Name: visualizing protein-dna interactions in live bacterial cells using photoactivated single-molecule tracking
Uploaded: 2014-03-10T20:30:00
Duration: 16 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Protein-DNA Interactions in Live Bacterial Cells Using Photoactivated Single-molecule Tracking at JoVE.com

Мы признаем, Джастин Пинкни и Йоханнес Hohlbein за помощь в строительстве заказ микроскопа и Симус Holden для программного обеспечения локализации. Родриго Рейес-Ламот объявлена ​​благодарность за предоставление E. Штамм. Исследование финансировалось Европейской комиссии Седьмая Рамочная программа Грант FP7/2007-2013 ЗДОРОВЬЯ-F4-2008-201418, Великобритании биотехнологии и биологических наук исследовательский совет Грант BB/H01795X/1, и Европейский исследовательский совет Грант 261227 в АНК. DJS финансировалось за счет Целевого программы Wellcome Грант WT083469. SU была поддержана MathWorks докторской общении.

<ol>
	<li>Friedberg, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> DNA Repair and Mutagenesis. , (2006).</li><li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+spatial+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer spatial resolution.</a> Science. 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li><li>Mortensen, K. I., Churchman, L. S., Spudich, J. A., Flyvbjerg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+localization+analysis+for+single-molecule+tracking+and+super-resolution+microscopy.">Optimized localization analysis for single-molecule tracking and super-resolution microscopy.</a> Nat. Methods. 7 (5), 377-381 (2010).</li><li>Manley, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-density+mapping+of+single-molecule+trajectories+with+photoactivated+localization+microscopy.">High-density mapping of single-molecule trajectories with photoactivated localization microscopy.</a> Nat. Methods. 5 (2), 155-157 (2008).</li><li>English, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+investigations+of+the+stringent+response+machinery+in+living+bacterial+cells.">Single-molecule investigations of the stringent response machinery in living bacterial cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (31), (2011).</li><li>Subach, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+mCherry+for+high-resolution+two-color+fluorescence+microscopy.">Photoactivatable mCherry for high-resolution two-color fluorescence microscopy.</a> Nat. Methods. 6 (2), 153-159 (2009).</li><li>Uphoff, S., Reyes-Lamothe, R., Garza de Leon, F., Sherratt, D. J., Kapanidis, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+DNA+repair+in+live+bacteria.">Single-molecule DNA repair in live bacteria.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110 (20), 8063-8068 (2013).</li><li>Datsenko, K. A., Wanner, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+inactivation+of+chromosomal+genes+in+Escherichia+coli+K-12+using+PCR+products.">One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (12), 6640-6645 (2000).</li><li>Reyes-Lamothe, R., Possoz, C., Danilova, O., Sherratt, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+positioning+and+action+of+Escherichia+coli+replisomes+in+live+cells.">Independent positioning and action of Escherichia coli replisomes in live cells.</a> Cell. 133 (1), 90-102 (2008).</li><li>Neidhardt, F. C., Bloch, P. L., Smith, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+medium+for+enterobacteria.">Culture medium for enterobacteria.</a> J. Bacteriol. 119 (3), 736-747 (1974).</li><li>Tokunaga, M., Imamoto, N., Sakata-Sogawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+inclined+thin+illumination+enables+clear+single-molecule+imaging+in+cells.">Highly inclined thin illumination enables clear single-molecule imaging in cells.</a> Nat. Methods. 5 (2), 159-161 (2008).</li><li>Crocker, J. C., Grier, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+digital+video+microscopy+for+colloidal+studies.">Methods of digital video microscopy for colloidal studies.</a> J. Colloid. Interface. Sci. 179 (1), 298-310 (1996).</li><li>Holden, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+limits+of+single+molecule+FRET+resolution+in+TIRF+microscopy.">Defining the limits of single molecule FRET resolution in TIRF microscopy.</a> Biophys. J. 99 (9), 3102-3111 (2010).</li><li>Holden, S. J., Uphoff, S., Kapanidis, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DAOSTORM:+an+algorithm+for+high-density+super-resolution+microscopy.">DAOSTORM: an algorithm for high-density super-resolution microscopy.</a> Nat. Methods. 8 (4), 279-280 (2011).</li><li>Wieser, S., Sch&#252;tz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+single+molecules+in+the+live+cell+plasma+membrane-Do's+and+Don't's.">Tracking single molecules in the live cell plasma membrane-Do's and Don't's.</a> Methods. 46 (2), 131-140 (2008).</li><li>Arnauld, S., Nicolas, B., Herv&#233;, R., Didier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple-target+tracing+(MTT)+algorithm+probes+molecular+dynamics+at+cell+surface.">Multiple-target tracing (MTT) algorithm probes molecular dynamics at cell surface.</a> Protoc. Exch. , (2008).</li><li>Lippincott-Schwartz, J., Patterson, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+fluorescent+proteins+for+diffraction-limited+and+super-resolution+imaging.">Photoactivatable fluorescent proteins for diffraction-limited and super-resolution imaging.</a> Trends Cell Biol. (11), 555-565 (2009).</li><li>Elmore, S., M&#252;ller, M., Vischer, N., Odijk, T., Woldringh, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+tracking+of+oriC-GFP+fluorescent+spots+during+chromosome+segregation+in+Escherichia+coli.">Single-particle tracking of oriC-GFP fluorescent spots during chromosome segregation in Escherichia coli.</a> J. Struct. Biol. 151 (3), 275-287 (2005).</li><li>Badrinarayanan, A., Reyes-Lamothe, R., Uphoff, S., Leake, M. C., Sherratt, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+architecture+and+action+of+bacterial+Structural+Maintenance+of+Chromosome+proteins.">In vivo architecture and action of bacterial Structural Maintenance of Chromosome proteins.</a> Science. 338 (6106), 528-531 (2012).</li></ol>

