Name: preparation of segmented microtubules to study motions driven by the disassembling microtubule ends
Uploaded: 2014-03-15T19:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر FI Ataullakhanov للمساعدة في تصميم وتصنيع الدوائر تدفق قابلة لإعادة الاستخدام، N. داشكيفيتش، N. Gudimchuk وA. Korbalev لتوفير الصور للشخصيات، N. Gudimchuk وP. زاخاروف لوضع بروتوكول وتوفير الكواشف ل إعداد البذور أنيبيب المسمى digoxigenin، A. Potapenko للمساعدة في تحرير النص وغيرها من أعضاء Grishchuk المختبر للحصول على نصائح والمناقشات. وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة منح R01-GM 098389 ومنحة رائدة من معهد بنسلفانيا العضلات لELG، وهو كيميل الباحث، من خلال RFBR يمنح 12-04-00111 واحد، 13 04-40190-H و 13 -04-40188-H، والأكاديمية الروسية للعلوم رئاسة المنح (آليات الأنظمة الجزيئية والتكامل وبيولوجيا الخلية الجزيئية برامج والجزيئية) لFI Ataullakhanov، المعاهد الوطنية للصحة منح R01 GM033787 جنرال موتورز لJR ماكينتوش، وزمالة ما بعد الدكتوراه مؤسسة ديمتري اسرة زيمين ل VAV

المعدات المطلوبة: التجارب الموضحة أدناه تتطلب مجهر الضوء مجهزة لمدينة دبي للإنترنت والتصوير مضان (الجدول 1). ويمكن استخدام حقل مشرق الصمام الإضاءة لتحسين كبير في الكشف عن بذور أنيبيب المرفقة ساترة 37، التي يصعب مراقبة مع مصباح الهالوجين العاد?...

العديد من المقايسات جزيء واحد في الوقت الحاضر تستخدم بشكل روتيني coverslips معاملة خاصة لخفض كبير غير محدد من البروتين الشائكة. الإجراء وصفنا هنا هو تعديل للبروتوكول الأصلي وضعت في مختبر هوارد 32، ونجد أن silanizing لل coverslips تستحق الجهد حتى مع المقايسات حبة مقرها مدينة د?...

