegung der galvanometrischen Spiegel synchronisiert sind, auch wenn sie nur in der Lage, Einzelstrahlabtastung durchzuführen sind, angewendet ...

<ol>
	<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Siffrin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+partially+reversible+th17+cell-induced+neuronal+dysfunction+in+the+course+of+encephalomyelitis.">In vivo imaging of partially reversible th17 cell-induced neuronal dysfunction in the course of encephalomyelitis.</a> Immunity. 33 (3), 424-436 (2010).</li><li>Esplugues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Th17+cells+occurs+in+the+small+intestine.">Control of Th17 cells occurs in the small intestine.</a> Nature. 475 (7357), 514-518 (2011).</li><li>Hauser, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+germinal-center+B+cell+migration+in+vivo+reveals+predominant+intrazonal+circulation+patterns.">Definition of germinal-center B cell migration in vivo reveals predominant intrazonal circulation patterns.</a> Immunity. 26 (5), 655-667 (2007).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li><li>Herz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+two-photon+intravital+microscopy+to+the+infrared+by+means+of+optical+parametric+oscillator.">Expanding two-photon intravital microscopy to the infrared by means of optical parametric oscillator.</a> Biophys. J. 98 (4), 715-723 (2010).</li><li>Hell, S. W., Rittweger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy:+Light+from+the+dark.">Microscopy: Light from the dark.</a> Nature. 461 (7267), 1069-1070 (2009).</li><li>Ding, J. B., Takasaki, K. T., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraresolution+imaging+in+brain+slices+using+stimulated-emission+depletion+two-photon+laser+scanning+microscopy.">Supraresolution imaging in brain slices using stimulated-emission depletion two-photon laser scanning microscopy.</a> Neuron. 63 (4), 429-437 (2009).</li><li>Bianchini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-wavelength+two-photon+excitation+-+stimulated+emission+depletion+(SW2PE-STED)+super-resolution+imaging.">Single-wavelength two-photon excitation - stimulated emission depletion (SW2PE-STED) super-resolution imaging.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (17), 6390-6393 (2012).</li><li>Berning, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscopy+in+a+living+mouse+brain.">Nanoscopy in a living mouse brain.</a> Science. 335 (6068), 551 (2012).</li><li>York, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+doubling+in+live,+multicellular+organisms+via+multifocal+structured+illumination+microscopy.">Resolution doubling in live, multicellular organisms via multifocal structured illumination microscopy.</a> Nat. Methods. 9, 749-754 (2012).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advanced optical imaging. , (2001).</li><li>Cha, J. W., Ballesta, J., So, P. T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shack-Hartmann-wave+front-sensor-based+adaptive+optics+system+for+multi-photon+microscopy.">Shack-Hartmann-wave front-sensor-based adaptive optics system for multi-photon microscopy.</a> J. Biomed. Opt. 15 (4), (2010).</li><li>Booth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+in+microscopy.">Adaptive optics in microscopy.</a> Phil. Trans. R. Soc. A. 365, 2829-2843 (2007).</li><li>Niesner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+single+and+multibeam+two-photon+microscopy+for+high-resolution+and+high-speed+deep+tissue+and+intravital+imaging.">The power of single and multibeam two-photon microscopy for high-resolution and high-speed deep tissue and intravital imaging.</a> Biophys. J. 93 (7), 2519-2529 (2007).</li><li>R&#252;ckel, M., Mack-Bucher, J. A., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+wave-front+correction+in+TPM+using+coherence-gated+wave-front+sensing.">Adaptive wave-front correction in TPM using coherence-gated wave-front sensing.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 17137-17142 (2006).</li><li>Tang, J., Germain, R. N., Cui, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superpenetration+optical+microscopy+by+iterative+multiphoton+adaptive+compensation+technique.">Superpenetration optical microscopy by iterative multiphoton adaptive compensation technique.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109 (22), 8434-8439 (2012).</li><li>Ji, N., Milkie, D. E., Betzig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+via+pupil+segmentation+for+high+resolution+imaging+in+biological+tissues.">Adaptive optics via pupil segmentation for high resolution imaging in biological tissues.</a> Nat. Methods. 7, 141-147 (2009).</li><li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+laser+scanning+microscopy+through+spatiotemporal+modulation.">Super-resolution laser scanning microscopy through spatiotemporal modulation.</a> Nano Lett. 9 (11), 3883-3889 (2009).</li><li>Andresen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+intravital+microscopy.">High-resolution intravital microscopy.</a> PLoS ONE. 7 (12), (2012).</li><li>Debarre, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+optics+for+structured-illumination.">Adaptive optics for structured-illumination.</a> Opt. Exp. 16 (13), 9290-9305 (2008).</li></ol>