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Мы обсуждаем несколько ключевых соображений для успеха эксперимента. Выбор и выражение флуоресцентного белка слияния: Существует большая палитра фотоактивируемых и фотопереключаемых флуоресцентных белков 17. Конкретный выбор зависит от микроскопических характеристик, в частности лазеров и фильтров, доступных. Сочетание 405 нм и 561 нм идеально подходит для общих фотоактивируемых флуоресцирующих белков. Мы выбрали PAmCherry 6, потому что это мономерный и не показали агрегацию в клетках. Кроме того, необратимый фотоактивация позволяет подсчета количества активированных флуорофоров для измерения числа копий белка в клетке. Вместо того, чтобы выразить слитый белок из плазмиды, мы предпочитаем введение хромосомную ген, кодирующий слитого белка в дикого типа локуса. Это гарантирует полную замену интересующего белка с флуоресцентный веrsion и поддержания уровня экспрессии дикого типа. Фотоактивация ставка: Важно регулировать скорость фотоактивации такой, что в среднем меньше, чем одна молекула на клетку находится в флуоресцентного состояния в любом кадре из фильма. Это зависит от интенсивности 405 нм и число молекул слева быть активирован. При очень низких плотностей изображений, однако, не все молекулы будут отображены до конца фильма или фильмов очень длинные должны быть приобретены. Количество кадров, записываемых в фильме зависит от числа копий слитых белков в клетке и среднего фотообесцвечивания жизни PAmCherry в условиях возбуждения используются. Количество копий Pol1 составляет ~ 400 молекул / ячейка 1 и среднее значение экспоненциального распределения жизни фотообесцвечивание составляла ~ 4 кадра. Постепенно увеличивая интенсивность волны 405 нм, активация равномерно распределяется по 10000 кадров фильма. Таким образом, каждая ячейка является OccupСВУ на флуоресцентных молекул в общей сложности ~ 1600 кадров, обеспечения мало перекрытие PSFs и сопровождение осложнений в кино 10000 кадров. Выдержка и возбуждения интенсивности: Прежде всего, время экспозиции должны быть достаточно коротким, чтобы наблюдать резкие протяженности точки с небольшим движением размытие. Тем не менее, частота кадров должна быть выбрана, чтобы получить наблюдаемый молекулярное движение между последовательными кадрами за пределами неопределенности локализации, в противном случае решающими фотоны впустую передискретизации трек. Движение несвязанных молекул, должна проверяться при достаточно больших временах, чтобы четко отличаться от видимого движения связанных молекул в связи с неопределенностью локализации. Когда устанавливается время экспозиции, интенсивность PSF должна быть скорректирована. Точность локализации ФСФ возрастает с увеличением числа фотонов, обнаруженных в течение длительности кадра. Более высокие интенсивности возбуждения увеличить бу скорости излучения фотоновт и скорость фотообесцвечивание и фоновый сигнал. Используйте низкой интенсивности возбуждения, которая дает нужную точность локализации. Для Pol1-PAmCherry мы выбрали 15.26 мс / кадр и 3,5 мВт 561 нм возбуждение (400 Вт / см 2). Важно, чтобы подтвердить жизнеспособность клеток для конкретных условий обработки изображений путем мониторинга роста клеток и морфологию до и после сбора данных (см. Дополнительную информацию в Uphoff соавт. 