Name: an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00
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Siamo grati per l&#39;aiuto del dottor Xinyu Li nella preparazione del manoscritto. SW è stato sostenuto da un fondo di avvio da Tulane University, del Presidente New Investigator Award Research Council dal UT Southwestern Medical Center, NIH di Grant EY021862, un premio sviluppo di carriera dalla ricerca per la prevenzione cecità fondazione, e un premio brillante Focus in degenerazione maculare senile Research .

Nota: Il seguente protocollo e risultati rappresentativi utilizzano l&#39;inibitore HDAC SAHA come un composto ad esempio. Tuttavia, questo protocollo è affatto limitato all&#39;uso di SAHA, ed è raccomandato come metodo generale per testare gli effetti dei composti solubili sulla neovascolarizzazione corneale. Dovranno essere realizzati per il grado di diluizione nonché la frequenza e la durata di applicazione modifiche secondarie. Inoltre, i composti che sono facilmente solubili in acqua potranno essere somministra...

<ol>
	<li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+visual+impairment.">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li><li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Blindness:+A+Global+Perspective.">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. 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Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li><li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries.">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li><li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest.">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. 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Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li><li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest.">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model.">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. 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Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li></ol>

Il protocollo presentato qui si traduce in livelli riproducibili di hemangiogenesis, linfoangiogenesi, e l&#39;infiammazione, che lo rende un sistema ideale per studiare questi tre processi (correlati). Mentre questo metodo produce NV corneale centralizzata, diversi metodi che sono stati sviluppati per causare più diretto NV, cioè la sutura della cornea 17 e impiantati fattore di crescita esprimendo pellet 18, potrebbe anche essere di interesse. Il nostro protocollo è stato progettato per l&#39;...

Cecità corneale è la quarta causa più comune di cecità, responsabile di circa il 4% di tutti i casi 1. Neovascolarizzazione corneale (NV) svolge un ruolo significativo in molte di queste patologie, tra cui cheratite erpetica (la causa infettiva di cecità in Occidente) e il tracoma (la principale causa di cecità contagiosa in tutto il mondo) 2. Terapie attuali includono steroidi, farmaci anti-infiammatori non steroidei (FANS), terapie anti-VEGF, e ciclosporina A, nonché tecniche chirurgiche convenzionali o laser 3. Tuttavia, la natura gravemente invalidante delle patologie NV basato corneali, la scarsità di strutture chirurgiche in grado di trattare NV corneale, e la mancanza di un&#39;opzione farmacologica fortemente l&#39;esecuzione ha condotto una tavola rotonda di esperti recente a concludere che, nonostante le terapie esistenti, la necessità medica fondamentale presentano tali patologie rimane insoddisfatta 4. La cornea umanasi compone di 5 strati, 3 strati cellulari (epiteliale, stromali ed endoteliali) e 2 di interfaccia (membrana di Bowman e la membrana Descemet). Esso funziona come barriera meccanica e la superficie di rifrazione per l&#39;occhio. La sua natura trasparente è la conseguenza di un delicato equilibrio dei suoi componenti ed è solidale alla propria funzione 5. Normalmente avascolare, la cornea riceve il sangue da microvasi che corre lungo il bordo esterno che sono alimentati dalla ciliare e arterie oftalmiche. Corneale NV si verifica quando uno stimolo promuove l&#39;angiogenesi di questi vasi permettendo loro di crescere verso il centro della cornea e limitano visione 6 così. Angiogenesi corneale comprende hemangiogenesis e linfoangiogenesi, che determinano la crescita interna dei vasi sanguigni e dei vasi linfatici dal porticato vascolare limbare verso il centro della cornea. Questo porta ad una ripartizione dei corneale &quot;privilegio angiogenico&quot;, un aumento di opacità corneale e fibrosi, distruzione della cornea layers, ed edema 7. I trigger precise di NV corneale sono numerosi, che vanno da una risposta alle malattie infettive, come il tracoma ad uno stato indotto chimicamente causato medicine tradizionali, prodotti chimici industriali, o agenti di guerra anche chimici. I meccanismi molecolari di questo processo non sono, ancora, completamente caratterizzati; tuttavia, sono stati identificati alcuni giocatori chiave. In condizioni normali la cornea possiede un unico &#39;privilegio angiogenica&#39; mantenuto da un insieme ridondante di fattori anti-angiogenici (come solubile VEGF-R1) 8. Tuttavia, in risposta ad uno stimolo esterno (come una ferita), ci sarà un upregulation locale di fattori pro-angiogenici (ad esempio VEGF-A). Questo punte l&#39;equilibrio di fattori pro-e anti-angiogenici che sta alla base privilegio angiogenico della cornea, e porta a hemangiogenesis, lymphangeogenesis, e l&#39;infiammazione, provocando quindi la patologia corneale e persino la cecità 9. &lt;class p = &quot;jove_content&quot;&gt; Data l&#39;esigenza medica insoddisfatta di questa patologia altamente invalidante, è di interesse per il campo per avere un modello animale affidabile di NV corneale. Qui vi presentiamo un tale modello: controllato lesioni alcali-burn. Vari modelli eye-pregiudizio basati sull&#39;utilizzo di anelli di carta da filtro sono stati utilizzati dal 1970 10. Nel 1989, un gruppo di oftalmologi Harvard Medical School caratterizzato un modello standard di una lesione corneale alcali-burn centrale nel coniglio basato su imbevendo un pezzo di carta da filtro circolare con idrossido di sodio (NaOH) e la sua applicazione alla cornea ad una specifica gamma di concentrazioni 11. Da allora, questa tecnica è stata adattata per l&#39;uso nel 12-14 mouse. Recentemente, il laboratorio Wang ha studiato gli effetti terapeutici della istone deacetilasi (HDAC) SAHA nella patogenesi della NV cornea usando un mouse corneale alcali-burn modello di lesione 15. La metodologia del modello di lesione corneale alcali-burn del mouse qui presentato è stato costruitoprincipalmente sul lavoro prima di altre due carte 14,16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">306575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">AbD Serotech</td>
			<td>MCA497RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab14917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">553370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Camera</td>
			<td style="width:96px;">Tucsen</td>
			<td style="width:119px;">TCC 5.0 ICE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Coverslips</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D4540-1L</td>
			<td>Caution: Mutagenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Blunt), Iris</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Sharp), Dumont #4</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">500340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td>RXKETAMINE</td>
			<td>Controlled substance, proper license required for use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Source for Microscope</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">LED-14M-YA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope (Stereo 7X-45X)</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">SM-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounting Medium, Vectashield</td>
			<td style="width:96px;">Vector</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S397-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S318-1</td>
			<td>Caution: Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;">P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proparacaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4554-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissors (5mm blade), Vanas</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:96px;">MPBio</td>
			<td align="right" style="width:119px;">92939249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Whatman Grade 1 Filter Paper</td>
			<td style="width:96px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXANASED-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse

In condizioni normali, la cornea è avascolare, e questa trasparenza è essenziale per mantenere una buona acuità visiva. Neovascolarizzazione (NV), della cornea, che può essere causata da traumi, cheratoplastica o malattie infettive, rompe il cosiddetto &#39;privilegio angiogenica&#39; della cornea e costituisce la base di molteplici patologie visive che possono anche portare alla cecità. Anche se ci sono diverse opzioni terapeutiche disponibili, la necessità medica fondamentale presentata da patologie corneali neovascolare rimane insoddisfatto. Per sviluppare sicuri, efficaci e mirate terapie, è necessario un modello affidabile di NV corneale e intervento farmacologico. Qui, descriviamo un modello di neovascolarizzazione corneale lesioni alcali-burn nel topo. Questo protocollo fornisce un metodo per l&#39;applicazione di una lesione alcali un&#39;ustione controllata alla cornea, la somministrazione di un composto di interesse farmacologico e la visualizzazione del risultato. Questo metodo potrebbe rivelarsi strumentazioneTal per studiare i meccanismi e le opportunità di intervento in NV corneale e altri disturbi neovascolare.

Dopo pregiudizio alcali-ustione, NV corneale si verifica in un modo dipendente dal tempo prevedibile. La Figura 1 mostra la netta differenza sia nella neovascolarizzazione e opacità corneale tra un animale non trattato (Figura 1A) e un animale trattato con l&#39;inibitore HDAC SAHA (Figura 1B ) nel punto di 7 giorni. Figure 2A e 2B mostrano un piatto monte corneale di un occhio controllo non trattato con pr...

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An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Neovascolarizzazione (NV) della cornea può complicare molteplici patologie visive. Utilizzando un modello di lesione alcali-un&#39;ustione controllata, un livello quantificabile di NV corneale può essere prodotta per lo studio meccanicistico di NV corneale e valutazione di potenziali terapie per i disordini neovascolare.

Un Injury Modello alcali-burn di neovascolarizzazione corneale nel mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Guarigione delle ferite di abrasione epiteliale corneale con oculare Burr come un modello per Cornea

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

A Novel Approach to Monitoring Graft Neovascularization in the Human Gingiva

Un nuovo approccio al monitoraggio dell'innesto neovascolarizzazione nella gengiva umana

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids ...

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

Ricostruzione del circuito sanguigno in un modello di trapianto di cuore di topo addominale

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...