Das Ziel der Intravital optische Bildgebung ist es, zelluläre Motilität und Interaktionen, um Gewebe-und Organfunktion in Gesundheit und Krankheit zu verstehen 5 dynamisch und funktional zu visualisieren. Die leistungsstarke Technologie, um diese, Multi-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie zu erreichen, muss noch Einschränkungen in Bezug auf Frontverzerrungen, Streuen, langsam Erwerb, Bleichen und Lichtschäden, die ihre räumliche Auflösung begrenzen Welle überwinden, Kontrast sowie die Zeitauflösung . ...

Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie (TPLSM), mit seinen Vorteilen für die tiefen Gewebe-Bildgebung mit Infrarotultrakurzpulsanregung ein Zusammenhang hat unsere Sicht auf Lebensprozesse auf Einzelzellebene durch die Enthüllung Motilität und Interaktionsmuster der verschiedenen revolutioniert Zell-Untergruppen in lebenden Tieren 05.02. Allerdings ist aktuelle Technik noch nicht ausreichend, um die Mechanismen der Organfunktion und Dysfunktion als Voraussetzung für die Entwicklung neuer therapeutischer Strategien zu klären, da es nur spärliche Informationen über die molekularen Grundlagen der Zellantwort im Gewebe in Gesundheit und Krankheit macht. Die derzeitige Technologie ermöglicht nur eine räumliche Fenster einige hundert Mikrometer aufgrund von Streuung und Wellenfront-Verzerrungseffekte auf die räumliche Auflösung und Signal-zu-Rausch-Verhältnis 6, die in der sehr kompakten Gewebe von erwachsenen Tieren besonders offensichtlich sind. Aufgrund einer sehr heterogenen Diese Streuung und ein Wellenfrontverzerrungseffekte sindd anisotrope Verteilung des Brechungsindex im Gewebe, was in einem ersten Schritt bis zu einer Tiefe abhängige Verschlechterung der 3D-Raumauflösung und schließlich zum völligen Verlust der Signal aus ballistischem Anregungsphotonen, also Verlust des Signal-zu-Rausch-Verhältnis Ursprung. In Bezug auf die biowissenschaftliche und biomedizinische tiefen Gewebe Anwendungen bedeutet dies, dass die aktuelle Technologie ist nicht eindeutig offenbaren zellulären Kommunikation, weil schlechte Auflösung würde zu falsch positiven Wechselwirkungen führen, während die Abnahme des Signal-zu-Rausch-Verhältnis würde dazu führen, das System einige Blick Wechselwirkungen zwischen schwachen Strukturen. Um die zelluläre Interaktionen eindeutig erkennen dynamische Weise wird eine stark verbesserte räumliche Auflösung tief im Gewebe erforderlich. Die aktuell eingeführte leistungsstarke Nanoskopie Techniken, die auf spezielle numerische Algorithmen, wie zB Struktur-Beleuchtung Ansätze, auf Erschöpfung des ersten angeregten Zustand, z. B. </em&gt; STED, RESOLFT oder auf Molekül-Lokalisierung, zB dSTORM, PALM, haben viele Anwendungen in fixierten Zellen als auch in Live-Zellkulturen 7 gefunden. Allerdings, um diese Anwendungen zu Gewebeschnitten, lebendes Gewebe und Organismen erweitern wir müssen noch ernsthafte technische Schwierigkeiten zu überwinden. Zwei-Photonen-Anregung mit unterschiedlichen Wellenlängen als auch mit einer einzigen Wellenlänge (sw2PE-STED) zur Anregung STED und stimulierte Emission wurde angewandt, um die laterale Auflösung in Hirnschnitten 8 oder in künstlichen Matrizen verbessern mit eingebetteten Zellen 9, die jeweils an der gleichen axiale Auflösung als Standard TPLSM. Mit einem STED-Photonen, die Dynamik der dendritischen Dornen konnte an der Oberfläche der Hirnrinde (bis zu 10-15 um Tiefe) in einem lebenden Thy1 EGFP-Maus mit einer Auflösung von 67 nm 10 abgebildet werden. Ein vielseitiges Werkzeug für Entwicklungsbiologie wird von der multifokalen strukturierten Beleuchtung Mikroskopie, die zwei-fach verbesserte 2D bereitstelltAuflösung. Allerdings kann diese Technik nur in Organismen mit einer geringen Neigung der Lichtstreuung wie Zebrafischembryonen 11 verwendet werden. Dennoch kann keine dieser Techniken in der hoch-streuendem Gewebe erwachsener Tiere in mehreren hundert Mikrometern, die entscheidend Modelle für die biomedizinische Forschung und klinische Erkrankungen bei Einsetzen nach der Geburt angewendet werden. Unabhängig von der Näherung verwendet, um den beugungsbegrenzten Wellenfrontform zu berechnen, dh die Punktverteilungsfunktion (PSF), nach der Fokussierung durch eine Linse, mindestens dreimal größer ist als die Breite der PSF entlang der optischen Achse (axialer Auflösung) die PSF Breite senkrecht zu der optischen Achse (laterale Auflösung) 12. Wellenfrontverzerrungen durch verschiedene Aufträge Zernikes Koeffizienten quantifiziert die Wellenfrontform von fokussierten elektromagnetischen Welle in tiefen Gewebe-Bildgebung, die zu viel größeren PSFs, vor allem entlang der optischen erheblich ändernal Achse 13-15. Daher sind sowohl die Beugungs Gesetze und die Wellenfrontverzerrungseffekte verweisen auf die Auflösung entlang der optischen Achse als limitierender Faktor