7). Pol1 проявляет связывания время ~ 2 сек до пропуском субстрата ДНК в естественных условиях 7, поэтому мы ожидаем, что в течение всего времени трека большинство молекул быть либо в связанном или свободном состоянии. Связанные молекулы появляются в основном неподвижны, потому что сайты хромосом имеют коэффициент диффузии на несколько порядков меньше (~ 10 -5 мкм 2 / с, Элмор и др.. 18), чем Pol1 диффузии в цитоплазме (~ 1 мкм 2 </sдо&gt; / сек). Диффузия анализ: кажущийся коэффициент диффузии D * рассчитывается из MSD отдельных треков, усредненное по минимум 4 шагов (5 кадров), чтобы уменьшить статистическую погрешность. Обратите внимание, что ~ 75% молекул отбелить менее чем 5 кадров для условий обработки изображений, описанных. Такие короткие треки не обеспечивают достаточную статистическую достоверность различать связанных и несвязанных молекул. Однако относительные доли связанных и несвязанных молекул, которые сообщают по активности белка являются независимыми от общего числа дорожек проанализированы. Это полезно для учета ошибки локализации PSF (σ LOC) при расчете D *, потому что неопределенность добавляет кажущуюся случайной шаг к каждой локализации молекулы 15. Для улучшения классификацию связанных и диффундирующих молекул, мы рекомендуем расчета D * ботач от одноступенчатых перемещений и смещений за время двух кадров. В этом случае можно установить два отдельных D * пороги: D (15 мсек) &lt;0,15 мкм 2 / с и D * (30 мсек) &lt;0,075 мкм 2 / сек. Обратите внимание, что D * является очевидным коэффициент диффузии, который зависит от клеток удержания дорожек и движения размывания за счет диффузии за время экспозиции. Чтобы извлечь точные беспристрастные коэффициентов диффузии, она доказала полезно сравнить наблюдаемую движение модельных данных на основе стохастического броуновского модели движения 5,7. Имитация данные также могут быть использованы для тестирования процедур анализа данных. Потенциальные применения данного способа: мы описали общий подход к визуализации и количественного взаимодействия белок-ДНК в естественных условиях изменением подвижности белка при связывании с хромосоме. Деятельность ДНК-илиРНК-связывающие белки, участвующие в ремонте, репликации, транскрипции и, таким образом, обслуживание хромосома может следовать в реальном времени на уровне одной клетки с пространственным разрешением ниже предела оптической дифракции. Отслеживания одной молекулы фотоактивируемые расширяет традиционные методы слежения, которые ограничены до нескольких меченых молекул на клетку. Альтернативный метод, который измеряет молекулярную диффузию в естественных условиях является флуоресценции восстановления после фотообесцвечивания (FRAP). В то время как FRAP очень полезно для измерения глобальные характеристики диффузии в крупных клеток, он ограничен в своей способности разрешать несколько молекулярных частиц с различными подвижности в пространственно неоднородной среде, особенно для малых бактериальных клеток. Мы применили фотоактивируемые одиночных молекул отслеживания для измерения деятельности ДНК-связывающих и субклеточных локализаций диапазоне различных белков в Е. палочка включая Pol1, ДНК-лигазы, Fis белка, ДНКполимеразной III 7, а также Структурная обслуживание хромосом белков MukB, E, и F 19. Мы предполагаем, способ также может быть приспособлен к другим типам клеток.

