Name: an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00
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Estamos muy agradecidos por la ayuda del Dr. Li Xinyu en la preparación del manuscrito. SW fue apoyada por un fondo de inicio de la Universidad de Tulane, Consejo de Investigación Premio al Investigador Nuevo del presidente de UT Southwestern Medical Center, NIH subvención EY021862, un premio de desarrollo de la carrera de la Investigación para Prevención de fundación ceguera, y un Premio Brillante Foco en la edad degeneración macular asociada a la Investigación .

Nota: El siguiente protocolo y resultados representativos utilizan el inhibidor de HDAC SAHA como un compuesto de ejemplo. Sin embargo, este protocolo es de ningún modo limitada al uso de SAHA, y se recomienda como un método general para poner a prueba los efectos de los compuestos solubles en neovascularización de la córnea. Tendrá que ser hecha por el grado de dilución, así como la frecuencia y la duración de la aplicación modificaciones menores. Adicionalmente, los compuestos que son fácilmente solubles en ...

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	<li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+visual+impairment.">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li><li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Blindness:+A+Global+Perspective.">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. 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Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li><li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest.">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model.">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. 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Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li></ol>

El protocolo que se presenta aquí se traduce en niveles reproducibles de hemangiogenesis, LI, y la inflamación, por lo que es un sistema ideal para estudiar estos tres procesos (interrelacionados). Mientras que este método produce centralizado NV córnea, varios métodos que se han desarrollado para causar más dirigida NV, a saber, la sutura de la córnea 17 y implantados factor de crecimiento expresando gránulos 18, también puede ser de interés. Nuestro protocolo está diseñado para su uso...

Ceguera corneal es la cuarta causa más común de ceguera, responsable de aproximadamente el 4% de todos los casos 1. La neovascularización corneal (NV) desempeña un papel importante en muchas de estas patologías, incluyendo la queratitis herpética (la principal causa infecciosa de ceguera en Occidente) y el tracoma (la causa principal de ceguera en todo el mundo infecciosa) 2. Las terapias actuales incluyen esteroides, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs), las terapias anti-VEGF, y ciclosporina A, así como las técnicas quirúrgicas convencionales o láser 3. Sin embargo, la naturaleza gravemente debilitante de patologías NV basado corneales, la escasez de instalaciones quirúrgicas capaces de tratar NV corneal, y la falta de una opción farmacológica encarecidamente realizar encabezó una mesa redonda de expertos reciente a la conclusión de que, a pesar de las terapias existentes, la necesidad médica fundamental presentado por estas patologías permanece insatisfecha 4. La córnea humanaconsta de 5 capas, 3 capas celulares (epitelial, del estroma y el endotelio) y 2 interfaz (membrana de Bowman y la membrana de Descemet). Funciona como una barrera mecánica y la superficie de refracción para el ojo. Su naturaleza transparente es la consecuencia de un delicado equilibrio de sus componentes, y es parte integral de su función adecuada 5. Normalmente avascular, la córnea recibe sangre de microvasos que se ejecutan a lo largo de su borde exterior que se alimenta desde la ciliar y las arterias oftálmicas. Corneal NV se produce cuando un estímulo promueve la angiogénesis de estos vasos permitiendo que crezcan hacia el centro de la córnea y por lo tanto limitar la visión 6. Angiogénesis corneal incluye hemangiogenesis y linfangiogénesis, que resultan en el crecimiento hacia el interior de los vasos sanguíneos y los vasos linfáticos de la arcada vascular del limbo hacia el centro de la córnea. Esto conduce a un desglose de la córnea &quot;privilegio angiogénico&quot;, un aumento en la opacidad de la córnea y la fibrosis, la alteración de la córnea Layers, y edema 7. Los disparadores precisos de NV corneal son numerosos, que van desde una respuesta a las enfermedades infecciosas como el tracoma en un estado inducido químicamente causado medicinas tradicionales, productos químicos industriales, o incluso agentes de guerra química. Los mecanismos moleculares de este proceso no son, por ahora, completamente caracterizados; sin embargo, se han identificado algunos jugadores clave. En condiciones normales la córnea posee un &#39;privilegio angiogénico&#39; única mantenida por una matriz redundante de factores anti-angiogénicos (tales como solubles de VEGF-R1) 8. Sin embargo, en respuesta a un estímulo externo (tal como una lesión), habrá una regulación por incremento local de factores pro-angiogénicos (por ejemplo, VEGF-A). Esto inclina la balanza de factores pro y anti-angiogénicos que subyace privilegio angiogénico de la córnea, y conduce a hemangiogenesis, lymphangeogenesis, y la inflamación, por lo tanto, causando la patología de la córnea e incluso ceguera 9. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Debido a la necesidad médica no satisfecha de esta patología altamente debilitante, es de interés para el campo para tener un modelo animal fiable de NV corneal. Aquí se presenta un modelo de este tipo: control de lesiones álcalis quemadura. Se han utilizado diversos modelos de ojo de lesiones basado en el uso de anillos de papel de filtro desde 1970 10. En 1989, un grupo de oftalmólogos Escuela de Medicina de Harvard caracteriza un modelo estándar de una lesión alcalino-quemadura de la córnea central en conejo basado en remojo un pedazo de papel de filtro circular con hidróxido de sodio (NaOH) y su aplicación a la córnea en un rango específico de concentraciones 11. Desde entonces, esta técnica se ha adaptado para su uso en el 12-14 ratón. Recientemente, el laboratorio de Wang estudió los efectos terapéuticos de la histona deacetilasa (HDAC) inhibidor de SAHA en la patogénesis de NV de la córnea utilizando un modelo de lesión de la córnea del ratón alcalino-quemadura 15. La metodología del modelo de lesión de la córnea del ratón alcalino-quemadura presentado aquí fue construidoprincipalmente en el trabajo previo de otros dos trabajos 14,16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">306575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">AbD Serotech</td>
			<td>MCA497RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab14917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">553370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Camera</td>
			<td style="width:96px;">Tucsen</td>
			<td style="width:119px;">TCC 5.0 ICE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Coverslips</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D4540-1L</td>
			<td>Caution: Mutagenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Blunt), Iris</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Sharp), Dumont #4</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">500340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td>RXKETAMINE</td>
			<td>Controlled substance, proper license required for use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Source for Microscope</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">LED-14M-YA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope (Stereo 7X-45X)</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">SM-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounting Medium, Vectashield</td>
			<td style="width:96px;">Vector</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S397-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S318-1</td>
			<td>Caution: Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;">P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proparacaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4554-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissors (5mm blade), Vanas</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:96px;">MPBio</td>
			<td align="right" style="width:119px;">92939249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Whatman Grade 1 Filter Paper</td>
			<td style="width:96px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXANASED-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse

En condiciones normales, la córnea es avascular, y esta transparencia es esencial para mantener una buena agudeza visual. La neovascularización (NV) de la córnea, que puede ser causada por un traumatismo, queratoplastia o enfermedad infecciosa, se rompe el llamado &quot;privilegio angiogénico &#39;de la córnea y constituye la base de múltiples patologías visuales que pueden incluso conducir a la ceguera. Aunque hay varias opciones de tratamiento disponibles, la necesidad médica fundamental presentado por patologías corneales neovasculares permanece insatisfecha. Con el fin de desarrollar terapias seguras, eficaces y selectivos, se requiere un modelo fiable de NV de la córnea y la intervención farmacológica. Aquí se describe un modelo de neovascularización corneal lesiones álcalis quemadura en el ratón. Este protocolo proporciona un método para la aplicación de una lesión alcalino-quema controlada a la córnea, la administración de un compuesto farmacológico de interés, y la visualización del resultado. Este método podría ser instrumentalTal para el estudio de los mecanismos y oportunidades para la intervención en NV corneal y otros trastornos neovasculares.

Después de la lesión alcalino-quemadura, NV córnea se produce en una, de la manera dependiente del tiempo predecible. La Figura 1 demuestra la gran diferencia tanto en la neovascularización y la opacidad de la córnea entre un animal sin tratar (Figura 1A) y un animal tratado con el inhibidor de HDAC SAHA (Figura 1B ) en el punto de tiempo de 7 días. Las Figuras 2A y 2B demuestran una córnea plana de m...

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An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

La neovascularización (NV) de la córnea puede complicar múltiples patologías visuales. Utilizando un modelo de lesión de álcali-quema controlada, un nivel cuantificable de NV corneal puede ser producido para el estudio mecanicista de la NV corneal y la evaluación de posibles terapias para trastornos neovasculares.

Una Lesión álcalis quemar modelo de neovascularización corneal en el ratón

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

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Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Cicatrización de heridas de abrasión epitelial corneal con rebabas Ocular como un modelo de córnea

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

A Novel Approach to Monitoring Graft Neovascularization in the Human Gingiva

Un nuevo enfoque de supervisión Neovascularization del injerto en la encía humana

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids ...

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

Reconstrucción Del Circuito Sanguíneo En Un Modelo De Trasplante De Corazón De Ratón Abdominal

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...