bei tiefen Gewebe-Bildgebung. Während Nanoskopie-Techniken konzentrieren sich auf entgegen die Grenzen der Beugungs nur, eine Technologie, die axiale Auflösung und Kontrast entgegenwirkt sowohl Beugung und Wellenfront-Verzerrungseffekte verbessert wird zur hochauflösenden Intravital Bildgebung notwendig. Idealerweise sollte diese Technik auch schnell genug, um die Überwachung der zellulären Dynamik zu ermöglichen. Die Echtzeit-Korrektur von Aberrationen und PSF Kontrastverlust mit Hilfe der adaptiven Optik in TPLSM wurde ausgiebig untersucht und in den letzten zehn Jahren 13,14,16-18 verbessert und es ist daher die derzeit besten Wahl, die zu einer besseren Verwaltung der ballistischen Erregungs 14 Photonen. Dennoch, aufgrund der Tatsache, dass die meisten Wellenfrontkorrektur Ansätze in der adaptiven Optik verwendet werden, sind iterative und dass sie have für kleine Flächen (einige 10 x 10 &amp;mgr; m 2) aufgrund der hohen Heterogenität des Brechungsindex in Gewebe wiederholt werden, ist die Erfassungsgeschwindigkeit wesentlich geringer als für die Bildgebung Zellmotilität und Kommunikation erforderlich. Darüber hinaus ist die physikalische Grenze in der adaptiven Optik-TPLSM verbessert wird immer noch von Beugung bestimmt. Räumliche Modulation der Beleuchtung (SPIN) und zeitliche Modulation auf der Erfassungsseite (SPADE) wurden theoretisch vorgeschlagen, Laser-Scanning-Mikroskopie eingesetzt, um die Auflösung zu verbessern. Ihre praktische Anwendung in der Intravital Bildgebung noch zu 19 nachgewiesen werden. Zusammengenommen gibt es eine hohe Nachfrage nach der Entwicklung von Technologien, die die Auflösung für die tiefen Gewebe-Bildgebung in lebenden erwachsenen Tieren zu verbessern. In dieser Arbeit erreichen wir räumliche Modulation des Anregungsmusters durch Steuern der Scan-Vorgang in Mehrstrahl-Beleuchtungsstreifen Multi-Photonen-Laser-sKonservenmikroskopie (MB-SI-MPLSM) 20. Im Gegensatz zu strukturierten Beleuchtung Ansätze, in denen die Anregungsstrahlquerschnitt räumlich moduliert ist, verwenden wir nur den Scan-Vorgang, um die räumliche Modulation der Anregung zu erreichen. Mit dem Ausbau der Anregung zu einer längeren Wellenlänge, wir sind in der Lage, sowohl die räumliche Auflösung und Signal-zu-Rausch-Verhältnis im tiefen Gewebe von stark streu Gewebe (z. B. Lymphknoten, frei Streupfad 47 um 6) zu verbessern, unabhängig von der optischen nichtlineare Signal wir erkennen, z. B. Fluoreszenz, Erzeugung der zweiten Harmonischen oder anderen Frequenzmischphänomen. Unter Verwendung dieses Ansatzes bei Anregungswellenlängen bis zu 900 nm sind wir in der Lage, dynamisch Bild zellulären Proteinstrukturen in der Größenordnung von wenigen Molekülen in Keimzentren der Lymphknoten der Maus. So kann man besser die Interaktion zwischen Antigen tragenden Einheiten auf der Oberfläche der follikulären dendritischen Zellen und B-Zellen sichtbar in dem Verfahren zum Testen des Antigen während der Immunantwort in sekundären lymphatischen Organe.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="600">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">ATTO590 &#8211; NSH for coupling</td>
			<td style="width:99px;">ATTO Tec, Germany</td>
			<td style="width:119px;">AD-590-35</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">CD21/35 &#8211; Fab fragment &#8211; ATTO590</td>
			<td style="width:99px;">DRFZ, Berlin</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">The coupling reaction was performed in the central lab of our institution.</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">B1-8 Jk-/- EGFP+</td>
			<td style="width:99px;">Prof. Anne Habermann, Yale Univ., CA, US</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">Can be also found at Jackson Laboratories (JAX).</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">EasySep Negative Selection Mouse B Cell Enrichment&#160;</td>
			<td style="width:99px;">StemmCell Technologies, Germany</td>
			<td style="width:119px;">19854</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Polystyren beads (605), 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:99px;">Life Technologies, Germany</td>
			<td style="width:119px;">F8803</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:99px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">TriMScope I</td>
			<td style="width:99px;">LaVision Biotec, Bielefeld, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">OPO (manual version)</td>
			<td style="width:99px;">APE, Berlin, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Ti:Sa Laser Chameleon Ultra II</td>
			<td style="width:99px;">Coherent, Duisburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">water-immersion objective lens, 20x, NA 0.95, IR, WD 2 mm</td>
			<td style="width:99px;">Olympus Germany, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