وحفظا للغاية ميكروتثبول الهياكل هيكل الخلية التي تعتبر مهمة للهندسة المعمارية الخلوية، حركية الخلية، وانقسام الخلايا، والنقل داخل الخلايا 1. هذه البوليمرات الحيوية التجمع من تويولين في حضور GTP، ويحولون بشكل عفوي بين النمو وتقصير 2. الأنابيب الدقيقة هي رقيقة جدا (فقط 25 نانومتر في القطر) وبالتالي تقنيات بصرية خاصة لتعزيز وينبغي أن تستخدم المقابل لمراقبة الأنابيب الدقيقة مع المجهر الخفيفة. فحص العمل السابق مع هذه البوليمرات سلوكهم الديناميكية باستخدام النقيض تدخل الفرق (DIC) 3. وكشفت هذه الدراسات ومماثلة في المختبر أنه في ظل الظروف التجريبية النموذجية، والأنابيب الدقيقة الخضوع كارثة والتحول إلى التحلل إلا نادرا، مرة واحدة كل 5-15 دقيقة (هذا التردد هو 7-15 ملي تركيز تويولين ذوبان درست في 28-32 درجة مئوية ) 4. وهكذا تم اقتراح تقنيات مختلفة لinducه أنيبيب التحلل في الطريقة التي تسيطر عليها. يمكن أن تسبب أنيبيب تقصير من قبل تجرف تويولين للذوبان 5،6، وقطع الأنابيب الدقيقة مع شعاع ليزر 7، أو باستخدام الأنابيب الدقيقة 8 مجزأة، كما هو موضح هنا. العمل السابق باستخدام الأنابيب الدقيقة مجزأة، فضلا عن البوليمرات التحول عشوائيا، وقد وجدت أن الشحنات داخل الخلايا الصغيرة، مثل الكروموسومات، الحويصلات، وحبات المغلفة البروتين، يمكن ان تتحرك في نهايات الأنابيب الدقيقة تقصير 9-13. ويعتقد أن هذه الظاهرة أن يكون لها تأثير مباشر على الاقتراحات الصبغي في الخلايا الإنقسامية، والآليات الكامنة ويجري حاليا التحقيق نشط 14-16. في الآونة الأخيرة، وتقنيات تستند الفلورسنت، بما في ذلك مجموع مضان انعكاس الداخلي (TIRF) المجهري، وقد استخدمت لدراسة حركية ديناميكية مع أنيبيب ينتهي 17-24. ميزة هذا النهج هو أنه يتيح فحص التفاعلق بين الأنابيب الدقيقة والبروتينات ملزمة أنيبيب في الوقت الحقيقي باستخدام البروتينات المسمى مع fluorophores مختلفة. تم العثور على العديد من المجمعات البروتين لنقل processively مع التمطيط و / أو تقصير نهايات أنيبيب. وتشمل هذه البروتينات المرتبطة أنيبيب Dam1 10،12،18، 19 Ska1، وXMAP215 20، وكذلك المحركات كينيسين Kif18A 21،22، 23 و MCAK CENP-E 24. هذه البروتينات تظهر processive بلاغ تتبع، والتي تختلف اختلافا جوهريا عن ذلك من البروتينات تتبع غيض الكلاسيكية مثل EB1 25. على الرغم من أن جزيئات EB1 والشركاء المرتبطة تظهر أن تظل المرتبطة ثابت مع أنيبيب ديناميكية ينتهي، تبقى الجزيئات الفردية ملزمة لطرف أنيبيب فقط ~ 0.8 ثانية، تبادل بسرعة مع تجمع ذوبان 26. في المقابل، processive بلاغ بتتبع، مثل Dam1، السفر مع أنيبيب تنتهي لكثير من ميكرون، وارتباطهم نصائح أنيبيب يمكن أن تستمر لم<html> أي ثواني. غيض الوقت تكوين الجمعيات، فضلا عن معدل الناتج من تتبع، يعتمد بشدة على عدد من الجزيئات التي تشكل تتبع طرف مجمع 27. الفرق أكبر من البروتين وعادة ما تكون أفضل بكثير بلاغ بتتبع. على سبيل المثال، مثل جمعيات معقدة مثل kinetochores الخميرة يمكن أن تبقى معزولة إلى جانب أنيبيب ينتهي لساعات 28. بعض البروتينات ملزمة أنيبيب، مثل Ndc80 بروتين معقد الحيز الحركي، وقد وجد أن تكون قادرة على تعقب مع أنيبيب ينتهي عند مستوى جزيء واحد، ولكن Ndc80 هي فعالة جدا في اقتران حركة البضائع حبة 19،29-31. وبالتالي، لفهم آلية بلاغ تتبع عن طريق المجمعات البروتين المختلفة، فضلا عن قدرتها على التنوع الأدوار، فمن المهم دراسة بلاغ تتبع بوصفها وظيفة من عدد الجزيئات في مجمع تتبع الحافة، وكذلك لتحديد قدرة هذه المجمعات لعرض الحركة الجماعية على سطح حبة البضائع. &gt; فيما يلي نقدم بروتوكولات وإجراءات تفصيلية لإعداد وإجراء التجارب مع الأنابيب الدقيقة مجزأة (الشكل 1A). أولا، يتم تعديل الشرائح الزجاجية المتاحة تجاريا لأنابيب البولي ايثيلين إرفاق قصيرة (بروتوكول 1). ثم يتم تجميعها وقابلة لإعادة الاستخدام غرفة التدفق المجهري من هذه الشريحة وتنظيفها البلازما وساترة silanized (بروتوكول 2) 32-34 كيميائيا أو. حجم الغرفة الناتج هو فقط 20-25 ميكرولتر (أو صغيرة مثل 15 ميكرولتر، انظر الملاحظة 3 في البروتوكول 1)، بما في ذلك حجم الأنبوب مدخل. ويمكن أيضا تدفق غرف متوفرة تجاريا استخدامها، ولكن حجمها عادة ما يكون أكبر، مما أدى إلى إهدار غير ضروري للبروتينات. إذا استخدمت غرفة أكبر، وينبغي تحجيم حجم كل الحلول في البروتوكولات أدناه نسبيا. ثم يتم إعداد البذور أنيبيب، على سبيل المثال باستخدام المتحللة ببطء GTP التناظرية، GMPCPP (غوانوزين-5&#39;-[(α، β) methyleno] ثلاثي) (بروتوكول 3، انظر أيضا هيمان &lt;م&gt; وآخرون 35). ويجمد البذور على ساترة تنظيفها ويتم حظر السطح في وقت لاحق لمنع امتصاص غير محدد من البروتينات الأخرى 32 (4 بروتوكول يصف الشلل باستخدام بذور digoxigenin). ويمكن بعد ذلك الأنابيب الدقيقة مجزأة تكون مستعدة باستخدام بروتوكول 5. والمبرر الرئيسي لهذا النهج هو أن البوليمرات أنيبيب الديناميكية، والتي تشكل في وجود GTP، يمكن أن يستقر مؤقتا عن طريق إضافة &quot;قبعات&quot; قصيرة من قطاعات تويولين مستقرة، والتي تحتوي على GMPCPP. تحتوي هذه القبعات أيضا تويولين رودامين المسمى، بحيث يمكن إزالتها ببساطة عن طريق إلقاء الضوء على مجال الرؤية مع ليزر 530-550 نانومتر أو مصباح الزئبق قوس (البروتوكول 6) 36. ويمكن بعد ذلك كثافة مضان للإشارة بلاغ تتبع استخدامها لتقدير عدد الجزيئات التي تسافر مع نهايات أنيبيب تفكيك، مع الأخذ بعين الاعتبار التفاوت في مجال الإضاءة المجهر (بروتوكول 7). ويمكن استخدام نهج مماثللدراسة التفاعلات بين الأنابيب الدقيقة depolymerizing وحبات المغلفة البروتين، أعد كما هو موضح في 27 (بروتوكول 8). وربط بعض البروتينات بسهولة على جدران الأنابيب الدقيقة مجزأة، ولكن يمكن أيضا ملاقط الليزر يمكن استخدامها لعقد حبة بالقرب من الجدار أنيبيب، وبالتالي تعزيز ملزمة لها.