Этот протокол описывает прямое измерение взаимодействий белок-ДНК в живой кишечной палочки клетки. Методика использует изменение коэффициента диффузии одного флюоресцентно меченого белка, как он связывается хромосомы (рис. 1). Для демонстрации метода мы используем ДНК-полимеразы I (Pol1), прототипом ДНК-связывающего белка, который заполняет пробелы ДНК в отстающей репликации нитей и иссечение ремонт путей 1. Появление супер-разрешением флуоресцентной микроскопии позволяет визуализацию молекулярных структур в клетках с нанометровым разрешением. Фотоактивируемые Локализация микроскопии (PALM) использует флуоресцентные белки, которые могут быть активированы из начального темной состояния в флуоресцентного состояния (рис. 2). Только подмножество всех меченых молекул активирована в любое время, чтобы определить свои позиции в последовательном порядке, независимо от тон суммарной концентрации меченых молекул в образце 2. Точность локализации на молекулу в основном зависит от размера флуоресцентного функции рассеяния точки (ФРТ), количество собранных фотонов, а фоновый сигнал 3. Многие приложения этого метода сосредоточиться на улучшение визуализации клеточных структур. Осознание того, что PALM можно комбинировать с одной молекуле отслеживания 4 открывает новые возможности для прямого следовать за движением произвольным количеством меченых белков в живых клетках. Повышенная чувствительность и временное разрешение флуоресцентных микроскопов в настоящее время позволяют отслеживать отдельных диффундирующих флуоресцентных белков в бактериальной цитоплазме 5. Здесь мы используем PAmCherry, проектированный флуоресцентный белок, который необратимо преобразует от начального нефлуоресцентный состояния в флуоресцентного состояния при облучении 405 нм света 6. Активированный PAmCherry флуорофоры может быть изображениег возбуждением на 561 нм и не найдена в течение нескольких кадров до фотообесцвечивания. Мы продемонстрировать способность метода для выявления переходных ДНК-связывающих события одного белков с использованием слияние Pol1 и PAmCherry. Обработка клеток с метилметансульфоната (MMS) вызывает повреждение ДНК метилирования, которая включена в гэп субстратов ДНК по базового эксцизионной репарации ферментов. Наш метод показывает ясно связывание одиночных молекул Pol1 в ответ на MMS повреждения 7.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1444">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:313px;">E.coli strain carrying a chromosomal insertion for a PAmCherry DNA-binding fusion protein</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:477px;"></td>
			<td style="width:467px;">created by Lambda-Red recombination</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MEM amino acids</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11130-051</td>
			<td>minimal medium supplement</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MEM vitamins</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11120-052</td>
			<td>minimal medium supplement</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Agarose</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>certified molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microscope coverslips No 1.5 thickness</td>
			<td>Menzel</td>
			<td>BB024060SC</td>
			<td style="width:467px;">remove background particles by heating slides in furnace at 500 &#176;C for 1h</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Methyl methanesulfonate (MMS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>129925</td>
			<td>CAUTION: toxic</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PALM setup</td>
			<td>home-built</td>
			<td></td>
			<td>described in Uphoff et al. 2013</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td></td>
			<td>for data analysis and visualization</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Localization software</td>
			<td style="width:187px;">custom-written, available online</td>
			<td>http://www.physics.ox.ac.uk/Users/kapanidis/Group/Main.Software.html</td>
			<td style="width:467px;">MATLAB and C++ software package that can be adapted for localization analysis. Cite Holden et al. 2010 if used in publication.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tracking software</td>
			<td>available online</td>
			<td><a href="http://physics.georgetown.edu/matlab/">http://physics.georgetown.edu/matlab/</a></td>
			<td style="width:467px;">MATLAB implementation by Blair and Dufresne. Cite Crocker &#38; Grier 1996 if used in publication.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing protein-dna interactions in live bacterial cells using photoactivated single-molecule tracking