highly resolved intravital striped-illumination microscopy of germinal centers

Überwachung zellulären Kommunikation durch Intravital tiefen Gewebe Multi-Photonen-Mikroskopie ist der Schlüssel für das Verständnis, das Schicksal von Immunzellen in dicken Gewebeproben und Organe in Gesundheit und Krankheit. Durch die Steuerung der Scan-Muster in Multi-Photonen-Mikroskopie und Anwendung geeigneter numerischer Algorithmen, eine gestreifte-Beleuchtung Ansatz entwickelten wir, was uns ermöglicht, zu erreichen 3-fach bessere axiale Auflösung und verbesserten Signal-zu-Rausch-Verhältnis, dh dagegen in mehr als 100 &amp;mgr; m Gewebetiefe in stark streu im Vergleich zu Standard-Multi-Photonen-Mikroskopie Gewebe des lymphatischen Organe. Die Aufnahmegeschwindigkeit sowie Bleichen und Lichtschäden Wirkungen waren ähnlich wie Standard-Photo-Multiplier-basierte Technik, während die Bildtiefe etwas geringer durch den Einsatz von Felddetektoren. Durch die Verwendung der Streifenbeleuchtung Ansatz sind wir in der Lage, die Dynamik der Immunkomplex-Ablagerungen auf sekundären follikulären dendritischen Zellen zu beobachten ̵1; auf dem Niveau von einigen Proteinmoleküle in Keimzentren.

Die räumliche Auflösung in Lymphknoten Die Dimensionen der effektiven Punktbildfunktion (epsf) entsprechen der räumlichen Auflösung eines Mikroskops 12. Wir messen diese dreidimensionale Funktion durch den Erwerb der zweiten Harmonischen Generation Signal von Kollagenfasern in Lymphknoten durch unsere MB-SI-TPLSM im Vergleich zu etablierten Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie-Techniken, dh Felderkennung TPLSM (mittels CCD-Kameras) und Punkterkennung TPLSM (mittels P...

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Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Hochaufgelöste Intravitalmikroskopie Striped-Beleuchtung von Keimzentren

Hochauflösende intravitalen Bildgebung mit Kontrastverstärkung von bis zu 120 &amp;mgr; m Tiefe in Lymphknoten von erwachsenen Mäusen durch räumliches Modulieren des Erregungsmusters einer multifokalen Zwei-Photonen-Mikroskop erreicht. In 100 um Tiefe gemessen wir Auflösungen von 487 nm (lateral) und 551 nm (axial) und damit umgehen, Streuung und Beugung Grenzen.

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Research

JoVE Journal

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Intravitalmikroskopie der Leistenbruch Lymph Node

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Forschung

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Tracking-Neutrophil Intraluminale Crawling, transendotheliale Migration und Chemotaxis in Tissue durch Intravital Video-Mikroskopie

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

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Intravital Imaging of the Mouse Thymus mittels 2-Photonen-Mikroskopie

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