<table>
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 1: Microscopy and other equipment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss 
			Nikon</td>
			<td>Axio Imager 2 
			Eclipse Ti</td>
			<td>other microscope models capable of DIC and epi-fluorescence-imaging can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Zeiss 
			Nikon</td>
			<td>420490-9900-000 
			CFI Apo 100x Oil 1.49</td>
			<td>100X, DIC, 1.3-1.49 NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective heater</td>
			<td>Bioptechs</td>
			<td>150803, 150819-19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent filter cube</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>49004 or 49008 
			41017 or 49020</td>
			<td>optimized for Rhodamine fluorescence&#160; 
			optimized for GFP fluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software</td>
			<td>freeware MicroManager 
			Molecular Devices</td>
			<td>not applicable 
			MetaMorph 7.5</td>
			<td>http://valelab.ucsf.edu/~MM/MMwiki/ 
			other software can be used to acquire images and for a particle tracking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon3, DU-897E-cs0-#BV</td>
			<td>Highly sensitive EMCCD camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trapping laser</td>
			<td>IPG Photonics</td>
			<td>YLR-10-1064-LP</td>
			<td>1064 nm laser, 10 W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence excitation lasers</td>
			<td>Coherent, Inc. 
			Coherent, Inc.</td>
			<td>Sapphire 488 LP 
			Sapphire 552 LP</td>
			<td>excitation of green fluorophores 
			excitation of red fluorophores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma Cleaner</td>
			<td>Harrick Plasma</td>
			<td>PDC-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial flow chambers</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>RC-20 or RC-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion pump</td>
			<td>Cole Palmer 
			Harvard Apparatus</td>
			<td>Masterflex 77120-52 
			Pico Plus</td>
			<td>Both pumps provide the required rate of liquid flow but a peristaltic pump may pulse at very slow speed. The flow with a syringe pump is more consistent for a wide range of rates but this pump has inertia.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<table>
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2: Microscopy chamber preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified microscope slides for reusable chambers</td>
			<td>Precision Glassblowing of Colorado</td>
			<td>Custom order www.precisionglassblowing.com</td>
			<td>Sonic slots in slides using schematics in Figure 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427410</td>
			<td>I.D. 0.58 mm, O.D. 0.965 mm; use these tubes to connect assembled chamber to the pump and waste container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427400</td>
			<td>I.D. 0.28 mm, O.D. 0.61 mm; use these tubes to make the reusable chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Regular microscope slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48312-003</td>
			<td>Other similar slides can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-150, 48366-067</td>
			<td>Other similar coverslips can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon sealant</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>KIT, SILICON SEALANT 5 MIN CURE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>83082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate adhesive</td>
			<td>Scotch 3M</td>
			<td>AD114</td>
			<td>Or cyanoacrylate adhesive from other manufacturers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<table>
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 3: Coverslips cleaning and coating.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Sieves, Grade 564</td>
			<td>Macron</td>
			<td>4490-04</td>
			<td width="200px"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass Staining Jar</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>21036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip Ceramic Holder</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>8542e40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlusOne Repel Silane</td>
			<td>GE Healthcare Biosciences</td>
			<td>17-1332-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-digoxigenin AB</td>
			<td>Roche applied science</td>
			<td>11093274910</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<table>
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 4: Preparation of seeds and segmented microtubules.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubulin</td>
			<td>purified from cow brains 
			Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>&#160; 
			T238P</td>
			<td>For purification protocols see 49&#8211;51 
			Unlabeled porcine tubulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeled tubulin</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc 
			Invitrogen 
			Invitrogen</td>
			<td>TL590M 
			C1171 (Rhodamine) 
			A-2952 (Digoxigenin)</td>
			<td>Rhodamine-labeled porcine tubulin 
			Tubulin can be labeled with any amine-reactive dye as in reference52.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GMPCPP</td>
			<td>Jena Biosciences</td>
			<td>NU-405</td>
			<td>Aliquot and store at -70 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VALAP</td>
			<td>vaseline, lanolin, and paraffin at 1:1:2 by mass</td>
			<td></td>
			<td>see ref. 9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of segmented microtubules to study motions driven by the disassembling microtubule ends

