Name: an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00
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私たちは、原稿を準備中の博士余市Liさんの助けに感謝しています。 SWがUTの南西医療センター、NIHグラントEY021862、失明基盤を防止するための研究からキャリア開発賞、加齢性黄斑変性症の研究における明るいフォーカス賞からの大​​統領の研究評議会の新しい研究者賞、チューレーン大学からのスタートアップ資金によってサポートされていました。

注：以下のプロトコルおよび代表的な結果は、実施例化合物として、HDAC阻害剤SAHAを使用しています。しかしながら、このプロトコルは、SAHAの使用に限定されるものではなく、角膜新生血管形成に対する可溶性化合物の効果を試験するための一般的な方法として推奨される。軽微な変更は、希釈の度合いだけでなく、周波数と印加時間のために作られる必要がある。また、水に容易に可溶​?...

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	<li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+visual+impairment.">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li><li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Blindness:+A+Global+Perspective.">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. 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Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li></ol>

ここで紹介するプロトコルは、これらの3（相互に）プロセスを研究するための理想的なシステム作り、hemangiogenesis、リンパ管、および炎症の再現可能なレベルになる。この方法は、集中角膜NVを生成するが、より多くの監督ネバダ、すなわち角膜17の縫合、ペレット18を表現移植し、成長因子を引き起こすために開発されているいくつかの方法が、また、関心があるかもしれ?...

角膜失明はすべてのケース1の約4％に責任失明の第四の最も一般的な原因です。角膜血管新生（NV）は、ヘルペス性角膜炎（西の失明の主な感染原因）とトラコーマ（世界的な感染失明の主な原因）2を含むこれらの病態の多くの重要な役割を果たしている。現在の治療は、ステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）、抗VEGF療法と同様に従来のまたはレーザ手術技術3シクロスポリン Aを含む。しかし、角膜NV基づく病状の深刻な衰弱性質上、外科角膜NVを治療することができる施設、好調理学的選択肢の欠如の不足は、現存の治療法にもかかわらず、それを締結する基本的な医療ニーズを、最近の専門家の円卓会議を主導これらの病理によって提示されたが4満たされていないままです。 ヒトの角膜5層、3細胞層（上皮細胞、間質および内皮）および2インターフェイス（ボーマン膜とデスメ膜）で構成されています。それは、目には機械的な障壁や屈折面として機能します。その透明な性質は、その構成要素の微妙なバランスの結果であり、その適切な機能5に不可欠である。通常は無血管、角膜は毛様体および眼動脈から供給され、その外縁に沿って実行されている微小血管から血液を受け取る。刺激が彼らが角膜の中心に向かって成長し、そのためのビジョン6を制限することができ、これらの血管の新生を促進する際の角膜NVが発生します。角膜血管新生は、角膜の中心に向かって輪部血管アーケードからの血管やリンパ管の内部成長につながる、これhemangiogenesisやリンパ管が含まれています。これは角膜の「血管新生の特権」、角膜混濁および線維症の増加、角膜LAの崩壊の崩壊につながるyers、および浮腫7。角膜NVの正確なトリガーは数多くあり、そのような化学的に誘発された状態へのトラコーマなどの感染性疾患に対する応答に至るまで、伝統的な医薬品、工業薬品、さらには化学兵器を引き起こした。 このプロセスの分子メカニズムは、まだ、完全に特徴付けられていない。しかし、いくつかの重要な選手が同定されている。通常の条件下では、角膜（例えば、可溶性VEGF-R1のような）抗血管新生因子8の冗長アレイによって維持されるユニークな「血管新生特権&#39;有する。しかし、（このような損傷のような）外部刺激に反応して、血管新生促進因子（ 例えば VEGF-A）の局所的なアップレギュレーションがあるでしょう。これは、先端角膜の血管新生特権の根底炎症および抗血管新生因子のバランス、従って角膜の病理及び失明さえ9を引き起こし、hemangiogenesis、lymphangeogenesis、および炎症をもたらす。 &lt;Pクラス= &quot;jove_contentは&quot;&gt;この非常に衰弱させる病理学の満たされていない医療ニーズを考えると、角膜NVの信頼できる動物モデルを持っている分野に関心がある。制御アルカリ火傷：ここでは、そのようなモデルを提示する。濾紙環の使用に基づく様々な眼損傷モデル1970 10が使用されてきた。 1989年には、ハーバード大学医学部の眼科医のグループは、水酸化ナトリウム（NaOH）の円形濾紙を浸漬し、特定の範囲の角膜にそれを適用することに基づいてウサギ角膜中央アルカリ火傷の標準モデルを特徴づけ濃度11。それ以来、この技術は、マウス12-14での使用に適合されている。最近では、王の研究室では、マウスの角膜アルカリ火傷モデル15を使用して角膜NVの病因におけるヒストン脱アセチル化酵素（HDAC）阻害剤SAHAの治療効果を検討した。ここで紹介するマウスの角膜アルカリ火傷モデルの方法論は、建設されました主に2他の論文14,16の前の仕事に。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">306575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">AbD Serotech</td>
			<td>MCA497RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab14917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">553370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Camera</td>
			<td style="width:96px;">Tucsen</td>
			<td style="width:119px;">TCC 5.0 ICE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Coverslips</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D4540-1L</td>
			<td>Caution: Mutagenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Blunt), Iris</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Sharp), Dumont #4</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">500340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td>RXKETAMINE</td>
			<td>Controlled substance, proper license required for use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Source for Microscope</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">LED-14M-YA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope (Stereo 7X-45X)</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">SM-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounting Medium, Vectashield</td>
			<td style="width:96px;">Vector</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S397-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S318-1</td>
			<td>Caution: Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;">P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proparacaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4554-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissors (5mm blade), Vanas</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:96px;">MPBio</td>
			<td align="right" style="width:119px;">92939249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Whatman Grade 1 Filter Paper</td>
			<td style="width:96px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXANASED-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse

通常の条件下では、角膜は無血管であり、この透明性が良好な視力を維持するために不可欠である。外傷、角膜移植や感染症が原因で発生することができ、角膜の新生血管形成（NV）は、角膜のいわゆる「血管新生の特権」を分解し、さらには失明につながる可能性があり、複数の視覚的な病理の基礎を形成します。利用可能ないくつかの治療の選択肢がありますが、角膜新生血管の病変によって提示された基本的な医学的必要性が満たされていないままです。 、安全で、有効で、標的療法を開発するために、角膜NVおよび薬理学的介入の信頼性のあるモデルが必要である。ここでは、マウスにアルカリ火傷角膜新生血管形成モデルについて説明します。このプロトコルは、角膜、興味のある薬理学的化合物を投与し、その結果の可視化への制御されたアルカリ火傷を適用するための方法を提供する。この方法は、instrumen証明することができた角膜NVと他の血管新生性疾患に介入するためのメカニズムと機会を研究するためのTAL。

アルカリ熱傷後、角膜NVは、予測可能な、時間依存的に発生します。1は 、未処理の動物（ 図1A）とHDAC阻害剤SAHA（ 図1Bで処理された動物の間での血管新生および角膜混濁の両方でスタークの違いを実証している）7日の時点で。 図2Aおよび2Bは 、一次PECAM-1とLYVE-1染色および二次のAlexa®488および59...

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An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

角膜の新生血管形成（NV）は、複数の視覚的な病状を複雑にする可能性がある。制御、アルカリ火傷モデルを利用して、角膜NVの定量化可能なレベルは、血管新生性疾患のための潜在的な治療法の角膜NVと評価のメカニズムの研究のために製造することができる。

マウス角膜血管新生のアルカリ熱傷損傷モデル

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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