Взаимодействия белок-ДНК находятся в центре многих фундаментальных клеточных процессов. Например, репликация ДНК, транскрипция, ремонт и организации хромосом регулируются ДНК-связывающих белков, которые распознают специфические структуры ДНК или последовательности. В экспериментах пробирке помогли генерировать подробные модели для функции многих видов ДНК-связывающих белков, но , точные механизмы этих процессов и их организации в сложных условиях живой клетки остаются гораздо менее понятны. Мы недавно представила метод для количественного репарации ДНК деятельность в живых кишечной палочки клеток с помощью фотоактивируемые локализации микроскопии (PALM) в сочетании с отслеживанием одиночных молекул. Наш общий подход идентифицирует отдельные события ДНК-связывающий изменением подвижности одного белка при ассоциации с хромосомой. Доля связанных молекул обеспечивает прямую количественную меру для акта белкаivity и обилие субстратов или сайтов связывания на уровне одноклеточного. Здесь мы описываем концепцию метода и продемонстрировать пробоподготовки, сбора данных, а также процедуры анализа данных.

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Protein-DNA Interactions in Live Bacterial Cells Using Photoactivated Single-molecule Tracking at JoVE.com

Visualizing Protein-DNA Interactions in Live Bacterial Cells Using Photoactivated Single-molecule Tracking

Визуализация взаимодействий белок-ДНК в живых бактериальных клеток с использованием отслеживания одиночных молекул фотоактивируемые

Фотоактивируемые локализации микроскопии (PALM) в сочетании с отслеживанием одиночных молекул позволяет прямое наблюдение и количественное определение взаимодействий белок-ДНК в живых кишечной клетки Escherichia.

Protein-DNA interactions are at the heart of many fundamental cellular processes. For example, DNA replication, transcription, repair, and chromosome ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

Визуализация сотовый к клетке передачи ВИЧ-инфекции с помощью флуоресцентного клоны ВИЧ и жить конфокальной микроскопии

By fusing the green fluorescent protein to their favorite proteins, biologists now have the ability to study living complex cellular processes using ...

Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

Оценка устьичного Ответ на живые бактериальные клетки с использованием полного изображения листьев

Stomata are natural openings in the plant epidermis responsible for gas exchange between plant interior and environment. They are formed by a pair of ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Визуализация вируса денге через Alexa Fluor маркировки

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Визуализация бактериальный токсин индуцированные ответы с помощью флуоресцентной микроскопии Онлайн сотовых

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

Визуализация InlC секрецию по расследованию сотовой инфекции по бактериальным патогеном<em&gt; листерий</em

Bacterial intracellular  pathogens can be conceived as molecular tools to dissect cellular signaling  cascades due to their capacity to exquisitely ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Оценка бактериального вторжения сердечных клеток в культуре и колонизации сердца у инфицированных мышей с использованием листерий моноцитогенов

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Генерация и нескольких фенотипическая Скрининг высокого содержания<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; транспозонов мутанты

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Новый метод для качественного многомасштабном анализа Бактериальный биопленок на нитчатых конидий с помощью конфокальной и электронной микроскопии

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Визуализация Эффекты мокроте на биопленки развития с использованием модели Chambered покровного стекла

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

Высоко мультиплексированная, высокоразрешающая визуализация т-клеток с использованием madSTORM

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...