يمكن أنيبيب التحلل توفير القوة لنقل مجمعات البروتين المختلفة والخرز المغلفة البروتين في المختبر. ويعتقد أن الآليات الكامنة لتلعب دورا حيويا في الاقتراحات التي تعتمد على كروموسوم أنيبيب خلال انقسام الخلايا، ولكن البروتينات ذات الصلة ودورها المحدد وغير محددة. وبالتالي، هناك حاجة متزايدة لتطوير المقايسات التي لدراسة مثل هذه الحركة في المختبر باستخدام مكونات النقي وتعريف الوسط البيوكيميائية. الأنابيب الدقيقة، ومع ذلك، هي بطبيعتها غير مستقرة البوليمرات؛ التبديل ما بين النمو والسمن العشوائية ويصعب السيطرة عليها. البروتوكولات وصفنا هنا الاستفادة من الأنابيب الدقيقة مجزأة التي يتم إجراؤها مع photoablatable استقرار مباراة دولية. يمكن أن تسبب التحلل من هذه الأنابيب الدقيقة مجزأة مع القرار الزماني والمكاني عالية، مما يساعد دراسات الحركة في نهايات أنيبيب تفكيك. هذه التقنية يمكن استخدامها لكاليفورنياRRY بإجراء تحليل كمي لعدد من الجزيئات في المجمعات البروتين fluorescently المسمى، والتي تتحرك processively مع أنيبيب ديناميكية ينتهي. لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء في هذه وغيرها من المقايسات الفلورسنت الكمي، ينبغي أن يعامل coverslips للحد من امتصاص البروتينات القابلة للذوبان غير محدد من fluorescently المسمى. وتقدم بروتوكولات مفصلة إلى أن تأخذ في الاعتبار تفاوت إضاءة الفلورسنت، وتحديد كثافة من fluorophore واحد باستخدام تناسب التمويه على مسافة واحدة. أخيرا، نحن تصف استخدام الأنابيب الدقيقة مجزأة لدراسة الاقتراحات التي تعتمد على أنيبيب من بلي المغلفة البروتين، وتوفير نظرة ثاقبة قدرة المحركات المختلفة وأية محرك البروتينات لزوجين التحلل أنيبيب لحركة البضائع processive.

البروتين تتبع مع ​​depolymerizing أنيبيب ينتهي. الحيز الحركي الخميرة المكون Dam1 هو إلى حد بعيد أفضل بلاغ تعقب من أنيبيب depolymerizing ينتهي 14. هذا المجمع 10-الوحيدات المسمى مع GFP يمكن التعبير عنها بسهولة وتنقيته من الخلايا البكتيرية 18،38، لذلك نوصي استخدامه كع?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends at JoVE.com

Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

الأنابيب الدقيقة هي بطبيعتها غير مستقرة البوليمرات، والتبديل ما بين النمو والسمن العشوائية ويصعب السيطرة عليها. نحن هنا تصف البروتوكولات باستخدام الأنابيب الدقيقة مجزأة مع قبعات استقرار photoablatable. يمكن أن تسبب التحلل من الأنابيب الدقيقة مجزأة مع القرار الزماني والمكاني عالية، مما يساعد تحليل الاقتراحات مع نهايات أنيبيب تفكيك.

إعداد مقسمة ميكروتثبول لدراسة الاقتراحات وانطلاقا من تفكيك أنيبيب ينتهي

Microtubule depolymerization can provide force to transport different protein complexes and protein-coated beads in vitro. The underlying mechanisms are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

اختبار الحساسية البصرية للسرعة واتجاه الحركة في السحالي

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Computer-Generated Animal Model Stimuli

الحاسوب خلق المحفزات الحيوان النموذجي

Communication between animals is diverse and complex. Animals may communicate using auditory, seismic, chemosensory, electrical, or visual signals. In ...

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

عزل وتنقية ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الطرفية بواسطة حبة فرز المغناطيسي

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Production of Xenopus tropicalis Egg Extracts to Identify Microtubule-associated RNAs

Production of Xenopus tropicalis Egg Extracts to Identify Microtubule-associated RNAs

إنتاج<em&gt; القيطم مداري</em&gt; البيض مقتطفات من التعرف على الرنا أنيبيب المرتبطة بها

Many  organisms localize mRNAs to specific subcellular destinations to spatially and  temporally control gene expression. Recent studies have demonstrated ...

Preparation of the Mgm101 Recombination Protein by MBP-based Tagging Strategy

إعداد البروتين التوحد Mgm101 بواسطة استراتيجية توصيف المستندة إلى MBP

The MGM101 gene was identified 20 years ago for its role in the maintenance of mitochondrial DNA. Studies from several groups have suggested that the ...

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

باستخدام كاتشو-2 خلايا لدراسة نقل الدهون من الأمعاء

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

قياس ديناميات الأنابيب المجهرية بواسطة المجهر القرص الغزل في المغزل ميتوتيك القطب

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

Investigating Flagella-Driven Motility in Escherichia coli by Applying Three Established Techniques in a Series

Investigating Flagella-Driven Motility in Escherichia coli by Applying Three Established Techniques in a Series

التحقيق في حركية Flagella يحركها في الإشريكية القولونية من خلال تطبيق ثلاث تقنيات راسخة في سلسلة

Motility is crucial to the survival and success of many bacterial species. Many methodologies exist to exploit motility to understand signaling pathways, ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

دليل خطوة بخطوة لتخطيط كهربية البعوض

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...